CN103565873A - 一种具有抗低氧应激功能的复方制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有抗低氧应激功能的复方制剂，主要用于防治缺氧性损伤引起的各种病理或生理状态，属于医药领域。本发明具有抗低氧应激功能的复方制剂，是以缬草提取物、木犀草素、洋甘菊花提取物、共轭亚油酸、人参提取物为原料药，以药剂学的常规辅料和工艺制备成的内服制剂。动物实验表明，本发明抗低氧复方制剂具有能够很好的抗低氧作用，能有效改善因外界环境氧含量降低而引起的各种缺氧病理状态。本发明制剂经在急进高原的军人、驻高原部队、赴高原旅游和工作人员近300人使用，现场试验数据表明其可以有效提高人体在低氧环境下的脑力劳动能力及体力耐力。

Description

一种具有抗低氧应激功能的复方制剂

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种具有抗低氧应激功能的复方制剂，主要用于防治缺氧性损伤引起的各种病理和生理状态。 

背景技术

氧是人体生理代谢的基本元素，空气中的氧经过呼吸进入血液，与红细胞的血红蛋白结合，再经血液循环到全身组织。海拔3000米以上的高原地区，由于空气的氧分压低，呼吸进入人体的氧也相应减少，进入动脉血液的氧也减少，不能完全满足机体的需要，造成机体缺氧。机体缺氧程度不同，所产生的反应也不同。进入较低高原时，由于缺氧程度较轻，机体所受影响仅是因氧气供应不足而引起的代谢增强及功能代偿。当缺氧较重时，一些缺氧敏感的器官则可能出现损害。缺氧的典型症状为：头昏、头痛、恶心、呕吐、心慌、气促、烦燥、食欲减退、乏力、失眠或嗜睡等。

低氧应激，是指在低氧尤其是急性低氧环境下，由于机体代谢失调，能量供给障碍等对脑、体功能产生显著影响，机体将出现头痛、头晕、嗜睡、神经精神行为异常外，体力活动能力和作业能力明显降低，记忆、推理能力以及警觉性显著下降。由于脑组织具有耗氧量大、代谢率高、氧和ATP储备少，对低氧耐受性差的特点，是机体对低氧敏感的组织。低氧引起细胞损伤的主要机理包括染色体断裂、转座、倒置，还有DNA单链或双链断裂或修复中碱基错配。低氧还可以通过过氧化间接损伤DNA。研究如何预防和保护低氧引起的损伤就显得非常重要。 

发明内容

本发明的目的提供一种具有抗低氧应激功能的复方制剂，主要用于防治缺氧性损伤而引起的各种病理和生理状态。

本发明具有抗低氧应激功能的复方制剂，是以缬草提取物、木犀草素、洋甘菊花提取物、共轭亚油酸、人参提取物为原料药，以药剂学的常规辅料和工艺制备成的内服制剂。

本发明组方中的缬草提取物（ValerianRootExtract），是由棕褐色粉末败酱科缬草属植物缬草的干燥根及根茎提取而得，具有镇静、催眠、解痉、镇痛作用，主要用于安神，理气，止痛等。木犀草素（luteolin）是一种天然黄酮类化合物，存在于多种植物中。具有多种药理活性，如消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等，临床主要用于止咳、祛痰、消炎、治疗心血管疾病。洋甘菊花提取物，是由洋甘菊花提取而得，德国洋甘菊具有消炎，抗痉挛，抗腹胀和舒缓的作用。人参提取物为五加科植物人参PanaxginsengCAMey.的干燥根茎叶提取物。类白色精细粉末。人参皂甙总含量一般在80-90%之间。实验结果表明，人参皂甙可以明显抑制脑和肝中过氧化脂质形成，减少大脑皮层和肝中脂褐素的含量，同时也能增加超氧化物歧化酶和过氧化氢酶在血液中的含量，具有抗氧化作用。此外，人参皂甙中的部分单体皂甙如rb1、rb2、rd、rc、re、rg1、rg2、rh1等可不同程度地减少体内自由基含量。天然的共轭亚油酸（CLA）主要存在于反刍类动物的肉类及乳汁中，很多的研究证实，双键位置在9、11位的顺-9位，反-11位（cis-9,trans-11）CLA和双键位置在10、12位的反-10位，顺-12位（trans-10,cis-12）。CLA是具有共轭不饱和双键的脂肪酸，是必需脂肪酸亚油酸的异构体，它作为天然的抗氧化剂具有多种重要的生理学功能，如抑制肿瘤的形成、调节脂肪代谢、抗动脉粥样硬化、改善免疫功能、降低胆固醇、促进生长等多种生物活性。

