CN102599351B - 一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂及其制备工艺，克服了现有技术生产成本高，有益微生物活菌数少的问题，特征是由枯草芽孢杆菌和酿酒酵母采用液体发酵和低温干燥制成的活菌制剂与由里氏木霉和黑曲霉经过固体发酵和烘干制成的酶制剂复配制成；产品每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu/g，纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克；优点是，能够短期内提高禽畜的饲料利用率，改善和平衡禽畜肠道内消化菌群，降低饲养成本，提高料肉比和动物生产性能，且制备工艺简单，生产成本低，适合产业化生产。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵和饲料添加剂技术领域，特别涉及一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂及其制备工艺。
背景技术
随着微生物学和微生态学的发展和日趋完善，微生物饲料添加剂在饲料行业中的应用越来越广泛。微生物饲料添加剂是一种利用对宿主有益的活性微生物及其代谢产物和生长调节物质的制剂，具有无毒害、无残留和无污染的特点，对环境保护和食品安全具有重要意义。目前，国内外关于微生物饲料添加剂的研究开发主要集中于三类：一类是以枯草芽孢杆菌和酵母培养物为代表的活菌制剂，其含有调控动物消化道内微生物生长的活性物质和活菌等有效成分，能够有效改善动物消化效率；一类是以蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶为代表的酶制剂，其以高产酶能力的微生物作为培养菌种，通过发酵过程获得酶类物质，酶制剂能够在动物消化道内直接作用，促进食物在动物体内的消化和利用；一类是活菌和酶的复合饲料添加剂，其具有微生态调控和饲料养分利用促进多种作用。经检索在该领域的相关专利申请有：
（1）一种含有微生物及生物酶的饲料添加剂（申请号为200410026127.7），该发明的特点其是由有益菌组分、功能酶组分、多种矿物质微量元素组分和饲料载体组分组成， 其有益菌组分包括有芽孢杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、酵母菌以及光合菌；其功能酶组分有纤维素酶、木聚糖酶、β-葡萄糖酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶和植酸酶等；该发明含有的有益菌种类和功能酶种类较多，还需要另外加入铜、铁、锌、锰、镁、硒、钴和碘等8种矿物质微量元素组分，因而成本较高，实际上，作为一种含有微生物及生物酶的饲料添加剂，不需要另外加入多种矿物质微量元素组分，因为在后期饲料制备过程中会有多种矿物质微量元素的添加，完全可以满足饲料生产和养殖户的需求； 此外，该发明含有的双歧杆菌和乳酸菌属于厌氧菌，在含有微生物及生物酶的饲料添加剂的生产过程中，有很多限制因素会导致成本增加，如厌氧培养过程，而双歧杆菌和乳酸菌在实际饲喂中由于其生存条件严格，会导致添加剂的效果降低，从而影响饲喂的效果；上述含有微生物及生物酶的饲料添加剂是将有益菌组分、生物功能酶组分和矿物质微量元素组分混合，经初粉碎后加入饲料载体，采用固体发酵方法，再经烘干而成，但未对各种类菌种的菌数比例和制备工艺详细说明，也没有说明合适的菌群比例和优势菌群，无法充分发挥微生物饲料添加剂的效果，因此，上述含有微生物及生物酶的饲料添加剂，不仅成本高，且效果也不好。
（2）一种反刍动物专用双效微生物饲料添加剂及其制备（申请号为200410004551.1），该发明提供了含有嗜酸乳杆菌和酿酒酵母以及α－淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶等生物酶的复合微生物饲料添加剂；该发明是采用玉米为原料，经过粉碎、蒸煮、液化、糖化等步骤，制成玉米液化酶解液，作为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和酿酒酵母 (Saccharomyce cerevisiae)的发酵原料，分别发酵制备成嗜酸乳杆菌和酿酒酵母培养物的活菌制剂；采用玉米、麸皮和豆粕等原料作为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)和黑曲霉(Aspergillus niger)的发酵产酶培养基，枯草芽孢杆菌用液体发酵、米曲霉和黑曲霉用固体混合发酵，配伍制成复合酶制剂；将活菌制剂与复合酶制剂按合适比例复配制成双效添加剂产品。该发明有益菌所含酶的活性较小，且所包含的微生物种类中也含有属于厌氧菌的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus) ，同样，在含有微生物及生物酶的饲料添加剂的生产过程中，尤其是厌氧培养过程中会导致成本增加，该嗜酸乳杆菌在实际饲喂中也会由于其生存条件严格，导致添加剂的效果降低，从而影响饲喂的效果；此外，该发明采用嗜酸乳杆菌作为一种活菌制剂菌种 ，由于嗜酸乳杆菌繁殖较慢，所以其种子培养时间长达92～96小时，在活菌制剂干燥过程中采用乳清粉作为保护剂，成本较高；采用枯草芽孢杆菌作为酶制剂菌种，在制备过程中对发酵液进行喷雾干燥，不仅成本高，而且容易降低枯草芽孢杆菌活菌数，不足以满足动物体内对饲料消化吸收的需要，使饲料添加剂进入动物体内消化效果减弱，从而不能有效平衡动物消化道内的有益菌群，提高饲料消化利用率。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足之处，提供可以提高有益菌在动物消化道内竞争能力，有效平衡消化菌群，促进动物对饲料的消化能力的一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂及其制备工艺。
