CN111281927A - 用于治疗帕金森氏病的中药组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、盐车前子与五味子(蒸)的中药组合物，可用于制备治疗帕金森氏病的药物。

Description

用于治疗帕金森氏病的中药组合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及治疗帕金森氏病的中药组合物及其制备方法和用途。
背景技术
帕金森病(Parkinson's disease，PD)又称震颤麻痹，是常见的慢性中枢神经系统退行性疾病，起病隐袭，病程长，呈渐进性加重，致残率高[1]。病理上，主要表现为中脑黑质多巴胺(Dopamine，DA)能神经元退行性变性、脱失，引起纹状体DA含量显著减少，甚至神经细胞大量死亡。临床以静止性震颤、肌僵直、运动减少及姿势步态异常为典型表现，同时可伴有自主神经功能障碍、脑皮质高级功能障碍等多种非运动症状[2]。PD发病机制复杂，氧化应激反应和免疫炎症机制介导的神经毒性在PD发病的级联反应过程中起着重要作用，共同参与神经变性疾病的发生、发展过程[3-4]。目前，临床用抗帕金森药物主要是左旋多巴制剂，只能暂时缓解症状并不能彻底治愈，且极易产生“开关现象”，导致外周和中枢性副作用，出现消化系统、心血管系统副作用及多种反运动障碍和神经系统异常症状[5-6]。近年来，有研究发现，长期使用该类制剂会对DA产生过度氧化作用，反而加重损伤[7]，因此，寻找新的治疗药物和治疗方法是临床神经病学迫切需要解决的现实问题。本研究中，我们拟在寻找新的疗效可靠、副作用少的药物来缓解药物的副作用，甚至替代这一药物来治疗PD和延缓发病进程。
中医理论认为，肾藏精，主骨生髓，髓充脑，脑为髓海，肾与脑通过督脉相连，在认知、思维及运动等方面密切联系[8]。补肾益精填髓越来越多的用于神识-运动疾病[9]。五子衍宗丸作为补肾良方，有补肾益精填髓之功。
本发明发明人前期研究发现，在神经系统疾病中，五子衍宗丸可通过抑制神经细胞凋亡[10]、调节炎性通路[11]对神经管畸形和多发性硬化发挥神经保护效应。由此，在这一研究基础上，发明人惊人地发现，五子衍宗丸治疗实验性PD的潜能。
MPTP是建立PD经典动物模型中最重要及使用最普遍的神经毒素[12]，其所建立的小鼠模型是研究PD神经病理学和神经化学物质变化最有用的模型[13]。本研究采用MPTP诱导建立小鼠PD模型，运用现代分子生物学技术探讨五子衍宗丸对实验性PD的治疗作用。
发明内容
鉴于上述，申请人进行了广泛深入的研究，结果发现，菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、盐车前子与五味子(蒸)的中药组合物具有治疗帕金森氏病的活性。
在一种实施方式中，提供本发明中药组合物，其特征在于菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、盐车前子与五味子(蒸)的组合。
在进一步的实施方式中，提供本发明中药组合物，其特征在于菟丝子(炒)30至50克、枸杞子30至50克、覆盆子10至30克、盐车前子5至15克、五味子(蒸)3至11克。
在更进一步的实施方式中，提供本发明中药组合物，其特征在于菟丝子(炒)40克、枸杞子40克、覆盆子20克、盐车前子10克、五味子(蒸)10克。
在另一实施方式中，提供本发明中药组合物，其特征在于,其为五子衍宗丸免煎颗粒剂，每剂约含有3.2g颗粒，分别为：菟丝子1.754克，枸杞子0.218克，覆盆子0.438克，车前子0.656克，五味子0.131克。
在另外一种实施方式中，提供制备本发明中药组合物的方法，其特征在于：
(1)直接混合各中药原料，得到中药混合物；或
(2)用水和/或醇提取上述(1)所得混合物，得到中药提取物。
在进一步的实施方式中，提供本发明方法所制备的中药混合物或中药提取物。
在另外一种实施方式中，提供本发明中药混合物或中药提取物的用途，用于制备治疗帕金森氏病的药物。
