CN103002869A

CN103002869A - 用于抑制par2 活化角质细胞的组合物和方法

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Publication number: CN103002869A
Application number: CN2010800681756A
Authority: CN
Inventors: C·L·斯万松; 箱崎智洋; L·T·劳克林二世
Original assignee: Procter and Gamble Ltd
Current assignee: Procter and Gamble Ltd; Procter and Gamble Co
Priority date: 2010-07-22
Filing date: 2010-07-22
Publication date: 2013-03-27
Anticipated expiration: 2030-07-22
Also published as: JP2012519735A; WO2012011908A1; EP2442784A1; KR20130020964A; EP2442784B1; KR101690959B1; CA2805480A1; CN103002869B; CA2805480C

Abstract

本发明将抑制PAR2活化角质细胞的组合物公开为包含维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物。在一个实施方案中，抑制PAR2活化角质细胞的组合物包含烟酰胺、N-十一碳烯酰基、L-苯丙氨酸和糖海带提取物。针对在发明背景中确认的技术问题，本发明可采取包括抑制PAR2活化角质细胞的方法在内的其它形式。

Description

用于抑制PAR2 活化角质细胞的组合物和方法

发明领域

本发明涉及通过使用维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物来提高PAR2抑制的方法。

发明背景

黑素是皮肤色素沉着的基础化合物。黑素是黑素细胞中由一组复杂的反应产生的，这些反应在基本水平上涉及酪氨酸酶以及作为底物的L-酪氨酸。酪氨酸酶催化L-酪氨酸至DOPA（L-3,4-二羟基苯丙氨酸）的转化和DOPA至多巴醌的转化。多巴醌经历进一步转化以形成黑素。黑素在被称作黑素小体的细胞器中聚集，所述黑素小体沿着被称为枝状体的黑素细胞的细丝转移到角质细胞。在黑素小体中表达有大约1500种基因产物，其中的600种在任何给定的时间表达，同时其中的100种被认为是黑素小体所独有的。此外，还有许多调控元件涉及信号发送、黑素小体在黑素细胞内的转移、以及将黑素小体转移到角质细胞。

黑素的生产周期的一种机理是通过细胞的吞噬作用将黑素小体从黑素细胞中转移到角质细胞。研究已发现，在角质细胞上表达的蛋白酶-活化的受体2（PAR-2）参与了黑素小体的转移，并因此PAR-2可调控色素沉着。参见Seiberg,M.等人发表的The Protease-Activated Receptor 2Regulates Pigmentation via Keratinocyte-Melanocyte Interactions,Experimental Cell Research254,25–32(2000)。用胰蛋白酶（或胰蛋白酶样蛋白酶）（或用肽激动剂SLIGRL）活化PAR-2可引起色素沉着，所述色素沉着在某些情况下可表现为色素沉着斑点或不均匀的皮肤色调。因此，可抑制胰蛋白酶（或胰蛋白酶样蛋白酶）活化PAR-2的化合物被认为通过角质细胞破坏或降低黑素细胞的吞噬作用。抑制PAR-2活化的化合物可能会调控色素沉着过度和黑素过度产生。

与黑素过度产生相关的病症被称为色素沉着过度。例如，黑变病或黄褐斑是一种病症，其特征在于边界清晰的斑点状褐色斑点的发育，它们通常对称地分布于脸颊、额头之上，并且有时出现在上嘴唇和颈部上。这种病症在很多情况下在孕期（妊娠期黑斑或“妊娠面斑”）和绝经期发生。另外，此病症在很多情况下存在于口服避孕药的人群中，也偶尔存在于一些没有口服避孕药的未孕妇女中，有时存在于男人中。与上文所述相似的面部色素沉着过度形态可能与被称作黄褐斑的慢性肝病相关。另一种与老化的皮肤相关的常见病症是有时被称为“老年斑”的暗斑的发展。色素沉着过度的其它形式能够由紫外线辐照或其它炎性刺激引起。色素沉着过度也可由对这种病症的遗传倾向引起，或者可在伤口愈合期间产生。

市场上销售用于改善色素沉着过度外观的许多活性成分。例如，使用诸如N-酰基苯丙氨酸和N-酰基酪氨酸的N-酰基氨基酸化合物和维生素B3已显示有益于体外调控黑素产生。参见Millikin,C.L.等人中。（2008年2月）。2008年在San Antonio,TX举行的美国皮肤病学会上，一个海报介绍了十一碳-10-烯酰基-苯丙氨酸（酰苯胺

）在体外调控黑素产生方面能给化妆品成分N-乙酰基葡糖胺和烟酰胺提供附加的有益效果。虽然现有的产品在调控色素沉着过度上是有效的，但持续需要更有效的产品。

糖海带（褐色的藻类物质）的提取物是本领域已知的。一个实例是以商品名菲罗蕊金由Biotech Marine,France出售的。如美国专利申请公开2008/0119527A1所描述，菲罗蕊金已知为可调控皮脂腺活性的反脂溢性剂。褐色藻类的提取方法也是已知的。欧洲专利1074262B1描述了用于一种类褐藻类与楔基海带种的提取方法。这些提取物被描述为用于化妆品组合物中作为渗透保护膜、自由基清除剂、或抗皮肤老化作用。以品牌名SK-II面部精华（Procter&Gamble,Cincinnati,OH）销售的化妆品组合物具有约1.25%的菲罗蕊金浓度。SK-II面部精华以一种滋润皮肤而不增加油性光泽的补水水凝面膜进行销售。