本发明采用的技术方案由有益菌组分和生物酶组分组成，所述有益菌组分含有枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、里氏木霉和黑曲霉，所述生物酶组分含有纤维素酶、α—淀粉酶和蛋白酶，所述含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂是由枯草芽孢杆菌和酿酒酵母活化后的液体种子采用液体发酵和40～50℃的低温干燥制备成的活菌制剂与由里氏木霉和黑曲霉活化后的液体种子经过固体发酵和烘干制备成的酶制剂按1:3～1:4的比例复配制成的；该产品每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu/g，纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克；
所述枯草芽孢杆菌和酿酒酵母活化后的液体种子是将枯草芽孢杆菌接种于成分为1%蛋白胨，0.4%牛肉膏，0.5%NaCl的种子培养基中， 250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养24小时；将酿酒酵母接种于成分为酿酒酵母的培养基中，250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养30小时培养制成；
所述里氏木霉和黑曲霉活化后的液体种子是将里氏木霉和黑曲霉分别接种于成分为0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4的培养基中, 250ml三角瓶装种子培养基50ml，取菌悬液1ml接入培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时培养培养制成；
所述活菌制剂是将枯草芽孢杆菌和酿酒酵母液体种子分别接种于玉米与豆粕酶解糖化液中，10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20小时，发酵液分别经过40～50℃的低温干燥，制成活菌数＞2×109cfu/g的枯草芽孢杆菌和活菌数＞1.8×109cfu/g的酿酒酵母，2者按1:1的比例复配成活菌数超过8×109cfu/g的活菌制剂；
所述酶制剂的制备是是将里氏木霉和黑曲霉的液体种子喷洒于含有30%玉米，69.6%豆粕和0.4%KH2PO4的固体培养基中，将发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度约为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，可适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得由里氏木霉和黑曲霉发酵而成的酶制剂。
所述一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂的制备工艺采用如下步骤：
（1）活菌制剂制备
（1.1）菌种准备
选用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）作为活菌制剂菌种；
（1.2）发酵培养基制备
选用粉碎后的玉米与豆粕，玉米与豆粕的比例为10:1，加入40～50℃的温水拌料，料水比例为1:2.5～1:3.5，拌匀后加热到75～85℃，时间为40～50分钟；在130～135℃，0.10～0.15MPa条件下蒸煮80～90分钟，冷却到60～70℃，加入高温液化酶和糖化酶处理3～4小时，得到葡萄糖值（DE值）为65%以上、糖度在12～14°BX的玉米与豆粕酶解糖化液，调节pH值为4～5，再加热至90℃保持20～30分钟，作为发酵培养基待用；
（1.3）发酵液制备
（1.3.1）枯草芽孢杆菌发酵液制备
（A）培养基
种子培养基：成分为1%蛋白胨，0.4%牛肉膏，0.5%NaCl，添加琼脂浓度为1.5%，调节pH值至7.0，120℃,灭菌30min；
发酵培养基：玉米与豆粕酶解糖化液，121℃,灭菌40min；
（B）培养条件
一级种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入种子培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养24小时，
二级种子培养：10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20小时，制成枯草芽孢杆菌液体种子；