在一种具体实施方式中，提供的本发明中药混合物或中药提取物用于改善帕金森氏病患者的运动功能。
在一种具体实施方式中，提供的本发明中药混合物或中药提取物用于保护帕金森氏病患者的黑质多巴胺能神经元
在进一步的实施方式中，提供治疗帕金森氏病的药物，以本发明中药混合物或中药组合物作为有效成分。
在进一步的实施方式中，提供治疗帕金森氏病的药物，其还包括至少一种已知的治疗帕金森氏病的药物。
附图说明：
图1为两组小鼠步态行为学比较图。与模型组比较，*P<0.05。
图2两组小鼠胶带移除时间比较图。与模型组比较，**P<0.01。
图3两组小鼠转头及爬杆时间比较图。与模型组比较，*P<0.05。
图4两组小鼠旷场自主活动轨迹比较图。
图5两组小鼠中脑黑质TH的表达差异(×50)图。与模型组比较，*P<0.05。
图6两组小鼠脑组织中GSH、MDA含量的差异图。与模型组比较，***P<0.001。
图7两组小鼠脑组织中SOD、CAT蛋白表达的差异图。与模型组比较，**P<0.01。
利用下列实验方法可以证明本发明组合物治疗帕金森氏病的能力。
试验例
材料
1.动物
8-10周龄雄性C57BL/6小鼠(SPF级)24只，体质量18-20g，购自北京维通利华实验动物科技有限公司，合格证编号：NO.11400700369127，许可证号：SCXK(京)2016-0006。经山西中医药大学伦理委员会批准，按国际动物实验方针进行科学实验。实验前所有动物均在无病原菌动物房清洁级适应性饲养1周，温度控制在(22±2)℃，相对湿度40％-60％，自然光照，通风良好，动物自由饮食、进水及活动。
2.药物
本研究用下面实施例5所述的五子衍宗丸免煎颗粒[由菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、盐车前子、五味子(蒸)组成]。实验时，将颗粒用生理盐水溶解配制成0.32g/ml的五子衍宗丸药液，于4℃冰箱保存备用，临用前取出回温并充分摇匀。
3.仪器
DigiGait动物步态检测分析系统(美国，型号：MSI-DIG-RT)；电泳仪(美国Bio-Rad公司，型号：PowerPacTM)；半干转膜仪(美国Bio-Rad公司，型号：PowerPacTM)；凝胶成像分析仪(美国Bio-Rad公司，型号：HOOD-II)；酶标仪(德国Leica公司，型号：C-1150)；冰冻切片机(德国Leica公司，型号：5702)；正置显微镜(德国Leica公司，型号：DM4000B/DFC450C)；高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司，型号：5840)。
4.试剂
MPTP(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)(批号：SLBM9246V)购自美国Sigma公司。谷胱甘肽(Glutathione，GSH)试剂盒(批号：20180102)、丙二醛(Malonaldehyde，MDA)试剂盒(批号：20180111)均购自南京建成生物工程研究所。Western blot相关抗体：过氧化氢酶(Catalase，CAT)(批号：14097)购自美国Cell Signaling Technology公司；超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)(批号：NB100-1992)购自美国Novus Biologicals公司；β肌动蛋白(β-actin，批号：01334/10412)购自康为世纪生物科技有限公司。BCA蛋白定量检测试剂盒(批号：C626DB004)购自上海生工生物技术有限公司；RIPA蛋白裂解液(批号：011918100315)、PMSF(批号：061918180704)均购自碧云天生物技术有限公司。