CN102988643B - 一种中药脑血疏注射剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗中风的中药脑血疏注射剂及其制备,该注射剂由中药黄芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黄、川芎等制成。
Description
技术领域:
本发明涉及一种治疗中风的中药脑血疏注射剂及其制备,该注射剂由中药黄芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黄、川芎等制成。
背景技术:
脑血管病是当今世界危害人类健康的三大疾病之一,是中老年人的多发病,死亡率很高,在我国脑血管病占死因的第二位。国内报道脑出血死亡率为38-43%,幸存者约有50%-70%患者留有严重的后遗症,生活不能自理,不仅病人遭受极大痛苦,也给家庭和社会造成负担。
中药治疗脑血管病有其优势,如已经上市的中药脑血疏口服液,其配方和工艺描述在中国专利200810100200.9,“一种中药脑血疏制剂”中,该专利描述了一种由中药黄芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黄、川芎等制成中药制剂,经过实验发现,该制剂具有益气、活血、化瘀作用,主治中风急性期及恢复早期,属气虚血瘀证。
由于上述专利的内容主要体现口服制剂以及口服治疗,无法完全满足市场需要,为此开发注射剂成为一种需要。
但中药注射剂要求高,特别是在提取物的质量上要求稳定,安全,无刺激性,按照上述中国专利中的方法无法达到此要求,因此本发明在上述专利的基础上进行了多重改进,特别是在提取工艺上进行了大量的筛选,为此本发明提供一种用药方便、起效迅速、治疗中风效果理想的中药新药脑血疏注射剂。
发明内容:
本发明提供一种治疗中风的中药注射剂,该注射剂由药物活性物质和药物可接受的载体组成,其中所述药物活性物质是由以下重量配比的中药原料制成的:黄 芪 466份,水蛭 300份,石菖蒲 167份,牛膝 167份,牡丹皮 167份,大黄 66份,川芎 167份。
本发明实施方式如下:
本发明中药注射剂的制备方法:
将石菖蒲、牡丹皮加5-15倍量的水,加热回流1-3h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏0.5-1.5h。提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,分别用6~12倍蒸馏水煎煮1-3次,煎煮时间分别为1~3小时,合并煎液,静置12~48小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为45~70%,冷藏12~48小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加3~5%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置2~4小时,加乙醇使含醇量为70~80%,冷藏12~48小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为70~80%,调pH7.5-8.5,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,冷藏12~48小时,滤过,滤液备用;将黄芪、川芎用6~12倍蒸馏水煎煮1-3次,煎煮时间分别为1-3小时,合并煎液,静置12~48小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并石菖蒲、牡丹皮蒸馏后的水溶液加乙醇使含醇量为45~70%,冷藏12~48小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为70~80%,冷藏12~48小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,滤液备用;将水蛭用2~4倍蒸馏水煎煮1-3次,每次1-3h,合并煎液,静置12~48小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为45~70%,冷藏12~48小时,滤过,滤液浓缩至相对密度1.04-1.06(70-80℃),备用;
合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液经过除热源,加入等渗调节剂、注射用水等药用辅料,灭菌、超滤、精滤即得。
优选的制备方法如下:
将石菖蒲、牡丹皮加10倍量的水,加热回流2h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏1h。提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为65%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加4%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置3小时,加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,挥尽醇至无醇味,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为75%,调pH8.0,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g, 冷藏24小时,滤过,滤液备用;将黄芪、川芎分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,滤液备用;将水蛭用3倍蒸馏水煎煮2次,每次1h,合并煎液,静置,24小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液浓缩至相对密度1.04-1.06(75℃),备用;
