CN103011963B - 刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基及其配制方法 - Google Patents

刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基及其配制方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基及其配制方法，培养基由以下重量份的组分组成：阔叶树木屑75～80份，甘蔗渣3～6份，麸皮12～18份，丙烯酰胺共聚交联物2～3份，磷酸二氢钾0.5～0.8份，石灰2～3份。培养基配制过程包括阔叶树木屑预处理、丙烯酰胺共聚交联物预处理、培养基混合、培养基装瓶、灭菌接种。本发明的培养基各组分之间的协同作用，配制的培养基在常规条件下可安全、稳定保藏刺芹侧耳的一级菌种，刺芹侧耳菌种三年内无退化或变异；本培养基的原料易得，配制方法简便，适用于食用菌生产，为规模化、连续化生产食用菌的企业提供了一种成本低廉、方法简便、安全、稳定、效果好的一级菌种保藏方法。

Description

刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基及其配制方法
技术领域
本发明涉及食用菌培养技术领域，具体涉及一种刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基及其配制方法。
背景技术
目前，在刺芹侧耳的工厂化生产中，由于周年连续化和大规模生产，菌种也是连续化和大量扩繁生产，生产者采用三级扩繁法生产菌种，一级菌种多采用连续转管继代培育的方式，菌种出现退化的情况比较严重或隐患很大；部分生产者将一级菌种采用简单的PDA继代转管低温保藏方式，往往1年后即出现菌种退化或变异，造成严重损失，优良菌株得不到有效保存；还有部分生产者直接从外部购买菌种，生产得不到保障且一样存在菌种质量不稳定。而本发明通过对刺芹侧耳菌种的遗传稳定性研究，设计了效果好、成本低、操作简便的保藏培养基和配制方法，无需特殊、贵重设备设施、操作简便，效果可靠。
发明内容
本发明针对上述的技术问题，提供一种刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基及其配制方法，该培养基容易获得、配制简单，可在常规条件下安全稳定的保藏刺芹侧耳的一级菌种。
本发明采取以下的技术方案：
一种刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，包括以下重量份的组分：阔叶树木屑75～80份，甘蔗渣3～6份，麸皮12～18份，丙烯酰胺共聚交联物2～3份，磷酸二氢钾0.5～0.8份，石灰2～3份。丙烯酰胺共聚交联物是高分子聚合物，内部含有大量亲水基团能够结合和吸附大量水分子，在培养基允许有限含水量的基础上保存更多足量的水分又不导致培养基因水分过重而绝氧；在菌丝长满培养基后的保藏过程中持续缓释水分供菌丝生命活动需要，从而防止菌丝体因失水干燥而菌丝死亡，大大延长了菌种的保藏时间。
作为本发明的优选实施例，刺芹侧耳的一级菌种保藏养基，包括以下重量份的组分：阔叶树木屑75份，甘蔗渣5份，麸皮15份，丙烯酰胺共聚交联物2.5份，磷酸二氢钾0.5份，石灰2份。
进一步的技术方案是，丙烯酰胺共聚交联物的颗粒度为1mm×1mm×1mm。
进一步的技术方案是，刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基采用以下的配制方法配制而成：
A、阔叶树木屑预处理：木屑的颗粒度为1mm～2mm，在木屑中加入水，调节含水量至65%～70%，露天堆放6个月以上，呈褐色或黑褐色，无霉腐味；
B、甘蔗渣预处理：甘蔗渣露天堆积，调节含水量至65％～70％，厌氧发酵3个月以上，呈棕褐色，有糖香味；
C、丙烯酰胺共聚交联物预处理：将丙烯酰胺共聚交联物，浸泡在清水中6小时以上充分吸水膨胀；
D、培养基混合：将预处理好的阔叶树木屑、甘蔗渣、麸皮、磷酸二氢钾、石灰加入步骤C预处理后的丙烯酰胺共聚交联物中混合均匀，补充水，使培养基含水量为65～68%；
E、培养基装瓶：将培养基装入保藏瓶中；
F、灭菌接种：将装有培养基的保藏瓶灭菌，接种后，23℃培育，菌丝长到还有10～12%的培养基未长满时，将保藏瓶置于2～4℃低温保藏。
进一步的技术方案是，培养基装瓶包括以下步骤：将培养基装入保藏瓶中，装料高度为70～80%，料面口填装2～4个丙烯酰胺共聚交联物盖面，并密封瓶口。
进一步的技术方案是，步骤F中所述灭菌包括以下步骤：将装有培养基的保藏瓶在灭菌锅中于98℃下灭菌45min，然后于115℃下灭菌45min，再于123℃下灭菌2.5h，自然冷却至90℃开锅。
本发明的有益效果是：1）本培养基中木屑、麸皮和丙烯酰胺共聚交联物的协同作用，配制的培养基在常规条件下可安全、稳定保藏刺芹侧耳的一级菌种，刺芹侧耳菌种三年内无退化或变异；2）本培养基的原料易得，配制方法简便，适用于食用菌生产，为规模化、连续化生产食用菌的企业提供了一种成本低廉、方法简便、安全、稳定、效果好的一级菌种保藏方法。
具体实施方式
下面结合本发明的具体实施方式对本发明作进一步的解释和说明。
实施例：
步骤1：刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，按如下重量份称取组分：阔叶树木屑75～80份，甘蔗渣3～6份，麸皮12～18份，丙烯酰胺共聚交联物2～3份，磷酸二氢钾0.5～0.8份，石灰2～3份。根据本发明优选的实施例，按如下重量份称取组分：阔叶树木屑75份，甘蔗渣5份，麸皮15份，丙烯酰胺共聚交联物2.5份，磷酸二氢钾0.5份，石灰2份。
步骤2：阔叶树木屑预处理：木屑颗粒度为1mm～2mm，在木屑中加入水，调节含水量至65～70%，露天堆放6个月以上，呈褐色或黑褐色，无霉腐味。
步骤3：甘蔗渣预处理：甘蔗渣露天堆积，调节含水量至65％～70％，厌氧发酵3个月以上，呈棕褐色，有糖香味。
步骤4：丙烯酰胺共聚交联物预处理：将丙烯酰胺共聚交联物，浸泡在清水中6小时以上充分吸水膨胀。
步骤5：培养基混合：将步骤2预处理好的阔叶树木屑、步骤3预处理好的甘蔗渣，麸皮、磷酸二氢钾、石灰加入到步骤4预处理好的丙烯酰胺共聚交联物中，混合均匀，补充水分，使培养基含水量为65～68%。
步骤6：培养基装瓶：将步骤5混合均匀的培养基装入保藏瓶中，装料高度为70～80%，料面口填装2～4个充分吸水的丙烯酰胺共聚交联物盖面，并密封瓶口。根据本发明的一个实施例，将培养基装入Φ20mm×200mm的试管中，每个试管中装入培养基的质量为30g，填装过程中适当压实，装料高度为140～160mm，料面口填装2～4个充分吸水的丙烯酰胺共聚交联物盖面，用化纤棉密封试管口。
步骤7：灭菌：将装有培养基的保藏瓶灭菌。根据本发明的一个实施例，将装有培养基的保藏瓶在灭菌锅中升温至98℃灭菌45min，然后于115℃下灭菌45min，再于123℃下灭菌2.5h，自然冷却至90℃开锅。
步骤8：接种：将刺芹侧耳的一级菌种接种到已灭菌的保藏瓶中，23℃培育，菌丝长到还有10～12%的培养基未长满时，将保藏瓶置于2～4℃低温保藏。根据本发明的一个实施例，Φ20mm×200mm的试管的培养基接种量为5mm×5mm琼脂斜面菌丝块，待菌丝长到还剩20cm左右的培养基未长满时2～4℃低温保藏。
采用本发明配制的培养基用于刺芹侧耳的一级菌种保藏，刺芹侧耳菌种在三年内无任何退化或变异。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。

