CN103014100B - 一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法，该方法包括以下步骤：a、选用工程菌做菌株进行发酵培养；b、对发酵培养所得菌体进行包涵体的分离和洗涤，得到精制包涵体；c、对精制包涵体进行复性，得到复性产物；d、对复性产物进行阴离子柱层析处理，得到阴离子柱层析产物；e、对阴离子柱层析产物进行阳离子柱层析，得到阳离子柱层析产物；f、对阳离子柱层析产物进行精细分离，采用反相填料柱层析处理，得到重组人粒细胞集落刺激因子。

Description

一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法。本发明在纯化工艺中采用了反相填料的精细分离纯化步骤。同现有技术相比较，可以大幅度地提高重组人粒细胞刺激因子的纯度、比活及稳定性。
背景技术：
重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）是特异作用于粒系祖细胞、促进其向成熟中性粒细胞增殖、分化的造血生长因子。具有以下功能：
1.促进骨髓移植后中性粒细胞计数增加。
2.癌症化疗引起的中性粒细胞减少。
3.骨髓异常增生综合症伴发的中性粒细胞减少症。
4.再生障碍性贫血伴发的中性粒细胞减少症。
5.先天性、特发性中性粒细胞减少症。
重组人粒细胞集落刺激因子已经可以通过基因重组生物工程技术进行量产。但其纯化工艺经过多年研究始终难以解决其纯度问题，且比活下降明显，如现有技术“粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立” 中国生物化学与分子生物学报1998, Vol. 14 描述了以下技术方案：稀释复性蛋白，之后一步ＳＰ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析至均质．纯化的Ｇ－ＣＳＦ蛋白比活性达3.4×108U/mg，每升表达菌液回收的Ｇ－ＣＳＦ总活性达1.06×1011U/mgＵ．纯化产物的Ｎ－端氨基酸序列分析表明，对甲硫氨酸的去除彻底，用于人体时可能具有较小的免疫原性和毒性。
重组人粒细胞集落刺激因子的纯化《微生物学免疫学进展》 1998年02期 描述了以下技术方案：包涵体变性复性后，ｒｈＧ－ＣＳＦ的活性得到恢复。用离子交换和疏水层析纯化了ｒｈＧ－ＣＳＦ，比活性达1.57×108U/mg，纯度大于９８％。
本发明经过对不同纯化工艺的研究，筛选出一种纯化方法，其技术方案是在纯化工艺中采用了反相填料的精细分离纯化步骤。包括步骤：a、选用工程菌做菌株进行发酵培养；b、对发酵培养所得菌体进行包涵体的分离和洗涤，得到精制包涵体；c、对精制包涵体进行复性，得到复性产物；d、对复性产物进行阴离子柱层析处理，得到阴离子柱层析产物；e、对阴离子柱层析产物进行阳离子柱层析，得到阳离子柱层析产物；f、对阳离子柱层析产物进行精细分离，采用反相填料柱层析处理，得到重组人粒细胞集落刺激因子。
同现有技术相比较，采用本专利的反相填料精细分离，rhG-CSF电泳纯度由90％提高到99％，HPLC纯度由90％提高到99％，其比活由0.8×107U/mg提高到3×108U/mg。可见，采用本发明的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化工艺，可以大幅度的提高rhG-CSF的纯度、比活，以及稳定性。
发明内容：
本发明提供一种rhG-CSF的纯化方法，该方法包括以下步骤：
a、选用工程菌做菌株进行发酵培养；
b、对发酵培养所得菌体进行包涵体的分离和洗涤，得到精制包涵体；
c、对精制包涵体进行复性，得到复性产物；
d、对复性产物进行阴离子柱层析处理，得到阴离子柱层析产物；
e、对阴离子柱层析产物进行阳离子柱层析，得到阳离子柱层析产物；
f、对阳离子柱层析产物进行精细分离，采用反相填料柱层析处理，得到重组人粒细胞集落刺激因子。
其中步骤a-c属于现有技术，可以根据现有技术中的方法获得。
本发明所述的步骤d-f属于纯化步骤，属于本发明的技术方案，其中，优选的技术方案如下：
阴离子柱层析（XK50/30层析柱，Q sepharose FF填料）
使用平衡液（20mmol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡8-10倍柱床体积。
样品预处理：将复性产物用2mol/L pH8.2 Tris-HCl调其pH值为8.2，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液。
上样：上样时泵流速为8.0-49.9ml/min。上样结束后用平衡液平衡2-4个柱床体积。
洗脱：使用预洗液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，洗脱2-4个柱床体积。然后将进液管换至洗脱液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液、0.1MNaCL）中，开始目标峰洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。
阳离子柱层析（XK50/30层析柱，CM Sepharose FF填料）
平衡：使用平衡液（20mmol/L pH4.5 HAc-NaAc缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min，平衡8-10倍柱床体积。
上样：上样液为上步得到的OD280大于0.3的洗脱液，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始上样。上样结束后，换至平衡液中，平衡2-4个柱床体积，至记录笔回至基线。用预洗液（20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.15 MNaCL）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，至杂质峰洗下为止。换至洗脱液(50mmol/LpH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.2MNaCL进行洗脱目的峰，收集OD280大于0.3的洗脱峰。
反相填料层析