本发明的复方制剂，是将缬草提取物、木犀草素、洋甘菊花提取物、共轭亚油酸、人参提取物进行有机组合，使各组分的抗氧化功能产生协同和叠加，有效增强了其抗氧化、代谢作用，改善了氧和能量供给性能，从而能够调节机体因外界环境氧含量降低而引起的各种病理和生理状态，因此可用于保护和修护低氧应激引起的各种损伤，维护机体正常的生理机能，提高脑力劳动的能力和体力耐力。

经过大量的动物实验和临床试验，确定本发明的各原料药按以下重量份进行配比，对于低氧应激引起的各种损伤均具有很好的防治作用：

共轭亚油酸2～10份，缬草提取物2～10份，木犀草素2～10份，洋甘菊花提取物1～10份，人参提取物1～10份，5-羟色胺5～50份，对氨基苯甲酸2～10份。

B族维生素是推动体内代谢，把糖、脂肪、蛋白质等转化成热量时不可缺少的物质。如果缺少维生素B，则细胞功能马上降低，引起代谢障碍，这时人体会出现怠滞和食欲不振。为了进一步加强对各种低氧应激损伤的防治效果，原料药中还加入B族维生素10～100份。维生素B包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、烟酸、泛酸、叶酸等。

微量元素为生物体所必需的一些元素，如铁、硅、锌、钙等，是一些重要酶的活性成分，在生命活动过程中的作用十分重要。本发明在组方中加入5～50份微量元素，如钙，镁，锌等，这些微量元素主要来源于碳酸钙、乳钙，硫酸镁，硫酸锌、葡萄糖酸锌等化合物。

维生素C具有促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命，增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力；还具有改善铁、钙和叶酸的利用，改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病等功能。本发明在组方中还可以加入20～200份维生素C。

实验表明，5-羟色胺、γ-氨基丁酸能够有效改善机体长程学习记忆能力，因此发明的组方中可加入γ-氨基丁酸5～50份，5-羟色胺5～50份。

n-3多不饱和脂肪酸的作用是促进人体视网膜、大脑和神经系统的正常运转；防治通过各种途径炎症的发生，降低糖尿病患者血清LDL-C和TG水平，抑制体外培养的乳腺、前列腺和结肠癌细胞增生，促进细胞凋亡。实验表明，多不饱和脂肪酸对LPS所致大鼠多巴能神经元损伤具有一定保护作用。本发明的组方中还加入10～100份n-3多不饱和脂肪酸。

下面通过动物实验和临床试验对本发明复方制剂的抗低氧应激功能机理和防治效果进行具体说明。

一、抗低氧复方制剂（AHCI）对低氧损伤大鼠自由基清除活性的影响研究

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

昆明种小鼠，雄性，体重为25±2g，购于第四军医大学大学实验动物中心。SDS、BSA、GSHSigma公司；四乙氧基丙烷(TEP)、考马斯亮蓝G250Fluka公司；DTNB、NBT南京卓尔生化有限公司；总抗氧化能力(TAOC)试剂盒南京建成生物工程研究所；D-半乳糖、硫代巴比妥酸(TBA)为国产分析纯及生化试剂。