发酵罐培养：100L全自动搅拌发酵罐装发酵培养基60L，由种子罐流加接种，接种量10%，28～32℃，培养24～26小时，制成枯草芽孢杆菌发酵液。
（1.3.2）酿酒酵母发酵液制备
（A）培养基
种子培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖，pH4～4.5，120℃,灭菌30min；
发酵培养基：玉米与豆粕酶解糖化液，121℃,灭菌40min；
（B）培养条件
一级种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入种子培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养20～30小时；
二级种子培养：10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20～24小时，制成酿酒酵母液体种子；
发酵罐培养：100L全自动搅拌发酵罐装发酵培养基60L，由种子罐流加接种，接种量10%，28～32℃，培养30～36小时，制成酿酒酵母发酵液；
（1.4）干燥加工
枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液中加入1%低聚糖作为保护剂后，分别经过40～50℃低温干燥，制成：
（1.4.1）枯草芽孢杆菌活菌制剂，活菌数＞2×109cfu/g和
（1.4.2）酿酒酵母活菌制剂，活菌数＞1.8×109cfu/g，
（1.5） 枯草芽孢杆菌和酿酒酵母复合活菌制剂复配调制
将枯草芽孢杆菌活菌制剂和酿酒酵母活菌制剂2者按1:1的比例复配调制成活菌数超过8×109cfu/g的枯草芽孢杆菌和酿酒酵母复合活菌制剂；
（2）酶制剂制备
（2.1）菌种准备
选用里氏木霉（Trichodermareesei）和黑曲霉（Aspergillus niger）
作为酶制剂菌种；
（2.2）复合酶制剂制备
（2.2.1）里氏木霉复合酶制剂制备
（A）培养基
种子培养基：0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4,添加琼脂浓度为1.6%，60℃时添加浓度为100mg/L林可霉素，调节pH值至7.0，120℃,灭菌30min；
固体发酵培养基：玉米30%，豆粕69.6%，KH2PO4 0.4%，按料水比1:1加水拌匀，自然pH值，120℃,灭菌30min；
（B）培养条件
种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取里氏木霉菌悬液1ml接入种子培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时，制成里氏木霉液体种子；
固体发酵培养：取灭菌后的固体发酵培养基，在经过消毒处理的发酵车间内，降温至30～45℃,将培养后的里氏木霉液体种子用蒸馏水稀释混匀，均匀喷洒到固体发酵培养基上，将固体发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得里氏木霉复合酶制剂；
（2.2.2）黑曲霉复合酶制剂制备
（A）培养基
种子培养基：0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4,添加琼脂浓度为1.6%，60℃时添加浓度为100mg/L林可霉素，调节pH值至7.0，120℃,灭菌30min；
固体发酵培养基：玉米30%，豆粕69.6%， KH2PO4 0.4%，按料水比1:1加水拌匀，自然pH值，120℃,灭菌30min；
（B）培养条件
种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取黑曲霉菌悬液1ml接入种子培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时，制成黑曲霉液体种子；
固体发酵培养：取灭菌后的固体发酵培养基，在经过消毒处理的发酵车间内，降温至40～45℃,将培养后的黑曲霉液体种子用蒸馏水稀释混匀，均匀喷洒到固体发酵培养基上，将发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得黑曲霉复合酶制剂；
（2.3）复配复合酶制剂制备
将里氏木霉复合酶制剂和黑曲霉复合酶制剂按照1:1～1.5:1的比例，混合复配均匀，制成含纤维素酶、α—淀粉酶和蛋白酶活性的复配复合酶制剂；
（3）复合饲料添加剂复配调制
将活菌制剂与酶制剂按照1:3～1:4的配伍比例进行复配，充分混合均匀，制成复合饲料添加剂产品，产品每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu，纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克。
在活菌制剂制备的干燥加工步骤中，所述枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液中加入的低聚糖是海藻糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚甘露糖、低聚异麦芽糖或大豆低聚糖中的至少1种。
