CN102919514B - 一种无抗益生活性饲料蛋白肽的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种无抗益生活性饲料蛋白肽的制备方法，以价格低廉的油料饼粕为原料，经过微生物发酵转变成无抗益生活性饲料蛋白肽，所用发酵菌为复合菌群，包括抗营养因子降解菌群、动物益生菌群，生物活性肽生产菌群。利用该发明所得产品为一种饲料蛋白，其具有三大特点：1无抗，不含抗营养因子；2益生，富含动物益生菌；3活性，富含生物活性肽。该饲料蛋白用于动物饲养具有易吸收、生物效价高和对动物的免疫调节、防病抗病等作用。

Description

一种无抗益生活性饲料蛋白肽的制备方法

技术领域

本发明涉及生物发酵技术领域，具体而言涉及一种饲料蛋白肽的制备方法。

技术背景

自上世纪50年代开始，在动物日粮中添加抗生素显著促进了动物生产，并对集约化畜牧业的发展做出了重大贡献。然而随着时间的推移，饲料中添加抗生素的危害日益显现，并受到社会的广泛关注。2004年，WTO、联合国粮农组织(FAO)和世界动物卫生组织(OIE)联合召开专题讨论会，讨论了非人用抗生素的使用和抗生素的耐药性问题。欧盟自2006年1月起全面禁止在畜禽饲料中添加抗生素。在生猪等饲养中不得添加抗生素目前已经是国际公认的食品安全标准。人们开始纷纷寻求其它的替代品和替代技术，以保证畜牧业生产的效率与效益不受影响。为解决上述问题，本发明提出一种新型饲料蛋白——无抗益生活性饲料蛋白肽的生产工艺。

本发明的技术特点在于包含三类菌群，

1是抗营养因子降解菌群，在油料饼粕中含有大量抗营养因子，如豆粕中的胰蛋白酶抑制剂，菜籽粕中的硫代葡萄糖苷，这些抗营养因子的存在会严重影响到动物对饲料蛋白的消化利用。本发明引入相应的降解菌，对其进行降解，达到无抗目的。

2是动物益生菌菌群。动物益生菌是一种生态健康型饲料添加剂，因不添加抗生素，不会造成药物残留，所以被人们普遍认为是有前途的抗生素的替代品，是动物的绿色饲料添加剂，受到国内外学者的广泛研究。本发明引入相应的动物益生菌，调节动物肠道菌群平衡，提高动物免疫力，达到益生目的。

3 生物活性肽生产菌群。蛋白质被动物摄取后，经肠道多种蛋白水解酶的作用，不是仅以氨基酸的形式吸收，更多的是以小肽的形式被直接吸收。而且，二肽和三肽的吸收速度比同组成的氨基酸要快。其中，某些小肽不仅具有营养功能，而且具有多种生理功能，这是肽理论研究和实践应用中的重大突破。本发明引入相应的生物活性肽生产菌群，可将油料饼粕中粗蛋白降解成寡肽，达到活性目的。

   目前国内外对饲料的固体发酵都是一步发酵法，即在同一操作条件下进行，不能很好的满足各种菌群的生长要求。本发明针对不同菌种的生长特性，实施分时发酵法，即在不同的发酵阶段控制不同的发酵参数（温度，pH值，通气量），不仅保证动物益生菌的有效生长和存活，还保证活性肽生产菌能有效水解蛋白产生物活性肽，抗营养因子降解菌能充分降解原料中的抗营养因子。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无抗益生活性饲料蛋白肽的制备工艺，利用该发明，制备不含抗营养因子，富含动物益生菌或生物活性肽的饲料蛋白。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一  发酵菌的制备

1) 抗营养因子降解菌的制备，从原始出发菌种酵母菌属和霉菌属（见表1）中挑取一环菌体，分别接种到麦芽汁种子培养基和察氏种子培养基中，于25℃-30℃温度下，100-120rpm，摇床培养48-72小时后，停止培养，作为1号发酵液。

2）动物益生菌的制备，从原始出发菌种乳酸菌属（见表1）中挑取一环菌体，接种到乳酸菌属培养基中，于35℃-38℃温度下静止培养48-64小时，作为2号发酵液。

3）生物活性肽生产菌的制备，从原始出发菌种芽孢杆菌属（见表1）中挑取一环菌体，接种到牛肉膏蛋白胨种子培养基中，于30℃-37℃温度下，150-170rpm，摇床培养16-24小时后，停止培养，作为3号发酵液。

4）复合发酵菌种的制备，将1号、2号和3号种子液按体积比1∶2∶1比例混合均匀，作为复合发酵菌种液。

二 固态原料的制备

将豆粕或菜籽粕等原料粉碎，按料水比1：4~1：8加水混匀。

三 复合菌群分步发酵

1）第一次发酵：将复合发酵菌种液以5％~10%的接种量接种到固态原料中，混合均匀于。将搅拌好的料堆积在消好毒的场地上，料高20—40厘米，好氧发酵48~54小时。

