CN102908405B

CN102908405B - 一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN102908405B
Application number: CN201210375202.5A
Authority: CN
Inventors: 蔡宇; 张荣华
Original assignee: Jinan University
Current assignee: Jinan University
Priority date: 2012-09-29
Filing date: 2012-09-29
Publication date: 2014-12-31
Anticipated expiration: 2032-09-29
Also published as: CN102908405A

Abstract

本发明属于中药领域，公开了一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法，该中药组合物由以下重量份计的中药原料制备而成：10～30的五倍子，10～30的透骨草，10～30的火炭母，10～30的山豆根。制备方法包括步骤：将五倍子、透骨草、火炭母和山豆根粉碎，用重量为上述中药原料重量2倍的体积分数为80%乙醇浸泡，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；将浓缩液加入体积分数为70%乙醇溶解，静置，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.01～1.10g/cm³，真空干燥，干燥物粉碎，过筛得到细粉，即得逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。本发明的中药组合物起到逆转肿瘤多药耐药作用，且该中药组合物无毒副作用。

Description

一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，特别涉及一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法。

技术背景

肿瘤细胞对抗肿瘤药物的多药耐药（multidrug resistance，MDR）是导致肿瘤化学药物治疗失败的常见因素。目前国内肿瘤患病率呈上升趋势，并且90％的肿瘤患者死亡在不同程度上受肿瘤耐药的影响，这就急切寻求符合上述理想的新一代耐药逆转剂。已知某些中药具有钙拮抗作用，且药物作用较温和，能在逆转MDR中提高化疗效果，具有很好的应用和开发前景。

现有的研究结果表明多种机制参与肿瘤细胞多药耐药形成，主要包括：细胞膜P-糖蛋白（Permeability-glycoprotein，P-gP）、多药耐药相关蛋白（MultidrugResistance Associated Protein，MRP）过度表达形成药物外输泵，使抗癌药物在肿瘤细胞内蓄积下降；谷胱甘肽-S-转移酶（GST）单独或与谷胱甘肽（GSH）一起参与多种细胞毒代谢及解毒过程；与细胞凋亡相关的因子及基因如bcl-2，P⁵³等异常。国内外针对上述环节进行了广泛研究以寻求拮抗和/或逆转肿瘤细胞MDR，体外被证实具有逆转耐药活性的化合物或生物制剂很多，但真正进入临床研究的只有异博定、环孢菌素A等极少数，而且疗效不理想。目前还没有一种药物或方法在临床被广泛接受原因在于：现有逆转剂大多为“老药新用”，逆转耐药往往不是其主要功能，临床使用禁忌症多，毒副作用大；生物制剂在体内不稳定，难以作用到靶点且毒副反应多；临床耐药往往数种机制同时参与，只对单一机制起作用的逆转剂难以发挥显著的效应。其中对于中药或有效单体成分研究而言，真正能结合临床疗效和中医理论的研究少见。

中国发明专利CN200710070320.4公开了“姜黄素在制备肿瘤多药耐药预防剂中的用途”，中国发明专利CN200710143393.1公开了“青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用”；目前有关制备肿瘤多药耐药逆转剂的发明专利还未见中药组合物的报道。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的首要目的在于提供一种逆转肿瘤多药耐药中药组合物。该中药组合物由四种中药原料制备而成，本发明的中药组合物起到逆转肿瘤多药耐药作用，且该中药组合物无毒副作用。

本发明的另一个目的在于提供一种逆转肿瘤多药耐药中药组合物的制备方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物，由如下按照重量份数计的中药原料制备而成：五倍子10～30份，透骨草10～30份，火炭母10～30份，山豆根10～30份。

上述逆转肿瘤多药耐药的中药组合物，更加优选由下述按重量份数计的中药原料制备而成：五倍子12份，透骨草18份，火炭母18份，山豆根12份。

一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）取以下重量份数计的中药原料：五倍子10～30份，透骨草10～30份，火炭母10～30份，山豆根10～30份粉碎，备用；

