CN101125142A - 青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用 - Google Patents
青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101125142A CN101125142A CNA2007101433931A CN200710143393A CN101125142A CN 101125142 A CN101125142 A CN 101125142A CN A2007101433931 A CNA2007101433931 A CN A2007101433931A CN 200710143393 A CN200710143393 A CN 200710143393A CN 101125142 A CN101125142 A CN 101125142A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medicine
- cell
- concentration
- vcr
- application
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Abstract
本发明公开了青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用，公开了青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用，公开了青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用，通过实验证实上述应用具有重要的临床意义。
Description
技术领域
本发明涉及青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用，属于医药领域。
背景技术
肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的重要原因之一。多药耐药性(multidrug Resistance，MDR)是指肿瘤细胞在接受抗癌药物治疗过程中对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时，对结构和作用完全不同的抗肿瘤药物产生交叉抗药性。导致肿瘤多药耐药机制复杂，肿瘤细胞可以通过不同途径获得多药耐药性。目前认为，导致MDR机制包括：①存在于肿瘤细胞膜上的P糖蛋白，多药耐药性相关蛋白，肺耐药相关蛋白异常表达；②磷酸激酶C、DNA拓扑异构酶II、谷胱甘肽(GSH)与谷胱甘肽-S-转移酶等细胞内酶异常改变。此外，胸苷的合成酶(TS)、醛脱氢酶(ALDH)的增加及二氢叶酸还原酶(DHFR)的变异也可导致细胞的耐药性的发生；③细胞调亡(Apoptosis)基因与细胞因子改变。④DNA修复异常；⑤器官微环境及其他因素等。
近几年来，随着对肿瘤耐药机制研究的不断深入，已经发现一些肿瘤多药耐药逆转剂及其活性成分。主要有：①钙通道阻滞剂，如为维拉帕米；②免疫抑制剂，如环胞霉素A；③谷胱甘肽转移酶(GST)及TOP异构酶II抑制剂；④激素及抗激素类化合物；⑤蛋白激酶抑制剂；⑥DNA修复相关酶活性抑制剂等。但能进入临床研究的只有异博定、环孢菌素A、SDZPSC833、它莫西芬等极少数，而且临床逆转效果不尽人意。其主要有以下原因：①毒副作用限制了用药剂量；②多机制参与形成的临床耐药使作用靶点单一的逆转剂难以发挥作用；③生物制剂在体内不稳定，半衰期短，难以作用到靶点部位，且副反应多。
近些年来，发现了许多中药及其中药活性成分能够逆转肿瘤多药耐药，特别是中药逆转肿瘤耐药性在P-gP介导的MDR经典机制被公认后以及肯定了钙拮抗剂异博定等对MDR的逆转作用后，国内外肿瘤研究者们开始有意识地从具有钙通道拮抗活性的中药中研究鉴定作用强、毒性小的MDR逆转剂。研究结果发现：①中药大黄主要成份大黄素/大黄酸在低剂量下能增加抗肿瘤药物的细胞毒作用，并能部分逆转肿瘤细胞的MDR；②粉防已碱、蝙蝠葛碱、莲心碱、左旋四氢马汀和人参皂甙Rb1的逆转肿瘤多药耐药作用明显，逆转倍数为8.2-13.0并且苦参碱、乌头碱对耐药细胞株的药性有不同程度的逆转作用；③中药汉防己提取物汉防己甲素在一定程度上能抑制耐药细胞的MDR特性；④化痰中药贝母中的主要活性成份贝母甲素和贝母乙素在逆转肿瘤多药耐药方面独具特色，其化学结构隶属于异甾生物碱的瑟文类生物碱，完全不同于钙离子拮抗剂、免疫抑制剂和其他现有耐药逆转剂，并且可以作用耐药机制不同(P-gP或MDR)的肿瘤细胞，很有临床应用前景。⑤理气类中药玄胡、补骨脂抽提剂的复方中药制剂R3、中药方剂(由川芎、莪术、鸡血藤等活血化瘀药组成)提取液R1等具有逆转耐药作用⑥浙贝母散剂可逆转急性白血病多药耐药。但这些药物/活性成份或停留于实验室阶段，或提纯后毒性较大，或逆转倍数较低而难以实现逆转耐药效果。