2）第二次发酵：将混合物装入大塑料桶或塑料袋压实密闭，保证密封完全不透气。厌氧发酵经3-5天。

四 产品后处理

发酵结束后，于60℃下干燥，粉碎，包装即得产品。

表1 复合发酵菌群中的具体菌种

表1 复合发酵菌群中的具体菌种

具体实施例

1) 分别从斜面保藏的酵母菌属原始菌种酿酒酵母、白地霉、产脘假丝酵母、热带假丝酵母中挑取一环菌体，接种到0.5 L麦芽汁种子培养基，于28℃温度下，120rpm，摇床培养48小时后，使其活菌数量达到10⁶/ml以上，等体积混合四种菌株的种子培养液，得到2L 酵母复合种子液。

2）分别从斜面保藏的霉菌属原始菌种米曲霉、黑曲霉中挑取一环菌体，接种到1 L察氏种子培养基中，于28℃温度下，120rpm，摇床培养72小时后，停止培养，使其活菌数量达到10⁶/ml以上，等体积混合两种菌株的种子培养液，得到2L 霉菌复合种子液。

3）将2L 酵母复合种子液和2L 霉菌复合种子液混合均匀，得到4L抗营养因子降解菌复合发酵液（1号发酵液）。

4）分别从斜面保藏的乳酸菌属原始菌种植物乳杆菌、双歧乳杆菌、肠球菌、酪酸菌中挑取一环菌体，接种到2 L乳酸菌属培养基中，于37℃温度下静止培养48小时，使其活菌数量达到10⁷/ml 以上，等体积混合四种菌株的种子培养液，得到8L 乳酸菌复合种子液，作为动物益生菌复合发酵液（2号发酵液）。

5）分别从斜面保藏的芽孢杆菌属原始菌种枯草芽孢杆菌 、纳豆杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌中挑取一环菌体，接种到1 L牛肉膏蛋白胨种子培养基中，于37℃温度下，160rpm，摇床培养24小时后，使其活菌数量达到10⁷/ml以上，等体积混合四种菌株的种子培养液，得到4L 芽孢杆菌复合种子液，作为生物活性肽复合发酵液（3号发酵液）。

6）将4L体积的1号发酵液、8L体积的2号发酵液和4L体积的3号发酵液混合均匀，共得16L复合发酵菌种液。

7）将32公斤豆粕粉碎，按料水比1：4加如128公斤水，混匀，得160公斤发酵原料。

8）将16L复合发酵菌种液接种到160公斤固态发酵原料中，混合均匀。将搅拌好的料堆积在消好毒的场地上，料高30厘米，好氧发酵48小时。

9）好氧发酵结束后，将混合物装入大塑料桶中压实密闭，保证完全不透气。再厌氧发酵4天。

10）发酵结束后，取出物料，于60℃下干燥，粉碎，包装即得产品。

Claims (1)

1.一种无抗益生活性饲料蛋白肽的制备方法，其特征是以豆饼粕为主要原料，用复合微生物进行固体发酵所得，具体包括以下步骤：

1) 分别从斜面保藏的酵母菌属原始菌种酿酒酵母、白地霉、产脘假丝酵母、热带假丝酵母中挑取一环菌体，接种到0.5 L麦芽汁种子培养基，于28℃温度下，120rpm，摇床培养48小时后，使其活菌数量达到10⁶/ml 以上，等体积混合四种菌株的种子培养液，得到2L 酵母复合种子液；

2）分别从斜面保藏的霉菌属原始菌种米曲霉、黑曲霉中挑取一环菌体，接种到1 L察氏种子培养基中，于28℃温度下，120rpm，摇床培养72小时后，停止培养，使其活菌数量达到10⁶/ml 以上，等体积混合两种菌株的种子培养液，得到2L 霉菌复合种子液；

3）将2L 酵母复合种子液和2L 霉菌复合种子液混合均匀，得到4L抗营养因子降解菌复合发酵液也就是1号发酵液；

4）分别从斜面保藏的乳酸菌属原始菌种植物乳杆菌、双歧乳杆菌、肠球菌、酪酸菌中挑取一环菌体，接种到2 L乳酸菌属培养基中，于37℃温度下静止培养48小时，使其活菌数量达到10⁷/ml 以上，等体积混合四种菌株的种子培养液，得到8L 乳酸菌复合种子液，作为动物益生菌复合发酵液也就是2号发酵液；

5）分别从斜面保藏的芽孢杆菌属原始菌种枯草芽孢杆菌 、纳豆杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌中挑取一环菌体，接种到1 L牛肉膏蛋白胨种子培养基中，于37℃温度下，160rpm，摇床培养24小时后，使其活菌数量达到10⁷/ml 以上，等体积混合四种菌株的种子培养液，得到4L 芽孢杆菌复合种子液，作为生物活性肽复合发酵液也就是3号发酵液；

6）将4L体积的1号发酵液、8L体积的2号发酵液和4L体积的3号发酵液混合均匀，共得16L复合发酵菌种液；

7）将32公斤豆粕粉碎，按料水比1：4加如128公斤水，混匀，得160公斤发酵原料；

8）将16L复合发酵菌种液接种到160公斤固态发酵原料中，混合均匀；

将搅拌好的料堆积在消好毒的场地上，料高30厘米，好氧发酵48小时；

9）好氧发酵结束后，将混合物装入大塑料桶中压实密闭，保证完全不透气；

再厌氧发酵4天；

10）发酵结束后，取出物料，于60℃下干燥，粉碎，包装即得产品。