CN102972319A

CN102972319A - 团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法及翘嘴鳊的培育方法

Info

Publication number: CN102972319A
Application number: CN2012105345466A
Authority: CN
Inventors: 刘少军; 肖军; 刘筠; 陶敏; 张纯; 康雪伟; 罗凯坤
Original assignee: Hunan Normal University
Current assignee: Hunan Yuelu Shanshui Breeding Technology Co.,Ltd.
Priority date: 2012-12-12
Filing date: 2012-12-12
Publication date: 2013-03-20
Anticipated expiration: 2032-12-12
Also published as: CN102972319B

Abstract

本发明公开了一种团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，以团头鲂为母本，翘嘴红鲌为父本，经远缘杂交后获得鲂鲌杂交F₁，对F₁进行饲养及检测，获得两性可育的F₁；然后以该F₁为对象进行培育，使两性可育的F₁进行自交，再经孵化、养殖，获得二倍体鲂鲌F₂；对F₂的倍性、育性进行检测，获得两性可育的F₂，至此获得了遗传稳定、两性可育的异源鲂鲌品系。本发明还公开了一种翘嘴鳊的培育方法，利用前述建立方法中获得的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁和二倍体鲂鲌F₂，与团头鲂进行回交育种，获得杂交鱼翘嘴鳊。通过该培育方法可以制备得到生长速度快、抗逆性强、肉质好、体形优美等特征的新型杂交鱼翘嘴鳊。

Description

团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法及翘嘴鳊的培育方法

技术领域

本发明涉及鱼类远缘杂交育种方法，尤其涉及通过远缘杂交技术建立两性可育异源品系的方法及利用可育异源品系制备新型杂交鱼的方法。

背景技术

远缘杂交可以使基因组从一个物种转移到另一个物种中，从而导致杂交后代的表现型和基因型都发生改变，如果远缘杂交能形成可育的异源品系，则为遗传育种提供了重要的种质资源库，这在遗传育种方面具有重要意义。远缘杂交可促进多倍体的发生并可能形成具有杂交优势的杂交后代，且已被证明是形成两性可育异源四倍体鱼的有效方法。可育异源四倍体鱼不仅可作为进化生物学基础研究上重要的模式动物，而且在生产应用上具有重要价值。利用四倍体鱼与二倍体鱼杂交可以实现不育三倍体鱼的大规模制备，不育三倍体生物可用于繁殖的能量转化到生长能量，形成生长快、个体大、肉肥味美、抗逆性强的经济鱼类，对控制养殖鱼类的过度繁殖和保护天然种质资源也具有重要意义。可育异源品系的建立可为异源多倍体育种奠定坚实的基础。如何利用和改进现有的生物学技术和方法来快速研制出新型可育异源鱼类品系，已成为本领域技术人员长期面临和需要解决的问题。

翘嘴鲌（Erythroculter ilishaeformis）属鲤形目，鲤科，鲌亚科，鲌属；俗称：大白鱼、翘壳、翘嘴巴等（英文名：Topmouth culter）；翘嘴鲌在我国各大水系均有分布，是长江流域优质经济鱼类，其个体大、生长快、肉质洁白、肉味质细嫩鲜美，素有“长江上等名鱼”和“太湖三白”之首的美誉，为鱼中上品，被列为我国淡水四大名鱼之一。野生翘嘴红鲌是以活鱼为主食的凶猛肉食性鱼类，苗期以浮游生物翘嘴红鲌及水生昆虫为主食，50克以上主要吞食小鱼小虾，也吞食少量幼嫩植物。翘嘴鲌雄性一般2年性成熟，雌性2～3年性成熟。

团头鲂（Megalobrama amblvcephala Yih）属鲤形目，鲤科，鲌亚科，鲂属；俗称：缩项鳊、武昌鱼，平胸鳊（英文名：Bluntsnout bream）。鲂是一种历史名贵鱼类，其肉质嫩滑，味道鲜美，是我国主要淡水养殖鱼类之一，原产于长江中游一带通江的湖泊，现已推广到全国各地养殖。团头鲂以草食性为主，同时也能摄食部分湖底植物碎屑和少量浮游动物，因此食性范围较广，团头鲂雌雄均为2年性成熟。