1.2 超氧自由基和羟自由基清除作用的测定

超氧自由基和羟自由基清除作用分别采用NBT光化还原法和邻二氮菲-Fe₂+氧化法测定。

1.3 H₂O₂诱导小鼠红细胞氧化溶血作用测定

将小鼠摘眼球取血，加入抗凝剂，离心得红细胞，冷生理盐水洗3次，制成0.5%红细胞悬浮液。各组取红细胞悬浮液1mL，多糖组加SRP溶液0.2mL，模型组加0.2mL生理盐水，两组分别加0.2mLH₂O₂(终浓度为10mmol/L)，同时以不加H₂O₂的为对照组。各组用生理盐水补足相同体积，于37℃反应1h，用生理盐水稀释6倍，3000rap离心5min，取上清液于415nm处测定吸光度。

1.4小鼠肝组织丙二醛(MDA)生成作用的测定

取小鼠肝组织称重后，在冰浴中用生理盐水制成1%悬浮液，1000×g离心去除杂质得匀浆液。实验分为对照组组和低氧诱导氧化组。AHCI实验组，以上各组均以生理盐水补足至相同体积后于37℃缓慢振荡保温1.5h，加入0.5mL28%的TCA溶液及0.38mL2%的TBA溶液混匀，在沸水浴中反应20min，冷却后离心，在532mm波长处测定吸光度。

1.5小鼠肝线粒体肿胀程度的测定

取小鼠肝脏加入预冷的线粒体分离介质，制成10%肝匀浆，3000×g离心10min后保留上清液，于15000×g离心15min，收集沉淀的线粒体(以上操作在冰浴中进行)。将线粒体用生理盐水充分悬浮后配制成520mm波长处吸光度(A520nm)为0.5～0.6的悬浮液。进行如下实验：对照组、低氧模型组和AHCI组都加入2.5mL悬浮液以生理盐水补足至3mL。于37℃保温，缓慢振荡，分别于0、10、20、30、60min取出测定A520nm，以零时的吸光度为100%，计算各组的相对吸光度。

2实验结果：抗低氧复方制剂（AHCI）在体外清除超氧自由基IC50为247.3μg/mL，在554.9μg/mL浓度时对羟自由基清除率为57.38%，在136.2μg/mL时对红细胞氧化溶血抑制率为43.8%，在700μg/mL时抑制线粒体肿胀程度与对照组相同，在687μg/mL时在自氧化和诱导氧化条件下，肝匀浆MDA生成的抑制分别为36.0%和47.9%（见表1、2）。由此说明，本发明的抗低氧复方制剂（AHCI）能有效地清除体外超氧自由基。

二、抗低氧复方制剂（AHCI）对D-半乳糖氧化损伤小鼠的抗氧化作用

1材料与方法

1.1材料与试剂：昆明种小鼠，雄性，体重为25±2g，购于第四军医大学大学实验动物中心。SDS、BSA、GSHSigma公司；四乙氧基丙烷(TEP)、考马斯亮蓝G250Fluka公司；DTNB、NBT南京卓尔生化有限公司；总抗氧化能力(TAOC)试剂盒南京建成生物工程研究所；D-半乳糖、硫代巴比妥酸(TBA)为国产分析纯及生化试剂。

1.2动物模型：小鼠正常饲养3d后随机分为对照组(A)、模型组(B)和AHCI低剂量组(100mg/kg·d)、中剂量组(300mg/kg·d)、高剂量组(600mg/kg·d)，每组各12只。3个剂量组经口灌胃给予AHCI，A组和B组给予同体积蒸馏水，在给予受试样品的同时，除A组外，各组每天颈背部皮下注射D-半乳糖(600mg/kg·d)，连续造模60d，A组颈背部皮下注射等量的生理盐水。动物饲养期间饲喂全价颗粒饲料，不限制摄食饮水，定期尾静脉取血测定血液抗氧化指标，实验结束时动物禁食12h后摘眼球放血处死动物，收集血液和主要脏器组织，分析抗氧化有关指标。