采用Pharmacia公司的预装型SOURCE 5RPC 4.6/150柱（粒径5μm，4.6×150mm、柱温度2-6℃，流速1.0ml/min）。配制洗脱液A为含100mmolNaCl溶液10mmol pH= 8.0 Tris-HCl缓冲液，洗脱液B为含100mmolNaCl、 50%乙腈的10mmol pH= 8.0 Tris-HCl 缓冲液。先用洗脱液A洗脱；再用梯度20％-80％洗脱液B洗脱，15-35分钟收集样品峰。被收集的样品经低温蒸发，除去有机物质，然后透析浓缩后保存在2-8℃条件下。
rhG-CSF经阳离子交换层析分离纯化样品经SDS-PAGE电泳后，用凝胶成像扫描系统分析，其电泳纯度为90％，HPLC纯度为90％，其比活能达到0.8×107U/mg ,在2-8℃条件下放置该样品3个月其电泳纯度和活性均无显著性变化。放置6个月其纯度和比活降低。可确定稳定性可以保证3个月。
rhG-CSF经反相填料层析分离纯化样品经取样检测，其电泳纯度与HPLC纯度均大于99％，经测定其比活可达到3.0×108U/mg 。该样品在4℃条件下放置12个月，该样品电泳纯度和活性均无显著性变化。稳定性可以保证12个月。其他质量控制项目均符合药典要求。采用本发明的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化工艺，可以大幅度地提高rhG-CSF的纯度、比活、稳定性。
本发明的工艺方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：
层析方式的选择：针对现有技术设计了5种层析方式，用这5种方式对复性溶液进行纯化，然后进行测定，实验结果如下：
经过检测发现，方式5效果最好。
具体实施方式：
以下对本发明予以进一步详尽说明。
实施例1
阴离子柱层析（XK50/30层析柱，Q sepharose FF填料）
使用平衡液（20mmol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡8-10倍柱床体积。
样品预处理：将复性产物用2mol/L pH8.2 Tris-HCl调其pH值为8.2，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液。
上样：上样时泵流速为8.0-49.9ml/min。上样结束后用平衡液平衡2-4个柱床体积。
洗脱：使用预洗液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，洗脱2-4个柱床体积。然后将进液管换至洗脱液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液、0.1MNaCL）中，开始目标峰洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。
阳离子柱层析（XK50/30层析柱，CM Sepharose FF填料）
平衡：使用平衡液（20mmol/L pH4.5 HAc-NaAc缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min，平衡8-10倍柱床体积。
上样：上样液为上步得到的OD280大于0.3的洗脱液，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始上样。上样结束后，换至平衡液中，平衡2-4个柱床体积，至记录笔回至基线。用预脱液（20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.15 MNaCL缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，至杂质峰洗下为止。换至洗脱液(50mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.2 MNaCL缓冲液)进行洗脱目的峰，收集OD280大于0.3的洗脱峰。取样检测。
实施例2
阴离子柱层析（XK50/30层析柱，Q sepharose FF填料）
使用平衡液（20mmol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡8-10倍柱床体积。
样品预处理：将复性产物用2mol/L pH8.2 Tris-HCl调其PH值为8.2，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液。
上样：上样时泵流速为8.0-49.9ml/min。上样结束后用平衡液平衡2-4个柱床体积。
洗脱：使用预洗液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，洗脱2-4个柱床体积。然后将进液管换至洗脱液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液、0.1MNaCL）中，开始目标峰洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。
疏水柱层析（INdEX层析柱，Phenyl Sepharose FF填料）
平衡：使用平衡液(20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.8mol/L硫酸铵)，调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡2-4倍柱床体积，至流出液PH值为4.5-5.0结束。
样品预处理：在上步洗脱液中加入硫酸铵，调节硫酸铵终浓度为0.8mol/L，静置半小时以上，即为样品液。
上样：以30.0-49.9ml/min流速上样。上样结束后，用平衡缓冲液平衡1-2倍柱床体积。
洗脱：使用洗脱液(80mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.05MNaCl)，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。取样检测。
实施例3
阳离子柱层析（XK50/30层析柱，CM Sepharose FF填料）
平衡：使用平衡液（20mmol/L pH4.5 HAc-NaAc缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min，平衡8-10倍柱床体积。