在活菌制剂制备的发酵液制备的发酵罐培养步骤中，可以将分别进行枯草芽孢杆菌和酿酒酵母发酵罐培养合并为将枯草芽孢杆菌和酿酒酵母混合发酵罐培养，即将枯草芽孢杆菌和酿酒酵母液体种子各按3%～5%比例共同接种到玉米与豆粕酶解糖化液中进行混合培养，10L自动种子发酵罐装种子发酵培养基5L，在28～32℃，180～200rpm（转/分钟）培养20小时。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
（1）本发明含有有益菌、生物酶和功能性物质低聚糖，配方中的有益菌和生物酶能够通过活菌分解和生物催化的作用，能够短期内提高禽畜的饲料利用率，促进动物消化道内氨基酸、维生素等营养物质的消化吸收，促进动物生长，提高动物生产性能，实际生产中使用本发明的产品后，能够提高仔猪和肉鸡的采食量和对粗饲料的消化利用率，对肉鸡可提高日增重最高达48.3%，提高蛋鸡产蛋量达6.31%，对仔猪提高日增重最高达24%。
（2）本发明不含有厌氧菌，不需要厌氧培养过程，所以生产条件要求不高，节省了相关的设备投入和生产环节，制备工艺简单，成本低，适合产业化生产；
（3）本发明采用枯草芽孢杆菌作为活菌制剂菌种，该菌种繁殖较快，可节约活菌制剂培养时间，提高生产效率；在活菌制剂干燥过程中采用低聚糖作为保护剂，进一步降低了生产成本，还可以明显减少活菌制剂制备过程的活菌损耗，可以满足动物体内对饲料消化吸收的需要，使饲料添加剂进入动物体内消化效果增强，从而能有效改善和平衡动物消化道内的有益菌群，降低饲养成本，提高料肉比和动物的生产性能。
附图说明
图1是本发明具体实施方式1的制备工艺流程图；
图2是本发明混合发酵罐培养工艺流程图。
具体实施方式
具体实施方式1
本发明所提出的一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂，由有益菌组分和生物酶组分组成，所述有益菌组分含有枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、里氏木霉和黑曲霉，所述生物酶组分含有纤维素酶、α—淀粉酶和蛋白酶，所述含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂是由枯草芽孢杆菌和酿酒酵母活化后的液体种子采用液体发酵和40～50℃的低温干燥制备成的活菌制剂与由里氏木霉和黑曲霉活化后的液体种子经过固体发酵和烘干制备成的酶制剂按1:3比例复配制成的；该产品每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu，最终纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克。
所述枯草芽孢杆菌和酿酒酵母活化后的液体种子是将枯草芽孢杆菌接种于成分为1%蛋白胨，0.4%牛肉膏，0.5%NaCl的种子培养基中，250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养24小时；将酿酒酵母接种于成分为酿酒酵母的培养基中，250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养30小时培养制成；
所述里氏木霉和黑曲霉活化后的液体种子是将里氏木霉和黑曲霉分别接种于成分为0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4的培养基中, 250ml三角瓶装种子培养基50ml，取菌悬液1ml接入培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时培养培养制成；
所述活菌制剂是将枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母液体种子分别接种于玉米与豆粕酶解糖化液中，10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20小时，发酵液分别经过40～50℃的低温干燥，制成活菌数＞2×109cfu/g的枯草芽孢杆菌和活菌数＞1.8×109cfu/g的酿酒酵母，2者按1:1的比例复配成活菌数超过8×109cfu/g的活菌制剂；
所述酶制剂的制备是将里氏木霉和黑曲霉的液体种子喷洒于含有30%玉米，69.6%豆粕和0.4%KH2PO4的固体培养基中，将发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度约为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，可适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得由里氏木霉和黑曲霉发酵而成的酶制剂。
本发明生产的产品主要技术指标：
每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu，
纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，
α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，
蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克，
大肠杆菌数：≤3个/100g，