1.3血液及组织样品的制备：取20μl血液于1mL生理盐水中混匀，3000×g离心3min，弃上清液，加蒸馏水0.2mL充分溶血，加入95%乙醇0.1mL，振荡30s，加入三氯甲烷0.1mL，再振荡30s，6000×g离心5min，上清液用于SOD活性测定。组织样品称重后剪碎，加入预冷的50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.8)，于冰浴中进行超声波破碎(400W，20s×3)制成10%组织匀浆。组织匀浆于4℃下10000×g离心10min，一部分上清液用于测定MDA含量和TAOC，另一部分上清液加饱和硫酸铵溶液至25%饱和度，同样条件下离心，上清液用于测定SOD、GPx活性。

1.4超氧化物歧化酶(SOD)活性测定：按Stewert等的方法测定SOD活性。MnSOD活性测定按王晓炜等方法进行。Cu,ZnSOD活性以总SOD活性与MnSOD活性之差表示。

1.5谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性测定：采用DTNB法测定GPx活性。

1.6MDA含量的测定：以TEP为标准，测定2%溶血液、血清及组织中的MDA含量。

1.7TAOC测定：按试剂盒说明书的方法进行。

1.8蛋白质含量测定：蛋白质含量测定采用Bradford以BSA为标准蛋白。

1.9实验数据处理与分析：实验数据用SPSS10.0统计软件进行统计学分析，数据用x±s表示，组间差异显著性采用t检验。

2实验结果

在动物实验中，AHCI对小鼠体重变化无显著影响，能使降低的血红蛋白(Hb)含量和肝指数恢复到正常水平。给予AHCI(200mg/kg)在20、45、60d时能提高血液SOD活性，在45、60d时能降低血液MDA含量，与模型组比差异有显著性；在小鼠血清抗氧化指标中，模型组MDA含量升高，谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和总抗氧化能力(TAOC)水平降低，与对照组比差异有显著性，给予AHCI后MDA含量显著降低，GPx活性和TAOC显著提高。与模型组比，AHCI组的肝抗氧化酶(总SOD、MnSOD、CuZnSOD及GPx)活性及TAOC显著提高，MDA含量显著下降，差异有显著性。AHCI对D-半乳糖所致氧化损伤小鼠血液和肝脏有显著的改善作用（见表3）。因此，本发明抗低氧复方制剂（AHCI）具有很好的抗氧化作用。

三、抗低氧复方制剂AHCI对低氧PTSD-SPS大鼠行为学影响的研究

1材料和方法

1.1实验动物分组：健康成年雄性SD大鼠40只，体质量（65±10）g，清洁级，购自第四军医大学实验动物中心。大鼠在光/暗周期为12h/12h、自然光照条件下饲养适应1w，随机分为四组，正常对照组，PTSD-SPS模型组，添加抗低氧复方制剂饲料PTSD-SPS模型组每组10只。对照组及SPS模型组以常规饲料喂养，另外两组（分别用于EPM实验检测和OF实验检测）采用添加抗低氧复方制剂的饲料喂饲一个月后开始造模。

1.2行为学检测

1.2.1高架十字迷宫（Elevatedplusmaze，EPM）：该装置由两条相对开放臂（长×宽：50cm×10cm）和两条相对的闭合臂（长×宽×高：50cm×10cm×40cm），由中央区（10cm×10cm）联结，闭合臂由高40cm涂黑木板围成。迷宫整体固定于金属支架上，使迷宫底板调节到距实验室地面50cm。测试时室内为暗光，室温22℃~25℃，保持安静。将在开阔的场地中适应10min后的大鼠面对闭合臂放置在EPM的中央区，随后记录大鼠5min的活动情况。测试时实验人员距离EPM至少1m。中间用湿布擦拭迷宫，清除排泄物，继续用干布擦净后再进行下一只大鼠的测试。整个实验过程用红外装置实施自动追踪，电脑相关软件自动记录进入开放臂的次数（Openarmen-try，OE）、进入开放臂的时间（Openarmtime，OT）、进入封闭臂次数（Closearmentry，CE）、进入封闭臂的时间（Closearmtime，CT），评判者由非实验人员完成以保证结果客观。小鼠运动活力（OE+CE）=进入开放臂次数（OE）+进入封闭臂次数（CE）；进入开放臂次数比例（OE％）=OE（/OE+CE）×100％；开放臂停留时间比例（OT％）=OT（/OT+CT）×100％。

