CN111437323A - 藤茶提取物在防治阿尔茨海默病药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医药领域，具体涉及藤茶提取物在预防和/治疗阿尔茨海默病药物中的应用，本发明人通过对藤茶提取物在治疗阿尔茨海默病领域的研究，发现藤茶提取物可以提高AD模型小鼠的空间学习记忆能力，缩短其水中潜伏期和搜索距离，并且显著增加空间探索实验阶段原平台所在目标象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比，能降低小鼠脑组织氧化损伤程度，降低脑组织内β‑淀粉样蛋白水平和炎症细胞因子水平，因此，藤茶提取物可用于治疗和预防阿尔茨海默病症，尤其治疗阿尔茨海默病症前期(如阿尔茨海默痴呆前期)，改善患者认知功能障碍，延缓患者大脑萎缩的发展，提高患者记忆力。

Description

藤茶提取物在防治阿尔茨海默病药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种藤茶提取物在防治阿尔茨海默病药物中的应用。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease AD)又称老年性痴呆，是一种最常见的中枢神经系统退行性疾病。AD以渐进性记忆障碍，认知功能障碍、人格改变以及语言障碍等神经精神症状为特征。常起病于老年或老年前期，多缓慢发病，逐渐进展，以痴呆为主要表现。AD的发病机制学说有淀粉样斑块沉积、Tau蛋白磷酸化、神经炎症、线粒体功能障碍和氧化应激等假说。体内淀粉样蛋白有多种肽段，常见的为Aβ1-40和Aβ1-42，其中Aβ1-42具有更高的神经毒性，可诱导细胞的凋亡、氧化应激和炎症反应等。随着人口老龄化越来越严重，AD的患病率也逐年上升。统计学研究发现，2018年全球约有5000万人患有痴呆，到2050年，这一数字将增至1.52亿。我国目前老年期痴呆的患病人数约占全世界老年期痴呆患者的1/4，我国平均预期寿命的延长预示着老年人口将不断增加，阿尔茨海默病患者的数量和比例还将持续增加。目前，临床实践中针对阿尔茨海默病病的治疗药物种类相当有限，治疗效果非常有限，因此，进一步寻找治疗阿尔茨海默病的有效药物仍然是当今药理学工作者的努力方向。
藤茶，是近年来研究较多的药茶两用中药之一，富含二氢杨梅素等黄酮类化合物，具有显著的抗氧化、抗炎、抗病原微生物、抗肿瘤、保肝、心脏保护、提高胰岛素敏感性等作用。目前还没有以藤茶为主要组成应用于防治阿尔茨海默病的研究报道。
发明内容
本发明的目的提供藤茶的新用途，特别是藤茶提取物在藤茶提取物在预防和/治疗阿尔茨海默病药物中的应用，为临床治疗和/预防阿尔茨海默病增加一种新药。
为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
藤茶提取物在预防和/治疗阿尔茨海默病药物中的应用，其作用机制为：藤茶提取物可以提高AD模型小鼠的空间学习记忆能力，缩短其水中潜伏期和搜索距离，并且显著增加空间探索实验阶段原平台所在目标象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比，能降低小鼠脑组织氧化损伤程度，降低脑组织内β-淀粉样蛋白水平和炎症细胞因子水平。
进一步地，所述藤茶提取物通过以下方法制备所得：取适量的藤茶，加10倍95％乙醇回流提取3次，每次2h，合并滤液，真空回收溶剂，得到浓缩物，放蒸发皿中自然挥干，即得。
进一步地，在微沸状态下回流提取3次，每次提取2h。
进一步地，所述防治阿尔茨海默病药物可以按照本领域常规方法制备成各种剂型，包括但不限于片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型。
本发明具有以下有益效果：
实验证明：在Morris水迷宫实验的定位航行和空间探索实验中发现，口服藤茶提取物可以提高AD模型小鼠的空间学习记忆能力，缩短其水中潜伏期和搜索距离，并且显著增加空间探索实验阶段原平台所在目标象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比，同时降低小鼠脑组织氧化损伤程度。以上实验结果表明，藤茶可用于治疗和预防阿尔茨海默病症，尤其治疗阿尔茨海默病症前期(如阿尔茨海默痴呆前期)，改善患者认知功能障碍，延缓患者大脑萎缩的发展，提高患者记忆力。因此藤茶提取物有望开发成为新一代安全有效，用于防治AD的药物。
附图说明
图1为藤茶提取物对AD模型小鼠空间学习能力的影响。
图2为藤茶提取物对AD模型小鼠空间记忆能力的影响。
图3为藤茶提取物对实验小鼠脑组织T-SOD活力的影响。