沙门氏菌：不得检出，
PH值：3.0～5.0，
保质期：≥6个月。
使用时，将本发明所制得的产品，在饲料中按日粮的0.2%添加产品直接饲喂，能够短期内提高禽畜的饲料利用率，改善禽畜肠道内消化菌群，增强禽畜机体的免疫功能；并能够作为功能性成分添加到饲料中，可部分或完全替代抗生素及化学药品，降低禽畜治疗药费和饲养成本，提高料肉比和动物的生产性能。实际生产中使用本发明的产品，能够提高肉鸡日增重最高达48.36%，降低料肉比最高达32.15%，提高蛋鸡产蛋量达6.31%，明显增加经济效益，提高仔猪增重最高达24%。
具体实施方式2
所述一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂的制备工艺采用如下步骤：
1.活菌制剂制备
1.1.菌种准备
选用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）作为活菌制剂菌种；
1.2．发酵培养基制备
选用粉碎后的玉米与豆粕，玉米与豆粕的比例为10:1，加入40～50℃的温水拌料，料水比例为1:2.5～1:3.5，拌匀后加热到75～85℃，时间为40～50分钟；在130～135℃，0.10～0.15MPa条件下蒸煮80～90分钟，冷却到60～70℃，加入高温液化酶和糖化酶处理3～4小时，得到葡萄糖值（DE值）为65%以上、糖度在12～14°BX的玉米与豆粕酶解糖化液，调节pH值为4～5，再加热至90℃保持20～30分钟，作为发酵培养基待用；
1.3.发酵液制备
1.3.1.枯草芽孢杆菌发酵液制备
A.培养基
种子培养基：成分为1%蛋白胨，0.4%牛肉膏，0.5%NaCl，添加琼脂浓度为1.5%，调节pH值至7.0。120℃,灭菌30min。
发酵培养基：玉米与豆粕酶解糖化液，121℃,灭菌40min。
B.培养条件
一级种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养24小时，
二级种子培养：10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20小时，制成枯草芽孢杆菌液体种子；
发酵罐培养：100L全自动搅拌发酵罐装发酵培养基60L，由种子罐流加接种，接种量10%，28～32℃，培养24～30小时，制成枯草芽孢杆菌发酵液。
1.3.2.酿酒酵母发酵液制备
A培养基
种子培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖，pH4～4.5，120℃,灭菌30min。
发酵培养基：玉米与豆粕酶解糖化液，121℃,灭菌40min。
[0022 B.培养条件
一级种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养20～30小时。
二级种子培养：10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20～24小时，制成酿酒酵母液体种子；
发酵罐培养：100L全自动搅拌发酵罐装发酵培养基60L，由种子罐流加接种，接种量10%，28～32℃培养30～36小时，制成酿酒酵母发酵液。
1.4.干燥加工
枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液中加入1%低聚糖作为保护剂后，分别经过40～50℃低温干燥，制成：
（1.4.1）枯草芽孢杆菌活菌制剂，活菌数＞2×109cfu/g和
（1.4.2）酿酒酵母活菌制剂，活菌数＞1.8×109cfu/g，
所述低聚糖是海藻糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚甘露糖、低聚异麦芽糖或大豆低聚糖其中一种或两种。
1.5. 枯草芽孢杆菌和酿酒酵母复合活菌制剂复配调制
枯草芽孢杆菌活菌制剂和酿酒酵母活菌制剂2者按1:1的比例复配调制成活菌数超过8×109cfu/g的枯草芽孢杆菌和酿酒酵母复合活菌制剂。
2.酶制剂制备
2.1.菌种准备
选用里氏木霉（Trichodermareesei）和黑曲霉（Aspergillus niger）
作为酶制剂菌种；
2.2. 复合酶制剂制备
2.2.1.里氏木霉复合酶制剂制备
A培养基
种子培养基：0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4,添加琼脂浓度为1.6%，60℃时添加浓度为100mg/L林可霉素，调节pH值至7.0。120℃,灭菌30min。
固体发酵培养基：玉米30%，豆粕69.6%，KH2PO4 0.4%，按料水比1:1加水拌匀，自然pH值，120℃,灭菌30min。
B.培养条件
种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取里氏木霉菌悬液1ml接入培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时，制成里氏木霉液体种子。
固体发酵培养：取灭菌后的固体发酵培养基，在经过消毒处理的发酵车间内，降温至30～45℃,将培养后的里氏木霉液体种子用蒸馏水稀释混匀，均匀喷洒到固体发酵培养基上，将固体发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得里氏木霉复合酶制剂；