青蒿是临床常用中药，味苦辛、性寒，归肝、胆经。具有清热、解暑、除蒸、截疟之功效。临床上常与其他中药配伍治疗暑邪发热、阴虚发热、夜热早凉、骨蒸劳热、疟疾寒热、湿热黄疸等症。其主要成份为青蒿素，同时青蒿素也是其抗疟的主要活性成份。青蒿素及其衍生物是我国自主研制开发的特效抗疟新药，它具有快速、安全高效、无抗药性的优点，更因为其结构特殊，药理作用广泛，在防治肿瘤、艾滋病等多种疾病方面具有潜在诱人的前景而备受国内外医药界关注。青蒿素是含有一个过氧桥的倍半萜的酯化合物，由于其结构的独特性，而使它的抗疟作用机理与已知抗疟药迥然不同。实验研究表明，青蒿素对疟原虫清除作用主要是通过损伤疟原虫的膜系统，而肿瘤多药耐药产生的一个重要机制与肿瘤细胞膜蛋白异常有密切关系，这就启示蒿素抗疟疾的药理机制，可能对肿瘤多药耐药治疗有效。
发明内容
本发明目的在于提供青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
本发明目的在于提供二氢青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
本发明目的在于提供青蒿琥酯在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
本发明目的在于提供青蒿提取物在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
本发明的技术方案为：
青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
二氢青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
青蒿琥酯在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
青蒿提取物在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用；
青蒿素在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
二氢青蒿素在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
青蒿琥酯在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
青蒿提取物在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
青蒿素在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用。
二氢青蒿素在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用。
青蒿琥酯在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用。
青蒿提取物在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用。
所述青蒿提取物采用现有技术制备。
下述实验例用于进一步说明本发明：
本发明实验表明：在体外通过细胞杀伤增敏试验，证实在无明显的细胞毒剂量下，青蒿素和青蒿提取物可部分逆转长春新碱耐药KBV200细胞的耐药性。青蒿琥酯和二氢青蒿素对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用，且四者对VCR杀伤KBV200的增敏作用有剂量依赖效应，随其浓渡的升高，其RI相应升高。
实验例1青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯和青蒿提取物对KBV200的抑制实验
1材料
1.1细胞系
KBV200细胞由中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所提供。其由人口腔麟状上皮癌细胞(KB)经长春新碱诱导的多药耐药细胞系。经测定耐药倍数约175倍，以MDR1基因、Pgp糖蛋白高表达为主要耐药机制。该细胞株对其他抗癌药物具有交叉耐药性，对紫杉醇耐药约156倍；对秋水仙素和阿霉素耐药约15倍；但对高三尖杉酯、鬼臼乙叉甙、5-氟脲嘧啶的耐药性较低。
1.2药物
实验药物有：①青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯由中国科学院上海药物研究所李英研究员馈赠；青蒿提取物由北京中医院中医研究所制剂室提取。青蒿素、青蒿提取物、二氢青蒿素以少量DMSO溶解，配成浓度为0.2mol/l的母液，超声助溶，-20℃保存。实验前用无血清的培养基(pH＝7.2)稀释至所需浓度DMSO＜0.1％。青蒿琥酯实验前配制，用5％NaHCO3配成浓度为0.2mol/l的母液，超声助溶，再用无血清的培养基(pH＝7.2)稀释至所需浓度DMSO＜0.1％。②长春新碱(VCR)由北京第二制药厂生产(批号0208001)。注射用水配制，100μg/ml，分装，-20℃保存。
1.3试剂