Claims (6)

1.一种刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，其特征在于包含以下重量份的组分：阔叶树木屑75～80份，甘蔗渣3～6份，麸皮12～18份，丙烯酰胺共聚交联物2～3份，磷酸二氢钾0.5～0.8份，石灰2～3份；所述的甘蔗渣预处理：甘蔗渣露天堆积，调节含水量至65％～70％，厌氧发酵3个月以上，呈棕褐色，有糖香味；丙烯酰胺共聚交联物预处理：将丙烯酰胺共聚交联物，浸泡在清水中6小时以上充分吸水膨胀。
2.根据权利要求1所述的刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，其特征在于包含以下重量份的组分：阔叶树木屑75份，甘蔗渣5份，麸皮15份，丙烯酰胺共聚交联物2.5份，磷酸二氢钾0.5份，石灰2份。
3.根据权利要求1或2所述的刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，其特征在于所述丙烯酰胺共聚交联物的颗粒度为1mm×1mm×1mm。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，其特征在于采用以下的配制方法配制而成：
A、阔叶树木屑预处理：木屑的颗粒度为1mm～2mm，在木屑中加入水，调节含水量至65％～70％，露天堆放6个月以上，呈褐色或黑褐色，无霉腐味；
B、甘蔗渣预处理：甘蔗渣露天堆积，调节含水量至65％～70％，厌氧发酵3个月以上，呈棕褐色，有糖香味；
C、丙烯酰胺共聚交联物预处理：将丙烯酰胺共聚交联物，浸泡在清水中6小时以上充分吸水膨胀；
D、培养基混合：将预处理好的阔叶树木屑、甘蔗渣、麸皮、磷酸二氢钾、石灰加入步骤C预处理后的丙烯酰胺共聚交联物中混合均匀，补充水，使培养基含水量为65～68％；
E、培养基装瓶：将培养基装入保藏瓶中；
F、灭菌接种：将装有培养基的保藏瓶灭菌，接种后，23℃培育，菌丝长到还有10-12％的培养基未长满时，将保藏瓶置于2-4℃低温保藏。
5.根据权利要求4所述的刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，其特征在于所述培养基装瓶包括以下步骤：将培养基装入保藏瓶中，装料高度为70-80％，料面口填装2-4个充分吸水的丙烯酰胺共聚交联物盖面，并密封瓶口。
6.根据权利要求4所述的刺芹侧耳的一级菌种保藏培养基，其特征在于步骤F中所述灭菌包括以下步骤：将装有培养基的保藏瓶在灭菌锅中于98℃下灭菌45min，然后于115℃下灭菌45min，再于123℃下灭菌2.5h，自然冷却至90℃开锅。
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