合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液加注射用水稀释至约50%浓度,用氢氧化钠调pH7.5,加注射水至1000ml,滤过,滤液过0.2μm的微孔滤膜滤过,即得。
本发明的中药制剂优选的是小容量注射液、大容量注射液、粉针剂、冻干粉针剂、葡萄糖注射液、氯化钠注射液等,最优选的是小容量注射液。
本发明的上述提取方法是经过筛选获得的,按照现有技术的方法制备的提取物,在水中不稳定,放置久了会出现沉淀,另外对注射部位有刺激,本发明经过多种提取工艺的研究,最后发现本发明的提取方法效果最优,所得提取物在水溶液中稳定,安全,无刺激性,可以满足注射剂的需求。
以下通过实验数据说明本发明的有益效果。
实验一、药效实验
脑血疏注射剂是采用黄芪、水蛭等七味中药组成的复方制剂。该品具有益气活血,化瘀等功能,适用于中风的治疗。脑血疏注射剂药效及毒理学效果综述如下;
1、药效:
(1) 脑血疏注射剂对大鼠脑出血的影响
本实验采用已建立的大鼠脑出血模型。将本实验造成的尾状核出血模型分为四组:空白对照组,生理盐水10ml/kg(n=6);脑血疏注射剂大剂量组,生药20g/kg体重(n=6);脑血疏注射剂小剂量组,生药10g/kg体重(n=6);阳性对照药丹红注射液组,生药6g/kg(n=6)。各组均静脉给药连续观察10天后断头取脑,于血肿中心部冠状面切开,取血肿最大面前端脑片以四氮唑蓝(TTC)染色,显示脑血肿及坏死区,计算血肿面积占脑片面积的比值;后端脑片置于10%福尔 马林溶液固定,作常规病理切片,HE染色,观察组织学的改变。
结果表明:
a)血肿面积与全脑面积的比值明显小于未经治疗的对照组,其中,大剂量组和小剂量组与对照组比较均有显著性差异分别为P<0.005及P<0.05。
b)组织形态学改变:a.生理盐水对照组用药10天后坏死灶只有部分吸收,格子细胞数量较多,无囊性变;b.脑血疏注射剂大剂量组用药10天后病灶局限化,病灶中心囊性变(血肿吸收);c.其小剂量组,在囊的周围仍处于格子细胞吞噬状态,未见明显的囊性变;二者呈明显的量效关系;d.丹红(阳性对照药)组,病灶坏死区基本清除,但未形成明显的囊性变。以上结果表明,脑血疏注射剂具有加速血肿吸收,减轻血肿周围脑水肿及脑缺血的作用,从而有利于神经功能的恢复。
(2)脑血疏注射剂对犬脑血流量及脑血管阻力的影响
实验共分四组:对照组给予生理盐水,脑血流量及脑血管阻力均无明显变化;脑血疏注射剂小剂量组给药后15分钟,脑血流量明显增加,与对照组比较有明显差异(P<0.05)。60分钟由药前53.40±11.58ml/min增至61.35±13.41ml/min,与药前及对照组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。大剂量用药后10分钟脑血流量明显增加,由药前55.60±12.31ml/min增至69.71±15.37ml/min,与药前及对照组比较差异非常显著(均P<0.001)。
与此同时,脑血疏注射剂大小两个剂量组均有明显降低脑血管阻力的作用,且大剂量组作用明显强于小剂量组,呈明显的量效关系。小剂量组给药后20分钟,脑血管阻力由药前3.12±0.79mmHg/ml/min降至2.65±0.94mmHg/ml/min,与药前及对照组比较均有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。大剂量组药后15分钟,脑血管阻力由药前3.13±0.83mmHg/ml/min下降至2.46±0.72mmHg/ml/min,与药前及对照组比较差异非常显著(P<0.01,P<0.001)。丹红注射液亦有增加脑血流量及降低脑血管阻力的作用。脑血疏注射剂增加脑血流量和降低血管阻力的作用优于丹红组。
本实验结果表明,脑血疏注射剂可增加麻醉犬脑血流量,降低脑血管阻力;大剂量有轻度降低血压作用,从而对脑组织供血及供氧有利。
(3)脑血疏注射剂对大鼠实验性微循环的影响
用XBT-01型显微镜40倍观察实验动物大脑半球软脑膜的微循环状况,选 用固定视野观察如下:
a)血流速度:对照组与给药组给药前血流速度均未见差异(P>0.05)。给药后对照组未见改变;丹红组及脑血疏注射剂大剂量组可见血流速度明显改善与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。
b)血液流态:对照组与各给药组给药前未见明显差异(P>0.05),对照组给药后血细胞聚集未见改善;丹红及脑血疏大剂量组给药后血细胞聚集程度减轻,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。
实验结果表明,脑血疏注射剂具有改善动物脑微循环障碍的作用,可加快血流速度,降低血细胞聚集程度,从而改善脑组织的供血供氧而达到治疗的目的。
(4)脑血疏注射剂对大鼠实验性血栓形成的影响
实验共分四组:各实验动物每天以静脉给药,连续10天。采用电连续刺激使血管内膜损伤,激活血小板和凝血系统活性、同时损伤内皮细胞,使管腔内逐渐形成血栓。实验结果表明,脑血疏注射剂能明显延长血栓形成时间和延长血管堵塞时间,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。提示有抑制动脉血栓形成的作用,有利于脑血管病的治疗。
(5) 脑血疏注射剂对血小板表面活性和聚集的影响
本实验在日本SONY电视显微镜下,测园树型(%)、扩大型(%)血小板数,并计算扩大型的聚集个数。大鼠60只,随机分为四组,各组动物均以静脉给药10天。实验结果,与对照比较,脑血疏注射剂与丹红组有明显抑制血小板扩大型,降低血小板聚集数(P<0.01),并显示脑血疏注射剂大剂量组抑制血小板扩大型和抗血小板聚集作用强于丹红注射液。表明,本药具有改善脑微循环和抑制血小板聚集的作用,为防治脑血栓形成的有效药物之一。
(6) 脑血疏注射剂对纤维蛋白溶解的影响
大白鼠40只,随机分为四组,连续静脉给药10天,实验当日于末次给药2小时,分别取血测定优球蛋白溶解时间(ELT),比较组间差异,结果脑血疏注射剂组大鼠优球蛋白溶解时间低于对照组(P<0.01)有显著的差异。说明脑血疏注射剂具有纤维蛋白溶解的作用,亦显示脑血疏注射剂大鼠ELT明显快于脑血康组(P<0.05),说明本药较丹红注射液能更好地加速纤维蛋白溶解。纤维系统对保持血管内液体及限制血凝过程的发展具有十分重要的意义。在正常状态下,体内形成少量的纤维蛋白后,由于纤溶系统的作用,血栓或凝血块可以溶解液化, 这不仅有利于血流的畅通,且有利于损伤的组织再生。本实验证明脑血疏注射剂能加速纤维蛋白的溶解从而达到活血化瘀和加速脑血肿的吸收起到良好的促进作用。