2.2.2.黑曲霉复合酶制剂制备
A培养基
种子培养基：0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4,添加琼脂浓度为1.6%，60℃时添加浓度为100mg/L林可霉素，调节pH值至7.0。120℃,灭菌30min。
固体发酵培养基：玉米30%，豆粕69.6%， KH2PO4 0.4%，按料水比1:1加水拌匀，自然pH值。120℃,灭菌30min。
B.培养条件
种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取黑曲霉菌悬液1ml接入培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时，制成黑曲霉液体种子；
固体发酵培养：取灭菌后的固体发酵培养基，在经过消毒处理的发酵车间内，降温至40～45℃,将培养后的黑曲霉液体种子用蒸馏水稀释混匀，均匀喷洒到固体发酵培养基上，将发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得黑曲霉复合酶制剂；
2.3.复配复合酶制剂制备
将里氏木霉复合酶制剂和黑曲霉复合酶制剂按照1:1～1.5:1的比例，混合复配均匀，制成含纤维素酶、α—淀粉酶和蛋白酶活性的复合酶制剂。
3.复合饲料添加剂复配调制
将活菌制剂与酶制剂按照1:3的配伍比例进行复配，充分混合均匀，制成复合饲料添加剂产品，产品每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu，纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克。
具体实施方式3
在活菌制剂制备的发酵液制备的发酵罐培养步骤中，可以将分别进行枯草芽孢杆菌和酿酒酵母发酵罐培养合并为将枯草芽孢杆菌和酿酒酵母混合发酵罐培养，即将枯草芽孢杆菌和酿酒酵母液体种子各按3%～5%比例共同接种到玉米与豆粕酶解糖化液中进行混合培养，10L自动种子发酵罐装种子发酵培养基5L，在28～32℃，180～200rpm（转/分钟）培养20小时，其它步骤同实施例2。采用这种实施方式，可以节省发酵罐以及生产中用料和能源消耗。
试验效果实施例
将60头21日龄断奶仔猪按窝别和性别配对，按公母配对，随机分成2个组，即对照组和试验组，每组30头，试验期为30天。日粮组成比例为：玉米66.78%、酶解豆粕 20.5%、乳清粉5%、鱼粉5%、碳酸钙0.9%、磷酸氢钙0.55%、赖氨酸0.23%、胆碱0.1%、食盐0.2%、甜味剂0.02%、多维0.4%、微量元素0.32%。试验组在日粮中分别添加占日食量0.2%的本发明产品，代替0.2%微量元素或多维，对照组不添加。
各试验组均在封闭式水泥地面猪舍内分栏饲养。将仔猪饲料按湿拌料（手握不出水）分别投入饲槽，每日饲喂4次，时间为早上8:00，中午12:00，下午16:00，晚上20:00。以鸭嘴式饮水器提供充足清洁饮水，保持舍温17℃～25℃，每日清粪2次，保持舍内清洁，并采用多种相同方式进行消毒。试验期间，按仔猪常规免疫程序进行免疫。
表1 仔猪试验期增重对比
| 组别 | 平均始重（kg） | 平均末重（kg） | 平均增重（kg） | 平均日增重（g) |
| 对照组 | 6.02 | 14.86 | 8.84 | 295 |
| 试验组 | 5.98 | 16.97 | 10.99 | 366 |
经过30天试验，实验组仔猪日增重366g，对照组日增重295g，实验组比对照组每日多增重71g，增重幅度为24%，具体数据详见表1，饲喂结果表明，本发明产品能够提高饲料利用率，促进仔猪增重幅度，从而增加肉猪养殖的经济效益。
Claims (3)
1.一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂的制备工艺，其特征在于采用如下步骤：
（1）活菌制剂制备
（1.1）菌种准备
选用枯草芽孢杆菌和酿酒酵母作为活菌制剂菌种；
（1.2）发酵培养基制备
选用粉碎后的玉米与豆粕，玉米与豆粕的比例为10:1，加入40～50℃的温水拌料，料水比例为1:2.5～1:3.5，拌匀后加热到75～85℃，时间为40～50分钟；在130～135℃，0.10～0.15MPa条件下蒸煮80～90分钟，冷却到60～70℃，加入高温液化酶和糖化酶处理3～4小时，得到葡萄糖值（DE值）为65%以上、糖度在12～14°BX的玉米与豆粕酶解糖化液，调节pH值为4～5，再加热至90℃保持20～30分钟，作为发酵培养基待用；
（1.3）发酵液制备
（1.3.1）枯草芽孢杆菌发酵液制备
（A）培养基
种子培养基：成分为1%蛋白胨，0.4%牛肉膏，0.5%NaCl，调节pH值至7.0，120℃,灭菌30min；
发酵培养基：玉米与豆粕酶解糖化液，121℃,灭菌40min；
（B）培养条件
一级种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入种子培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养24小时，
二级种子培养：10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20小时，制成枯草芽孢杆菌液体种子；
