CN102928599A - 葡萄球菌肠毒素a化学发光酶联免疫分析检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，该试剂盒的内容物包括有：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体，辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准溶液，包被溶液，洗涤溶液，封闭溶液，化学发光溶液，以及化学发光酶联板，具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点，适合于疾病监控及快速定量检测食品及血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A。

Description

葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，涉及一种超抗原检测的试剂盒，特别是一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，该试剂盒利用了双抗体夹心化学发光酶联免疫试验来定量检测环境、食品和体液中如河水、牛奶、尿液和血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A含量。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌，该菌广泛存在于空气、水、尘埃及人和动物的排泄物中。据美国疾病预防控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌，居第二位，占细菌性食物中毒的33％。加拿大报告的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％。我国每年发生此类中毒事件也非常多，全国各地均有报告，是疾病预防控制部门重点监测的疾病之一。另外，金黄色葡萄球菌还能导致其他的疾病，在世界范围内，金黄色葡萄球菌是主要的医院内感染菌，是引起化脓性感染的重要病原菌。据国际最新文献报道，金黄色葡萄球菌肠毒素A在引起败血症和脓毒血症的毒素中所占比例最高，约占30%。金黄色葡萄球菌肠毒素是金黄色葡萄球菌产生的主要致病物质之一。依据金黄色葡萄球菌肠毒素的血清型不同，可分为A、B、C、D、E、F、G、H、I和J等10个毒素血清型。由于SE具有很强的热稳定性，被金黄色葡萄球菌污染的食物经过加热处理后，虽然细菌可被杀死，但其已产生的金黄色葡萄球菌肠毒素仍然具有致病能力。因此，在食品卫生检测中，金黄色葡萄球菌肠毒素的检出是确定食物被金黄色葡萄球菌污染的决定因素。在各型金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒中，75%以上是金黄色葡萄球菌肠毒素A引起，其次依次是金黄色葡萄球菌肠毒素D、金黄色葡萄球菌肠毒素C和金黄色葡萄球菌肠毒素B。因此，在食品以及败血症和脓毒血症的人体血清中对金黄色葡萄球菌肠毒素A进行检测成为监控金黄色葡萄球菌肠毒素A中毒的必要手段。

目前，检测金黄色葡萄球菌肠毒素A主要有免疫琼脂扩散法、反向间接血凝法、免疫芯片法和酶联免疫吸附法等。免疫琼脂扩散法和反向间接血凝法的缺点是费时、影响分析的干扰因素较多、特异性差。免疫芯片法存在价格昂贵，操作人员需要经过专业培训，影响分析的干扰因素较多等不足。酶联免疫吸附法有时检测敏感性不够。鉴于此，建立一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，快速、特异、灵敏的检测金黄色葡萄球菌肠毒素A具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种食品及血清中的金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，适合于快速检测定量食品及血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A，具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物包括有：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体，辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准溶液，包被溶液，洗涤溶液，封闭溶液，化学发光溶液，以及化学发光酶联板；其中：

所述化学发光酶联板各孔包被抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的包被抗体，其中所述包被抗体浓度优选2.5μg/mL。

所述化学发光酶联板优选乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶联免疫板。

所述金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准溶液分别是0.0025ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL。

所述检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的检测抗体为辣根过氧化物酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A小鼠单克隆抗体原液，酶标金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体工作浓度优选为1:4000。

所述包被溶液是1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L去离子水中的混合液，pH为9.5；

所述封闭溶液是每升溶液中含体积分数为0.05的新生牛血清、pH 7.40.15mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述洗涤溶液是含有体积分数0.0005吐温-20，pH 7.4、0.15mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述化学发光溶液是0.01M鲁米诺与pH8.8，0.001M对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液和体积比为3：10000H₂O₂的混合液。

在制备抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的基础上，经过配对抗体的筛选，建立化学发光酶联免疫分析方法，用来定量检测食品及血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A。

本发明采用的定量检测方法包括：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体的制备和配对抗体的筛选，以及化学发光酶联免疫分析方法的建立。

抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的制备和配对抗体的筛选方法是将金黄色葡萄球菌肠毒素A作为免疫原，采用常规杂交瘤技术得到一组抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体，将未标记的单克隆抗体作为包被抗体，将辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体作为检测抗体，采用阵列法两两配对筛选检测金黄色葡萄球菌肠毒素A特异性强、敏感性最高的配对抗体。

按照上述抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体溶液浓度和检测抗体溶液浓度制备的试剂盒可以达到很好的线性范围，检测金黄色葡萄球菌肠毒素A标准曲线范围可以达到0.0025ng/mL~1ng/mL，灵敏度达到0.0025ng/mL。

本发明的金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点。与传统的酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked immunosorbent assay，ELISA）比较，灵敏度可以提髙8-10倍。可在环境、食品和体液中金黄色葡萄球菌肠毒素A含量检测中发挥重要作用。