免疫组化相关试剂：酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxyiase，TH，批号：GR3204690-2)购自英国Abcam公司；SABC即用型免疫组化染色试剂盒(批号：13L28K02L1022)购自武汉博士德生物科技有限公司；DAB显色试剂盒(批号：20181105)购自北京索莱宝科技有限公司。ELISA试剂盒：白介素6(interleukin-6，IL-6，批号：P144951)、白介素1β(interleukin-1β，IL-1β，批号：P156121)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α，批号：P155996)试剂盒均购自美国R&D公司；白介素10(interleukin-10，IL-10，批号：395974)试剂盒购自美国Novus Biologicals公司。
方法
1.模型制备
腹腔注射MPTP诱导建立小鼠PD模型，连续一周，注射剂量分别为：第1天15mg/kg；第2天20mg/kg；第3天至第7天30mg/kg。MPTP用灭菌的双蒸水溶解配制，现配现用，根据小鼠体质量计算每次腹腔注射用量。每次注射结束后，注意保暖，密切观察动物反应，实时调整。
2.动物分组及给药
24只小鼠按平均体质量根据随机数字表法随机分为两组：模型组和五子衍宗丸治疗组，每组12只。于首次注射MPTP后即开始进行药物干预，模型组用生理盐水(50ml/kg/d)灌胃；五子衍宗丸治疗组用五子衍宗丸溶液(16g/kg/d)灌胃；各组小鼠灌胃体积0.5ml/次/只，2次/d，早晚间隔12h，持续给药两周。小鼠在实验期间自由进食和饮水，定期称重并根据体重适时调整给药量。
3.检测指标及方法
3.1行为学观察
实验周期第14天，采用步态、胶带移除、爬杆以及旷场实验观察动物行为学表现，评价其运动功能。
3.1.1步态实验
评价动物运动平衡协调能力。于行为学检测前3天对各组小鼠每天进行1次步态训练。将动物逆向跑带行进方向放入水平步态仪的透明隔箱中，设置跑带速度为10cm/s，用DigiGait动物步态检测分析系统记录小鼠10s内的步态行为，每组每只动物均测试三次取均值，每次间隔时间至少10min。每测完1次用浸有肥皂水的棉布条彻底清理跑带，避免气味干扰。
3.1.2胶带移除实验
评价动物运动平衡协调能力。将一0.5cm×0.5cm大小的医用胶带贴于小鼠鼻尖，记录小鼠从贴上胶带至完全移除所用时间，每只小鼠均测试三次取均值，每次间隔至少2min，最长观察时间为60s。
3.1.3爬杆实验
评价动物运动迟缓症状的程度。将一直径为1cm，长60cm的木杆缠绕几层纱布(防滑)，顶端放置一方形木塞，固定于水平平台上，作为爬杆装置。各组小鼠在行为学检测前3天每天进行1次爬杆训练。将小鼠背向木杆放于木塞上，使其沿杆自然转身及下爬，记录以下2个时间:(1)转头时间：小鼠从放到杆顶木塞上转身至有向下爬杆趋势时所用时间；(2)爬杆时间：小鼠从杆顶自然下爬到杆底平台(以双后肢完全接触杆底平台为标准)所用时间。测试三次取均值，每次间隔10min以上，若中途停顿或反向爬行则重新检测，每次测试时间不超过3min。每次测试完毕后用75％酒精擦拭整个爬杆装置以消除气味。
3.1.4旷场实验
评价动物的自主活动能力。实验时，在相对安静环境条件下，同时将4只小鼠分别放入4个敞箱尺寸为30cm×30cm×30cm(长×宽×高)的旷场中央，小鼠自由活动。用顶部摄像机记录小鼠活动行为，每次连续测试10min，测试3次(每次间隔10min以上)取均值，观察小鼠10min内总的移动距离、平均速度及休息时间，并于录像结束后获取小鼠运动轨迹。每换一次鼠要彻底清除敞箱内排泄物，并用酒精棉球擦拭以祛除气味干扰。
3.2采样及检测
3.2.1样品采集
行为学测试结束后，腹腔注射10％水合氯醛(8ml/kg)麻醉小鼠，每组6只动物生理盐水心脏灌注后，用4％多聚甲醛灌流进行体内组织固定，冰上分离完整脑组织，置于4％的多聚甲醛溶液中4℃固定2h，之后浸入30％的蔗糖/PBS溶液中，4℃脱水24h，PBS溶液漂洗，OCT包埋，于适量液氮中快速冷冻制成组织包埋块，然后制备10μm的连续冠状冰冻切片，置于-80℃冰箱保存备用。