(7) 脑血疏注射剂对出、凝血时间的影响
a)出血时间(BT)的测定,采用Duke法,脑血疏注射剂大剂量组给药后出血时间由47.1±2.2秒显著增加71.2±8.9秒,(P<0.05)。应用了一定剂量的脑血疏注射剂能延长出血时间,可以认为这种BT的变化与活血化瘀作用有相关性。
b)凝血时间(CT)的测定,采用玻片法,脑血疏注射剂小剂量组给药后的CT值都较给药前延长,有显著性差异(P<0.05),结果表明,一定剂量的脑血疏注射剂能延长凝血时间这种变化与活血化瘀有相关作用,有利于脑血管病的治疗。
具体实施方式:
以下通过实施例进一步说明本发明,但不作为对本发明的限制。
实施例1
配方:
黄 芪 466g 水蛭 300g 石菖蒲 167g 牛膝 167g
牡丹皮 167g 大黄 66g 川芎 167g
【制法】:
以上七味,将石菖蒲、牡丹皮加10倍量的水,加热回流2h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏1h。提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为65%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加4%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置3小时,加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,挥尽醇至无醇味,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为75%,调pH8.0,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,冷藏24小时,滤过,滤液 备用;将黄芪、川芎分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,滤液备用;将水蛭用3倍蒸馏水煎煮2次,每次1h,合并煎液,静置,24小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液浓缩至相对密度1.04-1.06(75℃),备用; 合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液加注射用水稀释至约50%浓度,用氢氧化钠调pH7.5,加注射水至1000ml,滤过,滤液过0.2μm的微孔滤膜滤过,灌封为100支,100℃30min灭菌,即得。
实施列2
配方:
黄芪233g 水蛭150g 石菖蒲84g
牛膝 84g 牡丹皮84g 大黄33g
川芎84g
【制法】:
以上七味,将石菖蒲、牡丹皮加10倍量的水,加热回流1h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏0.5h。提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,用12倍量蒸馏水煎煮1次,煎煮时间为3小时,合并煎液,静置36小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为60%,冷藏36小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加5%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置2小时,加乙醇使含醇量为70%,冷藏36小时,滤过,滤液回收乙醇,挥尽醇至无醇味,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为70%,调pH7.5,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,冷藏36小时,滤过,滤液备用;将黄芪、川芎用12倍量蒸馏水煎煮1次,煎煮时间为3小时,合并 煎液,静置36小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液加乙醇使含醇量为70%,冷藏36小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为70%,冷藏36小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,滤液备用;将水蛭用4倍蒸馏水煎煮1次,煎煮3h,合并煎液,静置,36小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为65%,冷藏36小时,滤过,滤液浓缩至相对密度1.04-1.06(75℃),备用; 合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液加注射用水稀释至约50%浓度,用氢氧化钠调pH7.5,加注射水至500ml,滤过,滤液过0.2μm的微孔滤膜滤过,115℃30min灭菌,即得。
实施列3
配方:
黄芪932g 水蛭600g 石菖蒲334g
牛膝334g 牡丹皮334g 大黄132g
川芎334g
【制法】:
以上七味,将石菖蒲、牡丹皮加5倍量的水,加热回流3h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏1.5h。提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,分别用6倍蒸馏水煎煮3次,煎煮时间分别为1小时,合并煎液,静置12小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为45%,冷藏12小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加3%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置4小时,加乙醇使含醇量为80%,冷藏12小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为80%,调pH8.5,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,冷藏12小时,滤过,滤液备用;将黄芪、川芎用6倍蒸馏水煎煮3次,煎煮时间分别为1小时,合并煎液,静置12小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并石菖蒲、牡丹皮蒸馏后的水溶液加乙醇使含醇量为45%,冷藏12小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为80%,冷藏12小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含 生药2g,滤液备用;将水蛭用2倍蒸馏水煎煮3次,每次1h,合并煎液,静置12小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为45%,冷藏12小时,滤过,滤液浓缩至相对密度1.04-1.06(70-80℃),备用;合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液加甘露醇5.5g,依地酸钙钠0.9g,用氢氧化钠调pH7.5,加注射水至2000ml,滤过,滤液过0.2μm的微孔滤膜滤过,冷冻干燥,分装1000支,即得。
Claims (2)
1.一种治疗中风的中药脑血疏注射剂,由以下原料加工制成:
黄 芪 466g 水蛭 300g 石菖蒲 167g 牛膝 167g
牡丹皮 167g 大黄 66g 川芎 167g
制备方法:
以上七味,将石菖蒲、牡丹皮加10倍量的水,加热回流2h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏1h,提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为65%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加4%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置3小时,加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,挥尽醇至无醇味,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为75%,调PH8.0,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,冷藏24小时,滤过,滤液备用;将黄芪、川芎分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,滤液备用;将水蛭用3倍蒸馏水煎煮2次,每次1h,合并煎液,静置,24小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液浓缩至75℃测定时相对密度为1.04-1.06,备用; 合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液加注射用水稀释至约50%浓度,用氢氧化钠调PH7.5,加注射水至1000ml,滤过,滤液过0.2μm的微孔滤膜滤过,灌封为100支,100℃30min灭菌,即得。
2.一种治疗中风的中药脑血疏注射剂的制备方法,由以下原料制成:
黄 芪 466g 水蛭 300g 石菖蒲 167g 牛膝 167g
牡丹皮 167g 大黄 66g 川芎 167g
制备方法:
以上七味,将石菖蒲、牡丹皮加10倍量的水,加热回流2h蒸馏,收集初蒸馏液后,重蒸馏1h,提取挥发油,蒸馏后的水溶液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,备用;将大黄、牛膝,分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液,加乙醇使含醇量为65%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加4%的明胶液,充分搅拌后至无鞣质反应,放置3小时,加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,挥尽醇至无醇味,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,加乙醇使含醇量为75%,调PH8.0,密闭放置一夜,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,冷藏24小时,滤过,滤液备用;将黄芪、川芎分别用8倍量、6倍量蒸馏水煎煮2次,煎煮时间分别为2小时,合并煎液,静置24小时后,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.00-1.15,合并浓缩液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,再加乙醇使含醇量为75%,冷藏24小时,滤过,滤液回收乙醇,用蒸馏水稀释至每1ml含生药2g,滤液备用;将水蛭用3倍蒸馏水煎煮2次,每次1h,合并煎液,静置,24小时后,滤过,滤液加乙醇使含醇量为60%,冷藏24小时,滤过,滤液浓缩至75℃测定时相对密度为1.04-1.06,备用; 合并上述备用液,加石菖蒲等挥发油混匀,滤过,滤液加注射用水稀释至约50%浓度,用氢氧化钠调PH7.5,加注射水至1000ml,滤过,滤液过0.2μm的微孔滤膜滤过,灌封为100支,100℃30min灭菌,即得。
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