附图说明

图1为鲁米诺化学发光体系作用机理图。图中，（A）是鲁米诺在过氧化物酶、氢氧化钠和双氧水的作用下，发生氧化还原反应，由基态跃迁到激发态，激发态不稳定再回到基态时释放能量发射光的过程。（B）是玻璃纤维管将化学发光反应中产生的光收集起来，传递给光电倍增管（photomultiplier,PMT），PMT将光信号转化为模拟信号，经甄别电路转化成数字信号传递给计算机分析系统的过程。

图2为球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒的标准曲线。图中，金黄色葡萄球菌肠毒素A系列稀释浓度为0ng/mL、0.0025ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.2ng/mL和1ng/ml时，获得线性回归方程为Y=15750X+10.058（其中Y为相对发光单位，X代表金黄色葡萄球菌肠毒素A浓度）。R2=0.9988，表明线性关系良好。

以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。

具体实施方式

本发明的原理是将抗原-抗体反应的高度特异性与酶催化的高度灵敏性结合起来，利用酶催化底物的化学发光反应检测产物浓度。

申请人在制备抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的基础上，经过双抗体夹心酶联免疫吸附试验配对抗体的筛选，建立的化学发光酶联免疫分析方法，制备了一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，来定量检测环境、食品和体液中如河水、牛奶、尿液和血液中的金黄色葡萄球菌肠毒素A含量。

金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒的内容物包括：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体，辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准溶液，包被溶液，洗涤溶液，封闭溶液，化学发光溶液，以及化学发光酶联板。

上述试剂盒中涉及的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准溶液，辣根过氧化物酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体溶液，化学发光溶液和洗涤液及其配方对检测的灵敏度影响很大。其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品溶液：金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品溶液为以常规方法配制浓度分别为0.0025ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.2ng/mL和1ng/mL的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品溶液。

2、辣根过氧化物酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液为辣根过氧化物酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体原液，使用时用封闭溶液配制成1：4000的工作浓度。

3、抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体溶液：抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体用包被溶液稀释成1：1000的工作浓度，即2.5μg/ml。

4、化学发光溶液：0.01M鲁米诺与pH8.8，0.001M对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液和体积比为3：10000H₂O₂的混合液。

5、封闭溶液：是每升溶液中含体积分数为0.05的新生牛血清pH 7.40.15mol/L的磷酸盐缓冲液。

6、洗涤溶液：指含有体积分数0.0005吐温-20的pH 7.4 0.15mol/L的磷酸盐缓冲液。

7、包被溶液：1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L去离子水的混合液，pH为9.5。

其中，化学发光酶联板的包被是：将抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体置于设定的包被溶液中，加入到化学发光酶联板，以设定的浓度在4℃中包被过夜。

化学发光酶联板所包被的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体在碱性环境下可以很好的结合在检测板塑料表面上，可以经受多次洗涤，采用的包被抗体浓度为2.5μg/mL。

包被好的化学发光酶联板用封闭溶液封闭。

抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体溶液和检测抗体溶液的制备：

抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体溶液和检测抗体溶液的浓度是决定化学发光酶联免疫分析试剂盒测定金黄色葡萄球菌肠毒素A范围及灵敏度的重要因素。

抗金黄色葡萄球菌肠毒素A包被抗体溶液可以用包被溶液稀释成1：1000的工作浓度。

抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液优选用封闭液配制的浓度为1：4000。

抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的制备方法是：将纯化的金黄色葡萄球菌产生的金黄色葡萄球菌肠毒素A作为免疫原，采用常规杂交瘤技术得到一组抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体。

配对抗体的筛选方法是：将得到的一组单克隆抗体逐一常规标记辣根过氧化物酶，分别将未标记的单克隆抗体作为包被抗体，将辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体作为检测抗体，采用阵列法两两配对挑选最佳的配对抗体，建立双抗体夹心化学发光酶免疫分析的方法。最佳的配对抗体的挑选方法是：选择敏感性最高，即检测相同浓度的金黄色葡萄球菌肠毒素A的光吸收值最高，且特异性高，即检测无关蛋白的光吸收值最低，（即非特异本底最低）的配对抗体。

化学发光酶联免疫分析试验试验的方法是，在化学发光酶免疫板96孔中，加入2.5μg/mL包被抗体，4℃孵育过夜后用含5%新生牛血清的封闭液封闭，洗涤后加入经系列稀释的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品，孵育及洗涤后加入检测抗体，再次孵育及洗涤后加入鲁米诺、对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液和H₂O₂的混合液，用化学发光免疫分析仪测定每孔的发光强度，以金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品的光吸收值为纵坐标，相应标准品浓度为横坐标，作标准曲线，根据待测标本的光吸收值，经曲线拟合或换算，得出检测样本中金黄色葡萄球菌肠毒素A的浓度。

