CN103012304B - 用于制备免疫佐剂的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于制备免疫佐剂的化合物，更具体地本发明提供晶体ER-806158，(R)-1-(((R-4，5-二氢-2-苯基唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇，其具有三斜晶系和P1空间群。

Description

用于制备免疫佐剂的化合物
本申请是申请号为200680023963.7，申请日为2006年6月30日，发明名称为“用于制备免疫佐剂的化合物”的中国专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及用于制备免疫佐剂的化合物。
背景技术
已证明疫苗通常是用来预防传染病的成功的方法。一般情况下，其是成本有效的，并且不会诱导靶病原体的抗生素抗性或影响存在于宿主中的正常菌群。在很多情况中，例如当诱导抗病毒免疫时，疫苗可预防没有可行的治愈性或改善性治疗方法的疾病。
疫苗通过激活免疫系统以引起对药剂或抗原的应答而起作用，通常是以非传染性的或非病原的形式引入到体内的传染性的生物体或其一部分。一旦免疫系统对所述生物体而言已是“待发的”或“激活的”，那么之后使免疫系统暴露于作为传染性病原的该生物体产生快速且强烈的免疫应答，所述免疫应答在病原能够在宿主生物体中繁殖和感染足够的细胞以引起病症之前破坏病原。
用来激活免疫系统的药剂或抗原可以是处于较弱传染性状态的完整生物体，称为减毒生物体，或者在某些情况下是生物体的组分例如代表生物体的各种结构组分的碳水化合物、蛋白质或肽。
在许多情况下，为了刺激免疫系统足以使疫苗有效，即赋予免疫性，有必要增强对存在于疫苗中的抗原的免疫应答。许多蛋白质和大多数肽以及碳水化合物抗原单独施用不会引起足以赋予免疫性的抗体应答。需要这样的抗原以其会被认为是外来的并会引起免疫应答的方式提供给免疫系统。为此，已经设计了固定抗原并刺激免疫应答的添加剂(佐剂)。
最著名的佐剂，弗氏完全佐剂，由在油/水乳状液中的分枝杆菌的混合物组成。弗氏佐剂通过两种方式起作用：第一种，通过提高细胞和体液介导免疫，第二种，通过阻止抗原激发的迅速分散(“储存效应”)。然而，由于对该物质的频繁的中毒的生理和免疫反应，弗氏佐剂不能用于人类。
另一类已经表现出具有免疫激活作用或佐剂活性的分子是内毒素，也称为脂多糖(LPS)。LPS通过诱发“先天的”免疫应答，即已演变为使得生物体能够识别内毒素(和入侵细菌，其中内毒素是入侵细菌的组成部分)的应答，来刺激免疫系统，而不需要预先与生物体接触。虽然LPS毒性太大而不能作为可行的佐剂，但是在结构上与内毒素相关的分子例如单磷酰脂质A(“MPL”)正在临床试验上进行作为佐剂的测试。已证实LPS和MPL都是人toll样受体-4(TLR-4)。然而，目前唯一被FDA认可的用于人类的佐剂是铝盐(明矾)，其用来通过抗原的沉淀“储存”抗原。明矾也刺激对抗原的免疫应答。
因此，为了刺激免疫系统以产生比抗原单独或与明矾一起注射时所观察到的更强的对于抗原的抗体应答，需要开发用于制备可与抗原共施用的化合物的合成方法。
发明内容
一方面，本发明提供一种用于合成具有如下结构的TLR-4受体激动剂E6020的方法：
另一方面，本发明包括用于合成E6020的任何立体异构体的方法。因此，在此提供用于制备具有如下结构的化合物的合成中间体：
当与抗原例如疫苗共施用于细菌性和病毒性疾病时，这些化合物可用作免疫佐剂。本发明还提供可用于制备E6020及其立体异构体的合成中间体。
本发明还涉及以下方面：
1.式(15)的化合物或其盐：
其中：
A是-(CH2)x-O-或共价键；
n是0或1；
x为1～6；
R1a是氢、C1～C6的烷基、C3～C6的烯基、C3～C6的炔基或亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基；
R2a和R2b之一是H，另一个是一价氮保护基；或者R2a和R2b一起是二价氮保护基；
当A是-(CH2)x-O-时，R3a和R3b之一是H，另一个是一价氮保护基，或者R3a和R3b一起是二价氮保护基；
当A是共价键时，R3a和R3b是C1～C6的烷基，或者R3a和R3b一起是-(CH2)4-、-(CH2)5-或-(CH2)2O(CH2)2-；
R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基；以及
R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。
2.如项目1所述的化合物，其中R2a和R2b或R3a和R3b的所述氮保护基独立地选自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C＝、四氯邻苯二酰胺或叠氮化物。
3.如项目1所述的化合物，其中与R2a和R2b连接的所述氮上的保护基可以在选自酸性、碱性、氧化和还原条件的第一条件下脱除；并且与R3a和R3b连接的所述氮上的保护基可以在选自不同于所述第一条件的其余三种条件的第二条件下脱除。
4.如项目1所述的化合物，其中A是-(CH2)2-O-；n是0；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
5.如项目4所述的化合物，其具有式ER-820842：
6.如项目1所述的化合物，其中A是-(CH2)2-O-；n是1；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
7.如项目6所述的化合物，其具有式ER-819344：
8.如项目1所述的化合物，其中A是共价键；n是0；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
9.如项目8所述的化合物，其具有式ER-819385：
10.如项目1所述的化合物，其中A是共价键；n是0；R3a和R3b各自是异丙基；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
11.如项目10所述的化合物，其具有式ER-820116：
12.如项目1所述的化合物，其中A是-(CH2)2-O-；n是0；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
13.式(16)的化合物或其盐：
其中：
n是0或1；
R1a是氢、C1～C6的烷基、C3～C6的烯基、C3～C6的炔基、亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基；
R2a和R2c之一是H，另一个是一价氮保护基或-C(O)CH2C(O)R6；R2a和R2c一起是二价氮保护基；
R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基；以及
R5和R6独立地是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。
14.如项目13所述的化合物，其中R2a和R2b的所述氮保护基独立地选自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C＝、四氯邻苯二酰胺或叠氮化物。
15.如项目13所述的化合物，其中n是1；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
16.如项目13所述的化合物，其中n是1；R1a是烯丙基；R2a是氢；R2c是Boc；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
17.如项目16所述的化合物，其具有式ER-819409：
18.如项目13所述的化合物，其中n是1；R2a是氢；R2c是-C(O)CH2C(O)R6；R4是C7的烷基；R5是C11的烷基；并且R6是C11的烷基。
19.如项目13所述的化合物，其中n是0；R1a是烯丙基；R2a是氢；R2c是Boc；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
20.如项目19所述的化合物，其具有式ER-821843：
21.如项目13所述的化合物，其中n是1；R1a是烯丙基；R2a是氢；R2c是氢；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
22.如项目21所述的化合物，其具有式ER-807284：
23.如项目13所述的化合物，其中n是0；R1a是烯丙基；R2a是氢；R2c是-C(O)CH2C(O)R6；R4是C7的烷基；R5是C11的烷基；并且R6是C11的烷基。
24.如项目23所述的化合物，其具有式ER-807825：
25.式(17)的化合物：
其中：
R是氢或C1～C6的烷基；
R2a和R2b之一是H，另一个是一价氮保护基，或者R2a和R2b一起是二价氮保护基；
R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基；和
R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。
26.如项目25所述的化合物，其中R2a和R2b的氮保护基独立地选自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C＝、四氯邻苯二酰胺或叠氮化物。
27.如项目25所述的化合物，其中R是氢；R2a和R2b是氢；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
28.如项目27所述的化合物，其具有式ER-819120：
29.如项目25所述的化合物，其中R是氢；R2a是氢；R2b是氮保护基；R4是C7的烷基；并且R5是C11的烷基。
30.如项目29所述的化合物，其具有式ER-819302：
31.式(18)的化合物：
其中：
R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基；和
R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。
32.如项目31所述的化合物，其具有式ER-819509：
33.晶体ER-806158，(R)-1-(((R)-4，5-二氢-2-苯基唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇，其具有三斜晶系和P1空间群。
34.如项目33所述的晶体ER-806158，(R)--(((R)-4，5-二氢-2-苯基唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇，其特征在于晶格参数为：
α＝106.008(4)°
β＝95.604(4)°
γ＝98.696(4)°
并且Z＝1。
附图说明
图1描述晶体ER-8016158的结构。
图2是沿着a轴的晶胞堆积图，其示出在ER-806158晶体内氢键结合的最好的图，虚线。
图3描述晶体ER-806158的粉末X射线衍射(PXRD)图。
图4表示晶体ER-806158的DSC温谱图。
图5表示晶体ER-806158的红外光谱。
具体实施方式
定义
根据本发明并如本文所使用的，用下面的含义定义下列术语，除非另有明确说明。
下面还将更详细地描述本发明中公开的特定化合物以及特定官能团的定义。对本发明来说，根据元素周期表，CAS版本，Handbook ofChemistry and Physics，75th Ed.，封面内页，确定化学元素，并且通常如其中所述限定特定的官能团。此外，在“Organic Chemistry”，ThomasSorrell，University Science Books，Sausalito：1999中，描述了有机化学的普遍原理以及特定官能部分和反应性，其全部内容通过引用并入本文。另外，本领域的技术人员应该理解，在此所描述的合成方法使用多种保护基。就在此所用的术语“保护基”而言，指的是特定官能部分例如O、S、P或N被临时封锁，使得反应可选择性地在多官能化合物中的另外的反应活性部位进行。在优选实施方案中，保护基以良好的产率选择性地反应，以得到对所设计的反应稳定的保护的底物；必须通过易于得到的、优选为无毒且不攻击其它官能团的试剂来选择性地脱除保护基；保护基形成可容易分离的衍生物(更优选没有产生新的立体中心)；并且保护基具有最小的附加的官能度，以避免更多的反应位点。如在此所详述的，可以使用氧、硫、氮、磷和碳保护基。
例如，在某些实施方案中，如在此所详述的，使用某些示例性的氧保护基。这些氧保护基包括但不限于甲醚、取代的甲醚(例如，MOM(甲氧基甲醚)、MTM(甲硫基甲醚)、BOM(苄氧基甲醚)、PMBM(对甲氧基苄氧基甲醚)，等等)、取代的乙醚、取代的苄醚、硅醚(例如，TMS(三甲基硅醚)、TES(三乙基硅醚)、TIPS(三异丙基硅醚)、TBDMS(叔丁基二甲基硅醚)、三苄基硅醚、TBDPS(叔丁基二苯基硅醚))、酯(例如，甲酸酯、乙酸酯、苯甲酸酯(Bz)、三氟乙酸酯、二氯乙酸酯，等等)、碳酸酯、环状缩醛和缩酮。用于亚磷酸酯氧和磷酸酯氧的保护基包括：例如，诸如甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环己基、1-金刚烷基和2-三甲基甲硅烷基丙-2-烯基的烷基磷酸酯/亚磷酸酯；诸如乙烯基和烯丙基的烯基磷酸酯/亚磷酸酯；诸如2-氰乙基、2-氰基-1，1-二甲基乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基、2-(苯磺酰基)乙基和2-(苯甲磺酰基)乙基的2-取代的乙基磷酸酯/亚磷酸酯；诸如2，2，2-三氯乙基、2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基、2，2，2-三溴乙基、2，3-二溴丙基的卤乙基磷酸酯/亚磷酸酯；诸如苄基、4-硝基苄基、4-氯苄基、1-氧桥-4-甲氧基-2-吡啶甲基、芴基-9-甲基、5-苯并异唑基亚甲基、(C6H5)2C＝的苄基磷酸酯/亚磷酸酯；和诸如苯基、4-硝基苯基和4-氯苯基的苯基磷酸酯/亚磷酸酯；以及诸如三甲基甲硅烷基的甲硅烷基磷酸酯/亚磷酸酯。