发明概述

抑制PAR2活化角质细胞的组合物包含维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物。在某些实施方案中，抑制PAR2活化角质细胞的组合物包含烟酰胺、N-十一碳烯酰基L-苯丙氨酸和糖海带提取物。

本发明还涉及通过施用本发明所公开的组合物来抑制PAR2活化角质细胞的方法。响应于在发明背景中已被确认的技术问题，本发明可采用其它形式。本发明的其它形式可从下面的发明详述中了解。

附图简述

据信，通过下文说明结合附图将更好地理解本发明。参考图片不应被理解为是对本发明范围的限制。

图1是点滴器形式的示例性施用装置。

图2是棒状形式的示例性施用装置。

图3是窄头管形式的示例性施用装置。

图4是一张参与者的全彩图像。

发明详述

除非另外指明，本文所用的所有百分比和比率均按组合物的总重量计，并且所有的测量均在25℃下进行。所有数值范围是包括端值在内的较窄的范围；描述的范围上限和下限是可互换的以形成没有明确描述的范围。

本发明的组合物可包含基本组分以及本文所描述的任选成分，基本上其组成或由其组成。如本文所用，“基本上由组成”是指所述组合物或组分可包括附加成分，只要附加成分不会在本质上改变本发明权利要求保护的组合物或方法的基本特性和新型特性。

本文参照组合物所用的术语“施用”是指将本发明的组合物施用或铺开在人类的皮肤表面上，例如表皮上。

如本文所用，术语“皮肤病学可接受的”是指所述组合物或组分适用于与人类的皮肤组织接触，而无不适当的毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等等。

如本文所用的术语“安全且有效量”是指可足以显著地引起积极有益效果的化合物或组合物的量。

如本文所用的术语“发炎后色素沉着过度”是指响应瞬时发炎事件（尤其是在深色皮肤的受体者身上）而发生的色素沉着的急性或暂时增加。一旦瞬时发炎事件消失，发炎后色素沉着过度通常就平息了。瞬时发炎事件的实例包括但并不限于痤疮病变、毛发向内生长、刮伤、昆虫叮咬、表面活性剂的损害和短期紫外线曝光。

如本文所用的术语“色素沉着斑点”是指限定的皮肤区域，其中由于局部的和慢性的或系统性过度产生黑素，所述色素沉着大于邻近区域的皮肤。色素沉着斑点的直径通常介于约2mm和约10mm之间，但是斑点也可能更小或更大。色素沉着斑点可包括老年斑、太阳斑、阳光雀斑、低黑色素病变、雀斑、以及黄褐斑点中的一者或多者。

如本文所用的术语“老年斑”是指限定的皮肤区域，其中因由固有的或外在的老化因素引起的局部的和慢性黑素过度产生而使得该区域的色素沉着大于相邻区域。

如本文所用的术语“皮肤调色剂”是指一种试剂，所述试剂调控黑素产生信号、黑素的合成、黑素在黑素细胞和角质细胞之间的系统性传送、和/或黑素降解。皮肤调色剂可通过作为淡色或减少色素沉着的美容剂来改善不均匀皮肤色调的外观。

如本文所用的术语“皮肤色调”是指在皮肤上由系统性而非瞬时的黑素合成所形成的黑素的总体外观。皮肤色调通常在较大的皮肤区域之上表征。理想地，所述区域可小于100mm²，但是想象成如整个面部皮肤或任何面部皮肤表面的较大区域。皮肤色调可通过图像分析来测量。例如，总体明度可通过在L*a*b色彩空间中的L*坐标来测量（国际照明委员会）。发色团作图，例如黑素作图和黑素浓度，可用作整体皮肤色调的指示。平均黑素可从发色团图谱数据来计算。另外，皮肤色调的均匀度可通过黑素的均匀度确定，所述黑素的均匀度也可从发色团图谱数据来计算。合适的发色团作图技术在以下实例中进行了讨论。

如本文所用的术语“面部皮肤表面”是指额头、眶周、脸颊、口周、下巴和鼻部皮肤表面中的一者或多者。

I.组合物

本发明的组合物用于治疗、调控、改善、和/或预防黑素沉着过度。所述组合物用于施用到哺乳动物的皮肤表面，尤其是人类的皮肤。所述组合物可为各种各样的产品形式，包括但不限于溶液、悬浮液、乳液、面霜、凝胶、调理剂、棒状产品、笔状产品、喷剂、气溶胶、油膏、清洁液体洗涤剂和固体棒、洗发剂和毛发调理剂、软膏、泡沫、粉末、摩丝、剃刮膏、擦拭物、试纸、遮瑕膏、电子粉片遮瑕膏、伤口敷料和粘合剂绷带、水凝胶、成膜产品、面部和皮肤面膜（有或没有不溶薄片），诸如基础粉底、眼线和眼影的化妆品等等。所述组合物形式可符合所选择的特定的皮肤病学可接受的载体，如果这些载体在所述组合物中存在的话。

