CN103031332A - 一种黑麦草种子与农杆菌共培养的转基因技术 - Google Patents

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李杰勤
王丽华
詹秋文
张俊
赵庭
万海波
周青
王茂辉
王薇薇
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Abstract

一种黑麦草种子与农杆菌共培养的转基因技术，属于生物技术领域。将黑麦草种子消毒后充分洗净，与OD600为0.3的已载入双元载体的农杆菌接种液于恒温震荡器中共同震荡培养，再对种子进行暗箱培养，促进农杆菌侵染并在体内大量增殖扩散，然后将萌发的种子单粒播于营养钵中，3叶期即可进行转基因鉴定。本方法简便，操作容易，费用低廉。

Description

一种黑麦草种子与农杆菌共培养的转基因技术
技术领域
一种黑麦草种子与农杆菌共培养的转基因技术属于生物技术领域，更具体的说是一种通过黑麦草种子与农杆菌接种液共同培养的办法实现自动转基因接种。
背景技术
目前，黑麦草的转基因一般采用农杆菌侵染愈伤或基因枪轰击法，但是这2种方法都是基于组织培养技术，都存在转化周期长、花费较大、技术和设备要求高的缺点。
发明内容
一种黑麦草种子与农杆菌共培养的转基因技术发明的目的是采用一种黑麦草种子与农杆菌共同培养的方法，使二者在相互密切接触的情况下进行自动接种，以期改变现有技术转化周期长、花费较大、技术和设备要求高的状况。
本发明是这样实现的：
1.一种黑麦草种子与农杆菌共培养转基因技术的特征在于，以黑麦草种子与农杆菌接种液共同培养实现自动转基因接种，它包括①黑麦草种子消毒，②与菌液共同培养接种，③暗箱培养，④育苗栽培4个步骤。
2.黑麦草种子消毒：选取饱满的黑麦草种子先后用乙醇和84消毒液进行消毒，然后用灭菌水洗净种子。
3.将灭菌后的种子转入到OD600为0.3的载入了双元载体的农杆菌接种液中，于恒温震荡培养箱中震荡培养24小时，培养温度为28℃，震荡速度为100rpm。
4.将与菌液共培养后的种子取出置于发芽盒中，6℃恒温暗培养4天，注意保湿。
5.将培养后的种子单粒播到营养钵中，置于22℃下生长，3叶期即可进行转基因植株的鉴定。
本发明的有益效果：一种黑麦草种子与农杆菌共培养的转基因技术避开了传统的农杆菌侵染愈伤后或基因松轰击后再组织培养的技术路线，与现有方法相比有以下几个优点：第一，所需时间减少1个月左右，农杆菌侵染法从愈伤诱导到获得转基因植株一般需要3-4个月，本方法从接种开始到鉴定完成只需2-3个月；第二，本方法对技术要求不高，而黑麦草组织培养难度大，愈伤易褐化，因此对实验者的技术和实验的条件要求高，而本方法不涉及组织培养过程，因此大大降低了技术难度和实验条件；第三，本方法所需费用较少，现有的转基因技术需要借助植物组织培养技术，而组织培养的各种试剂较贵，而且需要建立组培室并配备大量的仪器设备才能开展工作，而本发明免除了这部分的花费，节约了大量资金。
具体实施方式：
下面结合具体实例对本发明进行进一步的描述。
实施例1：将1305GFP载体转入到黑麦草品种长江2号的植株中
1.         黑麦草种子消毒：选取200粒饱满的黑麦草长江2号种子首先用70%乙醇消毒2min，然后用84消毒液消毒15min，消毒结束后用灭菌水洗净种子。
2.         将灭菌后的长江2号种子转入到OD600为0.3的已载入1305GFP载体的农杆菌接种液中，于恒温震荡培养箱中培养24小时，培养温度为28℃，震荡速度为100rpm。
3.         将与菌液共培养后的种子取出置于发芽盒中，6℃恒温暗培养4天，注意保湿。
4.         将培养后的种子单粒播到营养钵中，置于22℃下生长，在3叶期进行转基因植株的鉴定。
通过以上步骤共获得109株黑麦草幼苗，经鉴定有21株为转基因植株。历时55天，比现有的转基因技术减少60天左右。

Claims (5)

1.一种黑麦草种子与农杆菌共培养转基因技术的特征在于，以黑麦草种子与农杆菌接种液共同培养实现自动接种，它包括①黑麦草种子消毒，②与菌液共同培养接种，③暗箱培养，④育苗栽培4个步骤。
2.根据权利要求1所述的技术，其特征在于，所述的黑麦草种子消毒的做法是：选取籽粒饱满的黑麦草种子，顺序用乙醇和84消毒液消毒，消毒结束后用灭菌水洗净种子。
3.根据权利要求1所述的技术，其特征在于，所述的与菌液共同培养接种的做法是：将灭菌后的种子转入到OD600为0.3的转入了双元载体的农杆菌接种液中，于恒温震荡培养箱中培养24小时，培养温度为28℃，震荡速度为100rpm。
4.根据权利要求1所述的技术，其特征在于，所述的暗箱培养的做法是：将与菌液共培养后的种子取出置于发芽盒中，6℃恒温暗培养4天，注意保湿。
5.根据权利要求1所述的技术，其特征在于，所述的育苗栽培的做法是：将培养后的种子单粒播到营养钵中，置于22℃下生长，3叶期即可进行转基因植株的鉴定。
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