现有技术中，尚未见有利用远缘杂交技术培育两性可育异源鲂鲌品系及利用可育鲂鲌品系制备翘嘴鳊的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，该方法可以获得遗传稳定、两性可育的异源鲂鲌品系，还相应提供一种翘嘴鳊的培育方法，通过该培育方法以制备得到生长速度快、抗逆性强、肉质好、体形优美等特征的新型杂交鱼——翘嘴鳊。

为解决上述技术问题，本发明提出的方案为一种团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，包括以下步骤：以团头鲂为母本，翘嘴红鲌为父本，经远缘杂交后获得鲂鲌杂交F₁，对所述的鲂鲌杂交F₁进行饲养，通过对鲂鲌杂交F₁的倍性、育性进行检测，筛选获得两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁；然后以两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁为对象进行培育，当其达到性成熟年龄时，使两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁进行自交繁殖，再经孵化、养殖，获得二倍体鲂鲌F₂；对二倍体鲂鲌F₂的倍性、育性进行检测，筛选获得高成活率的两性可育且遗传稳定的二倍体鲂鲌F₂，完成了团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立。通过rDNA基因序列分析，对鲂鲌杂交F₁代及二倍体鲂鲌F₂代的遗传稳定性进行研究，确定了本发明方法获得的杂交品系的遗传稳定性，从而建立了鲂鲌杂交品系。所述遗传稳定性研究特别体现在rDNA ITS序列在杂交后代中的遗传稳定性。

上述的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法中，所述自交繁殖优选包括人工催产和人工干法授精步骤。

上述的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法中，所述人工催产的具体操作优选包括以下步骤：在繁殖季节，将达到性成熟年龄的可育的二倍体鲂鲌杂交F₁置于20℃～26℃的水温环境中，先对该二倍体鲂鲌杂交F₁的母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，再对该二倍体鲂鲌杂交F₁的父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产；注射完毕后按1∶2～3的数量比将该二倍体鲂鲌杂交F₁的母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让二倍体鲂鲌杂交F₁的母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

上述的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，优选的，所述母本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为400IU/kg～800IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；所述父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为母本亲鱼注射剂量的一半。

作为一个总的技术构思，本发明还提供一种翘嘴鳊的培育方法，包括以下步骤：利用上述建立方法中获得的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁和二倍体鲂鲌F₂，与团头鲂进行回交育种，获得杂交鱼翘嘴鳊。该翘嘴鳊具有生长速度快、抗逆性强、经济性状整齐、肉质鲜美、嘴巴上翘等特点。

上述的翘嘴鳊的培育方法中，所述回交育种优选包括人工催产和人工干法授精步骤。

上述的翘嘴鳊的培育方法中，所述人工催产的具体操作优选包括以下两种方式。

根据人工催产选择的父、母本亲鱼的不同，第一种方式优选包括以下步骤：在繁殖季节，选择腹部膨胀、轻压能挤出墨绿色卵粒的雌性团头鲂作为母本亲鱼，选择轻压腹部能挤出白色精液的雄性二倍体鲂鲌杂交F₁和雄性二倍体鲂鲌F₂作为父本亲鱼，将前述回交用的母本亲鱼和父本亲鱼置于20℃～26℃的水温环境中，先对母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，再对父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产；注射完毕后按1∶3～5的数量比将母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让前述母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。所述雌性团头鲂的黄体素释放激素类似物的注射剂量优选为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量优选为500IU/kg～1000IU/kg，地欧酮的注射剂量优选为1mg/kg；所述父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为前述雌性团头鲂注射剂量的一半。

根据人工催产选择的父、母本亲鱼的不同，第二种方式优选包括以下步骤：在繁殖季节，选择腹部膨胀、轻压能挤出墨绿色卵粒的雌性二倍体鲂鲌杂交F₁作为母本亲鱼，选择轻压腹部能挤出白色精液的雄性团头鲂，将前述回交用的母本亲鱼和父本亲鱼置于20℃～26℃的水温环境中，先对母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，再对父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产；注射完毕后按1∶2～3的数量比将母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让前述母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。所述雌性二倍体鲂鲌杂交F₁的黄体素释放激素类似物的注射剂量优选为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量优选为400IU/kg～800IU/kg，地欧酮的注射剂量优选为1mg/kg；所述父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为前述雌性二倍体鲂鲌杂交F₁注射剂量的一半。