1.2.2旷场实验（Open-fieldTest，OF）：旷场实验箱长宽高(100cm×100cm×50cm)，内壁为黑色，底面划分为25个等边方格，沿四壁为外周格，其余为中央格。将大鼠放置在中央格，用摄像系统记录大鼠5min内的活动情况。每次实验后均清扫旷场，喷洒酒精去除气味后进行下一只测定。观察指标为中央格停留时间、穿越格数(三爪以上跨人邻格)、后肢直立次数(两前肢离箱底1cm以上)、理毛次数及粪便粒数。评判者由非实验人员完成以保证结果客观。

1.3动物模型：采用2005年在日本文部省召开的“基础和临床的研究进展”会议中确定的关于PTSD模型-SPS(Single-ProlongedStress，SPS)刺激后无干扰喂养的方法。SPS模型的具体建立方法：大鼠禁锢2h，然后立即强迫其游泳(水深40cm，水温25℃)20min；经过15min的自然恢复，密闭容器内乙醚麻醉至意识丧失，置于鼠笼中，不经任何打扰持续至苏醒。对照组动物无干扰常规饲料喂养，直至取材。

统计学处理应用SPSS13.0统计分析软件对数据进行统计分析，数据以均值±标准差（x±s）表示，进行t检验，P＜0.05为具有统计学差异。

2实验结果

2.1ω-3PUFAs对模型组大鼠高架十字迷宫行为的影响：与对照组相比，SPS模型组大鼠OE＋CE、OE%、OT%明显减少（P＜0.05），模型组大鼠表现出焦虑/抑郁情绪行为；与SPS模型组相比，60%ω-3PUFAs组大鼠OE＋CE（9.65±1.46）次、OE%（33.26%）、OT%（29.28%）明显增加（P＜0.05），具有显著统计学意义（见表4），而其与对照组相比没有显著性差异。

2.2抗低氧复方制剂对模型组大鼠旷场行为的影响：与对照组相比，SPS模型组大鼠中央格停留时间明显缩短（5.56±0.21）s，（P＜0.05），穿格次数明显的减少（30.23±5.96）次，（P＜0.05），具有显著的统计学意义，SPS模型大鼠在中央格内的停留时间缩短，穿行格数减少，表明大鼠探究行为减少，可能处于；与SPS模型组相比，抗低氧复方制剂组大鼠的中央格停留时间明显延长（P＜0.05），穿格次数明显增加（P＜0.05），其与对照组比较没有显著性差异。各组大鼠直立次数、理毛次数及排便量之间没有显著性差异（表5）。