在某些其它的示例性的实施方案中，使用氮保护基。这些氮保护基可以是一价或二价保护基，例如但不限于氨基甲酸酯(包括甲基、乙基和取代的氨基甲酸乙酯(例如，Troc)，等等)、酰胺、环状酰亚胺衍生物、N-烷基和N-芳基胺、亚胺衍生物和烯胺衍生物等。胺保护基例如苄氧基羰基(Cbz)、叔丁氧基羰基(Boc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、2，2，2-三氯乙氧基羰基(TROC)、三甲基甲硅烷基(TMS)-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基或(C6H5)2C＝(二苯基亚甲基)也可被提及。某些其它示例性的保护基在此详述，然而，应该理解本发明并不限于这些保护基；相反地，利用上述标准可以很容易地确定并在本发明中使用多种另外的等价保护基。此外，在″Protective Groups in Organic Synthesis″第三版Greene，T.W.和Wuts，P.G.，Eds.，John Wiley & Sons，New York：1999中描述了多种保护基，其全部内容在此通过参考并入。
应该理解，在此描述的化合物可以被任意数量的取代基或官能部分取代。一般地，术语“取代的”，无论其前面是否加上术语“任选地”，和包含在本发明的式中的取代基，是指给定结构中的氢基被特定的取代基代替。当任意给定结构中的多于一个位置可被选自特定基团的多于一个取代基取代时，在每个位置处的取代基可以相同或不同。如在此所用的，术语“取代的”意指包括所有可允许的有机化合物的取代基。在一个广泛的方面中，所述可允许的取代基包括有机化合物的无环和环状的、带支链和不带支链的、碳环和杂环的、芳香和非芳香的、碳和杂原子取代基。就本发明而言，杂原子例如氮可以具有满足所述杂原子化合价的在此所述的有机化合物的氢取代基和/或任何可允许的取代基。此外，本发明并不以任何方式被有机化合物的可允许的取代基所限制。取代基的组合和本发明预见到的变化优选为导致形成用于治疗和预防例如通常如上所述的疾病的稳定化合物的那些。取代基的实例包括但不限于卤取代基，例如F、Cl、Br或I；羟基；C1～C6的烷氧基，例如-OCH3、-OCH2CH3或-OCH(CH3)2；C1～C6的卤烷基，例如-CF3、-CH2CF3或-CHCl2；C1～C6的烷硫基；氨基；单和二烷基氨基；-NO2；-CN；硫酸酯基等。另外的通常可用的取代基的实例通过在此描述的实施例中所示的特定实施方案说明。
优选地，在此所用的术语“稳定的”是指化合物具有足以允许制备的稳定性并使化合物的完整性保持足够长的时间以进行检测且优选保持足够长的时间以用于在此详述的目的。
如在此所用的，术语“烷基”包括直链的和带支链的烷基。类似的规定用于其它一般性术语，例如“烯基”、“炔基”等。此外，如在此所用的，术语“烷基”、烯基”、“炔基”等包括取代的和未取代的基团。在某些实施方案中，如在此所用的，“低级烷基”用来表示具有1～6个碳原子的那些烷基(环状的、无环的、取代的、未取代的、带支链的或不带支链的)。在其它实施方案中，优选C1-4、C2-4、C1-3或C3-6的烷基或烯基。
在某些实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含用于烷基的1～20个脂肪族碳原子和用于烯基和炔基的2～20个碳原子。在某些其它实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含1～15个脂肪族碳原子。在另一些实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含1～8个脂肪族碳原子。在又一些实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含1～6个脂肪族碳原子。在另一些实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含1～4个碳原子。因此示例性的脂肪族基团包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、异戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等，其又可以带有一个或多个取代基。烯基包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基等。有代表性的炔基包括但不限于乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丙炔基等。
如在此所用的，术语“脂环的”是指结合脂肪族和环状化合物的特性的化合物，包括但不限于环状的或多环的脂肪烃和桥环烷基化合物，其任选地被一个或多个官能团取代。如本领域技术人员所理解的，“脂环的”在此意欲包括但不限于环烷基、环烯基和环炔基部分，其任选地被一个或多个官能团取代。因此，示例性的脂环基团包括但不限于例如环丙基、-CH2-环丙基、环丁基、-CH2-环丁基、环戊基、-CH2-环戊基-n、环己基、-CH2-环己基、环己烯基乙基、环己基乙基、降冰片基部分等，其又可以带有一个或多个取代基。
在此所用的术语“烷氧基”(或“烷基氧基”)或“硫代烷基”是指如先前所限定的烷基或环烷基通过氧原子或通过硫原子连接到母分子部分。在某些实施方案中，烷基或环烷基包含1～20个脂肪族或脂环族碳原子。在某些其它实施方案中，烷基或环烷基包含1～10个脂肪族或脂环族碳原子。在另一些实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含1～8个脂肪族或脂环族碳原子。在又一些实施方案中，烷基包含1～6个脂肪族或脂环族碳原子。在另一些实施方案中，烷基包含1～4个脂肪族或脂环族碳原子。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基和正己氧基。硫代烷基的实例包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、正丁硫基等。
术语“烷氨基”是指具有-NHR’结构的基团，其中R’是在此所限定的烷基或环烷基。术语“二烷氨基”是指具有-N(R’)2结构的基团，其中存在的每个R’独立地是在此所限定的烷基或环烷基。术语“氨基烷基”是指具有NH2R’-结构的基团，其中R’是在此所限定的烷基或环烷基。在某些实施方案中，烷基包含1～20个脂肪族或脂环族碳原子。在某些其它实施方案中，烷基或环烷基包含1～10个脂肪族或脂环族碳原子。在另一些实施方案中，在本发明中所用的烷基、烯基和炔基包含1～8个脂肪族或脂环族碳原子。在又一些实施方案中，烷基或环烷基包含1～6个脂肪族或脂环族碳原子。在另一些实施方案中，烷基或环烷基包含1～4个脂肪族或脂环族碳原子。烷氨基的实例包括但不限于甲氨基、乙氨基、异丙氨基等。
通常，在此所用的术语“芳基”和“杂芳基”是指稳定的优选具有3～14个碳原子的单或多环、杂环、多环和多杂环的不饱和部分，其每一个可以被取代或不被取代。还应该理解，如在此所限定的芳基和杂芳基部分可以通过烷基或杂烷基部分连接，并因此还包括-(烷基)芳基、-(杂烷基)芳基、-(杂烷基)芳基和-(杂烷基)杂芳基部分。因此，如在此所用的，术语“芳基或杂芳基”和“芳基、杂芳基、-(烷基)芳基、-(杂烷基)芳基、-(杂烷基)芳基和-(杂烷基)杂芳基”是可互换的。取代基包括但不限于任意的先前提及的取代基，即取代脂肪部分或在此公开的其它部分的取代基，其结果是形成稳定的化合物。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指具有一个或两个芳环的单或双环碳环体系，包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。在本发明的某些实施方案中，在此所用的术语“杂芳基”是指具有五到十个环原子的环状芳基，其中一个环原子选自S、O和N；零、一或两个环原子是另外的独立地选自S、O和N的杂原子；并且剩下的环原子是碳，所述基团通过任意的环原子连接到分子的其余部分，例如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、唑基、异唑基、噻二唑基、二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基等。
应该理解，芳基和杂芳基(包括二环芳基)可以是未取代的或取代的，其中取代包括独立地用任意的一个或多个通常如上所述的取代基替代其上的一个或多个氢原子。通常可用的取代基的另外的实例通过在此所述的实施例中所示的特定实施方案说明。
在此所用的术语“环烷基”具体是指具有3～7个、优选3～10个碳原子的基团。合适的环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等，其与其它脂环、杂脂环或杂环部分一样，可任选地被一个或多个通常如上所述的取代基取代。类似的规则适用于其它一般性术语，例如“环烯基”、“环炔基”等。此外，应该理解如上和在此所述的任何的脂肪族或杂脂肪族部分都可以包含稠合到其上的芳基或杂芳基部分。通常可用的取代基的另外的实例通过在此所述的实施例中所示的特定实施方案说明。
在此所用的术语“杂脂肪族的”是指主链中的一个或多个碳原子已经被杂原子取代的脂肪族部分。因此，杂脂肪族基团是指含有例如替代碳原子的一个或多个氧、硫、氮、磷或硅原子的脂肪链。杂脂肪族部分可以是带支链的或线性不带支链的。在某些实施方案中，杂脂肪族部分通过用一个或多个通常如上所述的取代基独立地替代其上的一个或多个氢原子而取代。通常可用的取代基的另外的实例通过在此所述的实施例中所示的特定实施方案说明。
在此所用的术语“杂脂环族的”是指结合杂脂肪族和环状化合物的特性的化合物，包括但不限于饱和的和不饱和的单或多环杂环，例如吗啉基、吡咯烷基、呋喃基、噻吩基、吡咯基等，其任选地被如在此所限定的一个或多个官能团取代。
此外，应该理解，如上和在此所述的任何的脂环族或杂脂环族部分都可以包含稠合到其上的芳基或杂芳基部分。通常可用的取代基的另外的实例通过在此所述的实施例中所示的特定实施方案说明。
在此所用的术语“卤”和“卤素”是指选自氟、氯、溴和碘的原子。
术语“卤烷基”表示如上所限定的具有一个、两个或三个卤素原子连接到其上的烷基，并以例如氯甲基、溴乙基、三氟甲基等基团为例。
在此所用的术语“杂环烷基”或“杂环”是指非芳族的5-、6-或7-元环或多环基团，包括但不限于包含具有独立地选自氧、硫和氮的一个到三个杂原子的稠合的六元环的二或三环基团，其中(i)每个5-元环具有0～1个双键并且每个6-元环具有0～2个双键，(ii)氮和硫杂原子可以任选地被氧化，(iii)氮杂原子可以任选地被季铵化，和(iv)任意的上述杂环可以被稠合到取代的或未取代的芳环或杂芳环上。典型的杂环包括但不限于吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、唑烷基、异唑烷基、吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基和四氢呋喃基。在某些实施方案中，使用“取代的杂环烷基或杂环”基团，并如在此所用的是指如上所限定的通过用一个或多个通常如上所述的取代基独立地替代其上的一个或多个氢原子而取代的杂环烷基或杂环基团。通常可用的取代基的另外的实例通过在此所述的实施例中所示的特定实施方案说明。
在此所用的术语“脂肪族的”、“杂脂肪族的”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“杂烷基”、“杂烯基”、“杂炔基”等包括取代的和未取代的、饱和的和不饱和的以及线性的和带支链的基团。类似地，术语“脂环族的”、“杂脂环族的”、“杂环烷基”、“杂环”等包括取代的和未取代的以及饱和的和不饱和的基团。此外，术语“环烷基”、“环烯基”、“环炔基”、“杂环烷基”、“杂环烯基”、“杂环炔基”、“芳基”、“杂芳基”等包括取代的和未取代的基团。
此外，E6020包含不对称的碳原子，并因此可作为立体异构体而存在，即对映体和非对映体。本领域技术人员将认识到本发明的方法可适于制备E6020的任意的所有可能的立体异构体。虽然在此提供的实施例公开了特定异构体的制备，但是认为用于制备E6020的其它立体异构体的方法落在本发明的范围内。
发明详述
一方面，本发明提供一种用于合成具有如下结构的TLR-4受体激动剂E6020的方法：