在上述的技术方案中，所述倍性生物学特征的检测方法优选是指外周血细胞培养染色体倍性检测方法，所述育性生物学特征的检测方法优选是指组织石蜡切片技术。此外，流式细胞技术、扫描和透射电镜技术等生物学方法也可用于对鲂鲌群体倍性、育性等主要生物学特性进行检测。

与现有技术相比，本发明的优点在于：通过采用本发明的方法，不仅可以获得遗传稳定、两性可育的异源鲂鲌品系，同时还可培育得到具有生长速度快、抗逆性强等杂交优势的新型杂交鱼——翘嘴鳊。

更重要的是，本发明方法获得的异源鲂鲌品系在鱼类遗传育种和生物进化方面具有重要意义。在生产应用上，两性可育异源鲂鲌品系的建立，为鲂鲌遗传育种提供了优质的种质资源库，如本发明中翘嘴鳊的培育，即是利用两性可育的鲂鲌品系与团头鲂回交后制备得到，且获得的翘嘴鳊具有生长速度快，耐低氧等显著遗传优势，14月龄的翘嘴鳊平均可长到1.2～1.3kg，鲂鲌品系的建立也为后续多倍体鲂鲌遗传育种奠定了基础。通过进一步选育，有望从中选育获得四倍体鲂鲌品系，实现不育三倍体鲂鲌的大规模制备，为水产养殖提供理想的养殖品种。在生物进化上，杂交被认为是推动物种形成乃至物种大爆发的催化剂，但是一直缺乏直接、有效的证据，而本发明获得的稳定的鲂鲌杂交品系可能形成一个新的物种，从而为研究杂交与物种爆发的关系提供了理想的实验模型。

附图说明

图1为本发明实施例中团头鲂（♀）× 翘嘴红鲌（♂）杂交获得的鲂鲌杂交F₁在1年龄时的外形照片。

图2为本发明实施例中团头鲂（♀）× 翘嘴红鲌（♂）杂交获得的鲂鲌杂交F₁的染色体图（2n=48）。

图3为本发明实施例中团头鲂（♀）× 翘嘴红鲌（♂）杂交获得的鲂鲌杂交F₁在15月龄时的雌性卵巢石蜡切片图。

图4为本发明实施例中团头鲂（♀）× 翘嘴红鲌（♂）杂交获得的鲂鲌杂交F₁在15月龄时的雄性精巢石蜡切片图。

图5为本发明实施例中二倍体鲂鲌F₂在6月龄时的外形照片。

图6为本发明实施例中二倍体鲂鲌F₂的染色体图（2n=48）。

图7为本发明实施例中雌性二倍体鲂鲌F₂在15月龄时雌性卵巢石蜡切片图。

图8为本发明实施例中雄性二倍体鲂鲌F₂在15月龄时雄性精巢石蜡切片图。

图9为本发明实施例中二倍体鲂鲌F₁及鲂鲌F₂与其原始亲本团头鲂和翘嘴红鲌间rDNA ITS1序列比对图。

图10为本发明实施例中团头鲂（♀）× 鲂鲌杂交F₁及F₂（♂）回交制备的翘嘴鳊在4月龄时的外形照片。

图11为本发明实施例中团头鲂（♀）× 鲂鲌杂交F₁及F₂（♂）回交制备的翘嘴鳊的染色体图（2n=48）。

图12为本发明实施例中鲂鲌杂交F₁（♀）× 团头鲂（♂）回交制备的翘嘴鳊在14月龄时的外形照片。

图13为本发明实施例中鲂鲌杂交F₁（♀）× 团头鲂（♂）回交制备的翘嘴鳊的染色体图（2n=48）。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例对本发明作进一步描述。

实施例：

一种本发明的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，包括以下步骤：

1. 鲂鲌杂交F ₁ 的制备及其筛选。

以团头鲂为母本，翘嘴红鲌为父本，经远缘杂交后获得鲂鲌杂交F₁，对该鲂鲌杂交F₁进行饲养，通过对鲂鲌杂交F₁的倍性、育性进行检测，筛选获得两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁；鲂鲌杂交F₁的获得及筛选方法可参见CN101720698A号中国专利文献。