EPM为国际上公认的测试动物焦虑行为装置，其利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突行为来考察动物的焦虑状态；并可作为评价抗焦虑药物和治疗手段的一种焦虑模型。近年来有文献报道PTSD可伴随焦虑症、抑郁症的发生，患者表现出焦虑/抑郁行为。经本次实验EPM测试发现，SPS模型组大鼠较少进入并停留于开放臂中，倾向于探究闭合臂，且在闭合臂的停留时间延长。另外，我们观察到大鼠在闭合臂内行动缓慢甚至静止不动或者排便等，SPS大鼠表现出更多与焦虑相关的行为，提示可能处于焦虑状态。OF可反映大鼠探究活动及情绪反应。在旷场行为实验中，中央格代表的中心区域对动物来说具有一定的新奇性同时是潜在的威胁情境，而周边格代表的外周区则相对安全，应激大鼠在中央格内的停留时间的长短及穿行格数次数多少，表明大鼠探究行为及情绪的变化。SPS模型大鼠穿越格子数及在中央格停留时间均显著减少，表明大鼠焦虑/抑郁反应增强，探究活动下降，更好的模拟了临床上PTSD焦虑/抑郁患者逃避、探索行为能力下降的表现。PTSD是指由于异常威胁性或灾难性心理创伤导致延迟出现和长期持续的精神障碍。它是应激疾病中最为典型的一种，属于严重创伤应激急性期。总的来说它是一种创伤后心理失衡状态，其临床表现以再度体验创伤特征，并伴有情绪的易激惹和回避行为。目前，苯二氮卓类抗抑郁药、抗焦虑药等用于PTSD治疗，短期虽有一定的疗效，但长期药物治疗带来的巨额医疗费及药物副作用、药物耐受不可避免，并且其预防复发的作用尚未明确。高原低氧环境应激可出现焦虑症、抑郁症的发生，本次实验中，抗低氧复方制剂能明显增加SPS模型组大鼠进入开放臂的次数与时间，与文献实验结果保持一致，并且延长大鼠在中央格停留时间和穿格次数，表明抗低氧复方制剂可降低SPS大鼠焦虑/抑郁水平，阻止其进入焦虑/抑郁状态，有助于保护SPS大鼠情绪行为学的变化，提示抗低氧复方制剂对PTSD-SPS行为学变化可能有一定的防护作用。

四、抗低氧复方制剂对低氧PTSD-SPS大鼠空间学习记忆和海马神经元溶酶体损伤的防护作用研究

1材料和方法

1.1实验动物及分组

健康成年雄性SD大鼠48只，体质量（60±10）g，清洁级，购自第四军医大学实验动物中心。动物在光/暗周期为12h/12h、自然光照条件下饲养适应5天。大鼠被随机分为四组，正常对照组，PTSD-SPS模型组，抗低氧复方制剂+PTSD-SPS模型组，60%ω-3PUFAs+PTSD-SPS模型组，每组12只。对照组及SPS模型组以基础饲料喂养，抗低氧复方制剂组饲料中添加在基础饲料中（60g/kg），各组按配置好的饲料喂饲一个月后开始造模。

1.2实验器材及材料

1.2.1Morris水迷宫：水迷宫为一直径160cm、高50cm的圆形水池，水池内壁被漆为黑色，池内水深23cm，水温保持在（21±2）℃，房间内光照恒定，无光线直射在水池内。池壁上以四个等距离点将水池分为四个象限，在靶象限内距离池壁35cm处放有一个直径为12cm、高21cm的圆形黑色站台，站台位于水面下2cm。池壁内贴有不同形状及颜色的标记物。迷宫上方安置连接显示系统的摄像机，同步记录大鼠运动轨迹。采用上海吉量软件科技有限公司研制开发的Morris水迷宫视频分析系统进行信息处理，该系统能动态记录大鼠在水迷宫中游泳的录像资料，设定分析参数，进行在线或离线数据分析，并提供大鼠上台潜伏期、靶象限活动时间百分比、穿台次数、游泳速度、游泳路程等指标。

1.2实验方法

1.2.1PTSD-SPS动物模型的制备：大鼠禁锢2h，然后立即强迫其游泳(水深40cm，水温25℃)20min；经过15min的恢复，密闭容器内乙醚麻醉至意识丧失，在笼中不经任何打扰持续至苏醒。对照组动物无干扰喂养，常规饲养直至取材。

1.3.2定位航行实验：实验前将大鼠置于站台上适应20s，随后将大鼠随机从不同象限(靶象限除外)面壁置入池内，大鼠登上站台10s后终止记录，最长记录时间为60s，若大鼠在60s内不能上台，引导其登上站台适应10s，然后将大鼠拭干放入鼠笼。如此将大鼠置入游泳池，每天同一时间训练一次，定位航行训练需要5天完成。测量平均逃避潜伏期，以此评判大鼠的空间学习能力。

1.3.3空间探索实验：定位航行训练结束后撤除水面下的站台，于实验第6天将大鼠随机从不同象限(靶象限除外)面壁置入池内，记录大鼠在60s内的游泳轨迹并进行分析，最后将大鼠拭干放入鼠笼。观察第6天大鼠在靶象限活动时间的比率和穿台次数，以此评判大鼠的空间记忆能力。