图4为藤茶提取物对实验小鼠脑组织MDA含量的影响。
图5为藤茶提取物对实验小鼠脑组织Aβ1-40水平的影响。
图6为藤茶提取物对实验小鼠脑组织Aβ1-42水平的影响。
图7为藤茶提取物对实验小鼠脑组织TNF-α水平的影响。
图8为藤茶提取物对实验小鼠脑组织IL-6水平的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
藤茶提取物的制备
取1kg藤茶，加10倍体积的95％乙醇在微沸状态下回流提取3次，每次2h，合并滤液，真空回收溶剂，得到浓缩物，放蒸发皿中自然挥干，得到藤茶提取物。
实施例2
藤茶提取物抗阿尔茨海默病的实验研究
一、实验材料与药物
1)实验材料
建模用Aβ1-42蛋白是从上海科肽生物科技有限公司购买。蛋白定量测试盒、丙二醛(MDA)测试盒和总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒是从南京建成生物工程研究所购买。小鼠Aβ1-40和Aβ1-42ELISA试剂盒，以及小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒是从武汉华美生物工程有限公司购买。
2)主要仪器
Morris水迷宫硬件与视频分析系统，旋转蒸发仪，紫外-可见分光光度计，低速自动平衡离心机，酶标仪等。
3)受试药物及处理方法
实施例1制备得到的藤茶提取物，用0.86％的生理盐水稀释制成所需浓度。
4)实验动物及分组
雄性昆明小鼠，体重20-24g，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。
取30只昆明小鼠，采用侧脑室注射Aβ1-42，建立AD小鼠模型。饲养一周后，将小鼠随机分为对照组(生理盐水)，实施例1制备得到的藤茶提取物低剂量组(100mg/kg/d)和高剂量组(200mg/kg/d)。每天灌胃给药1次，连续30天。
二、实验方法
1)AD模型小鼠空间学习和记忆能力检测
Morris水迷宫系统主要包括水迷宫装置、水迷宫图像自动采集系统和软件分析系统。水迷宫装置由一个直径1.2m的圆形水池构成，按照东西南北四个方向，人为的将水池定义为NE-I(东北第一象限)，NW-II(西北第二象限)，SW-III(西南第三象限)，SE-IV(东南第四象限)。实验开始前，将水放到预设水位，水温维持在21±1℃方可进行Morris水迷宫实验。将适应环境后的各实验组小鼠进行连续6天的水迷宫隐藏平台实验，以探究小鼠的空间学习能力和空间记忆能力。隐藏平台实验要求将直径8cm的白色平台置于SW-III象限距离中心约15cm处，平台隐藏在水迷宫中液面1.5cm处，并保持平台位置在6天内没有任何变动。按照四个象限依次将每只小鼠面向池壁，轻轻放入水中，记录小鼠寻找到隐藏平台并在其上停留10s所需要的时间，记作潜伏期(Latency，s)。每只小鼠每天按照四个象限进行一轮实验，每个象限入水间隔时间为15-20min，以保证小鼠有足够的休息时间。
在进行最后一次隐藏平台的定位航行实验24h后，进行小鼠空间探索实验。保持对照物、水深、光照、温度、湿度等外界条件不变，只撤去水迷宫平台。将小鼠面向NE-I的水迷宫池壁，轻放入水中。记录小鼠60s内在水中的游动轨迹、在SW-III象限的时间百分比、路程百分比，以及穿越平台位置的次数等，后期将结果用于分析小鼠的空间定位能力和在空间探索过程。
2)组织匀浆制备及指标检测
水迷宫行为学实验结束后，用水合氯醛麻醉剂深度麻醉小鼠并处死，迅速取脑组织，将鼠脑置于0.86％的生理盐水中清洗血迹，滤纸拭干，称重，并沿中央纵裂分为两个左、右两个半脑，用于病理学检测。取小鼠左半脑，进行准确称重，然后按照重量：体积＝1：9的比例加入9倍体积预冷的0.86％生理盐水，冰水浴条件下，尽快使用眼科小剪剪碎脑组织块，后用超声粉碎机进行粉碎。离心机在4℃，2500转/分钟，离心10分钟，吸取上清液，按照试剂盒步骤进行实验，测得样本的蛋白浓度，根据蛋白浓度进一步计算样本MDA含量和T-SOD活力。取相同区域的小鼠右半脑100mg，用1×PBS冲洗后，在1ml的1×PBS中进行匀浆，反复冻融两次后，组织匀浆在4℃下，5000g离心5分钟。离心得到的上清液被用来进行ELISA检测。检测AD模型小鼠Aβ1-40和Aβ1-42水平，以及炎症细胞因子TNF-α和IL-6水平。
三、实验结果
1.藤茶提取物对AD小鼠模型空间学习和记忆能力的影响
1.1藤茶提取物对AD小鼠模型空间学习能力的影响