图1为本实施例获得鲂鲌杂交F₁代在1年龄时的外形照片，图2为本实施例获得的二倍体鲂鲌杂交F₁的染色体图。从2月龄开始，每月定时取材，每次取4～6条鱼，到其到达2年龄时停止取材，利用石蜡切片技术对其性腺发育情况进行检测。

石蜡切片具体步骤为：1）取实验鱼称重解剖，取性腺用Bouin氏液固定1～2天；2）洗涤：Bouin氏液固定的材料直接换70%酒精更换数次即可；3）脱水：采用70%、80%、95%、100%的酒精梯度脱水，其中，95%、100%酒精重复两次，以保证组织中水分脱除干净，各级酒精脱水的时间约45min～1h，然后入100％酒精与二甲苯的混合液（体积比1∶1）30min～45min，再入二甲苯15min～30min，直到组织透明为止；4）透蜡：透蜡以前做好准备工作，如准备蜡杯，事先熔蜡，放入温箱，保持温度55℃～60℃左右，注意勿使温度过高防止组织发脆；将已经透明的组织放入二甲苯石蜡混合液内约20min～30min，然后入纯蜡杯，每杯透蜡45min～1h，共2h～3h透蜡完毕；5）折纸盒：按组织块大小折成纸盒，盒上注明材料名称、代号等；6）包埋：准备好小镊子、酒精灯、冷水等；将透蜡后的组织块放入加热后的熔融状态的石蜡中（用小纸盒盛之），待其冷却凝固；7）修切和固着蜡块；8）切片和烘片：37℃烘片1～3天；9）染色：二甲苯20min，两次，100％酒精与二甲苯的混合液（体积比1∶1）5min，100%、95%、80%、70%的酒精各5min，蒸馏水5min，吸水纸吸干；苏木精染20min～40min，水冲洗干净；分色（1%HCl 3s～10s；蒸馏水3s～10s，1%氨水3s～10s），70%、80%、90%、95%（加0.5% 的伊红）、95%、100%、100%的酒精脱水各2min，100％酒精与二甲苯的混合液（体积比1∶1）5min，二甲苯5min，两次；10）树胶封片，镜检，拍照。

15月龄时，解剖实验鱼，可看见雌性鲂鲌F₁两侧卵巢均发育正常，卵巢呈长椭圆形，手触后有松软感，切片观察发现卵巢发育至III期卵巢，其中存在大量处于II和III时相的卵母细胞（参见图3）；雄性鲂鲌F₁的精巢两边对称，外表呈乳白色，发育状态良好，并且部分个体轻压腹部可以挤出白色精液，石蜡切片观察发现，其中精细小管内可观察到精原细胞、精子细胞和大量的成熟精子（参见图4）。

在1年龄以后检测的50个样本中，除去7条三倍体，所有的二倍体鲂鲌杂交F₁个体的性腺均表现为可育型，这些结果表明，鲂鲌杂交F₁两性发育正常，相比同类远缘杂交试验，本发明首先极大地提高团头鲂与翘嘴红鲌远缘杂交后代中可育后代的比例，具有雌雄催产率高的特点。

二倍体鲂鲌F ₂ 的制备。

以上述获得的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁为对象进行培育，当其达到性成熟年龄时，使两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁进行自交繁殖，自交繁殖包括鲂鲌杂交F₁的人工催产和人工干法授精步骤，自交繁殖后再经孵化、养殖，获得鲂鲌F₂。图5为鲂鲌F₂在6月龄时的外形照片。

鲂鲌杂交F₁的人工催产具体包括以下步骤：在繁殖季节（每年5月下旬至7月上旬间），将达到性成熟年龄的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁置于20℃～26℃的水温环境中，先对二倍体鲂鲌杂交F₁的母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为400IU/kg～800IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；母本注射完后4h～5h，再对上述获得的二倍体鲂鲌杂交F₁代的父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产，父本亲鱼中黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为前述母本亲鱼注射剂量的一半。注射完毕后按1∶2～3的数量比将二倍体鲂鲌杂交F₁代的母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让二倍体鲂鲌杂交F₁代母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