1.3.4海马神经元电镜观察：造模后1天，大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉，打开胸腔，用0.9%的生理盐水200mL冲血，4%多聚甲醛灌注固定，断头后取出海马，在不同部位，切取约1mm×1mm×1mm的海马组织10块，固定于4%戊二醛溶液内，之后每组10块组织中随机选出3块组织，常规锷酸固定，逐级酒精脱水，E-pon812包埋，半薄切片定位，最后制成超微切片。经醋酸铀、柠檬酸铅双重染色后，在JEM-100CX2型透射镜下拍照。统计学处理应用SPSS13.0统计分析软件对数据进行统计分析，数据以均值±标准差（x±s）表示，进行t检验，P＜0.05为具有统计学差异。

2实验结果

2.1抗低氧复方制剂对造模后大鼠学习记忆的影响

2.1.1抗低氧复方制剂对造模后大鼠空间学习的影响：通过定位航行实验比较各组逃避潜伏期时间。与对照组相比，SPS模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（表6，P＜0.05），喂饲ω-3PUFAs的SPS组大鼠的逃避潜伏期没有明显的变化，无统计学差异；与SPS模型组相比，60%ω-3PUFAs组大鼠的逃避潜伏期明显缩短，在第四天和第五天分别达到18.22±5.07，19.13±4.26（Table1，P＜0.05），具有显著统计学意义。

2.1.2抗低氧复方制剂I对造模后大鼠空间记忆的影响：通过空间探索实验的两个指标靶象限活动时间百分比及靶象限穿台次数评价大鼠空间记忆能力。本次实验中，低氧SPS模型组大鼠靶象限活动时间百分比及穿台次数较对照组减少，分别为10.01%±3.03%及（1.05±0.13）次；喂饲抗低氧复方制剂SPS模型组大鼠靶象限活动时间百分比及穿台次数较SPS模型组明显增加分别达到25.56%±2.13%及2.36±0.34）次，P＜0.05，具有统计学意义。

2.2抗低氧复方制剂对海马神经元超微结构的影响

与正常对照组相比，SPS模型组大鼠海马神经元中溶酶体明显增多在实验的过程中，同时观察到线粒体肿胀及神经元细胞突起改变；与SPS模型组相比，喂饲抗低氧复方制剂的SPS模型组大鼠海马神经元溶酶体的数量明显减少，与对照组相比其数量没有显著差异。

本实验结果显示，SPS模型组大鼠逃避潜伏期延长，提示其空间学习和记忆的获得与巩固过程受到影响，空间学习记忆能力下降；靶象限活动时间百分比及穿台次数的下降进一步提示SPS模型组大鼠空间记忆保持能力下降。PTSD可致海马神经元形态改变，加速部分海马神经元细胞的死亡，进而影响认知和学习过程，损害海马依赖性的记忆，有研究表明，应激可引起海马神经元胞凋亡，与其细胞的溶酶体的表达和变化有关。本实验中SPS模型组大鼠海马组织细胞溶酶体明显增多，实验中同时发现线粒体肿胀，神经元突起改变。推测本研究中SPS模型大鼠的海马神经元有一定的损伤，海马神经元超微结构的改变可能是导致其损伤的原因之一。抗低氧复方制剂对外伤性脑损伤导致的学习记忆能力起到保护作用。这其中的机制可能在于抗低氧复方制剂有神经递质如5-羟色胺的功能。5-羟色胺是一个关键的神经发育信号，如果其活性受损，会引起神经元组织持久损伤。5-羟色胺可促进神经向外生长，并抑制凋亡。本实验结果显SPS模型组大鼠比对照组大鼠空间学习记忆能力明显下降，其海马神经元中溶酶体数量明显增加；添加抗低氧复方制剂的SPS模型组大鼠学习记忆能力与对照组无显著差异，并且海马神经元中溶酶体数量没有明显的变化，提示抗低氧复方制剂可能通过预防海马神经元超微结构的损伤而对低氧SPS大鼠的空间学习记忆能力下降起到一定的防护作用，而抗低氧复方制剂对低氧PTSD可能有一定的防护作用。