E6020是有效的TLR-4受体激动剂，因此所述化合物在与抗原例如用于细菌性疾病和病毒性疾病的疫苗共施用时用作免疫佐剂。例如，E6020可与任何合适的例如选自来自病原和非病原的生物体、病毒和真菌的抗原的抗原剂的抗原或疫苗组分组合使用。作为另一个实例，E6020可与对例如天花、黄热病、癌、瘟热、霍乱、禽痘、猩红热、白喉、破伤风、百日咳、流感、狂犬病、腮腺炎、麻疹、口蹄疫和脊髓灰质炎的病状和病情有药理活性的蛋白质、肽、抗原和疫苗组合使用。在某些实施方案中，E6020和抗原各自以有效量存在，以在将其施用于所接种疫苗的宿主动物、胎或卵时引起免疫应答。
另一方面，本发明包括用于合成TLR-4受体激动剂E6020的任意立体异构体的方法。因此，在此提供用于制备具有如下结构的化合物的方法：
I.磷酸酯脲基二聚体的制备
在某些实施方案中，本发明方法包括如下步骤：
(a)使具有如下结构的化合物：
其中，R1a是烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基、亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基；和
R2a和R2b各自独立地是氢或合适的氮保护基，或者R2a和R2b一起形成5-或6-元杂环；其中R2a和R2b不同时为氢；
与光气在适当的条件下反应，形成具有如下结构的脲基二聚体：
(b)在适当的条件下使在步骤(a)中形成的脲基二聚体(2)脱保护，以形成具有如下结构的部分脱保护的二聚体(3)：
(c)在适当的条件下使在步骤(b)中形成的部分脱保护的二聚体与合适的试剂反应，以形成具有如下结构的保护的二聚体(4)：
和
(d)在适当的条件下用一种或多种合适的试剂处理在步骤(c)中形成的二聚体，以形成具有如下结构的钠盐：
在某些实施方案中，上述化合物1～5具有如下的立体化学：
在另一些实施方案中，在适当的条件下用一种或多种合适的试剂处理在步骤(c)中形成的二聚体的步骤导致具有如下结构的化合物的形成：
然后其被纯化，产生相应的二钠盐：
在某些实施方案中，例如如上所示的那些，出现的每个R1a独立地是氢、C1～C6的烷基、C3～C6的烯基、C3～C6的炔基或亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基。在某些示例性的实施方案中，每个R1a是烯丙基。
在某些实施方案中，R2a和R2b各自独立地是氢、烷基、烯基、-C(＝O)Rx、-C(＝O)ORx、-SRx、SO2Rx，或者R2a和R2b一起形成具有＝CRxRy结构的部分，其中R2a和R2b不同时为氢并且Rx和Ry各自独立地是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、-C(＝O)RA或-ZRA，其中Z是-O-、-S-、-NRB，其中出现的每个RA和RB独立地是氢或烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂脂肪族、杂脂环族、芳基或杂芳基部分。在某些示例性的实施方案中，R2a是氢且R2b是-C(＝O)ORx，其中Rx是取代的或未取代的低级烷基。在某些其它示例性的实施方案中，R2a是氢且R2b是-C(＝O)OtBu。
在某些实施方案中，步骤(a)中的反应条件包括在适当溶剂中的光气。在某些示例性的实施方案中，所述溶剂是CH2Cl2、甲苯或其组合。在某些实施方案中，步骤(a)中的反应条件还包括弱碱。在某些示例性的实施方案中，所述弱碱是NaHCO3水溶液。
在某些实施方案中，步骤(b)中的脱保护反应条件包括在适当溶剂中的强酸。在某些示例性的实施方案中，所述溶剂是CH2Cl2。在某些其它示例性的实施方案中，R2a是氢，R2b是-C(＝O)OtBu，且所述强酸是TFA。
在某些实施方案中，步骤(c)中的试剂是3-氧代-十四烷酸衍生物。如在此所用的，“羧酸衍生物”(例如，3-氧代-十四烷酸或十二烷酸衍生物)是指RC(＝O)X结构的化合物，其中R是羧基，并且X是适于通过与伯胺反应形成酰胺的化学基团，或者X是可被化学转化以通过与伯胺反应形成酰胺的化学基团。在某些实施方案中，X是卤素、羟基、-OR、-SH、-SR或-C(卤)3；其中，R是烷基或芳基。在某些示例性的实施方案中，试剂是3-氧代-十四烷酸。在某些实施方案中，步骤(c)中的试剂是3-氧代-十四烷酸并且用于使脱保护的二聚体与试剂反应的反应条件包括碱。在某些实施方案中，所述碱是1-羟基苯并三唑。在某些实施方案中，碱是Hunig′s碱。在某些实施方案中，步骤(c)的反应条件包括羧酸活化剂，例如DCC。在某些实施方案中，所述羧酸活化剂是1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺。在某些实施方案中，所述羧酸活化剂是HBTU。
在某些其它实施方案中，出现的每个R1a是烯丙基，并且步骤(d)中的反应条件包括在适当溶剂中的Pd(PPh3)4。在某些示例性的实施方案中，步骤(d)中的处理条件还包括三苯膦和苯基硅烷。在某些示例性的实施方案中，溶剂是THF。
在另一些实施方案中，纯化具有如下结构的化合物：
包括色谱分离并用碱处理。在某些示例性的实施方案中，所述纯化过程包括(i)离子交换色谱，(ii)C-4Kromasil洗脱和(iii)用NaOAc水溶液处理。在某些示例性的实施方案中，所述纯化过程包括(i)Biotage KP-二氧化硅色谱，(ii)Biotage KP HS-C18色谱和(iii)用NaOAc水溶液处理。
II.用于制备中间体1的方法
在某些示例性的实施方案中，具有如下结构的化合物通过包括如下步骤的方法制备：
其中，R1a是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基、杂芳基或亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基；和
R2a和R2b各自独立地是氢或合适的氮保护基，或者R2a和R2b一起形成5-或6-元杂环；其中R2a和R2b不同时为氢；
(a)使具有如下结构的醇：
与具有如下结构的合适的部分保护的二醇反应：
其中，-OX1表示合适的离去基；
以形成具有如下结构的醇：
(b)在适当的条件下使醇8与合适的十二烷酸衍生物反应，以形成具有如下结构的酯：
(c)在适当的条件下使酯9脱保护，以形成具有如下结构的羟胺：
(d)在适当的条件下部分地保护羟胺10，以形成具有如下结构的醇：
其中，R2a和R2b如上所限定；
(e)在适当的条件下用一种或多种合适的试剂处理醇11，以形成具
有如下结构的磷酸酯：
其中，R1a是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、芳基或杂芳基、亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基；和
R3a和R3b各自独立地是氢或合适的氮保护基，或者R3a和R3b一起形成5-或6-元杂环；其中R3a和R3b不同时为氢；和
(f)在适当的条件下使12部分地脱保护，形成胺1：
在某些实施方案中，出现的每个R1a立地是氢、C1～C6的烷基、C3～C6的烯基、C3～C6的炔基或亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基。在某些示例性的实施方案中，出现的每个R1a是烯丙基。
在某些实施方案中，R2a和R2b各自独立地是氢、烷基、烯基、-C(＝O)Rx、-C(＝O)ORx、-SRx、SO2Rx，或者R2a和R2b一起形成具有＝CRxRy结构的部分，其中R2a和R2b不同时为氢并且Rx和Ry各自独立地是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、-C(＝O)RA或-ZRA，其中Z是-O-、-S-、-NRB，其中出现的每个RA和RB独立地是氢或烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂脂肪族、杂脂环族、芳基或杂芳基部分。在某些示例性的实施方案中，R2a是氢且R2b是-C(＝O)ORx，其中Rx是取代的或未取代的低级烷基。在某些其它示例性的实施方案中，R2a是氢且R2b是-C(＝O)OtBu。
在某些示例性的实施方案中，X1是甲苯磺酰基。
在某些实施方案中，步骤(b)的十二烷酸衍生物是十二烷酸。在某些实施方案中，步骤(b)的试剂是十二烷酸并且用于使醇8反应的反应条件包括碱。在某些实施方案中，所述碱是4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在某些实施方案中，步骤(b)的反应条件包括羧酸活化剂，例如DCC。在某些实施方案中，所述羧酸活化剂是1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺。
在某些实施方案中，步骤(c)的脱保护反应条件包括催化氢解和合适的溶剂。在某些示例性的实施方案中，步骤(c)的脱保护反应条件包括H2和Pd/C。在某些示例性的实施方案中，溶剂是异丙醇(IPA)。
在某些示例性的实施方案中，R2a是氢且R2b是-C(＝O)OtBu，步骤(d)的反应条件包括二碳酸二叔丁酯和合适的溶剂。在某些实施方案中，所述溶剂是醇。在某些示例性的实施方案中，溶剂是异丙醇(IPA)。
在某些实施方案中，步骤(e)包括：
(i)原位形成具有如下结构的氨基亚磷酸酯(phosphoramidousacid ester)：
其中R4a和R4b独立地是低级烷基；和
(ii)原位形成具有如下结构的亚磷酸酯：
其中，R1a、R2a、R2b、R3a和R3b如上所限定。
在某些其它实施方案中，处理步骤(e)包含磷酰化剂，并导致氨基亚磷酸酯13的原位形成。在某些示例性的实施方案中，所述磷酰化剂是在二烷基胺存在下的烯丙基四异丙基亚磷酰二胺(tetraisopropylphosphorodiamidite)。在某些其它实施方案中，处理步骤(e)包含三氟乙酸吡啶在某些示例性的实施方案中，二烷基胺是二异丙胺并且所述氨基亚磷酸酯13具有如下结构：
在某些实施方案中，处理步骤(e)包括原位形成氨基亚磷酸酯13，随后与具有如下结构的保护的乙醇胺反应：
其中，R3a和R3b各自独立地是氢或合适的氮保护基，或者R3a和R3b一起形成5-或6-元杂环；其中R3a和R3b不同时为氢。在某些示例性的实施方案中，R3a和R3b各自独立地是氢、烷基、烯基、-C(＝O)Rx、-C(＝O)ORx、-SRx、SO2Rx，或者R3a和R3b一起形成具有＝CRxRy结构的部分，其中R3a和R3b不同时为氢并且Rx和Ry各自独立地是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂脂肪族、杂脂环族、芳基、杂芳基、-C(＝O)RA或-ZRA，其中Z是-O-、-S-、-NRB，其中出现的每个RA和RB独立地是氢或烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂脂肪族、杂脂环族、芳基或杂芳基部分。在某些示例性的实施方案中，R3a是氢且R3b是-C(＝O)ORx，其中Rx是芳烷基。在某些其它示例性的实施方案中，R3a是氢且R3b是-C(＝O)ORx，其中Rx是9-芴甲基(即，R3b是Fmoc)。
在某些示例性的实施方案中，处理步骤(e)包括氨基亚磷酸酯13与保护的乙醇胺15的原位反应，其中R3a是氢且R3b是Fmoc，并且反应条件包括乙酸和三氟乙酸吡啶
在某些实施方案中，处理步骤(e)包括亚磷酸酯14的原位形成，随后在合适的氧化剂的存在下氧化形成磷酸酯12：
在某些示例性的实施方案中，所述氧化剂是H2O2。
在某些实施方案中，R2a是氢且R2b是-C(＝O)OtBu，步骤(f)的反应条件包括二烷基胺和合适的溶剂。在某些示例性的实施方案中，二烷基胺是二甲胺。在某些示例性的实施方案中，溶剂是THF。
在某些实施方案中，中间体6-13、13a和14具有如下的立体化学：
合成综述
本领域技术人员可利用已经存在的磷脂化学的文献，与本文包含的信息相结合，以指导用于合成E6020及其立体异构体的合成策略、保护基以及其它材料和方法。
各种专利文献和在此引用的其它参考文献在制备特定的单糖初始原料方面提供有益的背景资料。具体地，在6,551,600、6,290,973和6,521,776中描述了特定的试剂和初始原料，其全部内容在此通过引用并入。
此外，本领域技术人员可关注该文献提供的关于用于合成E6020及其立体异构体的示例性的中间体的具体指导和实施例。
在E6020合成中的上述化合物有庚基和十一烷基侧链。在具有不同烷基链长度的E6020类似物的合成中，通过使用合适的试剂，这些侧链可以具有不同的长度。因此，本发明涉及具有下式(15)的化合物：
在式(15)中，A是-(CH2)x-O-或共价键，n是0或1，x为1～6。当A是-(CH2)x-O-时，亚甲基连接到NR3aR3b的氮原子上，且氧连接到亚磷酸酯或磷酸酯基团的磷原子上。优选地，x为2～4，并最优选为2。当n是0时，式(15)的化合物含有亚磷酸酯基团。当n是1时，式(15)的化合物含有磷酸酯基团。
R1a是氢、C1～C6的烷基、C3～C6的烯基、C3～C6的炔基或亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基。所述保护基在本领域内是已知的，其示例性的列举如上所述。特别优选的基团R1a是烯丙基。
在式(15)中，R2a和R2b之一是H，另一个是一价氮保护基；或者R2a和R2b一起是二价氮保护基。对于R3a和R3b来说，当A是-(CH2)-O-时，R3a和R3b之一是H，另一个是一价氮保护基；或者R3a和R3b一起是二价氮保护基。当A是共价键时，R3a和R3b独立地选自C1～C6的烷基或者一起是-(CH2)4-、-(CH2)5-或-(CH2)2O(CH2)2-。优选地，当A是共价键时，R3a和R3b是C2～C6的烷基，例如乙基、丙基或丁基并更优选为异丙基。