A.糖海带提取物

本发明的组合物包含安全且有效量的糖海带提取物，褐色藻类提取物。优选的提取物是购自Marine Biotech,France的菲罗蕊金和/或菲罗蕊金BG。另一种合适的糖海带提取物以产品代号HG657购自Ennagram,France。所述组合物可以按所述组合物的重量计至少约0.001%、0.0006%、0.2%、或1%的量包含菲罗蕊金和/或菲罗蕊金BG。所述组合物可以按所述组合物的重量计至少约50%、20%、10%、5%或1%的量包含菲罗蕊金和/或菲罗蕊金BG。使用的菲罗蕊金和/或菲罗蕊金BG的示例性范围包括按所述组合物的重量计0.008%至50%、约0.04%至20%、0.2%至10%、1%至5%、以及1%至3%。

所述组合物可包含足够量的糖海带提取物以提高或改善所述组合物内其它活性物质的色素沉着过度的治疗效果。在一个实施方案中，所述组合物包含足够量的糖海带提取物以提高或改善维生素B₃化合物和/或N-酰基氨基酸化合物的功效。在某些实施方案中，所述糖海带提取物可提高或改善烟酰胺和/或N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸的功效。在另一个实施方案中，所述组合物可包含足够量的糖海带提取物以提高或改善所述组合物内其它活性物质的PAR-2抑制作用。在某些实施方案中，所述糖海带提取物可提高或改善烟酰胺和/或N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸的PAR-2抑制作用。在另一个实施方案中，所述组合物包含足够量的糖海带提取物以提高所述组合物内其它成分的PAR2抑制作用。例如，所述组合物可包含足够量的糖海带提取物以提高维生素B3化合物和N-酰基氨基酸化合物的组合物中其它成分的PAR2抑制作用。

所述糖海带提取物可包含其它化合物，例如水、增稠剂、保湿剂、溶剂和增溶剂等。例如，菲罗蕊金和/或菲罗蕊金BG大约包含约1%至约2.5%的干提取物，其中剩余材料为惰性载体。因此，本发明的组合物可包含按所述组合物的重量计约0.00001%至约1.25%，在一个实施方案中约0.00006%至约0.5%，在另一个实施方案中约0.002%至约0.25%的量的糖海带提取物。在另一个实施方案中，所述组合物包含按所述组合物的总重量计约0.01%至约0.125%，并且在另一个实施方案中0.01%至0.075%的糖海带提取物。所述糖海带提取物可用本领域已知的方法制备，例如欧洲专利1074262B1中所描述的方法。

B.N-酰基氨基酸化合物

所述组合物可包含安全且有效量的一种或多种N-酰基氨基酸化合物。氨基酸可为本领域已知氨基酸中的任何一种。N-酰基氨基酸化合物包括N-酰基氨基酸、它们的异构体、它们的盐、以及它们的衍生物。本发明的N-酰基氨基酸化合物符合式I：

式I

其中R可为氢、烷基（取代或未取代的、支链或直链的）、芳基、或者烷基和芳族基团的组合。本领域已知的氨基酸的可能侧链的列表描述于1981年由W.H.Freeman and Company出版的Stryer的“Biochemistry”中。R¹可为饱和或不饱和的、直链或支化的、取代或未取代的C₁-C₃₀烷基；取代或未取代的芳族基团；或它们的混合物。

N-酰氨基酸化合物可选自：N-酰基苯丙氨酸、N-酰基酪氨酸、它们的异构体、它们的盐、以及它们的衍生物。氨基酸可为D或L异构体或它们的混合物。N-酰基苯丙氨酸符合下式II：

式II

其中R¹可为饱和或不饱和的、直链或支化的、取代或未取代的C₁-C₃₀烷基；取代或未取代的芳族基团；或它们的混合物。

N-酰基酪氨酸符合下式III：

式III

其中R¹可为饱和或不饱和的、直链或支化的、取代或未取代的C₁-C₃₀的烷基；取代或未取代的芳族基团；或它们的混合物。

尤其可用作局部肤色匀化（淡色或减少色素沉着）化妆品试剂的是N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸。该试剂属于广义的N-酰基苯丙氨酸衍生物类别，其酰基是C11单不饱和脂肪酸部分，并且氨基酸是苯丙氨酸的L-异构体。N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸符合下式IV：

式IV

如本文所用，N-十一碳烯酰基L-苯丙氨酸可以商品名酰苯胺

从SEPPIC商购获得。

本发明的组合物可包含按所述组合物的重量计约0.0001至约25%、约0.001至约10%、约0.01至约5%、或约0.2至约2.5%的N-酰基氨基酸。

C.维生素B ₃

本发明的组合物可包括安全且有效量的维生素B3化合物。维生素B₃化合物尤其可用于调节皮肤状况，如美国专利5,939,082中所述。所述组合物包含按所述组合物的重量计约0.01%至约50%、约0.1%至约20%、约0.5%至约10%、约1%至约5%、或约2%至约5%的维生素B3化合物。