以下是发明人给出的实施例：

实施例1：金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的制备与包被抗体和检测抗体配对的筛选

（1）抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体的制备：纯化的天然金黄色葡萄球菌肠毒素A抗原标准品由军事医学科学院微生物流行病研究所提供。采用8周龄BALB/c小鼠作为免疫动物，以金黄色葡萄球菌肠毒素A为免疫原，首次免疫剂量为50μg/mL，将免疫原溶于生理盐水和等体积福氏完全佐剂制成乳化剂，皮下多点注射。间隔3周后进行第二次免疫，剂量和途径同第一次免疫，佐剂为福氏不完全佐剂。2~3周后进行第三次免疫，剂量同上，不加佐剂，腹腔免疫，腹腔注射7~10天后尾静脉采血测其效价，如小鼠血清效价达到要求加强免疫一次，剂量同上，不加佐剂。加强免疫3天后取脾制备成单个细胞悬液，采用常规杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选及克隆化，共得到33株抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体，分别命名为FMU-SEA1～FMU-SEA33。

（2）用于双抗体夹心ELISA单克隆抗体的配对筛选：将得到的一组抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体，逐一常规标记辣根过氧化物酶，分别将该组中未标记的单克隆抗体作为包被抗体，用包被溶液稀释至2.5μg/mL，将辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体作为检测抗体，采用双抗体夹心ELISA两两配对方阵法确定最佳抗体配对。最佳配对抗体的挑选方法是：选择敏感性最高，即检测相同浓度的金黄色葡萄球菌肠毒素A的光吸收值最高，且特异性强（即检测无检测抗原或无关抗原的光吸收值最低，也即非特异本底最低）的配对抗体。具体步骤为：

A．96孔酶联板分别包被33株金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体，4℃孵育过夜。

B．洗涤液充分洗板3次，加入用封闭溶液稀释的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品，浓度为0.01ng/mL，只加封闭溶液的孔设为空白对照孔，37℃孵育1h。

C．洗涤液充分洗板3次，按照方阵法排列分别加入33株辣根过氧化物酶标记的检测抗体，100μl/孔，形成33×33方阵，37℃孵育1h。

D．洗涤液充分洗板后，加入2，2’-连氮基-双（3-乙基苯并噻吡咯啉-磺酸）底物显色液，100μl/孔，37℃孵育15min，用酶标仪检测405nm下的吸光度（OD）值。

经过抗体的配对筛选后，将FMU-SEA2单克隆抗体作为包被抗体，FMU-SEA33单克隆抗体作为抗体。

实施例2：化学发光酶联免疫方法的建立

（1）最佳包被抗体浓度的选择：包被抗体按1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL的系列稀释度包被化学发光酶联板，100μL/孔，4℃孵育过夜，用洗涤液洗板3次；250μL/孔封闭溶液封闭，室温放置1小时，洗板3次；加入0.01ng/mL的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准抗原，100μL/孔，同时每种包被抗体浓度均做空白对照孔，37℃孵育1小时，洗板3次；分别加入1：4000稀释的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体，37℃孵育1小时，洗板5次；加入100μL/孔的化学发光液，测定发光值。根据测定的不同包被抗体浓度与相应空白孔的发光值比值的大小筛选出最佳包被抗体的浓度为2.5μg/mL。

（2）检测抗体浓度的确定：包被抗体按2.5μg/mL浓度包被化学发光酶标板，100μL/孔，4℃孵育过夜，用洗涤溶液洗板3次；250μL/孔封闭溶液封闭，室温放置1小时，洗板3次；加入0.01ng/mL的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品，100μL/孔，37℃孵育1小时，洗板3次，每次拍干；分别加入倍比稀释的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A酶标抗体1:500-1:64000于各反应孔中，100μL/孔，同时每种酶标抗体浓度均做空白对照孔，37℃孵育1小时，洗涤。加入100μL/孔的化学发光液，测定发光值。根据测定的不同酶标抗体浓度与相应空白孔的发光值比值的大小筛选出最佳酶标抗体的浓度为1:4000。

（3）检测下限的确定：

根据对包被抗体及检测抗体最佳浓度的筛选，申请人选择并确定包被抗体浓度为2.5μg/mL，抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体浓度为1：4000，确定化学发光酶联免疫检测方法的检测下限：

A．包被：用0.05M pH9.5碳酸盐包被溶液将包被抗体配成2.5μg/mL的溶液，化学发光酶联板每孔中加100μL，4℃过夜。次日弃去孔内溶液，用洗涤液洗3次，300μL/孔，每次5分钟，拍干。（此步骤简称洗涤，下同）。

B．封闭：用封闭溶液封闭上述已包被的化学发光酶联板，250μL/孔，室温孵育1小时，洗涤。

C．加样：加入倍比稀释的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品于上述已封闭的化学发光酶联板中，100μL/孔，37℃孵育1小时，洗涤。