各组其余6只动物生理盐水心脏灌注后，快速冰上剥离脑组织，PBS溶液漂洗，称重，一半脑组织按重量(g):体积(ml)＝1:9的比例加冰生理盐水充分研磨，2500rpm/min，离心10min，取上清液制成10％的脑组织匀浆液，-80℃保存备用。另外一半脑组织称重后于研磨管中剪碎，加RIPA裂解液(每20mg组织样品加入200μl裂解液，含1mM的PMSF)，冰上充分研磨后静置30min，然后12000rpm/min，4℃离心30min，取上清液，BCA法测定蛋白浓度，-80℃冰箱保存备用。
3.2.2指标检测
3.2.2.1免疫组织化学染色观察中脑黑质TH阳性神经元
取上述脑组织冰冻切片，PBS充分浸洗晾干，3％双氧水甲醇混合液室温孵育10min(灭活内源性过氧化物酶)，PBS冲洗5min×2次，加5％正常山羊血清封闭非特异性抗原，37℃孵育30min，甩干，勿洗，加TH抗体(1:800，PBS稀释)，4℃孵育过夜；次日，洗涤，加羊抗兔IgG二抗，37℃孵育30min，充分浸洗，滴加SABC，37℃孵育30min，DAB(A:B＝1:1)显色，镜下观察染色，及时PBS终止反应，苏木素复染。经梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片后，显微镜下观察摄片，使用分析测量图象软件Image pro-Plus 6.0进行细胞计数，并进行统计学分析。
3.2.2.2微量酶标法检测脑组织中GSH、MDA含量
取10％的脑组织匀浆液，按照GSH、MDA试剂盒规范操作，用酶标仪检测405nm处各孔的吸光度值，计算组织中GSH、MDA的含量，统计分析。
3.2.2.3Western blot检测脑组织中SOD、CAT的蛋白表达
取上述提取的脑蛋白，加Loading buffer制备蛋白上样缓冲液样品，用10％SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白，半干式转膜法转至PVDF膜(稳压15V，30min)，5％脱脂奶粉室温摇床上封闭1h，TBST洗涤5min×4次。分别加入抗SOD、抗CAT、抗β-actin抗体(1:1000，TBST稀释)，4℃孵育过夜。次日洗膜后，加相应羊抗兔HRP耦联二抗(1:10000，TBST稀释)，室温摇床孵育2h，充分洗涤，滴加ECL(A:B＝1:1)化学发光液，用Bio-Rad凝胶成像分析仪检测条带，Image Lab 3.0软件进行灰度值比较，并进行统计学分析。
3.2.2.4ELISA检测脑组织IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-10水平
96孔板中加入100μl经PBS稀释的包被抗体，密封后室温过夜；次日，PBST充分洗涤3次(每次400μl)，静止2-3min，然后倒置用滤纸吸干；每孔加入300μl的1％BSA，室温1h；洗涤，滤纸吸干；取不同浓度标准品和适当稀释的脑组织蛋白样本，每孔加入100μl，密封后室温2h；洗涤，每孔加辣根酶标记物100μl，室温避光静置20min；洗涤后加底物液显色，每孔100μl，室温避光静置20min；之后每孔加50μl终止液，充分混合终止反应，用酶标仪测定450nm处各孔吸光值，根据标准曲线计算样品中各细胞因子浓度并进行分析处理。
4.统计学方法
采用GraphPad Prism 5.0统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差
Figure BDA0002455610250000081
表示，两两比较采用t检验，组间比较用单因素方差分析(ANOVA)，P<0.05认为差异有统计学意义。
结果
1.五子衍宗丸对PD小鼠行为学表现的影响
1.1五子衍宗丸对PD小鼠步态行为学表现的影响