在式(15)的化合物中，与R2a和R2b连接的氮上的保护基可以在选自酸性、碱性、氧化和还原条件的第一条件下脱除；与R3a和R3b连接的氮上的保护基可以在选自不同于所述第一条件的其余三种条件的第二条件下脱除。优选的氮保护基选自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C＝、四氯邻苯二酰胺或叠氮化物。一般而言，有四种类型的条件可用于脱除氮保护基，即酸性、碱性、氧化或还原条件。在优选实施方案中，在这四种条件之一下选择性地脱除一个氮保护基，并使用剩下的三种条件之一选择性地脱除另一个氮保护基。在一个实施方案中，分别用温和的酸性或温和的碱性条件脱除氮保护基。
与R2a和R2b连接的氮可用Boc基团保护且与R3a和R3b连接的氮可以用Fmoc基团保护，或者反之亦然。Boc基团可选择性地在酸性条件下(在室温下在例如二氯甲烷的溶剂中的甲磺酸、三氟乙酸或甲酸)脱除。Fmoc基团可在当使用在溶剂例如THF中的仲胺如哌啶或二甲胺时在室温下选择性地脱除。
作为替代方案，与R2a和R2b连接的氮可用Troc基团保护且与R3a和R3b连接的氮可以用Fmoc基团保护，或者反之亦然。Fmoc基团可在如上所述的条件下选择性地脱除，Troc基团可在还原条件(例如在THF、水中的锌)下断裂。
在另一个实例中，与R2a和R2b连接的氮可用Troc基团保护且与R3a和R3b连接的氮可以用Boc基团保护，或者反之亦然。Troc基团可在还原条件(例如在THF、水中的锌)下断裂，Boc基团可在如上所述的条件下选择性地脱除。
R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基。R4是C5～C12的烷基，优选为C5～C9的烷基，更优选为C7的烷基，并最优选为正庚基。
R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。R5是C5～C15的烷基，优选为C7～C13的烷基，更优选为C11的烷基，并最优选为正十一烷基。
式(15)的化合物的盐可以在合成过程中出现，或者也可以通过使式(I)的化合物与酸或碱反应得到。优选为酸加成盐。
优选的式(15)的化合物如下：(a)其中，A是-(CH2)2-O-，n是0，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；(b)其中，A是-(CH2)2-O-，n是1，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；(c)其中，A是共价键，n是0，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；和(d)其中，A是共价键，n是0，R3a和R3b各自为异丙基，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基。
这样的中间体用于制备具有下式(16)的E6020类似物和前体：
在式(16)中，如上式(I)所述的，n是0或1。R1a是氢、C1～C6的烷基、C2～C6的烯基、C2～C6的炔基、亚磷酸酯氧保护基或磷酸酯氧保护基。优选的用于基团R1a的取代基与上面讨论的那些相同。例如，R2a和R2c之一是H，另一个是一价氮保护基或-C(O)CH2C(O)R6；或者R2a和R2c一起是二价氮保护基。除了R2a或R2c之一也可以优选为-C(O)CH2C(O)R6之外，优选的用于R2a和R2c的基团与上面讨论的用于R2a和R2b的那些相同。R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基，具有与式(15)相同的优选基团。R5和R6独立地是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基，具有与上述用于R5的那些相同的优选取代基。
优选的式(16)的化合物如下：(a)其中，n是1，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；(b)其中，n是1，R1a是烯丙基，R2a是氢，R2c是Boc，R4是C7的烷基，并且R7是C11的烷基；(c)其中，n是1，R2a是氢，R2c是-C(O)CH2C(O)R6，R4是C7的烷基，R5是C11的烷基，并且R6是C11的烷基；(d)其中，n是0，R1a是烯丙基，R2a是氢，R2c是Boc，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；(e)其中，n是1，R1a是烯丙基，R2a是氢，R2c是氢，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；和(f)其中，n是0，R1a是烯丙基，R2a是氢，R2c是-C(O)CH2C(O)R6，R4是C7的烷基，R5是C11的烷基，并且R6是C11的烷基。
式(16)的化合物的盐可以在合成的过程中出现，或者也可以通过使式(I)的化合物与酸或碱反应得到。优选为酸加成盐。
本发明还包括式(17)的化合物：
在式(17)中，R是氢或C1～C6的烷基并优选为氢。式(17)中的R2a和R2b之一是H，另一个是一价氮保护基；或者R2a和R2b一起是二价氮保护基。R2a和R2b的优选基团是用于上述式(15)的那些。R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基且R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。R4和R5的优选基团也是用于上述式(15)的那些。
优选的式(17)的化合物包括如下这些化合物：(a)其中，R是氢，R2a和R2b是氢，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基；和(b)其中，R是氢，R2a是氢，R2b是氮保护基，R4是C7的烷基，并且R5是C11的烷基。
本发明还包括式(18)的化合物：
在式(18)中，R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基；并且R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。R6和R7的优选基团如上所述。优选的式(18)的化合物是ER-819509。
用于实施本发明的合成方法的实例如下所示，在合成路线1～5和本文的具体实例中详述。应该理解，在此所述的方法可适用于在此公开的化合物中的每一个及其等同物。此外，试剂和初始原料对本领域技术人员是公知的。虽然下面的合成路线描述特定示例性的中间体和保护基，但是应该理解使用可替代的初始原料、保护基和/或试剂会产生其它中间体，这被认为落在本发明的范围内。
合成路线1
在本发明的某些示例性的实施方案中，酯ER-819059的制备由三个步骤实现，用合适的基团选择性地官能化二醇ER-028694，由此将伯羟基转化为离去基。例如，二醇ER-028694的伯羟基被甲苯磺酰化以得到相应的加合物ER-028695。然后甲苯磺酰酯ER-028695与醇ER-807277在碱(例如NaHMDS)存在下偶合，以得到相应的醚ER-806158。用月桂酸酯化醇ER-806158，随后氢解苯基二氢唑基团，得到羟胺ER-819120。氨基的Boc保护得到ER-819302。
合成路线2
合成路线3
如在合成路线2和3中所描述的，可以用6步将Boc-保护的ER-819302转化为E6020。例如，在双(烯丙氧基)二异丙基氨基膦和二异丙胺存在下磷酸化ER-819302，随后与FmocNH(CH2)2OH原位反应并氧化(例如，过氧化氢)，以形成磷酸化的中间体ER-819344，其在适当的条件下(例如，Me2NH)脱保护时形成脱保护的中间体ER-819385。ER-819385与光气在适当条件下(例如，在NaHCO3水溶液存在下在甲苯中的20％光气)的反应导致二磷酸酯ER-819409的形成。使用合适的酸例如TFA使在ER-819409上的Boc-保护的仲胺脱保护，得到二胺中间体ER-807284。在偶联剂例如EDC和DMAP的存在下用3-氧代-1-十四烷酸酰胺化游离胺，得到倒数第二个产物ER-807285。在过量的三苯基膦和质子源(苯基硅烷)的存在下利用钯(0)试剂例如四(三苯基膦)合钯(0)使烯丙基磷酸酯脱保护，得到可被纯化(例如，合适的离子交换色谱条件，随后用NaOAc水溶液处理)的所希望的粗产物，以得到所希望的化合物E6020。
应该理解，在上述合成路线1、2和3中所描述的反应中的每一个可以利用所述的用于合成上述各种类型的示例性中间体的试剂和条件实施，或者其可使用其它可用的试剂、保护基或初始原料改性。例如，各种脲形成条件、磷酸化和胺保护/脱保护条件在本领域是公知的。一般地，参见March，Advanced Organic Chemistry，第五版，John Wiley &Sons，2001；和“Comprehensive Organic Transformations，a guide tofunctional group preparations”，Richard C.Larock，VCH publishers，1999；其全部内容在此通过引用并入，和“Protective Groups in OrganicSynthesis”第三版Greene，T.W.和Wuts，P.G.，Eds.，John Wiley&Sons，New York：1999，其全部内容在此通过引用并入。
总之，本发明以比先前报道的方法明显更少的、产率更高的步骤提供E6020的合成。本发明的方法以高的总产率并通过高效的路线提供标题化合物。
下面的有代表性的实例用来帮助解释本发明，既不是用来也不应该被解释为限制本发明的范围。当然，除了在此所示的和描述的之外，本发明的各种变化及其许多进一步的实施方案从该文献的全部内容(包括下面的实施例)和在此引用的科技和专利文献的参考内容来看对于本领域技术人员是显而易见的。还应该理解，那些被引用的参考资料的内容通过引用在此并入以帮助解释现有技术。
下面的实施例包含可适于以本发明的各种实施方案及其等同方案实施本发明的重要的附加信息、具体实例和指导。
具体实施方式
进一步通过实施例来解释本发明的化合物及其制备，所述实施例举例说明制备或使用这些化合物的方法的一部分。但是，应该理解，这些实施例不限制本发明。本发明的变化方案视为落在本发明的在此所描述的和所要求保护的范围内。
进一步通过实施例来解释本发明的化合物及其制备，所述实施例举例说明制备或使用这些化合物的方法的一部分。但是，应该理解，这些实施例不限制本发明。本发明的变化方案(现在已知的或进一步发展的)视为落在本发明的在此所描述的和所要求保护的范围内。
利用免疫佐剂E6020的制备来举例说明，下面的实施例包括利用本发明的方法和化合物来合成免疫佐剂化合物的合成前体。
本领域技术人员将认识到E6020的许多类似物可通过本发明的方法和由本发明的化合物制备，包括但不限于美国专利6,551,600、6,290,973和6,521,776中描述的那些E6020类似物，所述文献的全部内容在此通过引用并入。因此，应该理解，下面通过实施例的方式描述的合成方法不限制通过所附的权利要求限定的本发明的范围。
一般的反应程序
除非特别说明，否则使用磁力搅拌棒搅拌反应混合物。惰性气氛是指干燥的氩气或干燥的氮气。通过对经过适当处理的反应混合物样品进行薄层色谱、质子核磁共振或高压液相色谱(HPLC)分析来监控反应。
下面所列的缩写用于在此提及的一些通用有机试剂：
ATP：         烯丙基四异丙基亚磷酰二胺
DMF           二甲基甲酰胺
EA：          乙酸乙酯
EDC：         1-[3-(二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HBTU：        O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲-六氟磷酸酯
HOBT：        1-羟基苯并三唑
IPA：         异丙醇
MTBE：        甲基叔丁基醚
NaHMDS：      六甲基二硅氮烷钠
Pyr.TFA：     三氟乙酸吡啶
TBME：      叔丁基甲基醚
TFA：       三氟乙酸
THF：       四氢呋喃
TsCl        甲苯磺酰氯
实施例1：ER-028695的制备
制备1：用9分钟的时间将在干燥的四氢呋喃(THF)(1041 g)中的ER-028694(952g，5.46mol)加到在0℃下、氮气氛下、干燥的22L反应器中的在干燥的THF(2408 g)中的对甲苯磺酰氯(1704g，8.938mol)的搅拌溶液中。用无水THF(364 g)将残留的ER-028694冲洗到反应器中。用19分钟的时间将三乙胺(1.35Kg，13.4mol)逐滴地加到澄清的黄色反应溶液中，在此期间溶液变混浊。用干燥的THF(30g)将残留的三乙胺冲洗到反应混合物中。
在0℃下再搅拌15小时17分钟之后，用缓慢加入的1.0M的盐酸(2120g)用36分钟的时间结束反应，温度从0.1℃变为5.9℃。用3分钟的时间加入盐水(785mL)，再继续搅拌5分钟，随后用THF(0.57Kg)将反应混合物(～22L)转移到50L的处理反应器中。有机层与水层分离(pH＝6)。用1.0M的盐酸(2120 g)和盐水(785mL)的混合物洗涤有机层。然后再用水(2120mL)和盐水(980mL)的混合物洗涤有机层。