（2）用重量为步骤（1）所述中药原料2倍重量的体积分数80％的乙醇浸泡后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；浓缩液中加入重量为浓缩液2倍重量的体积分数70％的乙醇溶解，静置，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.01～1.10g/cm³，真空干燥，干燥物粉碎，过筛得细粉，即得逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。

步骤（2）所述的浸泡时间为24～48小时；

所述静置的时间为24～48小时；

所述真空干燥的温度为60～80℃，时间为6～12小时；

所述过筛是过目数为40～80目的筛网。

本发明的原理在于：

各种中药原料的药理疗效如下：

五倍子：味酸、涩、性寒，具有敛肺、止汗、涩肠、固精、止血、解毒功效；

透骨草：甘、苦、温，具有祛风湿、活血、舒筋、止痛功效；

火炭母：酸、甘、寒，具有清热解毒、利湿消滞、凉血止痒功效；

山豆根：苦、寒，具有清火、解毒、消肿、止痛功效。

本发明采用各种中药原料配伍，从中医角度认为起到清热解毒功效；本发明中药组合物中原料药组合紧凑，可有效起到逆转肿瘤多药耐药的作用。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：

中国发明专利CN1762450A公开的专利“五味子在制备抗肿瘤药物及其肿瘤多药耐药逆转剂中的应用”，该专利的只是针对“五味子”这单一药材；中国发明专利CN101164534A公开的专利“姜黄素在制备肿瘤多药耐药预防剂的应用”是针对中药材姜黄中的单体成分姜黄素的作用；而这些单一中药的作用未在中医药理论指导下组方用药，与本发明中药复方制剂的作用具有区别，本发明采用各种中药原料配伍，从中医角度认为起到清热解毒功效；本发明中药组合物中原料药组合紧凑，可有效起到逆转肿瘤多药耐药的作用，且该中药组合物无毒副作用；本发明生产方法简便，用药成本不高。实验结果表明：本发明组合物含药血清与ADR联合用可使ADR对K562/ADR的IC₅₀明显下降，不同给药浓度对K562/ADR逆转倍数为1.60～4.00，且呈浓度正相关，这表明本发明中药组合物对K562/ADR耐药株具有逆转作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

1、按下述重量配比称取各中药原料：五倍子100克，透骨草100克，火炭母100克，山豆根100克，粉碎，备用。

2、将上述粉碎后的中药原料加入到800克的体积分数为80%乙醇浸泡24小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；浓缩液中加入重量为浓缩液2倍重量的体积分数70％的乙醇溶解，静置24小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.01g/cm³，60℃真空干燥6小时，得干燥物30克，粉碎，过40目筛得细粉，即得逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。

实施例2：

1、按下述重量配比称取各中药原料：五倍子200克，透骨草200克，火炭母200克，山豆根200克。

2、将上述粉碎后的中药原料加入到1600克的体积分数为80%乙醇浸泡36小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；浓缩液中加入重量为浓缩液2倍重量的体积分数70％的乙醇溶解，静置36小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.06g/cm³，80℃真空干燥8小时，得干燥物60克，粉碎，过60目筛得细粉，即得逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。

实施例3：

1、按下述重量配比称取各中药原料：五倍子300克，透骨草300克，火炭母300克，山豆根300克。

2、将上述粉碎后的中药原料加入到2400克的体积分数为80%乙醇浸泡48小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；浓缩液中加入重量为浓缩液2倍重量的体积分数70％的乙醇溶解，静置48小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.10g/cm³，80℃真空干燥12小时，得干燥物90克，粉碎，过80目筛得细粉，即得逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。

实施例4：

1、按下述重量配比称取各中药原料：五倍子120克，透骨草180克，火炭母180克，山豆根120克。

2、将上述粉碎后的中药原料加入到1200克的体积分数为80%乙醇浸泡24小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；浓缩液中加入重量为浓缩液2倍重量的体积分数70％的乙醇溶解，静置24小时后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.04g/cm³，70℃真空干燥10小时，得干燥物45克，粉碎，过60目筛得细粉，即得逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。