孵化期间，对二倍体鲂鲌杂交F₁杂交获得的鲂鲌F₂的受精率和孵化率进行统计，结果显示，其受精率和孵化率分别为91.6%和82.3%，可见，利用鲂鲌杂交F₁进行自交可获得庞大的鲂鲌F₂群体。相比同类远缘杂交F₂代的受精率和孵化率，本发明杂交方法的受精率和孵化率得到了显著的提高。

利用外周血细胞培养方法染色体制片法对本实施例制得的鲂鲌F₂进行倍性检测，外周血细胞培养的染色体倍性检测方法的操作步骤包括：1）在超净工作台中配制培养基，100ml培养基含以下成分：84ml RPMI-1640，15ml小牛血清，2支PHA，1ml 0.1%的肝素钠，以7.5% NaHCO₃（无菌）或1N HCl调pH至7.2～7.4；2）用注射器吸取少量灭菌肝素钠溶液，于用碘酒消毒后的实验鱼尾部静脉取血；3）按每10ml培养液中加入约0.2ml抗凝血的标准将抗凝血加入培养基中，于24℃ 5%二氧化碳浓度的培养箱中培养68h～72h，培养期间，定期轻摇匀，以使细胞充分接触培养基；4）终止培养前24h，在培养液中用1ml注射器滴加10μg/ml的秋水仙碱，使其终浓度为0.05μg/ml～0.07μg/ml；以上步骤1～4均需无菌操作；5）将培养物全部转入洁净的10 ml离心管中，以1000rpm离心5min，弃上清液；6）向离心管中加入低渗液9ml，混匀，低渗25min～30min；7）加入1ml固定液，轻轻混匀后1000rpm离心5min，弃上清液；8）加入4ml固定液，轻轻混匀，静置20min后1000rpm离心5min，弃上清液；9）重复步骤8）一次；10）视最后细胞数量多少加入适量固定液制成细胞悬液（一般为1ml～2ml）后，吸取细胞悬液自20cm～30cm高处滴片，轻吹散，空气中自然干燥；11）Giemsa染液染色20min～40min，细水流冲洗载玻片背面去除染液，气干后镜检、拍照。检测结果显示，被检测的鲂鲌F₂个体均为二倍体（参见图6）。

从上述获得的二倍体鲂鲌F₂的2月龄开始，每月定时取材，每次取4～6条二倍体鲂鲌F₂，利用石蜡切片技术对其性腺发育情况进行检测，石蜡切片方法如上所述，图7和图8分别为雌性和雄性二倍体鲂鲌F₂在15月龄时的性腺石蜡切片图。从图7中可以看出，雌性二倍体鲂鲌F₂的15月卵巢中存在大量处于II和III时相的卵母细胞，卵巢发育正常；雄性二倍体鲂鲌F₂在15月精细小管中发育正常，管内可以观察到大量精子细胞。另外，在1年龄时，部分雄性二倍体鲂鲌F₂的个体便可以挤出白色精液，相比于二倍体鲂鲌杂交F₁，其达到性成熟的年龄变短了，这与我们在异源四倍体鲫鲤中观察到的结果一致，表明杂交可能会导致杂交后代性成熟年龄提早。

另外，抽取二倍体鲂鲌杂交F₁、F₂及其亲本团头鲂和翘嘴红鲌血液，血液抗凝剂（ACD）防止血液凝固，利用UNIQ-10柱式基因组DNA抽提试剂盒（sangon）提取其基因组DNA，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增其rDNA内部转录间隔区（ITS）序列进行测序，并与其亲本进行比较，结果如图9所示。由图9可见，二倍体鲂鲌杂交F₁及F₂均共同遗传了团头鲂和翘嘴鲌特异的ITS1序列，这为本发明方法获得的鲂鲌品系的遗传稳定性提供了直接的证据。

一种本发明的翘嘴鳊的培育方法，包括以下步骤：将本实施例上述方法中获得的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁和二倍体鲂鲌F₂，与团头鲂进行回交育种，回交育种包括人工催产和人工干法授精步骤，回交育种后获得杂交鱼翘嘴鳊。