将有机层转移到干净的22L的反应器中，随后在氮气氛下加入THF(1.6Kg)。在搅拌下将溶液冷却到0℃(冰水浴)，随后用7分钟的时间加入10％的NaOH水溶液(2.04Kg)，温度从-0.4℃变为2.3℃。在用6分钟的时间加入28％的NH4OH水溶液(935g)之后，温度从1.9℃变为12.5℃，搅拌混合物25分钟，随后加入庚烷(1.1Kg)。用庚烷(0.532Kg)将反应混合物转移到50L的处理反应器中，充分混合，静置，排出水层(pH 14)。用10％的NaOH水溶液(2.04Kg)洗涤有机层，然后用水(2.04Kg)洗。蒸发有机层的溶剂(在真空室中(house vacuum))并使残余物与庚烷(1.1Kg)共沸，得到澄清的橙色油状物。将分离出来的物质(1.839Kg)不经进一步纯化而用于下一步。ER-028695的分析数据：1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ0.88(t，J＝7.1Hz，3H)，1.2-1.5(m，12H)，1.57(bs，1H)，1.6-1.7(m，1H)，1.8-1.9(m，1H)，2.45(s，3H)，3.7-3.8(m，1H)，4.1-4.2(m，1H)，4.2-4.3(m，1H)，7.35，(d，J＝7.8Hz，2H)，7.80(d，J＝7.8Hz，2H)。MS-APESI(M+Na)C17H28NaO4S计算值：351.16实测值：351.23。HPLC：ER-028695：ER-817864比为87.11％：11.71％。
制备2：将无水THF(250mL)在氮气氛下加到对甲苯磺酰氯(161.1g，0.845mol)的搅拌溶液中。然后在22℃的反应器温度下加入ER-028694(90.0g，0.516mol)，随后加入三乙胺(176mL，1.26mol)，得到澄清的黄色溶液。几分钟后溶液变混浊。搅拌15小时33分钟后，取出100μL样品。GC分析显示转化率为100％。再取出100μL样品，并用2.0mL生产用水和3.0mL庚烷萃取。用生产用水(2.0mL)洗涤有机层两次，然后用盐水(2.0mL)洗涤。在减压下蒸发所得的有机层，得到无色油状物。无色油状物的1H-NMR分析显示ER-028694/ER-028695/ER-817864的比为1.00/91.93/7.07。
确定反应完成后，加入1.0M的盐酸溶液，温度从21.4℃变为26.8℃，然后加入盐水(74.2mL)。有机层(～0.6L)与水层(～0.4L, pH＝10)分离，并用1.0M盐酸(201mL)和盐水(74.2mL)的混合物洗涤，随后用生产用水(201mL)和盐水(92.7mL)的混合物洗涤。然后将有机层转移到干净的反应器中，随后在氮气氛下加入THF(200mL)。伴随搅拌将溶液冷却到10℃，然后用2分钟的时间加入10％的NaOH水溶液(193g)，同时保持反应温度低于25℃(温度从15.3℃变为21.3℃)。然后用5分钟的时间加入NH4OH水溶液(88.4g)(观察到延迟放热)，同时仍然保持反应温度低于25℃(温度从15.5℃变为22.7℃)。在搅拌下将反应混合物温热到20℃，持续15分钟。用庚烷(200mL)从水层提取出反应混合物，水层的pH为14。用10％的NaOH水溶液(193g)洗涤有机层，然后用生产用水(193mL)洗涤。用庚烷(200mL，29～32℃，4.4托)蒸发溶剂(在29～32℃，20托)并分离出残余物，得到澄清的橙色油状物。将分离出来的物质不经进一步纯化而用于下一步(假设100％的产率)。无色油状物的1H-NMR分析得到ER-028694/ER-028695/ER-817864的比为0.9/90.9/8.2。KF为13.0ppm。
实施例2：ER-806158的制备
制备1：用33分钟的时间将在THF(3.300Kg)中的1.0M双(三甲基二甲硅烷基)酰胺钠加到在-1℃下、氮气氛下、干燥的22L反应器中的在干燥的THF(10.580 Kg)中的ER-807277(1.177 Kg，6.642mol)的搅拌溶液中，同时保持反应温度为-0.8～4.1℃。再在-0.1℃下搅拌溶液17分钟后，用5分钟的时间将在干燥的THF(0.968Kg)中的粗ER-028695(1.089 Kg，3.316mol)加到反应溶液中，保持温度在-0.1～3.9℃。用干燥的THF(0.253Kg)将残留的ER-028695冲洗到反应器中。将最终的反应混合物温热到室温，在此期间澄清的橙色反应溶液变为悬浮液(约在19℃时)。在室温下搅拌3小时31分钟后，将完全反应混合物冷却到0.1℃，并将其倾入在50L处理反应器中的冷饱和NH4Cl水溶液(4.7Kg)和盐水(1.65L)的混合物中(放热的，Tmax＝16.2℃)。用水(2×1.0L)然后用甲苯(3.769 Kg)将残留的反应混合物冲洗到处理反应器中。搅拌混合物5分钟后，使反应混合物静置5分钟，并排出所得的底部水层(pH＝9)。在30～34℃下在真空室内部分蒸发有机层的溶剂。用最少量的THF(0.4Kg)冲洗容器并将冲洗液与产物合并。为方便转移，在加热下(浴温＝30～34℃)加入甲苯(0.4Kg)，以使固体分散为浆状物。
在氮气氛下将粗浆状物转移到干净的干燥的22L反应器中，随后在～19℃下在快速搅拌下加入庚烷(7.503 Kg)。再搅拌6小时22分钟后，对混合物进行真空过滤(Fisher P5滤纸，编号#09-801G)，并分别用0.99Kg、1.02 Kg和1.01 Kg的庚烷洗涤滤饼(～5.4L)三次。在30～34℃下在真空室内蒸发合并的滤液和洗涤液，得到混浊的橙色油状物(1.207Kg)。在过滤漏斗中的白色滤饼是ER-807277。
将粗产物(1.206Kg)溶于甲基叔丁基醚(MTBE)/庚烷＝1/4(700mL)中，通过中号玻璃料过滤漏斗过滤，然后用MTBE/庚烷＝1/4(300mL)冲洗滤饼，得到澄清的黄色滤液。用调到～840mL/分钟的流量(～25磅/平方英寸溶剂压力)，将粗ER-806158溶液装载到经过预先调节的硅胶柱(用MTBE(10.46 Kg)，然后用MTBE/庚烷＝1/4(3.140 Kg/11.606 Kg)处理的Biotage 150L(5.62 Kg，空隙体积＝7.07L)柱)上。装载后，用MTBE/庚烷＝1/4(0.148 Kg/0.547 Kg)冲洗柱，随后用MTBE/庚烷＝1/4(2.09Kg/7.740Kg)、MTBE/庚烷＝2/3(2.094Kg/2.904Kg)、MTBE/庚烷＝7/3(3.661Kg/1.448Kg)并且最后用MTBE(40.298Kg)洗脱。在整个色谱过程中，收集了约350mL的级分。浓缩合并的含有产物的级分并使用庚烷(0.540 Kg)共沸干燥，随后在33℃下在真空室内干燥1小时13分钟，得到澄清的橙色油状物(0.793 Kg，71％)，纯度为98.32面积％。ER-806158的结晶
将2.376 Kg的纯化的ER-806158溶于庚烷(8.121Kg)中，并在氮气氛下转移到干净的、干燥的22L反应器中，随后搅拌。以每0.5小时～4℃逐渐地将澄清的黄色溶液冷却到-15℃。所得的白色悬浮液在-15℃下再搅拌1小时，随后在冷却的过滤漏斗和滤纸上真空过滤，同时使氮气层覆盖滤饼。用上述过滤的冷庚烷(-12.3℃，1.387 Kg)洗涤所希望的固体，并使滤饼保持在真空下14小时13分钟(T＝14.9～18.8℃)，同时使氮气层覆盖固体的上部。合并母液、洗涤液和在反应器中溶解残留的ER-806158的溶剂以重复利用。
得到：2.068Kg，87.0％产率
ER-806158的分析数据
●纯度：99.84wt/wt％
●手性纯度：99.72％e.e.
●KF：0.21％
●庚烷：268ppm
●1H-NMR(CDCl3)δ0.88(t，J＝6.9Hz，3H)，1.2-1.6(m，12H)，1.6-1.7(m，1H)，1.7-1.8(m，1H)，3.21(bs，1H)，3.6-3.7(m，3H)，3.7-3.8(m，2H)，3.5-3.6(m，2H)，4.2-4.3(m，1H)，4.5(m，2H)，7.42，(t，J＝7.6Hz，2H)，7.49，(dd，J＝6.9，7.8Hz，1H)，7.95(d，J＝7.3Hz，2H)。
●元素分析(EA)：C30H59NO6计算值：C，72.04；H，9.37；N；4.20实测值：C，71.83；H，9.30；N，4.08。
●熔点(DSC)开始，26.7℃；最大，29.5℃。
制备2：假设100％的产率，根据用在实施例1的步骤2中的初始ER-028694的量计算用在反应中的ER-028695的量(mol)。在氮气氛下将ER-807277(178.3g，1006mmol)加到干净的干燥的5L反应器中。伴随搅拌加入干燥的THF(1.8L)以制备澄清的黄色溶液，并将该溶液冷却到0℃。用20分钟的时间加入NaHMDS/THF(1.0M，553mL)，并使反应温度保持在低于或等于5℃(3.8～1.3℃)。搅拌溶液10分钟，然后冷却到-5℃。在氮气氛下随着搅拌用干燥的THF(165mL，1vol.)将粗ER-028694(计算为165g，503mmol)转移到干燥的干净的烧瓶中，得到澄清的橙色溶液。然后用6分钟的时间将ER-028695/THF溶液加到反应溶液中，温度从-3.2℃变为0.4℃。用干燥的THF(40mL)将残留的ER-028695冲洗到反应器中，并在温水浴(23℃)中将反应混合物温热到室温。在温热过程中，澄清的橙色反应溶液变为悬浮液。在18.7～21.3℃下搅拌1.75小时后，取出样品(10μL)，加到1.0mL MeCN中，并通过2μm的针筒式过滤器过滤，得到无色的澄清的滤液。HPLC分析(TM-779)检测到转化率为98.2％。在室温下完全搅拌3小时后，HPLC分析显示转化率为99.5％。将饱和的NH4Cl水溶液(0.66L)一次全部加入(放热的，18.9～26.0℃)，然后加入生产用水(0.30L)、盐水(0.25L)和甲苯(0.66L)。加完后继续搅拌5分钟。在29～32℃下在减压下部分蒸发上部有机层的溶剂(～2.6L)，得到浆状物(481.7g)，排出下部的水层(～1.4L，pH＝11)。
在氮气下将浆状物转移到干燥的干净的5L反应器中。在室温下在快速搅拌下加入庚烷(1.65L)，持续搅拌14小时。对混合物进行真空过滤(中号滤纸)，用庚烷(0.33L)洗涤所得滤饼(～0.52L)，并收集黄色的滤液(～2.8L)。在减压下蒸发溶剂(29～32℃)，得到橙色的油状物(177.9g)。
将粗产物(177.9g)溶于TBME/庚烷＝1/4(178mL)中，并用调整过的～170mL/分钟(～18磅/平方英寸的溶剂压力)的流量装载到用TBME(2.1L)、然后用TBME/庚烷＝1/4(3.15L)调节的Biotage 75L硅胶(834 g，空隙体积＝1.05L)的柱上。收集级分1～2(各个级分为～350mL)。装载后，用TBME/庚烷＝1/4(178mL)冲洗柱并用TBME/庚烷＝1/4(2.1L)洗脱，收集级分2～8；用TBME/庚烷＝2/3(1.05L)洗脱，收集级分8～11；用TBME/庚烷＝7/3(1.05L)洗脱，收集级分11～14；并用TBME(8.4L)洗脱，收集级分15～39。分析所收集的级分(TLC，硅胶F254；流动相，TBME；显谱，UV和茴香醛溶液)，合并含有没有ER-807277污染的级分(14～35)的产物。用庚烷(29～32℃，10.3托)使溶剂蒸发(29～32℃，80托)，得到澄清的橙色油状物(114.4g)，其在冷却到室温时固化。HPLC分析(TM-779)检测到96面积％。
在氮气氛下伴随搅拌用庚烷(572mL)温热(29～32℃)橙色固体(114.4g，1wt)并转移到1L的干燥的干净反应器中。将溶液冷却到14℃，搅拌0.5小时，并用ER-806158晶体(0.112g)作为种晶。继续搅拌0.5小时，在此期间可以见到固体颗粒。将反应混合物逐渐冷却到-10℃(每0.5小时4℃)，进一步冷却到-15℃，同时继续搅拌1小时。通过冷(～-20℃)庚烷(～200mL)得到的冷的中号过滤漏斗，通过该漏斗真空过滤反应混合物，随后用冷庚烷(约-20到-15℃)洗涤。继续施加真空1.5小时，并将氮气层施加到滤饼的顶部。然后将所得的白色粗糙粒状固体(98.4g，0.295mol)转移到瓶中。分析结果显示：wt/wt％，99.95；纯度，99.68，残留的庚烷，19.1ppm；KF，1.04％。DSC显示27℃时开始熔融。手性HPLC分析(TM-573)检测到99.8面积％。
实施例3：FR-819059的制备
制备1：将4-二甲氨基吡啶(51 g，0.417mol)加入到在氮气氛下的在干净的干燥22L烧瓶中的在干燥二氯甲烷(CH2Cl2)(3710g)中的N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(904 g，4.176 mol)、月桂酸(纯化的，881 g，4.398mol)和ER-806158(1400 g，4.198 mol)的搅拌溶液中。搅拌1小时13分钟后，反应混合物变为轻微混浊的黄色溶液，且反应温度达到26.7℃的最高值。6小时34分钟后，发现反应完成98.9％，此时将另外的N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(303 g，1.581mol)一次性全部加入。在室温下总计搅拌20小时50分钟后，将MeOH(5566g)一次全部加入到黄色的反应悬浮液中(微吸热的，Tmin＝17.1℃)。部分溶剂蒸发(在真空室内，29～32℃)除去CH2Cl2(3.71Kg)，随后用等份的庚烷(2×2.86kg ea.)萃取。蒸发庚烷萃取液(在真空室内，30～35℃)并使用庚烷(0.75Kg)共沸干燥。