实施例5：

白血病细胞K562/S为白血病敏感株，K562/ADR为白血病细胞阿霉素耐药株。K562/ADR是由K562/S细胞接触递增浓度的ADR（阿霉素）诱导而成，具有典型多药耐药性。细胞株均培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中。细胞株购买于中山大学实验动物中心。

含药血清制备：重量为20±2克NIH小鼠适应性饲养3天后，称重，根据随机数目表随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、空白组共4组，每组10只；给药方法与剂量：小鼠于高剂量组按本中药组合物40g/kg灌胃给药，中剂量组按20g/kg灌胃给药，低剂量组按10g/kg灌胃给药；空白对照组以生理盐水灌胃。其中，所用的NIH小鼠购买于中山大学实验动物中心。

给药2h后，取血，3000转/分离心10分钟，分离血清，56℃灭活30min，用RPMI1640配制不同浓度的血清培养液。

取对数生长期细胞，K562/ADR细胞以1×10⁵/ml、K562/S以0.5×10⁵/ml分别接种于96孔培养板，100μl/孔。在37℃、5%CO₂条件下培养过夜后，加不同浓度的受试含药血清和ADR共100μl，调零组和对照组加相应体积的培养液，每组设4个平行孔。培养72h后，每孔加5mg/ml MTT20μl（调零组除外），再培养4h，倾去培养液，加DMSO100μl/孔，待完全溶解后，用酶联免疫仪在波长570nm处调零组调零后读取吸光度（A）值。取4孔A值的均数按公式计算细胞抑制率；细胞抑制率（IR）=[1-（试验孔A均值/对照孔A均值）]×100%。计算IR并求出半数抑制浓度（IC₅₀），以上实验重复3次。

逆转倍数=IC_50对照组/IC_50受试组

IC_50对照组为对照组的K562/S或K562/ADR IC₅₀值；

IC_50受试组为不同剂量给药组的IC₅₀值。

表1 本发明中药组合物对K562/ADR耐药株的逆转作用

本发明组合物含药血清与ADR联合用可使ADR对K562/ADR的IC₅₀明显下降，不同给药浓度对K562/ADR逆转倍数为1.60～4.00，且呈浓度正相关，这表明本发明中药组合物对K562/ADR耐药株具有逆转作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物，其特征在于：该中药组合物由重量比为1：(1～1.5)：(1～1.5)：1的中药原料五倍子、透骨草、火炭母和山豆根制备而成；

该中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取重量比为1：(1～1.5)：(1～1.5)：1的中药原料五倍子、透骨草、火炭母和山豆根，粉碎，备用；

(2)用重量为步骤(1)所述中药原料2倍重量的体积分数80％的乙醇浸泡后，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩；浓缩液中加入重量为浓缩液2倍重量的体积分数70％的乙醇溶解，静置，过滤，收集滤液，回收乙醇，浓缩至密度为1.01～1.10g/cm³，真空干燥，干燥物粉碎，过筛得细粉，即得逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物。

2.根据权利要求1所述的一种逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物，其特征在于：该中药组合物由下述按重量份数计的中药原料制备而成：五倍子12份，透骨草18份，火炭母18份，山豆根12份。

3.根据权利要求1所述的一种逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物，其特征在于：步骤(2)所述的浸泡时间为24～48小时；

4.根据权利要求1所述的一种逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物，其特征在于：步骤(2)所述静置的时间为24～48小时；

5.根据权利要求1所述的一种逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物，其特征在于：步骤(2)所述真空干燥的温度为60～80℃，时间为6～12小时；

6.根据权利要求1所述的一种逆转白血病细胞阿霉素耐药株的中药组合物，其特征在于：步骤(2)中所述过筛是过目数为40～80目的筛网。