见图1，10s内模型组动物脚掌与跑带接触面积为50.71±9.17cm2，五子衍宗丸组为38.51±5.22cm2，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)；此外，五子衍宗丸组小鼠步态脚爪角度为46±2.69°，明显小于模型组的56.96±3.6°，差异显著(P<0.05)。表明五子衍宗丸组动物运动时肢体更加协调，步伐相对稳定，肢体平衡协调能力更强。
1.2五子衍宗丸对PD小鼠胶带移除行为学表现的影响
见图2，检测结果显示，模型组、五子衍宗丸组胶带移除时间分别为：19.79±4.19s、13.08±2.93s。与模型组比较，五子衍宗丸组移除胶带用时明显缩短(P<0.01)，肢体更加协调灵活。表明五子衍宗丸可在一定程度上改善PD小鼠的平衡能力。
1.3五子衍宗丸对PD小鼠爬杆行为学表现的影响
见图3。模型组和五子衍宗丸组转头时间分别为：4.98±0.93s、3.68±0.42s，爬杆时间分别为：21.08±4.13s、14.44±3.02s。与模型组比较，五子衍宗丸组转头时间及爬杆用时均明显减少(P<0.05)，运动迟缓症状程度有所减轻，灵活性增加，表现出更强的运动能力。
1.4五子衍宗丸对PD小鼠旷场行为学表现的影响
1.4.1五子衍宗丸对两组小鼠旷场中移动总距离、平均速度、休息时间的影响
见表1。与模型组比较，五子衍宗丸组小鼠在旷场中移动总距离显著增加(P<0.01)，移动平均速度提高(P<0.01)，活动过程中休息时间明显缩短(P<0.05)。可见，五子衍宗丸组小鼠活跃度增加，表现出更强的自主活动能力。
表1两组小鼠旷场中移动总距离、平均速度、休息时间的比较(
Figure BDA0002455610250000091
n＝12)
Figure BDA0002455610250000092
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
1.4.2五子衍宗丸对PD小鼠旷场自主活动轨迹的影响
见图4。由系统最终生成的活动轨迹图可以看出，模型组动物行动路线简单，较为清晰，活动量少且多沿敞箱四周贴壁运动，中央区运动路程较短；而五子衍宗丸组小鼠行动路线复杂多变，轨迹遍布整个箱底，自主活动显著增多，并且在中央区运动的路程明显增加。
2.五子衍宗丸对PD小鼠中脑黑质TH阳性神经元的影响
见图5。黑质区TH免疫组化染色结果显示，模型组小鼠TH阳性神经元较少，呈散在排列，细胞轮廓模糊不清，胞质染色较浅且颜色不均匀，神经元缺失严重；与模型组比较，五子衍宗丸组小鼠黑质TH阳性细胞数明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)，且细胞排列较整齐，胞质染色变深，颜色较均匀。结果表明，五子衍宗丸治疗组中脑黑质TH阳性神经元明显升高，提示对DA能神经元具有保护作用。
3.五子衍宗丸对PD小鼠脑组织GSH、MDA含量的影响
见图6，与模型组比较，五子衍宗丸组脑组织GSH含量显著升高(P<0.001)，MDA含量显著减少(P<0.001)。结果表明，五子衍宗丸可能通过增加PD小鼠脑内抗氧化酶含量来对抗氧化反应，同时减少脂质过氧化，从而起到治疗作用。
4.五子衍宗丸对PD小鼠脑组织CAT、SOD蛋白表达的影响
见图7。与模型组比较，五子衍宗丸组脑内SOD、CAT蛋白表达量均显著增多(P<0.01)，说明五子衍宗丸可能通过上调抗氧化酶的表达减弱MPTP引起的氧化应激反应。
5.五子衍宗丸对PD小鼠细胞因子表达的影响
见表2。与模型组比较，五子衍宗丸治疗可抑制脑组织中炎性因子IL-6、TNF-α(P<0.001)及IL-1β(P<0.05)；同时增加抑炎因子IL-10(P<0.01)。由此提示，五子衍宗丸干预可减少炎性因子分泌，增加抑炎因子含量，从而降低脑内的炎性微环境，有助于保护多巴胺能神经元。
表2两组小鼠脑组织中细胞因子的含量差异(
Figure BDA0002455610250000111
n＝12)
Figure BDA0002455610250000112