上述回交育种中的人工催产包括以下两种方式：

方式一：在繁殖季节，选择腹部膨胀、轻压能挤出墨绿色卵粒的雌性团头鲂作为母本亲鱼，选择轻压腹部能挤出白色精液的雄性二倍体鲂鲌杂交F₁和F₂作为父本亲鱼，将母、父本亲鱼置于20℃～26℃的水温环境中，先对前述母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，雌性团头鲂母本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为500IU/kg～1000IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；母本亲鱼注射完毕4h～5h后，再对前述父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产，父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为母本亲鱼注射剂量的一半；注射完毕后按1∶3～5的数量比将母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让前述母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

方式二：在繁殖季节，选择腹部膨胀、轻压能挤出墨绿色卵粒的雌性二倍体鲂鲌杂交F₁作为母本亲鱼，选择轻压腹部能挤出白色精液的雄性团头鲂作为父本亲鱼，将母、父本亲鱼置于20℃～26℃的水温环境中，先对前述母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，雌性二倍体鲂鲌杂交F₁的黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为400IU/kg～800IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；母本亲鱼注射完毕4h～5h后，再对前述父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产，父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为母本亲鱼注射剂量的一半；注射完毕后按1∶2～3的数量比将母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让前述母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

不论采用上述的哪种人工催产方式，当人工催产8h～12h后，选取产卵顺利的母本亲鱼与产精顺利的父本亲鱼进行人工干法授精，将受精卵均匀铺于玻璃培养皿中，24℃左右的流水孵化。待鱼苗全部孵出后，继续在玻璃培养皿中培育2天，再将鱼苗放入网箱中继续饲养，其中清水的高度从30cm高逐渐提升，在一周内升高到0.8m～1.2m，当鱼苗长到3cm～4cm长时，转入池塘中饲养；1～2天后泼洒豆浆，2～3次/天，力求细、匀。鱼苗长成后经检测获得二倍体杂交鱼翘嘴鳊。其中，采用上述方式一人工催产后获得的翘嘴鳊的外形照片和染色体图分别如图10、图11所示，采用上述方式二人工催产后获得的翘嘴鳊的外形照片和染色体图分别如图12、图13所示。

在采用上述方式一回交制备的翘嘴鳊达到4月龄时，以及采用上述方式二回交制备的翘嘴鳊达到14月龄时，随机选取20尾，测量其体重，计算其平均重量；同时对它们的外部形态特征进行检测，包括背鳍条、腹鳍条、臀鳍条、侧线鳞、侧线上鳞和侧线下鳞；检测结果如下表1所示。

表1：翘嘴鳊的外部形态特征检测结果对照

侧线鳞

侧线上鳞

侧线下鳞

背鳍条

腹鳍条

臀鳍条

团头鲂

49～52

9～10

9～12

Ⅲ＋8～9

8~10

Ⅲ+25～27

翘嘴鲌

80～92

16～20

6～7

Ⅲ＋7

8～9

Ⅲ+20～23

二倍体鲂鲌杂交F1

60～69

12～14

8～9

Ⅲ＋8

9～10

Ⅲ+21～24

翘嘴鳊*（鲂鲌×鲂）

60～66

12～14

10～12

Ⅲ＋8

9

Ⅲ+24～26

翘嘴鳊*（鲂×鲂鲌）

53～60

11～13

9～11

Ⅲ＋8

9

Ⅲ+25～27

*为不同回交组合制备的翘嘴鳊，括号中前者为母本，后者为父本；上表中大写的罗马数字代表硬棘条的数目，阿拉伯数字代表鳍条的数目。

从表1中可以看出，两种翘嘴鳊在侧线下鳞、臀鳍条上与团头鲂更接近，而在侧线鳞、侧线上鳞等性状上与原始亲本翘嘴红鲌更接近，这表明了它们的杂合性。两种翘嘴鳊都具有鳊鱼体背高的特点，同时也遗传了原始亲本翘嘴红鲌嘴部上翘的特点。

在生长速度上，14月龄时雌性鲂鲌杂交F₁代与雄性团头鲂回交制备的翘嘴鳊平均体重为2.52斤，最大个体2.6斤，最小个体2.2斤，体重较为均匀，表明其经济性状较为一致，同时，与亲本团头鲂相比，其生长速度要快20%左右，这表明翘嘴鳊具有较快的生长速度。