发酵罐培养：100L全自动搅拌发酵罐装发酵培养基60L，由种子罐流加接种，接种量10%，28～32℃，培养24～26小时，制成枯草芽孢杆菌发酵液；
（1.3.2）酿酒酵母发酵液制备
（A）培养基
种子培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖，pH4～4.5，120℃,灭菌30min；
发酵培养基：玉米与豆粕酶解糖化液，121℃,灭菌40min；
（B）培养条件
一级种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取斜面菌种1环接入种子培养基中，28～32℃，180～200rpm旋转摇床培养20～30小时；
二级种子培养：10L自动种子发酵罐装种子培养基5L，按5%接种量，28～32℃，培养20～24小时，制成酿酒酵母液体种子；
发酵罐培养：100L全自动搅拌发酵罐装发酵培养基60L，由种子罐流加接种，接种量10%，28～32℃，培养30～36小时，制成酿酒酵母发酵液；
（1.4）干燥加工
枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液中加入1%低聚糖作为保护剂后，分别经过40～50℃低温干燥，制成：
（1.4.1）枯草芽孢杆菌活菌制剂，活菌数＞2×109cfu/g和
（1.4.2）酿酒酵母活菌制剂，活菌数＞1.8×109cfu/g，
（1.5） 枯草芽孢杆菌和酿酒酵母复合活菌制剂复配调制
将枯草芽孢杆菌活菌制剂和酿酒酵母活菌制剂2者按1:1的比例复配调制成活菌数超过8×109cfu/g的枯草芽孢杆菌和酿酒酵母复合活菌制剂；
（2）酶制剂制备
（2.1）菌种准备
选用里氏木霉和黑曲霉作为酶制剂菌种；
（2.2）复合酶制剂制备
（2.2.1）里氏木霉复合酶制剂制备
（A）培养基
种子培养基：0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4,调节pH值至7.0，120℃,灭菌30min；
固体发酵培养基：玉米30%，豆粕69.6%，KH2PO4 0.4%，按料水比1:1加水拌匀，自然pH值，120℃,灭菌30min；
（B）培养条件
种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取里氏木霉菌悬液1ml接入种子培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时，制成里氏木霉液体种子；
固体发酵培养：取灭菌后的固体发酵培养基，在经过消毒处理的发酵车间内，降温至30～45℃,将培养后的里氏木霉液体种子均匀喷洒到固体发酵培养基上，将固体发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得里氏木霉复合酶制剂；
（2.2.2）黑曲霉复合酶制剂制备
（A）培养基
种子培养基：0.5%CMC, 0.2%NaNO3, 0.2%K2HPO4, 0.05%KCl, 0.05%MgSO4·7H2O, 0.0001%FeSO4,调节pH值至7.0，120℃,灭菌30min；
固体发酵培养基：玉米30%，豆粕69.6%， KH2PO4 0.4%，按料水比1:1加水拌匀，自然pH值，120℃,灭菌30min；
（B）培养条件
种子培养：250ml三角瓶装种子培养基50ml，取黑曲霉菌悬液1ml接入种子培养基中，28～32℃，黑暗培养48小时，制成黑曲霉液体种子；
固体发酵培养：取灭菌后的固体发酵培养基，在经过消毒处理的发酵车间内，降温至40～45℃,将培养后的黑曲霉液体种子均匀喷洒到固体发酵培养基上，将发酵培养基拌匀，平铺在发酵床上，厚度为3～5厘米，温度28～32℃，相对湿度为80～90%；每间隔12小时翻床一次，适当补喷蒸馏水；共培养48小时；然后将发酵料风干，获得黑曲霉复合酶制剂；
（2.3）复配复合酶制剂制备
将里氏木霉复合酶制剂和黑曲霉复合酶制剂按照1:1～1.5:1的比例，混合复配均匀，制成含纤维素酶、α—淀粉酶和蛋白酶活性的复合酶制剂；
（3）复合饲料添加剂复配调制
将复合活菌制剂与复合酶制剂按照1:3～1:4的配伍比例进行复配，充分混合均匀，制成复合饲料添加剂产品，产品每克含有益微生物活菌数＞8×109cfu，纤维素酶活为每克产品每分钟降解纤维素量＞500毫克，α—淀粉酶活为每克产品每分钟水解淀粉量＞3000毫克，蛋白酶活为每克产品每分钟水解酪蛋白生成氨基酸量＞400毫克。
2.根据权利要求1所述一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂的制备工艺，其特征在于，在所述活菌制剂制备的干燥加工步骤中，所述枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液中加入的低聚糖是海藻糖、低聚果糖、低聚木糖、低聚甘露糖、低聚异麦芽糖或大豆低聚糖中的至少1种。
3.采用权利要求1或2所述一种含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂的制备工艺制备的含有生物酶和微生物的复合饲料添加剂。
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