样品预处理：将复性产物用冰醋酸调其pH值为4.5，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液。
上样：调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始上样。上样结束后，换至平衡液中，平衡2-4个柱床体积，至记录笔回至基线。用预脱液（20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.15 MNaCLp）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，至杂质峰洗下为止。换至洗脱液(50mmol/LpH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.2 MNaCLp)进行洗脱目的峰，收集OD280大于0.3的洗脱峰。
疏水柱层析（INdEX层析柱，Phenyl Sepharose FF填料）
平衡：使用平衡液(20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.8mol/L硫酸铵)，调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡2-4倍柱床体积，至流出液pH值为4.5-5.0结束。
样品预处理：在上步洗脱液中加入硫酸铵，调节硫酸铵终浓度为0.8mol/L，静置半小时以上即为样品液。
上样：以30.0-49.9ml/min流速上样。上样结束后，用平衡缓冲液平衡1-2倍柱床体积。
洗脱：使用洗脱液(80mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.05M NaCl)，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。取样检测。
实施例4
阴离子柱层析（XK50/30层析柱，Q sepharose FF填料）
使用平衡液（20mmol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡8-10倍柱床体积。
样品预处理：将复性产物用2mol/L pH8.2 Tris-HCl调其pH值为8.2，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液。
上样：上样时泵流速为8.0-49.9ml/min。上样结束后用平衡液平衡2-4个柱床体积。
洗脱：使用预洗液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，洗脱2-4个柱床体积。然后将进液管换至洗脱液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液、0.1MNaCL）中，开始目标峰洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。
反相填料层析
采用pharmacia 公司的XK 26/20柱，用MDS-5型反相制备液相色谱填料装柱，洗脱液A为20％PB缓冲液，洗脱液B为含0.01％tween80的20％甲醇溶液，流速为10ml /min。经采用梯度洗脱，在10-45分钟10％-75%洗脱液B洗脱，收集样品峰。收集样品时，收集中间部分。被收集的样品经低温蒸发，除去有机物质，然后透析浓缩后保存在2-8℃条件下。
实施例5
阴离子柱层析（XK50/30层析柱，Q sepharose FF填料）
使用平衡液（20mmol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min。平衡8-10倍柱床体积。
样品预处理：将复性产物用2mol/L pH8.2 Tris-HCl调其pH值为8.2，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液。
上样：上样时泵流速为8.0-49.9ml/min。上样结束后用平衡液平衡2-4个柱床体积。
洗脱：使用预洗液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，洗脱2-4个柱床体积。然后将进液管换至洗脱液（20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液、0.1MNaCL）中，开始目标峰洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰。
阳离子柱层析（XK50/30层析柱，CM Sepharose FF填料）
平衡：使用平衡液（20mmol/L PH4.5 HAc-NaAc缓冲液），调节泵流速为30.0-49.9ml/min，平衡8-10倍柱床体积。
上样：上样液为上步得到的OD280大于0.3的洗脱液，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始上样。上样结束后，换至平衡液中，平衡2-4个柱床体积，至记录笔回至基线。用预脱液（20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.15 MNaCL缓冲液）进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，至杂质峰洗下为止。换至洗脱液(50mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.2 MNaCL缓冲液)进行洗脱目的峰，收集OD280大于0.3的洗脱峰。
反相填料层析
采用Pharmacia公司的预装型SOURCE 5RPC 4.6/150柱（粒径5μm，4.6×150mm、柱温度2-6℃，流速1.0ml/min）。配制洗脱液A为含100mmolNaCl溶液10mmol Tris-HCl (pH= 8)，洗脱液B为含100mmolNaCl溶液10mmol Tris-HCl 50%乙腈(pH= 8)。先用洗脱液A洗脱；再用梯度洗脱20％-80％洗脱液B洗脱，15-35分钟收集样品峰。被收集的样品经低温蒸发，除去有机物质，然后透析浓缩后保存在2-8℃条件下。取样检测。