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
讨论
PD主要表现为震颤显性、运动迟缓及姿势步态异常等运动障碍。动物行为学表现能够直观准确地反映中枢神经系统功能的变化。本研究结果表明，五子衍宗丸可显著改善PD小鼠的平衡协调能力，缓解运动迟缓症状，增强自主活动能力，增加活跃度，提高运动功能，这一结果提示动物中枢神经系统的功能在一定程度上得到了改善。PD以中脑黑质-纹状体DA含量减少，神经元变性缺失为主要特征。TH是DA合成的限速酶，仅在DA神经元中持续表达[14]。中脑黑质区TH的含量可间接反应DA能神经元的缺失情况[15]。本实验结果显示，五子衍宗丸治疗可明显增加纹状体TH阳性神经元，减少MPTP引起的DA的缺失，对神经元具有一定的保护作用。
在各种神经变性机制中，氧化应激被认为是导致PD神经元变性的潜在机制，可能是PD发病的重要环节[16]。氧化应激是细胞内氧化与抗氧化系统失衡出现的应激损伤状态，其反应的增强可介导PD神经元变性、缺失和凋亡等病变过程[17]。MPTP进入机体通过血-脑屏障后，在酶的作用下转化为MPDP+，经自发氧化生成活性毒素分子MPP+，选择性进入黑质DA能神经元内，打破体内活性氧水平和内源性抗氧化能力之间的氧化还原动态平衡，使得抗氧化能力相对不足，氧自由基相对增加，引起细胞和组织损伤[18]。此时，体内抗氧化系统SOD、CAT、GSH清除氧自由基的能力减弱，消耗增加，活性明显下降，同时脂质过氧化反应增强，过氧化代谢产物MDA含量增加[19]。本研究结果显示，五子衍宗丸可显著上调SOD、CAT表达水平，增加GSH含量，减少MDA的产生，减少脂质过氧化，达到对自由基的清除作用，缓解脑内氧化应激状态。
系列研究显示，慢性神经炎症可能与PD的发生发展有关，持续炎症反应和神经胶质细胞的活化是PD病理中存在的普遍特征，在DA能神经元丢失中发挥了重要作用[20]。其发病机制可能为在年龄、遗传或环境等诱因下，外周T淋巴细胞穿过血脑屏障进入中枢神经系统，刺激分泌多种细胞因子[21]。炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α是主要的炎性分子，可介导神经元损伤，促进DA能神经元退行性损伤丢失、变性甚至坏死[22]。持续的炎症反应会产生大量的炎症介质，进一步加速PD的病理进程[23]。抑炎因子IL-10是抗炎的重要细胞因子[24]。这些细胞因子共同参与机体免疫反应和炎症调节，因此，干预细胞因子的释放，调节免疫炎症可减少DA能神经元损伤，最大程度上延缓PD进程[25]。本实验结果提示，五子衍宗丸干预可显著抑制促炎因子IL-6、IL-1β及TNF-α，升高抑炎因子IL-10，表明五子衍宗丸可能通过抑制脑内的神经炎性微环境，减轻其对神经元的损害，从而起到保护神经元的作用。
综上，我们的研究证实，五子衍宗丸可通过上述途径对PD发挥神经保护作用。
本研究采用MPTP诱导制备经典PD小鼠模型，运用较先进的现代实验技术，探讨了五子衍宗丸治疗PD的潜能及其可能的作用机制。研究结果表明，五子衍宗丸能显著改善PD小鼠的运动功能障碍，保护DA能神经元，其作用机制可能为一方面提高脑抗氧化系统功能，减弱脂质过氧化程度，进而抑制氧化应激反应，平衡氧化与抗氧化系统，另一方面有效缓解脑内炎症反应，改善炎性微环境。我们的实验研究为五子衍宗丸临床治疗PD提供了实验依据。
实施例
下列实施例仅供阐述发明，不被解释为以任何方式限制发明的范围。
实施例1
取菟丝子(炒)40克、枸杞子40克、覆盆子20克、盐车前子10克、五味子(蒸)10克，直接混合装入胶囊；或者用水煎煮提取，过滤，浓缩，加入药学上可接受的常用载体，压片。
实施例2
取菟丝子(炒)30克、枸杞子30克、覆盆子10克、盐车前子5克、五味子(蒸)3克，直接混合装入胶囊；或者用水煎煮提取，过滤，浓缩，加入药学上可接受的常用载体，压片。
实施例3
取菟丝子(炒)50克、枸杞子50克、覆盆子30克、盐车前子15克、五味子(蒸)11克，直接混合装入胶囊；或者用水煎煮提取，过滤，浓缩，加入药学上可接受的常用载体，压片。