如本文所用，“维生素B₃化合物”是指具有式V的化合物：

式V

其中R为-CONH2（即烟酰胺）、-COOH（即烟酸）或-CH2OH（即烟基醇）；它们的衍生物；以及任何上述物质的盐。

前述维生素B3化合物的示例性衍生物包括烟酸酯，所述酯包括烟酸的非血管舒张性酯（例如生育酚烟酸酯、烟酸十四烷酯）。

合适的维生素B3化合物的实例是本领域熟知的并且可从多个来源（例如Sigma Chemical Company，ICN Biomedicals，Inc.，和AldrichChemical Company）商购获得。

D.皮肤病学可接受的载体

本发明的组合物也可包含用于组合物的皮肤病学可接受的载体（其可被称为“载体”）。如本文所用，短语“皮肤病学可接受的载体”是指所述载体适于局部施用到角质组织，具有良好的美学特性，与组合物中的活性物质相容，并且不会引起任何不合理的安全或毒性问题。在一个实施方案中，所述载体以按所述组合物的重量计约50%至约99%、约60%至约98%、约70%至约98%，或者作为另外一种选择约80%至约95%的含量存在。

所述载体可为各种各样的形式。非限制性实例包括简单的溶液（如水基的、有机溶剂或油基的）、乳液、以及固体形式（例如凝胶、棒状固体、可流动的固体、或无定形材料）。在某些实施方案中，所述皮肤病学可接受的载体为乳液形式。乳液一般可分类为具有连续水相（例如水包油和水包油包水）或连续油相（例如油包水和油包水包油）。本发明的油相可包含有机硅油，非有机硅油诸如烃油、酯、醚等，以及它们的混合物。

所述水相通常包含水。然而，在其它实施方案中，所述水相可包含不是水的组分，包括但不限于水溶性保湿剂、调理剂、抗微生物剂、湿润剂和/或其它水溶性护肤活性物质。在一个实施方案中，所述组合物中的非水组分包括湿润剂，诸如甘油和/或其它多元醇。然而，应当认识到，所述组合物可为基本上无水（即小于1%的水）或完全无水的。

选择合适载体以产生所需的产品形式。此外，所述组分的溶解度或分散性（如糖海带提取物、防晒活性物质、附加组分）可决定载体的形式和特性。在一个实施方案中，水包油或油包水乳液是优选的。

乳液可进一步包含乳化剂。所述组合物可包含任何合适百分比的乳化剂以充分地乳化载体。基于所述组合物的重量计，合适的重量范围包含约0.1%至约10%，或约0.2%至约5%的乳化剂。乳化剂可为非离子的、阴离子的或阳离子的。合适的乳化剂公开于例如美国专利3,755,560、美国专利4,421,769以及北美版McCutcheon的“Detergents andEmulsifiers”，，第317-324页(1986)中。根据所需的产品形式，合适的乳液可具有宽范围的粘度。

所述载体可进一步包含为本领域熟知的增稠剂以提供具有合适粘度和流变学特性的组合物。

E.任选成分

在一些实施案例中，希望在组合物中包含皮肤调色剂和糖海带提取物的组合。可包含皮肤调色剂以进一步改善总体肤色。当存在时，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计至多约50%、40%、30%、20%、10%、5%、或3%的皮肤调色剂。当存在时，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计至少约0.001%、0.01%、0.1%、0.2%、0.5%、或1%的皮肤调色剂。合适的范围包括下限和上限的任何组合，包括在按所述组合物的重量计约0.1%至约50%；约0.2%至约20%；或约1%至约10%的合适范围内的皮肤调色剂。本文所列的量仅用作指导，因为所述皮肤调色剂的最佳量将取决于所选的具体活性物质，这是由于它们的功效确实相差很大。

合适的皮肤调色剂包括但不限于糖胺、熊果苷、脱氧熊果苷、1,3-二羟基-4-烷基苯（例如己基间苯二酚、蔗糖二月桂酸酯、补骨脂酚（4-[(1E,3S)-3-乙烯基-3,7-二甲基-1,6-辛基二烯]苯酚或单萜苯酚））、焦宁（购自Biotech Marine,France）、稷籽提取物、十八烯二酸、肉桂酸、阿魏酸、芥末花提取物、甲基烟酰胺、油溶性甘草提取物、叶酸、十一碳烯酸(即十一烯酸)、十一碳烯酸锌、硫胺素（维生素B1）及其盐酸盐、L-色氨酸、向日葵（太阳花）和葡萄（葡萄树）叶提取物、肌肽（carnosine）（即肌肽（dragosine））、龙胆酸甲酯、1,2-己二醇和1,2-辛二醇（即以商品名Symdiol68由Symrise AG,Germany出售的组合）、肌醇基、曲酸、去氧苯比妥化合物、水杨酸和维甲酸类（包括视黄醇和丙酸视黄酯）。