D．加检测抗体：分别加入1:4000稀释的酶标检测抗体于化学发光酶联板中，100μL/孔，37℃孵育1小时，洗涤。

E．发光：化学发光酶联板中加入发光溶液100μL/孔，反应5min后用酶标仪检测发光值。

F．检测：Tecan酶标仪读取发光值（相对发光单位，RLU）。计算信号与噪声的比值，即信噪比（S/N）。

实施例3：检测金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒在不同基质中的应用

该实施例用来评价本发明的萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒在不同基质中检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的准确性和实用性。

将金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品分别用环境基质河水、食品基质牛奶、体液基质人血清或人尿液稀释成不同浓度，用化学发光酶免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A含量，计算所测量浓度与实际加入浓度的比值，即回收率。

（1）用包被抗体包被化学发光酶联板：用包被溶液将包被抗体稀释成2.5μg/mL加入化学发光酶联板，100μL/孔，4℃过夜，弃掉包被液，每孔加入250μL洗涤液，洗涤3次，加入封闭液250μL/孔，37℃孵育1h，弃掉孔内液体，洗涤液洗涤3次。

（2）样品预处理

A．河水：将河水样品在4℃、10000转/分钟条件下离心15分钟，弃去沉淀。

B．牛奶：将购买的纯牛奶样品在4℃、10000转/分钟条件下离心15分钟，去掉脂肪层。

C．尿样；将收集的尿液样品在4℃、10000转/分钟条件下离心15分钟，去掉沉淀。

D．血清：将收集的血液样品在4℃静置过夜，3000转/分钟，离心15分钟，取血清。

E．分别用上述液体将金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品稀释成高（0.2ng/ml）、中（0.01ng/ml）、低（0.005ng/ml）3个浓度，分别掺入到相应基质中，在最佳包被抗体和检测抗体优化条件下，用化学发光酶联免疫分析法测定10次回收率，计算平均回收率。回收率计算方法为：

回收率＝（测定浓度/实际浓度）×100％。

（3）检测步骤

A．加样：向包被好的的化学发光酶联板中加金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品溶液或样品溶液，100μL/孔，37℃孵育1小时。

B．洗涤：弃掉孔中液体，每孔加入洗涤溶液250μL，洗涤3次。

C．加检测抗体：加入1:4000稀释的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，100μL/孔，37℃孵育1小时。

D．洗涤：弃掉孔中液体，每孔加入洗涤溶液250μL，洗涤3次。

E．加发光溶液：加入发光溶液，100μL/孔。

F．检测：用Tecan酶标仪测定每孔的发光强度。

（4）结果判断

用所获得的标准品发光值作出工作曲线和方程式，根据样品的发光值计算出基质中的金黄色葡萄球菌肠毒素A浓度，依据公式计算回收率。

结果见下表：

实施例4：金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒精密度和准确度试验

取0.005ng/mL、0.01ng/mL和0.2ng/mL的金黄色葡萄球菌肠毒素A标准品，加入人尿中，用化学发光酶联免疫试剂盒检测金黄色葡萄球菌肠毒素A回收率。每个浓度的批间变异系数以10天分别检测得到的10个重复数据进行计算；批内变异系数以同一天检测的10个重复样品数据计算。

根据制定的标准曲线（图2）的线性方程计算回收率。结果见下表：

从上述测定结果看，本试剂盒变异系数低于10.47%，回收率在85%~102%之间，表明本试剂盒有很好的精密度和准确度。

Claims (3)

1.一种金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的内容物包括：

1）化学发光酶联板，该化学发光酶联板的各孔包被有抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体；

2）辣根过氧化酶标记的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液，是由辣根过氧化酶标记的小鼠抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体，该金黄色葡萄球菌肠毒素A检测抗体溶液的工作浓度为1：4000；

3）金黄色葡萄球菌肠毒素A系列标准品溶液，浓度分别为0.0025ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.2ng/mL和1ng/mL；

4）包被溶液、封闭溶液、洗涤溶液和化学发光溶液，其中：

所述包被溶液是1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L去离子水中的混合液，pH为9.5；

所述封闭溶液是每升溶液中含体积分数为0.05的新生牛血清、pH 7.40.15mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述洗涤溶液是含有体积分数0.0005吐温-20，pH 7.4、0.15mol/L的磷酸盐缓冲液；

所述化学发光溶液是0.01M鲁米诺与pH8.8，0.001M对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液和体积比为3：10000H₂O₂的混合液。

2.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，其特征在于：所述化学发光酶联板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板。

3.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A化学发光酶联免疫分析检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光酶联板的各孔包被的抗金黄色葡萄球菌肠毒素A的单克隆抗体的浓度为2.5μg/mL。

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