将产物(2.192Kg)溶于庚烷(3.00Kg)中，并装载到硅胶柱(用MTBE/庚烷＝1/1(15.0Kg)预处理过的Biotage 150L硅胶(5.62Kg))上。用MTBE/庚烷＝1/1(31.3Kg.)以调整过的～0.84L/分钟(溶剂压力＝22磅/平方英寸)的流量洗脱产物，收集约350mL洗脱液/级分。合并含有产物的级分并浓缩干燥和真空干燥(16℃，在真空室内，16小时13分钟)，得到作为澄清的浅黄色油状物的ER-819059(2.102Kg，86.4％产率)。
ER-819059的分析数据
●HPLC分析：99.76面积％。
●KF：0.36％
●庚烷：725ppm
●1H-NMR(CDCl3)δ0.881(t，J＝7.1Hz，3H)，0.884(t，J＝6.9Hz，3H)，1.2-1.3(m，26H)，1.5-1.6(m，2H)，1.6-1.7(m，2H)，1.8-1.9(m，2H)，2.28(t，J＝7.6Hz，2H)，3.4-3.6(m，3H)，3.69(dd，J＝3.7，9.6Hz，1H)，4.3-4.6(m，3H)，5.0(m，1H)，7.43，(t，J＝7.6Hz，2H)，7.51，(dd，J＝6.0，7.3Hz，1H)，7.95(d，J＝6.0Hz，2H)。
●MS-APESI(M+H)C32H54NO4计算值：516.41实测值：516.48
●TLC：(硅胶F254)：MTBE/庚烷＝1/1；ER-819059的Rf=0.51
制备2：在氮气氛下将N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.49g，7.77mmol)、ER-806158(2.00g，6.00mmol)、DMAP(0.07g，0.59mmol)和十二烷酸(1.44 g,7.19mmol)加到干燥的50mL烧瓶中。然后在搅拌下加入干燥的二氯甲烷(6.0mL)。在室温下继续搅拌，直到得到微混浊的溶液。搅拌16小时后，取出样品(10μL)，并加入到1.5mLMeCN中。HPLC分析(TM-780)检测到转化率为95.1％。然后再加入另外量的N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.307g，1.60mmol)。再搅拌8h(总共24小时)之后，取出第二样品(10μL)并如前所述进行分析。HPLC分析(TM-780)检测到转化率为99.6％。再继续搅拌15小时(总共39小时)，此时取出第三样品并分析。HPLC(TM-780)分析检测到转化率为99.96％。然后加入饱和的NaHCO3水溶液(10mL)、盐水(10mL)和庚烷(10mL)，同时继续搅拌0.5小时。观察到较差的乳状液。然后加入庚烷(10mL)，并充分混合，但基本上没有改善该乳状液。然后，加入MeOH(3.0mL)并充分混合，但其也基本上没有改善该乳状液。使组合物静置0.5小时，排出在底部形成的乳状的水层。用TBME(20mL)萃取水层，静置约15分钟后排出底部水层。水层的TLC分析(TLC，硅胶F254；流动相，TBME；显谱，UV和茴香醛溶液)检测到大量产物。再用TBME(20mL)萃取水层，并合并有机层。溶剂蒸发(29～32℃，7.5托)得到澄清的黄色油状物(3.35g)。
将粗产物(3.35g)溶于TBME/庚烷＝1/1(12mL)中，并装载到用TBME/庚烷＝1/1(36mL)预处理过的Biotage 12M硅胶(8.99 g，空隙体积＝11.3mL)柱上。以调整过的～12mL/分钟的流量洗脱产物，收集15个级分(每个～6mL)。分析所收集的级分(TLC，硅胶F254；流动相，TBME/庚烷＝1/1；显谱，UV和茴香醛溶液)，并合并含有产物的级分(3～15)。溶剂蒸发(29～32℃，8.3托)得到澄清的无色油状物(3.03g)。HPLC分析(TM-780)检测到99.18面积％。由于较差的乳化而没有进行水处理。
实施例4：ER-819120的制备
在氮气氛下将ER-819059(3.03 g，5.87mmol，1wt)和10％Pd/C(0.303 g，0.28mmol)加到干净的装有IPA(20.2mL，6.67vol.)的50mL的烧瓶中。在室温下在快速搅拌下抽空该烧瓶，并用氢(氢压力保持在0.04巴)吹扫。该抽空-吹扫过程再重复两次。通过不同样品的HPLC分析监控反应。反应完成后，约3.5天，抽空烧瓶并用氮气吹扫三次。通过0.2-μm的针筒式过滤器过滤所得的混合物，并用IPA(2×4.0mL)冲洗。然后合并无色的澄清的滤液，粗产物/IPA溶液用于下一步反应(没有纯化，假设100％产率)。
实施例5：ER-819302的制备
根据前述步骤的初始ER-819059计算ER-819120的量(mol)。
在氮气氛下在搅拌下将二碳酸二叔丁酯(1.30g，5.96mmol)一次全部加入到装有在IPA中的ER-819120(2.52g当量的ER-8189120，5.87mmol，～31.5mL)的50mL烧瓶中。通过HPLC(样品制备：样品15μL，并加到1.0mL的MeCN中)和TLC(TLC，硅胶F254；流动相，MeOH/CH2Cl2/NH4OH＝10/89/1；显谱，茴香醛溶液或茚三酮溶液)监控反应。TLC仅检测到较小的ER-819120斑点。加入更多的二碳酸二叔丁酯(0.20g，0.92mmol)。TLC分析没有观察到改善。溶剂蒸发(29～32℃，10托)得到无色的澄清油状物(3.21 g)。
用TBME/庚烷＝1/1(36mL，3 v.v.)处理Biotage 12M硅胶(8.99 g，空隙体积＝11.3mL)柱。将流量调整为～12mL/分钟。在将粗产物(3.35g)溶于TBME/庚烷＝1/1(12mL)后，将其装载到所述柱上，并用TBME/庚烷＝1/1(70mL)洗脱。收集十五个级分(每个～6mL)并分析(TLC，硅胶F254；流动相，TBME/庚烷＝1/1；显谱，UV和茴香醛溶液)。合并级分(3～15)中的产物。溶剂蒸发(29～32℃，8.3托)得到无色的澄清油状物(3.03g)。
实施例6：ER-819302的可替代的制备
将10％Pd/C(99g＝烧瓶1，102g＝烧瓶2)加到在两个干净的装有异丙醇(IPA)(分别为4.647Kg)的12L反应器中的被平均分成两份的ER-819059(1.970 Kg，3.82mol)中。抽空(-0.79巴)烧瓶，然后用氢(0.05巴)吹扫三次，同时搅拌。反应在室温的氢气氛(0.04巴)下保持7天16小时，此后抽空(在真空室内)反应并用氮吹扫三次，以除去所有痕量的过量的氢，随后在氮气氛下冷却到0℃。
在两个单独的烧瓶中，在氮气氛下将二碳酸二叔丁酯(分别为434g，1.99mol和438g，2.01mol)溶于无水THF(分别为203g)中。用5分钟的时间将冷却的ER-819120反应混合物加到各个烧瓶中。用无水THF(分别为40g)将残留的反应物冲洗到反应混合物中。发现反应是放热的(4.5到10.1℃)并观察到放气。将反应温热到室温并继续搅拌过夜。合并完成的反应并用硅藻土545(1.143Kg，装载到Fisher P524cm的过滤器上)过滤，在氮气层下用IPA(3.091Kg)冲洗。用IPA(1.417 Kg)冲洗反应器中的残留物并过滤，随后用IPA(13.46Kg)冲洗滤垫。再用IPA(分别为4.573Kg和6.360Kg)冲洗滤垫两次。
浓缩合并的滤液，随后用庚烷(7.529Kg)共沸，得到澄清的无色油状物(2.452Kg；纯度为70.57面积％)。将粗产物平均分为四份纯化。
将粗ER-819302(611g，1wt)溶于庚烷(613g，1wt)，并装载到Biotage 150L硅胶柱[(5.620Kg)，利用700mL/分钟的流量，用MTBE(10.48Kg)、然后用庚烷(15.51 Kg)处理]上。用庚烷(340g，0.56wt)冲洗残留在柱上的ER-819302。用15％MTBE/庚烷(7.102Kg/36.994Kg)、然后用MTBE(15.72 Kg)洗脱柱，此时收集约3L每份的级分。使用相同的方法单独地层析剩下的三等份的粗ER-819302。浓缩来自四份纯化产物的合并的所希望的级分并用庚烷(0.5Kg)共沸干燥，得到作为澄清的无色油状物的ER-819302(1.9135Kg；在97.86面积％纯度下的产率为94.6％)。
ER-819302-00的分析数据
●1H-NMR(CDCl3)δ0.89(t，J＝6.9Hz，6H)，1.2-1.3(m，26H)，1.46(s，9H)，1.5-1.7(m，4H)，1.7-1.8(m，1H)，1.8-1.9(m，1H)，2.30(t，J＝7.6Hz，6H)，3.3-3.4(m，1H)，3.48(td，J＝6.9，9.6Hz，1H)，3.5-3.6(m，2H)，3.69(td，J＝6.1，7.1Hz，1H)，3.76(d，J＝8.2Hz，2H)，5.0-5.1(m，1H)，5.2(bs，1H)。
●MS-APESI(M+Na)C30H59NNaO6计算值：552.42实测值：552.52
●KF＝0.30％
●庚烷＝6034ppm；MTBE＝未检测到。
实施例7：ER-819344的制备
制备1：在氮气氛下在室温下将三氟乙酸吡啶(30.9g，0.160mol)一次全部加到在无水CH2Cl2(200mL)中的二异丙胺(22.4mL，0.160mol)的搅拌溶液中，微放热。一旦反应混合物回到室温，就加入烯丙基四异丙基亚磷酰二胺(51.1mL，0.160mol)，随后搅拌10分钟。用无水CH2Cl2(300mL)将ER-819302(84.4g，0.159mol)共沸干燥若干次，直到确定水含量低于60ppm。将ER-819302溶于二氯甲烷(300mL)之后，缓慢地将溶液加到上述吡啶反应混合物中，使反应温度保持在20～30℃，随后用另外的二氯甲烷(100mL)冲洗来自反应容器的残余物。
当反应中间体ER-820116的形成完全(2小时)时，将反应混合物冷却到0℃，随后逐滴加入乙酸(18.2mL，0.320mol)，使反应温度保持在0～15℃。将三氟乙酸吡啶(11g，0.056mol)加到反应混合物中，并搅拌所得的反应10分钟，之后立即将ER-222581(46.5g，0.164mol)一次性加入。在室温下搅拌反应混合物2小时，然后将混合物冷却到0℃，逐滴加入30wt.％的在水中的过氧化氢(49mL，0.480mol)，使最终的反应温度保持在0～10℃(初始放热很强)。将反应混合物温热到室温，并再搅拌30分钟，之后将反应混合物冷却到0℃。通过以使反应温度保持在0～10℃的加入速率缓慢地加入10wt.％亚硫酸氢钠水溶液(3.5L)来结束最终的反应混合物。将结束的反应物温热到室温并搅拌，直到用于两个随后层的负过氧化物测试(30分钟)。
用MTBE(2.0L)稀释所得的混合物，搅拌10分钟，然后转移到处理容器中。使层分离并用5％的NaHCO3水溶液(2.0L)和盐水在水中的1∶1混合物分别各自洗涤有机层一次。用MTBE(1L)反萃取合并的水层。用无水硫酸钠(100g)干燥合并的有机层，过滤并浓缩，用MTBE共沸干燥，得到ER-819344(146.6 g，产率为97％，HPLC的纯度为91％)。
ER-819344的数据分析
●1H-NMR(CDCl3)δ0.85-0.90(m，6H)，1.20-1.36(m，26H)，1.40-1.65(m，4H)，1.44(s，9H)，1.70-1.83(m，2H)，2.27(t，J＝7.6Hz，2H)，3.37-3.57(m，6H)，3.90-4.00(m，1H)，4.03-4.10(m，1H)，4.11-4.24(m，3H)，4.35-4.40(m，2H)，4.50-4.60(m，2H)，4.94-5.0(m，1H)，5.05-5.15(m，1H)，5.22-5.27(m，1H)，5.30-5.40(m，1H)，5.85-6.0(m，2H)，6.01-6.05(m，1H)，7.30(dd，J＝7.3，7.8Hz，2H)，7.40(dd，J＝7.3，7.8Hz，2H)，7.61(d，J＝7.8Hz，2H)，7.76(d，J＝7.3Hz，2H)。
●31p-NMR(CDCl3，未校准)0.172，0.564(两个非对映异构体)
●MS-APESI(M+Na)C50H79N2NaO11P计算值：937.53实测值：937.65。
制备2：将ER-819302(1wt.)溶于无水二氯甲烷(3vol.)中。如果水的总量大于或等于0.7mol.％的ER-819302，如通过Kf所确定的，那么通过利用蒸发溶剂来驱逐水以将水含量降低到令人满意的水平。
将无水二氯甲烷(2vol.)装到干燥的反应器中，随后加入二异丙胺和三氟乙酸吡啶(1当量)(加入前在浴中以控制放热)。搅拌溶液，并在浴中将温度调到20～25℃。然后将烯丙基四异丙基亚磷酰二胺(1当量)加到溶液中，随后搅拌5分钟。然后以可控的加入速率将ER-819302的二氯甲烷溶液加到溶液中，同时保持反应温度低于30℃(用1vol.的二氯甲烷冲洗)。通过TLC(MTBE/庚烷/Et3N＝40/60/1)和HPLC(TM，通过取出30ul反应混合物并用1ml乙腈稀释来制备样品)监控反应进程。当ER-819302：ER-820116的比大于95∶5时，反应完成，这通常在2小时内发生。在中间体ER-820116形成之后，将反应混合物冷却到0～10℃，并以保持反应温度低于15℃的加入速率加入乙酸。