在某些实施方案中，附加的皮肤调色剂选自糖胺、去氧苯比妥化合物、水杨酸、诸如己基间苯二酚的1,3-二羟基-4-烷基苯以及维甲酸类。如本文所用，“糖胺”包括此类物质的异构体和互变异构体及其盐（例如盐酸盐）和它们的衍生物。糖胺的实例包括葡糖胺、N-乙酰基葡糖胺、甘露糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、它们的异构体（例如立体异构体）、以及它们的盐（例如盐酸盐）。如本文所用，“去氧苯比妥化合物”是指具有式VI的化合物：

式VI

其中R¹和R²是任选的，或为有机酸（例如磺酸等）。在一个实施方案中，去氧苯比妥化合物为二羟乙基磺酸己氧苯醚。

色素沉着过度可由皮肤炎症引起。引起色素沉着过度的瞬时发炎事件，并且更具体地发炎后色素沉着过度，包括但并不限于痤疮病变、毛发向内生长、划伤、昆虫叮咬、表面活性剂损害、过敏原和短期的紫外线曝光。炎症引起的色素沉着过度（包括发炎后色素沉着过度）可通过向本发明的组合物中混入抗炎剂来管理。当存在时，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计至多约20%、10%、5%、3%、或1%的抗炎剂。当存在时，本发明的组合物包含按所述组合物的重量计至少约0.001%、0.01%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、或1%的抗炎剂。合适的范围包括所述下限和上限的任何组合。合适的抗炎剂包括但不限于非甾体抗炎剂（NSAIDS，包括但不限于布洛芬、萘普生、氟芬那酸、依托芬那酯、阿司匹林、甲芬那酸、甲氯芬那酸、吡罗昔康和联苯乙酸），甘草酸（也被称为甘草素、甘草甜素和甘草皂甙）和盐如甘草酸二钾、甘草次酸、甘草提取物、红没药醇（例如α-红没药醇）、茜草（提取自茜根属植物，尤其是红根）和乳香树脂（提取自没药属植物，尤其是印度穆库尔没药）、可乐果提取物，春黄菊，红三叶草提取物和海鞭提取物（提取自柳珊瑚目植物）、上述任何物质的衍生物、以及它们的混合物。

本主题发明的组合物可包含一种或多种防晒活性物质（或防晒剂）和/或紫外线吸收剂。本文中，“防晒活性物质”共同地包括防晒活性物质、防晒剂、和/或紫外线吸收剂。防晒活性物质包括防晒剂和物理防晒霜两者。防晒活性物质可为有机的或无机的。合适的防晒活性物质的实例以“防晒剂”在个人护理产品委员会的第三版《International CosmeticIngredient Dictionary and Handbook》中公开。尤其合适的防晒活性物质是2-乙基己基-p-甲氧基肉桂酸酯（可商购获得的PARSOL^TM MCX）、4,4'-叔丁基甲氧基二苯甲酰甲烷（可商购获得的PARSOL^TM1789）、2-羟基-4-甲氧基二苯酮辛基二甲基-对氨基苯甲酸二倍酰三油酸酯2,2-二羟基-4-甲氧基二苯酮4-（双（羟丙基）氨基苯甲酸乙酯2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸2-乙基己酯水杨酸2-乙基己酯对氨基苯甲酸甘油酯3,3,5-三甲基环己基水杨酸酯邻氨基苯甲酸薄荷酯对二甲基氨基苯甲酸或氨基苯甲酸盐酯对二甲基-氨基-苯甲酸-2-乙基己酯2-苯基苯并咪唑-5-磺酸2-（对二甲基氨基苯基）-5-磺酸苯并恶唑酸氰双苯丙烯酸辛酯氧化锌亚苄基樟脑及其衍生物二氧化钛以及它们的混合物。

在一个实施方案中，所述组合物可包含按所述组合物的重量计约1%至约20%，或约2%至约10%的防晒活性物质。确切的量将根据所选的防晒活性物质和所期望的防晒因子(SPF)而变化，SPF在本领域技术人员的知识范围内。

本发明的组合物可包含多种其它成分，前提条件是它们不会不可接受地改变本发明的有益效果。当存在时，本发明的组合物可包含按所述组合物的重量计约0.0001%至约50%；约0.01%至约20%；或者作为另外一种选择约0.01%至约10%的任选组分。本文所列的量仅用作指导，因为用于组合物中的任选组分的最佳量将取决于所选的具体活性物质，这是由于它们的功效确实相差很大。因此，可用于本发明中的一些任选组分的量可在本文所列范围之外。

当被混入到所述组合物中时，任选组分应适于与人类的皮肤组织接触，而无不适当的毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等等。本发明的组合物可包含任选组分，例如抗痤疮活性物质、脱屑活性物质、抗蜂窝炎剂、螯合剂、类黄酮、美黑活性物质、非维生素抗氧化剂和自由基清除剂、毛发生长调节剂、抗皱纹活性物质、抗萎缩活性物质、矿物、植物甾醇和/或植物荷尔蒙、N-酰基氨基酸化合物、抗微生物或抗真菌活性物质、以及其它有益护肤的活性物质，这些在美国专利申请US2006/0275237A1和US2004/0175347A1中有进一步详述。