实施例4
五子衍宗丸水蜜丸
自太原市同仁堂药店(生产商：北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂；批号：18035041)购买五子衍宗丸水蜜丸[由菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、盐车前子、五味子(蒸)组成]。
每只小鼠按照16g/kg/d的剂量计算用药量，配制浓度为0.32g/mL的五子衍宗丸药液10mL操作步骤：
准备：研钵、电子天平、称量纸、15mL离心管、生理盐水、50mL量筒、水浴锅、封口膜
1.取一定量的五子衍宗丸水蜜丸，放入清洁干燥的研钵中，室温充分研磨至变为微细粉末状，研磨时间越长效果越好，研磨过程不断搅拌。
2.将研好的粉末小心取出，电子天平上准确称取3.2g粉末放入15mL离心管中。
3.用量筒量取10mL生理盐水倒入离心管，充分震荡混匀，并封口放于水浴锅中加热直至管内药物全部溶解。
4.取出晾至室温，即为0.32g/mL的五子衍宗丸药液，置于4℃冰箱保存备用。
实施例5
五子衍宗丸免煎颗粒
配制10mL浓度为0.32g/mL的五子衍宗丸药液，需要免煎颗粒3.2g(克)。五子衍宗丸中菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、车前子(盐炒)、五味子(蒸)五味药饮片重量比例为4：4：2：1：1，相应的当量比率(1g饮片含颗粒的量)分别为20、2.5、10、30、6。换算得到1g五子衍宗丸免煎颗粒中含菟丝子0.548g，枸杞子0.068g，覆盆子0.137g，车前子0.205g，五味子0.041g，因此3.2g五子衍宗丸免煎颗粒中相应各组分分别为1.754g，0.218g，0.438g，0.656g，0.131g。
步骤：
1.按上述计算所得比例准确称取五味药的免煎颗粒，倒入清洁干燥的研钵中，搅拌充分混匀，适当研磨为粉末状。
2.将研好的粉末取出，在电子天平上准确称取3.2g粉末放入15mL离心管中。
3.用量筒量取10mL生理盐水倒入离心管，封口放于水浴锅中加热，并充分震荡混匀，直至管内药物全部溶解。
4.取出晾至室温，即为0.32g/mL的五子衍宗丸药液，置于4℃冰箱保存备用。
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Claims (10)

1.中药组合物，其特征在于菟丝子(炒)、枸杞子、覆盆子、盐车前子、五味子(蒸)的组合，用于治疗帕金森氏病。
2.权利要求1的中药组合物，其特征在于菟丝子(炒)30至50克、枸杞子30至50克、覆盆子10至30克、盐车前子5至15克、五味子(蒸)3至11克。
3.权利要求2的中药组合物，其特征在于菟丝子(炒)40克、枸杞子40克、覆盆子20克、盐车前子10克、五味子(蒸)10克。
4.权利要求1的中药组合物，其特征在于,其为免煎颗粒剂形式，每剂约含有3.2克颗粒，分别为：菟丝子1.754克，枸杞子0.218克，覆盆子0.438克，车前子0.656克，五味子0.131克。
5.制备权利要求1至4任意一项的中药组合物的方法，其特征在于：
(1)直接混合各中药原料，得到中药混合物；或
(2)用水和/或醇提取上述(1)所得混合物，得到中药提取物；
例如，按照实施例5的方法制备。
6.按照权利要求5的方法所制备的中药混合物或中药提取物。
7.权利要求6的中药混合物或中药提取物的用途，用于制备治疗帕金森氏病的药物。
8.按照权利要求7所述的用途，其中所述治疗帕金森氏病为改善帕金森氏病患者的运动功能和/或保护帕金森氏病患者的黑质多巴胺能神经元。
9.治疗帕金森氏病的药物，以权利要求6的中药混合物或中药提取物作为有效成分。
10.按照权利要求9所述的治疗帕金森氏病的药物，其还包括至少一种已知的治疗帕金森氏病的药物。
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