将三氟乙酸吡啶(0.4当量)加到反应混合物中，随后加入ER-222581(1当量)。在室温下搅拌混合物约20～30分钟，直到白色悬浮液变为澄清溶液。通过TLC(MTBE/庚烷/Et3N＝40/60/1)和HPLC(TM，通过取出30ul反应混合物并用1ml乙腈稀释来制备样品)监控反应进程。反应完成后，约1.5或2小时，将反应混合物冷却到-5～0℃。
然后将30wt.％的在水中的过氧化氢(3当量)加到反应混合物中，同时保持反应温度低于5℃。将反应混合物温热到室温，然后搅拌30分钟。之后将其冷却回-5～0℃，并加入10wt.％亚硫酸氢钠水溶液，同时保持反应温度低于5℃。在加入亚硫酸氢盐溶液后，再次将反应混合物温热到室温，然后搅拌30分钟。继续搅拌，直到反应混合物在过氧化物测试条上指示阴性结果。
将甲基叔丁基醚加入到反应中，并搅拌10分钟。然后将反应混合物转移到处理容器中并使层分离。如果显示水层含有产物，则用甲基叔丁基醚反萃取水层。用5％的碳酸氢钠水溶液洗涤有机层，然后用一半盐水洗涤(如果水层是混浊的，则有必要用甲基叔丁基醚反萃取)，浓缩有机层(如果其变为乳状油，则用MTBE进料并真空过滤)。用HPLC和HNMR分析粗ER-819344。最大规模的试验得到84.4g ER-819302，产率为97％，如HPLC所示。
实施例8：ER-819385-00的制备
在室温下将在THF(8.5mL，17.0mmol)中的2.0M的二甲胺加到在THF(1.5mL)中的ER-819344(1.56g，1.70mmol)的搅拌溶液中，并搅拌反应混合物2小时。浓缩完成的反应混合物并用MTBE(15mL)共沸干燥粗产物两次。将所得的产物溶于MTBE(30mL)，并用盐水(7.5mL)洗涤。将最终的有机层浓缩至干燥，并用MTBE(15mL)共沸一次，得到所希望的、有些不稳定的ER-819385，其不经过纯化而用于下一步。
制备2：将ER-819344-00(1.56 g，1.70mmol)溶于THF(1.5mL)中，并在室温下加到在THF中的二甲胺商品溶液(2.0M，8.5mL)中，并搅拌2小时。进行TLC分析，显示ER-819344完全消耗。将U.V.灯和对茴香醛斑点用作显谱技术。然后通过旋转蒸发技术除去挥发物。用MTBE(2×15mL)共沸粗产物，之后将其溶于MTBE(30mL)并用盐水(7.5mL)洗涤，以除去任何残留的低MW的胺(例如，二甲胺、乙醇胺)。没有得到乳状液，因为层容易分离。该洗涤之后水层的pH为～10。将有机层浓缩至干燥并用MTBE(1×15mL)共沸，以得到所希望的胺单体ER-819385-00。
实施例9：ER-819409-00的制备
制备1：将饱和的NaHCO3溶液(12mL)加到在CH2Cl2(15mL)中的粗ER-819385(计算值1.18g，1.70mmol)的搅拌溶液中。将所得的混合物冷却到0℃，随后逐滴加入20％的在甲苯中的光气(465μL，0.935mmol)。将反应温热到室温，搅拌1小时，然后在加入第二份20％的光气溶液(210μL，0.425mmol)之前冷却到0℃。将最终的反应混合物温热到室温，搅拌过夜。加水(15mL)。再搅拌30分钟后，将结束的反应转移到分液漏斗中，分层45分钟。用CH2Cl2(30mL)萃取水层，并浓缩干燥合并的有机层。用MTBE/乙酸乙酯(EtOAc)(1∶1，50mL)共沸干燥粗油状物，溶于EtOAc/庚烷(1∶1，50mL)，并在玻璃料漏斗上过滤以移除盐。在硅胶(12g)上用2.5％MeOH/乙酸乙酯(50mL)、用3.8％MeOH/乙酸乙酯(50mL)并最后用5.6％MeOH/乙酸乙酯(100mL)洗脱来纯化粗产物，以得到作为澄清的无色油状物的ER-819409(984mg，产率为82％)。
制备2：将ER-819385-00(1.70mmol，粗物质)溶于CH2Cl2(15mL)并加到饱和NaHCO3溶液(12mL)中。将所得的混合物冷却到0℃，并逐滴加入到在甲苯中的光气商品溶液(465μL，0.55当量)中。在1小时搅拌下将反应温热到室温。TLC(10％MeOH/CH2Cl2)和对茴香醛分析用来显现反应产物，表明仍然存在大量初始原料。因此将反应冷却到0℃，以便第二次加入20％的光气溶液(210μL，0.25当量)。加入后，将反应温度缓慢地温热到室温。1小时后的TLC分析仍然显示初始原料，但没有表现出分解的迹象。然后使反应静置过夜，同时搅拌。第二天的TLC分析表明仍然存在初始原料，但也显示出现基线分解。在室温下将水(15mL)加到反应产物中并搅拌30分钟。将混合物转移到分液漏斗中，在分离所述层之前使它们静置45分钟。用CH2Cl2(30mL)萃取水层，合并有机层并浓缩干燥。水层和合并的有机层的TLC分析没有显示胺初始原料的存在，表明在处理过程中反应进行完全。
用MTBE/EA共沸粗油状物，再溶于～50mL的1∶1的EA/庚烷，并在玻璃料漏斗上过滤以移除盐。在SiO2柱(50％EA/正庚烷，100％EA，然后5-10％MeOH/EA)上纯化该物质，以得到984mg以无色油状物存在的所希望的脲ER-819409-00。这表示自Fmoc脱保护开始合起来的产率为82％。物质平衡是在脲形成阶段的过夜搅拌过程中形成的基线物质。
实施例10：ER-819409-00的二羟基脲的合成
以保持反应温度低于30℃的速率将二异丙胺(78.7mL，0.561mol)加到在无水乙腈(348g)中的三氟乙酸吡啶(108g，0.533mol)的搅拌溶液中。使反应冷却到室温后，加入烯丙基四异丙基亚磷酰二胺(179mL，0.561mol)(观察到稍微吸热，然后放热)，随后再搅拌10分钟。然后以使反应温度保持在20～30℃的加入速率加入在无水乙腈(453mL)中的ER-819302(283.2 g，0.5345mol；用800mL的庚烷预驱逐)。再搅拌30分钟后，将反应混合物冷却到0℃，随后缓慢加入乙酸(64mL，1.1mol)，同时保持反应温度低于25℃。使反应混合物在室温下平衡。将在乙腈(200mL)中的三氟乙酸吡啶(103g，0.533mol)加到反应混合物中。在加入三氟乙酸吡啶之后，立即加入ER-812978(40g，0.27mol)，随后用乙腈(50mL)冲洗。在室温下搅拌反应混合物18小时，之后将其冷却到0℃，随后缓慢加入在水中的30wt.％的过氧化氢(140mL，1.37mol)，使反应温度保持在0～24℃(开始时强放热)。最终的反应混合物再搅拌30分钟，随后以使反应温度保持在0～18℃的速率加入20wt％亚硫酸氢钠水溶液(3000g)。将反应混合物温热至室温并搅拌，直到过氧化物测试提供阴性结果。
在处理容器中用MTBE(3000mL)稀释所得的反应混合物并搅拌15分钟。使层分离后，用10％碳酸氢钠(NaHCO3)水溶液(3500mL)、然后用30％NaCl水溶液(2000mL)洗涤有机层。用MTBE(3000mL)反萃取盐水层三次。浓缩合并的有机层并用TBME/庚烷＝1/1(1.4L)驱逐两次。将残余物溶于MTBE(735g)，并通过硅藻土垫(150g)过滤悬浮液，随后用MTBE(300mL)洗涤容器和过滤垫三次。浓缩干燥滤液，得到363.4g微混浊的油状物。利用调整过的～800mL/分钟的流量用TBME/庚烷＝7/3(400mL)将粗ER-819302溶解并装载到预处理过的硅胶柱[用MTBE/庚烷＝7/3(15Kg)处理的Biotage 150L(5.62Kg，空隙体积＝7.07L)柱]上。装载后，用TBME/庚烷＝7/3(500mL)冲洗残留的ER-819302并将冲洗液装载到柱上。用MTBE/庚烷＝7/3(26Kg)、然后用MTBE/庚烷/MeOH＝70/25/5(21.8Kg/7.18 Kg/1.7Kg)洗脱柱。在该过程中总共收集36个级分。浓缩合并的含有产物的级分并使用庚烷(8L)共沸干燥，随后在真空室内干燥，得到纯度为92.69面积％的油状物(281g，79％)。
ER-820116的分析数据
●1H-NMR(CDCl3)δ0.870(m，6H)，1.176(d，J＝8.0Hz，12H)，1.254-1.282(b，28H)，1.428(b，9H)，1.528(b，2H)，1.603(b，2H)，1.790(m，2H)，2.265(t，J＝7.0Hz，2H)，3.431(m，2H)，3.481(m，2H)，3.600(m，2H)，3.751(b，2H)，3.847(b，1H)，3.847-4.208(m，2H)，4.950(b，1H)，5.126(d，J＝10Hz，1H)，5.286(dd，J＝17Hz，J’＝1.5Hz，1H)，5.898-5.989(m，1H)
●31P-NMR(CDCl3，未校准)148.449和148.347(两个非对映异构体)
●MS-APESI(M+Na)C39H78N2O7P计算值：717.55实测值：717.66。ER-821843的分析数据
●31P-NMR(CDCl3，未校准)δ139.832，139.868，140.170，140.327(4个非对映异构体)
●MS-APESI(M+Na)C30H59NNaO6计算值：552.42实测值：无质谱数据
ER-819409的分析数据
●MeOH：未检测到
●MTBE：未检测到
●MeCN：185ppm
●庚烷：1718ppm
●1H-NMR(CDCl3)δ0.88(t，J＝6.9Hz，12H)，1.20-1.37(m，52H)，1.44(s，18H)，1.45-1.72(m，8H)，1.76-1.85(m，4H)，2.28(t，J＝7.6Hz，4H)，3.38-3.58(m，12H)，3.85-3.97(m，2H)，3.98-4.20(m，8H)，4.53-4.58(m，4H)，4.95-5.0(m，2H)，5.18-5.28(m，2H)，5.26(dd，J＝1.4，10.5Hz，2H)，5.37(dd，J＝0.9，16.9Hz，2H)，5.62-5.85(m，2H)，5.87-5.99(m，2H)。
●MS-APESI(M+Na)C71H136N4NaO19P2计算值：1433.92实测值：
1433.98。
实施例11：ER-807284-00的制备
制备1：在氮气氛下用10分钟的时间缓慢地将甲磺酸(13.8g，144mmol)在CH2Cl2(140mL)中的溶液加到在干燥CH2Cl2(120mL)中的ER-819409(40.25 g，28.51mmol)的搅拌溶液中，同时保持反应温度低于20℃。将反应混合物温热到20℃，随后搅拌15小时，直到确定中间体反应完全。将所得的反应混合物冷却到0℃并用5分钟的时间加入二异丙基乙胺(27.5mL，158mmol)。再在0℃下搅拌5分钟后，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(32.55g，170mmol)一次性加入。反应混合物在0℃下搅拌12分钟，随后一次性加入ER-028699(20.6 g,85.0mmol)。所得的反应混合物在0℃下搅拌2小时，随后温热至室温，持续30分钟，在此期间确定反应完全。
用调整至150～200mL/分钟的流量在预处理的Biotage 75M硅胶柱[(351g硅胶，用MTBE(1L)、然后用CH2Cl2(2L)预处理]上洗脱完成的反应混合物的四分之一(105 g)。连续地用1％乙醇(EtOH)/CH2Cl2(900mL)、用3％EtOH/CH2Cl2(900mL)、最后用6％EtOH/CH2Cl2(2250mL)洗脱柱，同时收集～150mL/级分。合并所希望的含有产物的级分、浓缩(在真空室内，30～35℃)并用庚烷(100mL)共沸三次，得到8.8g的ER-807285。以类似的方式纯化完成的反应的剩余物，总共得到35.2g(产率为74.5％)。
两个另外的实验方法如下所述。其在处理阶段不同。第一种涉及标准结束，而另一种使用反相结束(reverse quench)。用NH4OH/MeOH/CH2Cl2为1∶9∶90进行TLC分析。用对茴香醛斑点使TLC板显色以显现初始原料和反应产物。
制备2：将ER-819409-00(995mg，0.705mmol)溶于CH2Cl2(7.8mL)。在室温下用1～2分钟将TFA(1.4mL)加到该混合物中。然后在室温下搅拌反应混合物4小时。
搅拌后，用冰浴冷却反应混合物，并用25分钟加入饱和NaHCO3水溶液(16.0mL)。在中和过程中记录的最高温度为～8℃，平均温度为4℃。所得的混合物再搅拌45分钟，在此期间缓慢地将内部温度从4℃温热到室温。将混合物转移到分液漏斗中并加入CH2Cl2(11.0mL)。在分离之前使层静置35分钟。用CH2Cl2(5.0mL)萃取pH为8～8.5的水层。合并有机层并用10mL的通过使饱和盐水溶液和水以3∶1的比混合而制备的盐水溶液洗涤。在分离之前使层静置20分钟。然后将有机层储存在制冷器(-20℃)中过夜。
第二天早晨，从制冷器中移出有机层并温热至室温。使用Na2SO4干燥，在玻璃料漏斗上过滤，并浓缩至干燥。将所得的油状物再溶于CH2Cl2(8.0mL)并在棉塞上过滤，以除去任何盐残余物。浓缩干燥所得的物质以得到无色的油状物ER-807284-00(727mg，质量回收率为85％)。另外的CH2Cl2萃取提供额外的99.0mg的所希望的物质，使得质量回收率为96.8％。不必纯化。
ER-807284的分析数据
●1H-NMR(CDCl3)δ0.85-0.95(m，12H)，1.20-1.35(m，52H)，1.45-1.65(m，8H)，1.70-1.85(m，4H)，2.25-2.65(bs，4H)，2.28(t，J＝7.6Hz，4H)，3，20-3.27(m，2H)，3.30-3.60(m，12H)，3.98-4.22(m，10H)，4.50-4.60(m，4H)，4.95-5.05(m，2H)，5.27(dd，J＝0.9，10.5Hz，2H)，5.38(dd，J＝0.9，16.9Hz，2H)，5.90-6.0(m，2H)。