个人护理产品委员会的第三版《International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook》描述了多种非限制性的广泛用于护肤行业的美容和药物成分，这些成分是可用于本发明组合物中的合适的任选组分。这些成分类别的实例包括：研磨剂、吸收剂、诸如芳香剂的美容组分、颜料、染色剂/着色剂、精油、抗结块剂、消泡剂、抗微生物剂、粘结剂、生物添加剂、缓冲剂、增量剂、螯合剂、化学添加剂、着色剂、化妆品收敛剂、化妆品灭生物剂剂、变性剂、药物收敛剂、润肤剂、外用止痛剂、成膜剂或成膜物质、遮光剂、pH调节剂、防腐剂、推进剂、还原剂、多价螯合剂、皮肤冷却剂、皮肤保护剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素、以及它们的组合。

II.示例性组合物

以下是本发明的组合物的非限制性实例。实例的给出仅是为了举例说明之目的，不应被解释为是对本发明的限制，因为在不脱离本发明的实质和范围的情况下，可作出许多改变，这将被本领域的普通技术人员所认识到。在实例中，除非另外指明，所有浓度均按重量百分比列出，并且可排除次要材料，如稀释剂、填料等。因此，所列的制剂包括所列的组分以及与该组分有关的任何次要材料。对于本领域普通的技术人员显而易见的是，这些次要材料的选择将根据所选成分的物理和化学特性而变化，从而制备本文所述的本发明。

所有的实施例均可用于治疗、调控、改善和/或预防色素沉着过度。本发明可进一步涉及用组合物来局部治疗一种或多种色素沉着斑点的方案或涉及用组合物进行一种更宽泛的或通用的面部皮肤治疗的方案。

*1–购自Biotech Marine,France。

*2–酰苯胺，购自SEPPIC,France。

*3–Emulgade PL68/50，购自Cognis GmbH。

*4–Sepigel305，购自SEPPIC,France。

*5–Dow Corning DC1503，购自Dow Corning，Inc.,Midland,MI。

本发明的组合物通常通过常规方法制备，如本领域已知的制备局部用组合物的方法。上述方法通常涉及在一个或多个步骤中将成分混合至相对均匀的状态，可进行或不进行加热、冷却、施加真空等。通常，乳液可通过以下来制备：首先将水相材料和油脂相材料分别混合，并然后将两相适当地混合，直至获得所需的连续相。优选制备所述组合物以优化活性物质的稳定性（物理稳定性、化学稳定性、光稳定性）和/或递送。这种最优化可包括合适的pH值（例如小于7）、排除可与活性剂复合并因此负面影响稳定性或递送的物质（如排除杂质铁）、使用预防复合物形成的方法（例如合适的分散剂或双隔室包装）、使用合适的光稳定性方法（例如混入防晒剂/防晒霜、使用不透明的包装）等等。

III.治疗方法

各种治疗、施用、调控、或改善方法可利用前述组合物。所述组合物可施用到皮肤表面。所述组合物可施用到需要PAR2抑制的皮肤表面。例如，所述组合物可施用到包括色素沉着斑点或不均匀色调的皮肤表面。所述组合物可施用到需要调控和/或降低黑素的皮肤表面。最令人关心的皮肤表面大多是（但不限于）那些通常未被衣服覆盖的部分，例如面部皮肤表面、手和臂皮肤表面、脚和腿皮肤表面、以及颈和胸部皮肤表面（例如坦胸露背的衣服）。具体地，色素沉着斑点的识别可在包括前额、口周、下巴、眶周、鼻部和/或面颊皮肤表面的脸部皮肤表面上进行。

所述方法包括识别用所述组合物治疗的皮肤表面的步骤。色素沉着斑点可由使用者或第三方如皮肤科医师、美容师或其他护理人员进行确认。识别可通过基于大小和颜色视觉检视皮肤上的需要治疗的色素沉着斑点来进行。黑素的识别可通过可商购获得的如

V（购自AstronClinica,Ltd.,UK）或

肤色分析系统(购自Canfield Scientific,Inc.,Fairfield,NJ)的成像装置来进行。两个装置均能够采集皮肤的图像并识别如黑素的发色团。然后这些图像可用来识别色素沉着斑点或不均匀色调。

有许多给药方案可用于将组合物施用到皮肤表面。在治疗期，可每天至少一次、每天两次、或以每天更频繁的方式施用所述组合物。当每天两次施用时，第一次与第二次施用应相隔至少1至约12小时。通常，所述组合物可在早上和/或晚上临睡前施用。

所述组合物可被施用并保留在皮肤表面上以保证足够的接触时间，和/或重复施用足够的次数以达到期望的PAR2抑制效果。在某些实施方案中，接触时间大于约1小时、2小时、6小时、8小时、12小时、或24小时。接触时间是从施用所述组合物直至移除所述组合物的时间。在某些实施方案中，所述组合物可通过冲洗或洗涤底物被除去。