综上所述，本发明抗低氧复方制剂（AHCI）能有效地清除低氧损伤大鼠体外超氧自由基；对D-半乳糖所致氧化损伤小鼠血液和肝脏有显著的改善作用，具有很好的抗氧化作用，能有效改善因外界环境氧含量降低而引起的各种缺氧病理生理状态，可用于保护和修护低氧应激引起的各种损伤，维护机体正常的生理机能，提高脑力劳动的能力和体力耐力。本发明制剂经在急进高原的军人、驻高原部队、赴高原旅游和工作人员近300人使用，现场试验数据表明其可以有效提高人体在低氧环境下的脑力劳动能力及体力耐力。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明复方制剂的制备及用法、用量进行详细说明。

实施例1、片剂复方制剂的制备

活性组方：以重量份计

共轭亚油酸10份，缬草提取物10份，木犀草素10份，洋甘菊花提取物10份，人参提取物10份，胆碱5份，泛酸10份，叶酸10份，生物素5份，烟酰胺5份，维生素B110份，维生素B25份，维生素B65份，维生素C20份，钙10份，镁5份，锌10份，n-3多不饱和脂肪酸80份，γ-氨基丁酸50份，5-羟色胺50份。

工艺：按药剂学的常规辅料和工艺制备成片剂。每片400mg。

用法用量：每日2～3次，每次3～4片。

实施例2、软胶囊剂复方制剂的制备

活性组方：以重量份计

共轭亚油酸10份，缬草提取物5份，木犀草素5份，洋甘菊花提取物5份，人参提取物3份，胆碱5份，泛酸10份，叶酸10份，生物素5份，烟酰胺5份，维生素B110份，维生素B25份，维生素B65份，维生素C20份，钙10份，镁5份，锌10份，n-3多不饱和脂肪酸50份，γ-氨基丁酸20份，5-羟色胺20份。

工艺：按药剂学的常规辅料和工艺制备成软胶囊剂。每粒400mg。

用法用量：每日2～3次，每次3～4粒。

实施例3、颗粒剂复方制剂的制备

活性组方：以重量份计

共轭亚油酸2份，缬草提取物2份，木犀草素2份，洋甘菊花提取物1份，人参提取物1份，胆碱2份，泛酸5份，叶酸10份，生物素2份，维生素B15份，维生素B25份，维生素B65份，维生素C20份，钙5份，镁2份，锌5份，n-3多不饱和脂肪酸20份，γ-氨基丁酸10份，5-羟色胺10份。

工艺：按药剂学的常规辅料和工艺制备成颗粒剂。

用法用量：每日2～3次，每次10g。

Claims (9)

1.一种具有抗低氧应激功能的复方制剂，是以缬草提取物、木犀草素、洋甘菊花提取物、共轭亚油酸、人参提取物为原料药，以药剂学的常规辅料和工艺制备成的内服制剂。

2.如权利要求1所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：所述各原料药按以下重量份进行配比：

共轭亚油酸2～10份，缬草提取物2～10份，木犀草素2～10份，洋甘菊花提取物1～10份，人参提取物1～10份。

3.如权利要求2所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：原料药中还包括B族维生素10～100份。

4.如权利要求2所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：原料药中还包括维生素C20～200份。

5.如权利要求2所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：原料药中还包括微量元素5～50份。

6.如权利要求5所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：所述微量元素为钙、镁、锌。

7.如权利要求2所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：原料中还包括n-3多不饱和脂肪酸10～100份。

8.如权利要求2所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：原料药中还包括γ-氨基丁酸5～50份。

9.如权利要求2所述具有抗低氧应激功能的复方制剂，其特征在于：原料药中还包括5-羟色胺5～50份。