●MS-APESI(M+H)C61H121N4O15P2计算值：1211.83实测值：1211.97。
制备3：将CH2Cl2(22.3mL)装到适当规格的反应器中。加入ER-819409-00(2.85g，2.01mmol)并溶于CH2Cl2中。在室温下用1分钟加入TFA(4.0mL)。在室温下搅拌反应混合物4.5小时。
处理：(反相结束)：用1～2分钟通过聚四氟乙烯导管将反应混合物转移到冷却到0℃的饱和NaHCO3溶液中。观察到微小的升温，最大放热为～4℃。用CH2Cl2(4×2.5mL)冲洗反应烧瓶并将洗涤液加到溶液中。移除冷却装置并用45分钟温热至室温。再加入CH2Cl2(22mL)，并将混合物转移到分液漏斗中。在分离之前使混合物静置20分钟。用CH2Cl2(22mL)萃取水层并合并有机层。用盐水溶液，即饱和盐水/H2O(比为3∶1)(40mL)，洗涤合并的有机层。使所得的混合物静置30分钟，同时缓慢地使层分离。分层。有机层保持混浊。将有机层储存在-20℃的制冷器中过夜。然后将其温热至室温，用Na2SO4干燥，在玻璃料漏斗上过滤并浓缩干燥。再用CH2Cl2(22mL)反萃取盐水溶液以回收另外的物质。质子和氟NMR谱显示这两组物质均被TFA盐形式所污染。NaHCO3层的pH分析显示pH为～7(不足够高(8～8.5)以纯净地得到游离碱ER-807284-00)。合并上述得到的两组并通过将有机物质溶于CH2Cl2(50mL)来重复处理。将合并的溶液转移到250mL的装备有机械搅拌装置的三口圆底烧瓶中。加入饱和NaHCO3水溶液(50mL)并在室温下搅拌所得的混合物45分钟。将反应器内的物质转移到250mL的分液漏斗中。用CH2Cl2(总共25mL)冲洗反应器。静置混合物～1h并观察到乳状液。分离有机层和水层并用CH2Cl2(30mL)反萃取水层。合并所得的有机层，用饱和盐水(25mL)洗涤。甚至在静置1小时后，有机层依然保持混浊，此后分离有机层和水层。用Na2SO4干燥有机层，在玻璃料漏斗上过滤。滤液是混浊的。用CH2Cl2(25mL)反萃取盐水。在类似的干燥步骤后，将来自CH2Cl2层的物质与其它物质合并。浓缩干燥所得的合并的有机滤液，用MTBE(2×25mL)共沸，再溶于CH2Cl2(10mL)并在位于10mL注射器中的硅藻土(3mL)塞上过滤。所述注射器的尖端配备有过滤装置以捕获小颗粒。浓缩干燥滤液，NMR谱显示得到二胺ER-807284-00并且不含TFA盐。质量回收率超过95％。通过TLC净化反应。必须重复该处理以纯净地产生游离碱，通过TLC表现出某种程度的降解。控制pH可以改善该方法。
实施例12：ER-807285-00的制备
制备1-EDC/HOBT：将ER-807284-00(1.0当量)和无水二氯甲烷(8.41重量)装到适当规格的惰性反应器中。然后将1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(2当量)加到该反应器中，随后加入1-羟基苯并三唑(0.18当量)。然后将3-氧代-十四烷酸(2.2当量)以三等份加入到该反应器中，搅拌反应混合物10分钟，在每次加料之间保持T内部在15～20℃。通过TLC监控反应，以使ER-807284完全消耗。当确定反应完成(通常在1小时后)时，将生产用水(5重量)加到反应器中。搅拌混合物20分钟，然后分离20分钟。将有机层放在一边。以上述方式用乙酸乙酯(2×6重量)反萃取水层两次。然后合并所有有机层，加入硫酸钠(8重量)并静置15分钟以吸收水分。过滤有机物并用乙酸乙酯洗涤滤饼，直到得到ER-807285的阴性结果。真空(～50托，28～35℃)浓缩滤液，得到ER-807285。利用3％～6％EtOH/CH2Cl2通过硅胶色谱纯化该物质。合并富所希望物质的级分并通过旋转蒸发浓缩，并用IVAC泵(0.2托)干燥2小时。无色油状物ER-807285的产率为50％。
制备2-EDC/DMF：将ER-807284-00(208mg，0.172mmol)溶于在适当规格反应器中的DMF(2.1mL)中，并加入EDC(263 mg,1.37mmol)。将混合物冷却到0℃并用30秒逐滴加入溶于DMF(1.4mL)的3-氧代十四烷酸(166mg，0.686mmol)。在0℃下搅拌所得的反应混合物10分钟，同时温热到室温。通过TLC(7.5％MeOH/CH2Cl2：用于初始原料和产物的对茴香醛斑点)来监控反应。～3小时后在0℃下通过加入饱和NaHCO3溶液(8.0mL)、H2O(4.0mL)和1∶1的MTBE/正庚烷(10mL)结束反应。将反应混合物转移到分液漏斗中。用少量1∶1的MTBE/正庚烷冲洗反应器，然后与反应混合物合并。静置反应混合物20～30分钟，之后分离有机层和水层。有机层的总体积为～35mL。水层的TLC分析显示有少量DMF。不需要对水层进行二次萃取。用盐水(4.0mL)洗涤有机层，然后静置15分钟。观察到快速的分离，无乳状液。分离有机层和水层，蒸发干燥有机层，得到粗ER-807285-00。使用3～6％EtOH/CH2Cl2溶剂体系在SiO2柱上纯化粗ER-807285。产率为53％，(151mg ER-807285)，HPLC纯度为88％。
制备3-HBTU/Hunig’s碱/DMF：将ER-807284-00(232mg，0.191mmol)溶于DMF(2.5mL)。将反应器冷却到0℃。加入HBTU(218mg，0.574mmol)和3-氧代十四烷酸(139mg，0.574mmol)。随后用30秒逐滴加入Hunig’s碱(106uL，0.612mmol)。反应混合物在0℃下搅拌20分钟并在～10分钟后变为乳状。将反应混合物温热到室温。继续搅拌超过4小时。由于DMF用TLC监控是困难的。因此，反应时间会更短。用1∶1的MTBE/正庚烷(10mL)稀释反应混合物，并转移到60mL的分液漏斗中，并用通过使1.0M柠檬酸(50uL)和饱和氯化钠(9.5mL)制备的pH为3的水溶液处理。形成并析出大量盐，阻塞漏斗。加水(5.0mL)以使盐溶解，但是在此之后没有相分离，甚至在逐渐地加入MTBE(至多15mL)之后也是如此。然后加入乙酸乙酯直到10mL，以开始恢复相分离。使层静置～30分钟以获得分离。将水相的pH调整到pH为5。再用10mL如上所述制备的稀柠檬酸洗涤有机层，得到pH为3。分层。用饱和NaHCO3溶液(2×5mL)洗涤有机层。分离所得的水层和有机层并蒸发干燥有机层。ER-807285的产率为45％(143 mg)，HPLC纯度为91％。
实施例13：E6020的制备
在氩气流下将在脱气THF(1.57重量)中的ER807285(1当量)装到适当大小的惰性容器中。用40分钟将在四氢呋喃(2重量)中的四(三苯基膦)合钯(0)(0.03重量)、三苯基膦(0.03重量)和苯基硅烷(0.07重量)的溶液加到反应器中(T内部通常升高至～40到45℃)。通过TLC和HPLC监控反应中ER-804057的完全消耗。当确定反应完成(通常在＜10分钟后)时，通过离子交换色谱纯化反应混合物。对于关于该纯化的更多细节，参见实施例14。
实施例14：E6020的纯化
将含有四(三苯基膦)合钯(0)、三苯基膦和苯基硅烷的804057游离酸的粗反应混合物装载到Source 30Q离子交换柱中。然后，用甲醇/THF/水(77.5/15/5)从804057中洗脱出未结合的反应物。通过用增加的醋酸钠线性梯度从柱中洗脱804057的钠盐(即E6020)，所述醋酸钠以0M开始并以0.05M结束。在该色谱分析过程中除去杂质。
任选的二次纯化可能是希望的。该色谱分析从由前面的色谱中得到的E6020/醋酸钠离子交换溶液开始。将其直接装载到C-4Kromasil柱上并用等度缓冲体系甲醇/THF/水/醋酸钠(77.5/15/5/0.05M)洗脱。合并含有产物的级分，用于固相萃取。
然后用水以50/50稀释纯E6020溶液并装载到C-4Kromasil柱上。然后用水洗脱，从水到乙腈的线性梯度。这使盐和水与纯E6020分离。然后，用甲醇从柱中洗脱产物。得到纯E6020在甲醇中的溶液。在25～30℃和完全真空室内在旋转蒸发器上浓缩干燥。冻干玻璃质的产物或用乙酸乙酯/乙腈的溶液处理，形成白色固体。真空干燥得到E6020。实施例15：晶体ER-806158，(R)-1-(((R)-4，5-二氢-2-苯基唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇的表征
将一部分ER-806158再溶于温热的甲苯中，直到所有物质全部溶解，然后冷却。这产生单晶体，在本研究中选择使用这样的单晶体。用很少量的巴拉东油(paratone oil)将大小为0.14×0.14×0.10mm的无色块晶固定在玻璃纤维上。
A.单晶X射线衍射
用配备在193K下操作的Oxford Cryostream低温设备的基于Bruker SMART APEX CCD(电荷耦合器件)的衍射仪收集数据。用每帧0.3°的ω扫描测量数据30秒，以便收集到半球。总共收集到1271帧，最大分辨率为在数据收集结束时再收集最初的50帧，以监控衰减。用SMART软件(SMART V 5.625(NT)Software for the CCD DetectorSystem；Bruker Analytical X-ray Systems，Madison，WI(2001))获取晶胞参数并用SAINT基于所有观测到的反射进行精修。用校正Lp和衰减的SAINT软件(SAINT V 6.22(NT)Software for the CCD DetectorSystem Bruker Analytical X-ray Systems，Madison，WI(2001)进行数据简化。用SHELXS-97程序(Sheldrick，G. M.SHELXS-90，Program forthe Solution of Crystal Structure，University ofGermany，1990.)通过直接法来求解结构并通过最小二乘法对F2进行精修，SHELXL-97，(Sheldrick，G. M.SHELXL-97，Program for theRefinement of CrystalStructure，University ofGerm any，1997.)，并入到SHELXTL-PC V 6.10中，(SHELXTL 6.1(PC-Version)，Program library for Structure Solution and Molecular Graphics；BrukerAnalytical X-ray Systems，Madison，WI(2000))。
通过系统缺位分析在空间群P1(#1)中解得如图1所示结构。各向异性地精修所有非氢原子。通过差值傅立叶法找到氢并各向异性地精修。在数据收集过程中用于衍射研究的晶体没有显示分解。在50％椭球下绘制所有图。图2是沿着a轴的晶胞堆积图，其表示在晶体内氢键结合的最好的图，虚线。
表1.晶体数据和结构精修
B.粉末X射线衍射
使用石英片在Scintag衍射仪上在常规粉末衍射条件下在5～70°的2θ范围内用铜照射采集数据并在表2所示的条件下分析。不使用背景校正。图3表示晶体ER-896158的PXRD图案。晶体ER-896158的PXRD图案的特征峰在表3中列出。
表2：测量条件
X射线衍射仪：Scintag
靶：Cu
检测器：锂漂移二极管
管电压：40kV
管电流：30mA
狭缝：DS 1.0，RS 0.3mm，SS 2mm管，0.5m检测器
扫描速度：1°/分钟
步进I取样：0.02″
扫描范围：5～70″
样品架：石英架(25mm×25mm)
测角仪：θ-θ，固定的水平支架，测角仪
滤波器：电子的
单色仪：未使用
表3：粉末X射线衍射特征峰(2θ±0.22θ)
  6.9   20.2   25.2   41.6
  11.9   20.5   25.4   48.9
  13.6   21.7   26.5   55.2
  19.5   23.3   27.4   58.6
  19.7   24.2   34.4
C.晶体ER-806158的DSC表征。
通过差示扫描量热法(DSC，毛细管技术)确定晶体ER-806158的固态特征。使用5.17000mg的晶体ER-806158样品，在50mL/分钟的氮吹扫下，在具有氧化铝盘的以10℃/分钟加热到200℃的2920DSCV2.5F量热计上进行DSC操作。图4表示在氮存在下在27℃(初始温度)下熔融的晶体ER-806158吸收+29.2卡/克的温谱图。在样品的二次加热过程中观察到先有放热现象的熔融，这表明该ER-806158在液相中可以在至多到200℃的温度下是稳定的。
D.晶体ER-806158的红外光谱
晶体ER-806158的FTIR吸收光谱记录了纯晶体粉末。晶体ER-806158的IR吸收光谱如图5所示。

Claims (1)

1.晶体ER-806158，(R)-1-(((R)-4，5-二氢-2-苯基唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇，其具有三斜晶系和P1空间群，其特征在于晶格参数为：
α＝106.008(4)°
β＝95.604(4)°
γ＝98.696(4)°
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