主要包括：①四氮唑蓝(MTT)系瑞士Fluka公司产品，用时以PBS现配制，5mg/ml，过滤除菌，4℃避光保存。②胰蛋白酶系美国GIBCO公司产品，PBS溶液配制，浓度为0.25％，过滤除菌，4℃避光保存。③RPMI1640培养基由美国GIBCOBRL生产。④小牛血清由天津H&Y生物有限公司生产。
⑤二甲基亚砜(DMSO)系美国Biomol公司产品。
1.4仪器
主要有：①恒温CO2培养箱由日本SANYO公司生产(型号MCO-15AC)。②酶标仪系奥地利ASYA-HITECH公司产品(型号Digiscan SA100)。③高速低温离心机系日本SANYO公司产品。④微量振荡器由北京海淀电子医疗仪器厂生产(型号WZ-2A)。⑤月坛牌洁净工作台由北京半导体设备厂生产。⑥倒置显微镜系日本Nikon公司产品。⑦显微镜BX60由日本(OLYMPUS公司)生产。⑧恒温水浴槽由北京医疗设备厂生产。
2方法
2.1细胞培养及耐药性维持
将保存于液氮中的KBV200细胞(细胞冻存液含10％二甲基亚砜，90％小牛血清)取出，于37℃-40℃水浴中迅速融化，1000rpm离心5min后弃上清，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养基重悬细胞，加入200nmol/L VCR维持耐药，置37℃含5％CO2的恒温培养箱中培养。当细胞贴壁生长至80％融合时，再以0.25％Trypsin/1mM EDTA消化传代。实验前一天更换培养液。
2.2细胞毒实验
取对数生长期的耐药细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640培养液制成一定浓度的细胞悬液，加入96孔细胞培养板，每孔180μl实验用药溶液(青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯、青蒿提取物，下同)或160μl(逆转耐药组)，使每孔细胞数为0.6×104。或加入不同浓度的青蒿素溶液(二氢青蒿素溶液、青蒿琥酯溶液或青蒿提取物溶液)20μl或青蒿素溶液(二氢青蒿素溶液、青蒿琥酯溶液或青蒿提取物溶液)与VCR合剂40μl(终浓度)，设培养液调零组、不加药细胞空白组，每组设六个平行孔，置37℃含5％CO2的恒温培养箱中培养72小时。每孔加入5mg/ml MTT液15μl，继续培养4小时。离心去上清，每孔加入DMSO 150μl，充分振荡，酶标仪检测570nm下光密度值(OD值)。
实验重复4次。
2.3分组方法
实验分为细胞毒实验与逆转耐药实验两部分。实验内容包括：①测定不同浓度的长春新碱对KBv200细胞抑制率，并依据抑制率计算IC50(即细胞生长抑制率为50％时的药物浓度)。②分别测定实验用药青蒿素、青蒿琥酯、二氢青蒿素、青蒿提取物对KBv200的生长抑制率，依据抑制率计算IC50，并分别选择实验用药对KBV200细胞生长抑制率小于10％、20％、30％的药物浓度与长春新碱伍用对KBV200细胞的生长抑制率。并依据公式计算其逆转KBV200细胞倍数。
2.4计算方法
细胞生长抑制率IR(％)＝[1-(用药组OD值-调零空OD值/对照组OD值-调零空OD值)×100％。逆转倍数RI＝耐药细胞株的IC50/耐药细胞株加逆转剂的IC50。IC50应用加权线性回归计算(用POMS-36计算机软件处理)，并利用Excel软件绘图。
3结果
1长春新碱对KBV200细胞抑制率
依据细胞毒实验方法，观察不同浓度的长春新碱(VCR)对KBV200细胞的抑制效应。不同浓度的4次实验数据的平均值显示，VCR对KBV200细胞均有不同的抑制效应，结果见表1、图1(VCR对KBV200细胞生长抑制率标准折线图)。
表1、VCR对KBV200细胞生长抑制率
| 长春新碱(μg/ml) | IR(％) |
| 0.1250.2500.5001.0002.000 | 6.51±2.599.06±3.1313.9±3.5425.6±1.7166.3±0.01 |
注：VCR对KBV200抑制的IC50浓度为1.58±1.22μg/ml
从表1与图1可以看出，以对KBV200细胞抑制的IC50为基准，当VCR浓度在1μg/ml以下时对KBV200细胞抑制效应并不明显。当VCR浓度大于1.58μg/ml以上浓度时才具有较为明显的抑制效应。
2青蒿提取物及其活性成分对KBV200细胞抑制率
按照细胞毒实验方法，青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯和青蒿提取物对KBV200的抑制率效应，4次实验数据平均值显示，其对KBV200细胞均有一定抑制效应。其结果见表2-5与图2-5。
表2、青蒿素对KBV200细胞生长抑制率
| 青蒿素(μmol/l) | IR(％) |
| 1.252.505.0010.020.040.080.0160 | 0.040±2.011.140±2.852.690±4.365.870±3.9012.70±2.5319.22±5.5928.47±2.7343.57±5.20 |
注：青蒿素对KBV200抑制的IC50浓度为172.4±4.54umol/l