由上可见，本实施例方法获得的异源鲂鲌品系不仅整合了父、母本亲鱼的多项优良性状，表现出明显的杂交优势，还极大地提高了远缘杂交后代中可育个体的比例以及远缘杂交F₂代的受精率、孵化率。并且提供了一种生长速度快、抗逆性强的新型杂交鱼——翘嘴鳊的培育方法。鲂鲌品系的建立为后续异源四倍体鲂鲌育种奠定了基础，在鱼类遗传育种和生物进化研究方面具有重要的生物学意义。

Claims

1.一种团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，包括以下步骤：以团头鲂为母本，翘嘴红鲌为父本，经远缘杂交后获得鲂鲌杂交F₁，对所述的鲂鲌杂交F₁进行饲养，通过对鲂鲌杂交F₁的倍性、育性进行检测，筛选获得两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁；然后以两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁为对象进行培育，当其达到性成熟年龄时，使两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁进行自交繁殖，再经孵化、养殖，获得二倍体鲂鲌F₂；对二倍体鲂鲌F₂的倍性、育性进行检测，筛选获得两性可育且遗传稳定的二倍体鲂鲌F₂，完成了团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立。

2.根据权利要求1所述的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，其特征在于：所述自交繁殖包括人工催产和人工干法授精步骤。

3.根据权利要求2所述的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，其特征在于，所述人工催产的具体操作包括以下步骤：在繁殖季节，将达到性成熟年龄的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁置于20℃～26℃的水温环境中，先对该二倍体鲂鲌杂交F₁的母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，再对该二倍体鲂鲌杂交F₁的父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产；注射完毕后按1∶2～3的数量比将该二倍体鲂鲌杂交F₁的母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让二倍体鲂鲌杂交F₁的母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

4.根据权利要求3所述的团头鲂与翘嘴红鲌间杂交品系的建立方法，其特征在于，所述母本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为400IU/kg～800IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；所述父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为母本亲鱼注射剂量的一半。

5.一种翘嘴鳊的培育方法，包括以下步骤：利用权利要求1～4中任一项所述建立方法中获得的两性可育的二倍体鲂鲌杂交F₁和二倍体鲂鲌F₂，与团头鲂进行回交育种，获得杂交鱼翘嘴鳊。

6.根据权利要求5所述的翘嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述回交育种包括人工催产和人工干法授精步骤。

7.根据权利要求6所述的翘嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述人工催产的具体操作包括以下步骤：在繁殖季节，选择腹部膨胀、轻压能挤出墨绿色卵粒的雌性团头鲂作为母本亲鱼，选择轻压腹部能挤出白色精液的雄性二倍体鲂鲌杂交F₁和雄性二倍体鲂鲌F₂作为父本亲鱼，将前述回交用的母本亲鱼和父本亲鱼置于20℃～26℃的水温环境中，先对母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，再对父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产；注射完毕后按1∶3～5的数量比将母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让前述母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

8.根据权利要求7所述的翘嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述雌性团头鲂的黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为500IU/kg～1000IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；所述父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为前述雌性团头鲂注射剂量的一半。

9.根据权利要求6所述的翘嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述人工催产的具体操作包括以下步骤：在繁殖季节，选择腹部膨胀、轻压能挤出墨绿色卵粒的雌性二倍体鲂鲌杂交F₁作为母本亲鱼，选择轻压腹部能挤出白色精液的雄性团头鲂，将前述回交用的母本亲鱼和父本亲鱼置于20℃～26℃的水温环境中，先对母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物、绒毛膜促性腺激素及地欧酮的混合催产剂进行催产，再对父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺激素进行催产；注射完毕后按1∶2～3的数量比将母、父本亲鱼投放到产卵池中，先向产卵池中冲水，然后让前述母、父本亲鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精。

10.根据权利要求9所述的翘嘴鳊的培育方法，其特征在于，所述雌性二倍体鲂鲌杂交F₁的黄体素释放激素类似物的注射剂量为8μg/kg～10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射剂量为400IU/kg～800IU/kg，地欧酮的注射剂量为1mg/kg；所述父本亲鱼的黄体素释放激素类似物的注射剂量和绒毛膜促性腺激素的注射剂量均为前述雌性二倍体鲂鲌杂交F₁注射剂量的一半。