经取样检测，其电泳纯度与HPLC纯度均大于99％，经测定其比活可达到3.0×108U/mg 。该样品在2-8℃条件下放置12个月，该样品电泳纯度和活性均无显著性变化。稳定性可以保证12个月。其他质量控制项目均符合药典要求。采用本发明的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化工艺，可以大幅度地提高rhG-CSF的纯度、比活、稳定性。

Claims (1)

1.一种rhG-CSF的纯化方法，该方法包括以下步骤：
a、选用工程菌做菌株进行发酵培养；
b、对发酵培养所得菌体进行包涵体的分离和洗涤，得到精制包涵体；
c、对精制包涵体进行复性，得到复性产物；
d、对复性产物进行阴离子柱层析处理，得到阴离子柱层析产物；
e、对阴离子柱层析产物进行阳离子柱层析，得到阳离子柱层析产物；
f、对阳离子柱层析产物进行精细分离，采用反相填料柱层析处理，得到重组人粒细胞集落刺激因子；
其中，所述对复性产物进行阴离子柱层析处理方法如下：
阴离子柱层析为XK50/30层析柱，Qsepharose FF填料
使用20mmol/L pH8.2 Tris-HCl缓冲液为平衡液，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，平衡8-10倍柱床体积，
样品预处理：将复性产物用2mol/L pH8.2 Tris-HCl调其pH值为8.2，然后超滤浓缩至复性体积的1/10，即为上样液，
上样：上样时泵流速为8.0-49.9ml/min，上样结束后用平衡液平衡2-4个柱床体积，
洗脱：使用20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液为预洗液进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，洗脱2-4个柱床体积，然后将进液管换至20mmol/L pH7.8 NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液、0. 1MNaCl的洗脱液中，开始目标峰洗脱，收集OD280大于0.3洗脱峰；
所述对阴离子柱层析产物进行阳离子柱层析，方法如下：
阳离子柱层析为XK50/30层析柱，CMSepharose FF填料
平衡：使用20mmol/L pH4.5 HAc-NaAc缓冲液为平衡液，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，平衡8-10倍柱床体积，
上样：上样液为上步得到的OD280大于0.3的洗脱液，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，开始上样，上样结束后，换至平衡液中，平衡2-4个柱床体积，至记录笔回至基线，用20mmol/L pH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.15MNaCl为预洗液进行预洗，调节泵流速为30.0-49.9ml/min，至杂质峰洗下为止，换至50mmol/LpH4.5HAc-NaAc缓冲液、0.2MNa C l的洗脱液中进行洗脱目的峰，收集OD280大于0.3的洗脱峰，
所述对阳离子柱层析产物进行精细分离，采用反相填料柱层析处理，方法如下：
反相填料层析采用Pharmacia公司的预装型SOURCE 5RPC 4.6/150柱，其粒径5μm，4.6×150mm、柱温度2-6℃，流速1.0ml/min，  
洗脱液A为含100mmolNaCl溶液10mmol pH= 8.0 Tris-HCl缓冲液，洗脱液B为含100mmolNaCl、 50%乙腈的10mmol pH= 8.0 Tris-HCl 缓冲液，先用洗脱液A洗脱；再用梯度20％-80％洗脱液B洗脱，15-35分钟收集样品峰，被收集的样品经低温蒸发，除去有机物质，然后透析浓缩后保存在2-8℃条件下。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104120159A (zh) * 2013-04-26 2014-10-29 上海三维生物技术有限公司 一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法
CN108368162B (zh) * 2016-04-15 2021-11-12 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种重组人粒细胞刺激因子的复性及纯化方法
CN110041423A (zh) * 2018-01-16 2019-07-23 江苏奥赛康药业股份有限公司 一种重组人粒细胞集落刺激因子的复性及纯化方法
CN109354622A (zh) * 2018-12-05 2019-02-19 苏州汇通色谱分离纯化有限公司 一种索玛鲁肽纯化专用填料及其纯化方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101597319A (zh) * 2008-06-03 2009-12-09 哈药集团生物工程有限公司 一种纯化重组人粒细胞集落刺激因子的方法
CN101830977A (zh) * 2010-05-07 2010-09-15 厦门特宝生物工程股份有限公司 一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101597319A (zh) * 2008-06-03 2009-12-09 哈药集团生物工程有限公司 一种纯化重组人粒细胞集落刺激因子的方法
CN101830977A (zh) * 2010-05-07 2010-09-15 厦门特宝生物工程股份有限公司 一种重组人粒细胞刺激因子的纯化方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
储淳等.重组人粒细胞集落刺激因子的纯化.《微生物学免疫学进展》.1998,第26卷(第2期),
李福胜等.粒细胞集落刺激因子（G-CSF）在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立.《中国生物化学与分子生物学报》.1998,第14卷(第5期), *
重组人粒细胞集落刺激因子的纯化;储淳等;《微生物学免疫学进展》;19981231;第26卷(第2期);第1-5页 *

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