治疗期理想地是足以产生PAR2抑制的时间。治疗期可为足以产生色素沉着斑点的外观改善、黑素的降低、或皮肤色调的匀化的时间。所述改善可为色素沉着斑点的可检测的尺寸减小、色素沉着斑点的淡化（例如颜色淡化）、或色素沉着斑点的黑素减少。治疗期可涉及单次施用或多次施用。所述组合物至少每天施用。在另一个实施方案中，所述组合物每天施用至少两次。多次施用可在为期至少约1周内发生。作为另外一种选择，治疗期可持续超过约4周或超过约8周。在某些实施方案中，治疗期可延长至多个月（即3-12个月）或多年。

向皮肤表面施用组合物的步骤可通过局部施用来完成。关于组合物的施用，术语“局部的”、“局部”，“局部地”是指将所述组合物递送到目标区域（例如色素沉着斑点）同时最小化向无需治疗的皮肤表面的递送。已经认识到，局部施用确实允许将适当量的组合物施用到与目标区域例如色素沉着斑点相邻的区域（即，组合物被施用或保留在色素沉着斑点的边界内时总是需要铺开）。组合物的形式或皮肤病学可接受的载体应被选择成有利于局部的施用。虽然本发明的某些实施方案设想将组合物局部施用到色素沉着斑点，但应当理解，本发明的组合物可更通常或广义地施用到一种或多种面部皮肤表面以降低在那些面部皮肤区域内的色素沉着斑点的外观。

在一些实施方案中，组合物可由多种适于局部或全面施用的施用装置递送。多个施用装置在图1-3中以举例的方式示出。在图1中，合适的施用装置10可为点滴器12，该图显示该点滴器有一个可包含所述组合物的瓶子14。图2显示施用装置20为具有外壳24的棒状体22，所述外壳可容纳组合物。棒状体22可包括柄部26、杆27和施用头28。施用头28可包括纤维、泡沫、棉花、或任何其它合适的材料，所述施用头可释放地保持组合物。图3显示施用装置30为窄末端32，其具有主体34和窄分配末端36。组合物可存储在主体34内并通过尖末端36分配。也可使用其它的可将第一组合物局部施用到色素沉着斑点的施用装置，例如棉拭子。其它合适的施用装置包括购自Shya Hsin Plastic Works，Inc.,Taiwan的SH-0127笔试施用器和购自SwabPlus，Inc.,China的Xpress Tip或液体充填式拭子。施用装置可被构造成易于将所述组合物施用到色素沉着斑点（这些斑点具有介于约2mm和约10mm之间的近似直径）并允许分配约1至约50uL/cm²或约1至约5uL/cm²的组合物的量的剂量。在另一个实施方案中，将所述组合物同时施用到一个或多个色素沉着斑点，并且更一般地讲同时施用到一个或多个面部皮肤表面（即，在小于30分钟，或更典型地小于5分钟的一段时间内）。

虽然本文所述的一些方法设想用施用装置来施用本发明的组合物，但应当理解，施用装置并不是必须的，并且本发明的组合物也可用人的手指或其它常规方法直接施用。

合适的方法可包括上述步骤中的任何一个或多个。用以抑制PAR2活化角质细胞的一种合适的方法包括将包含维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物的组合物施用到皮肤表面一段足以抑制PAR2活化角质细胞的时间的步骤。另一种抑制PAR2活化角质细胞的合适方法包括将包含维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物的组合物施用到皮肤表面的步骤，其中至少每天施用所述组合物一段足以抑制PAR2活化角质细胞的时间。

IV.测试方法

本发明提供以下方法以用于显示本发明的多种实施方案的某些特征和优点，并且不应被理解为是对本发明范围的限制。

PAR-2抑制测定：该测定原理依赖于将β-抑制蛋白添加到活化的PAR-2受体中，从而导致活性β-半乳糖苷酶（其可切割底物，从而产生可被定量测量的发光信号）的形成。PAR-2可通过添加胰蛋白酶并且也通过添加SLIGRL肽来活化。

表达连接到β-半乳醣苷酶的α-片段的PAR-2受体的细胞和表达连接到β-半乳醣苷酶的β-片段的β-抑制蛋白的细胞可从DiscoveRx Corp.,Freemont,CA获得。在T75或T150培养瓶中，细胞在补充有10%加热灭活胎牛血清、500单位/mL青霉素、500ug/mL链霉素、800ug/mL庆大霉素和300ug/mL潮霉素的达尔伯克氏改进的伊格尔培养基（DulbeccosModified Eagle Medium）的培养基中于37℃的CO₂恒温箱中繁殖（所有的培养基组分购自Invitrogen Corp.,Carlsbad,CA）。当细胞达到大约80%铺满度时，用细胞解离缓冲液（以商品号13151-014购自InvitrogenCorp.,Carlsbad,CA）将细胞从培养瓶中分离出来。使用血球计对细胞进行计数并将细胞用20uL/孔的