各实验组6天平均逃避潜伏期比较，实验如图1所示。从图1的实验结果表明，经过6天的训练，模型对照组小鼠潜伏期时间明显高于给药组，给药治疗的各组潜伏期随着训练天数的增加而缩短。并且与对照组相比，高剂量组在第5和第6天表现出显著性差异。说明本发明提供的藤茶提取物对小鼠记忆行为能力有改善作用。
1.2藤茶提取物对AD小鼠模型空间记忆能力的影响
撤去平台后，与模型对照组比较，低剂量组和高剂量组小鼠在Morris水迷宫经过平台所在象限的停留时间明显增多，空间探索实验结果表明，藤茶提取物有改善AD模型小鼠对空间位置记忆能力作用的趋势。结果见图2。
2.藤茶提取物对AD模型小鼠脑组织生化指标的影响
2.1对T-SOD的影响
具体实验结果如图3。由图3可知，藤茶提取物低、高剂量组与模型对照组比较，给药后T-SOD活力均有所升高，表明藤茶提取物可提高AD模型小鼠脑内T-SOD的活力，起到缓解氧化损伤的作用。
2.2对MDA的影响
具体实验结果如图4。由图4可知，藤茶低、高剂量组与模型对照组比较，给药后MDA含量影响不明显。对于神经细胞的保护作用不强。
2.3对Aβ1-40水平的影响
具体实验结果如图5。由图5可知，藤茶提取物低剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层Aβ1-40的水平明显降低。藤茶提取物高剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层Aβ1-40的水平无明显影响。
2.4对Aβ1-42水平的影响
具体实验结果如图6。由图6可知，藤茶提取物低剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层Aβ1-42的水平明显降低。藤茶提取物高剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层Aβ1-42的水平略微升高。
2.5对TNF-α水平的影响
具体实验结果如图7。由图7可知，藤茶提取物低剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层TNF-α的水平明显降低。藤茶提取物高剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层TNF-α的水平无明显影响。
2.6对IL-6水平的影响
具体实验结果如图8。由图8可知，藤茶提取物低剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层IL-6的水平明显降低。藤茶提取物高剂量组与模型对照组比较，给药后小鼠大脑皮层IL-6的水平无明显影响。
以上实验结果表明，本发明提供的藤茶提取物能够有效改善AD模型小鼠的空间学习能力，缩短潜伏期，在空间探索实验中，目标象限路程百分比和时间百分比具有相同的趋势。时间百分比和路程百分比都显著增加，藤茶提取物能够改善AD模型小鼠空间学习和记忆能力。能降低小鼠脑组织氧化损伤程度，降低脑组织内β-淀粉样蛋白水平和炎症细胞因子水平，对AD具有很好的防治作用。且与现有的药物相比，藤茶提取物更加安全，无不良反应。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。

Claims (5)

1.藤茶提取物在预防和/治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：藤茶提取物可以提高AD模型小鼠的空间学习记忆能力，缩短其水中潜伏期和搜索距离，并且显著增加空间探索实验阶段原平台所在目标象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比，能降低小鼠脑组织氧化损伤程度，降低脑组织内β-淀粉样蛋白水平和炎症细胞因子水平。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述藤茶提取物通过以下方法制备所得：取适量的藤茶，加10倍95％乙醇回流提取3次，每次2h，合并滤液，真空回收溶剂，得到浓缩物，放蒸发皿中自然挥干，即得。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：在微沸状态下回流提取3次，每次提取2h。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述防治阿尔茨海默病药物可以按照本领域常规方法制备成各种剂型，包括但不限于片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型。
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