培养基（购自Invitrogen Corp.,Carlsbad,CA）以10000细胞/孔装到384个孔板中。将细胞培养24-48小时。

为测定由胰蛋白酶活化PAR2的潜在抑制剂，每个孔都用1uL的测试材料的水溶液进行处理。每种测试材料都进行三次测试。将细胞在CO₂恒温箱中温育30分钟，之后加入1uL胰蛋白酶（约0.1ug/uL）。将细胞在CO₂恒温箱中温育1小时，之后加入细胞裂解底物溶液（11uL/孔）。细胞裂解底物溶液以PathHunter^TM检测套件购自DiscoveRx Corp.,Freemont,CA(目录号#93-0001)，其中将所述成分按以下比例混合：

测定缓冲液：底物1：底物2=19:5:1

将板在800Xg下简单离心（大约5分钟）以除去气泡，并然后在室温下温育1小时。在Envision^TM2101Multilabel Reader（购自PerkinElmer,Inc.,Boston,MA）上读取每孔的发光数据。该范围通过含溶剂对照物+胰蛋白酶的孔（高对照）和含溶剂对照物但无胰蛋白酶的孔（低对照）进行确定。每种处理的PAR2抑制百分比通过以下发光信号的式进行计算。

使用Microsoft，Redmond，WA的Excel，采用T-测试函数，分布不均的单尾函数进行统计。

使用上面概述的测定法，测试了糖海带提取物（例如菲罗蕊金）、N-酰基氨基酸（例如酰苯胺）和维生素B3（例如烟酰胺）的各种浓度和组合。1%菲罗蕊金（即组合物包含大约0.025%-0.01%的糖海带提取物）、1%酰苯胺、5%烟酰胺、以及它们的组合的原液组合物可在使用之前被制备并稀释。以0.045、0.023和0.006的稀释因子进行测试运行。为清楚起见，以0.045的因子稀释后的所述1%酰苯胺组合物产生包含0.045%酰苯胺的测试组合物。

下表中报导的数值是PAR2活化抑制的百分比。下表报道的所有数值均被认为是在近似p值≤0.05时统计意义上的显著性。图4是表中数据的柱状图，其中Y轴是PAR2抑制的百分比。对于化合物的组合中的每一种化合物，三个柱状图表示稀释因子为0.045、0.023和0.006。100%这个数值表示PAR2活化抑制相当于不存在胰蛋白酶引发剂的对照物。

包含菲罗蕊金的测试组合物单独地显示出很小的抑制作用或没有抑制作用。酰苯胺和烟酰胺单个地展示出抑制作用，在更高稀释的情况下其抑制作用是显著的。酰苯胺和烟酰胺一起展示出尤其是在更高稀释时突出的抑制作用。酰苯胺、烟酰胺和菲罗蕊金的组合甚至展示出比酰苯胺和烟酰胺的组合更高的抑制作用。鉴于菲罗蕊金自身提供了很小的抑制作用甚至没有抑制作用，这种结果是出乎意料的。不受理论的限制，据信菲罗蕊金可提高烟酰胺/酰苯胺对PAR2的抑制作用。通过抑制PAR2活化，也同样抑制了黑素小体以细胞吞噬作用的方式从黑素细胞至角质细胞的转移。据信增强对PAR2活化的抑制将通过减少或限制更少的黑素存在于角质细胞中而表现出来。

本文所公开的量纲和值不旨在被理解为严格地限于所述的精确值。相反，除非另外指明，每个这样的量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开的量纲“40mm”旨在表示“约40mm”。

除非明确地不包括在内或换句话讲有所限制，本文所引用的每篇文献，包括任何交叉引用的或相关的专利或专利申请，均特此全文以引用方式并入本文。对任何文献的引用均不是承认其为本文公开的或受权利要求书保护的任何发明的现有技术、或承认其独立地或以与任何其它一个或多个参考文献的任何组合的方式传授、提出建议或公开任何此类发明。此外，当本发明中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文件中相同术语的任何含义或定义相矛盾时，应当服从在本发明中赋予该术语的含义或定义。

尽管已说明和描述了本发明的具体实施方案，但是对那些本领域的技术人员显而易见的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出许多其它的改变和变型。因此，随附权利要求书中旨在涵盖本发明范围内的所有这些改变和变型。

Claims

1.一种抑制PAR2活化角质细胞的方法，所述方法包括将包含维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物的组合物施用到皮肤表面一段足以抑制PAR2活化角质细胞的时间的步骤。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述皮肤表面是面部皮肤表面。

3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述组合物施用到所述皮肤表面上的色素沉着斑点。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中每天至少一次或两次将所述组合物施用到所述皮肤表面至少约4周或8周。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含皮肤病学可接受的载体。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含调色剂、防晒活性物质、抗炎剂活性物质、或它们的组合。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括优选通过成像装置来识别需要PAR2抑制的皮肤表面的步骤。

8.一种抑制PAR2活化角质细胞的方法，所述方法包括将包含维生素B3化合物、N-酰基氨基酸化合物和糖海带提取物的组合物施用到皮肤表面的步骤，其中至少每天施用所述组合物至少1小时的接触时间。

9.一种用于抑制PAR2活化角质细胞的组合物，包含：

a.约0.5%至约10%的烟酰胺，

b.约0.001至约10%的N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸，和

c.足以提高烟酰胺和N-十一碳烯酰-L-苯基丙氨酸的PAR2抑制的量的糖海带提取物。