从表2与图2可以看出，当青蒿素浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。青蒿素浓度在160umol/l以下时对KBV200细胞抑制效应并不明显；当青蒿素浓度大于172.4umol/l以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于80umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于30％；小于40umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于20％。
表3、青蒿琥酯对KBV200细胞生长抑制率
| 青蒿琥酯(μmol/l) | IR(％) |
| 0.03900.07800.01560.31300.62501.25002.50005.000010.00020.000 | 1.640±3.5208.650±7.0609.520±4.91018.41±4.42035.25±10.5247.56±1.25057.67±1.11069.85±6.90084.47±0.60095.02±6.560 |
注：青蒿琥脂对KBV200抑制的IC50浓度为1.466±3.75umol/l
从表3与图3可以看出，当青蒿琥酯浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。青蒿琥酯浓度在1.25umol/l以下时对KBV200细胞抑制效应并不明显；当浓度青蒿琥酯大于1.466umol/l以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于0.313umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于20％；小于0.039umol/l时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应。
表4、二氢青蒿素对KBV200细胞生长抑制率
| 二氢青蒿素(μmol/l) | IR(％) |
| 0.1560.3130.6251.2502.5005.00010.0020.0040.00 | 0.680±0.840.940±3.876.770±6.0310.00±3.3118.50±4.8832.30±10.148.69±6.5371.98±7.1689.99±4.39 |
注：二氢青蒿素对KBV200抑制的IC50浓度为11.16±5.48umol/l
从表4与图4可以看出，当与二氢青蒿素浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。二氢青蒿素浓度在10umol/l以下时对KBV200细胞抑制效应并不明显；当浓度二氢青蒿素大于11.16umol/l以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于2.5umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于20％；小于0.313umol/l时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应。
表5、青蒿提取物对KBV200细胞生长抑制率
| 青蒿提取物(μg/ml) | IR(％) |
| 0.5551.1102.2204.4408.88017.7535.5071.00142.0284.0 | 2.210±0.435.060±3.485.190±6.319.350±4.9614.68±5.7129.68±4.9666.23±7.8976.49±3.2889.94±1.9699.61±9.82 |
注：青蒿提取物对KBV200抑制的IC50浓度为29.25±6.14ug/ml
从表5与图5可以看出，当青蒿提取物浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。青蒿提取物浓度在17.75ug/ml以下时对KBV200细胞抑制效应并不明显；当青蒿提取物浓度大于29.25ug/ml以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于17.75ug/ml时对KBV200细胞的抑制率低于30％；小于0.555ug/ml时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应.
实验例2青蒿素、二氢青蒿素、青蒿琥酯和青蒿提取物与VCR伍用对KBV200的抑制实验
(材料和方法同实验例1)
选择青蒿提取物及其活性成分对KBV200细胞抑制率小于10％、20％、30％药物浓度与VCR配伍使用，观察对KBV200细胞抑制率。其中，青蒿素浓度分别为10μmol/l、20μmol/l与40μmol/l；青蒿琥脂浓度分别为0.078μmol/l、0.156μmol/l与0.313μmol/l；二氢青蒿素浓度分别为0.625μmol/l、1.25μmol/与2.5μmol/l；青蒿提取物浓度分别为4.44μg/ml、8.88μg/ml与17.75μg/ml。研究结果见6-9与图6-9。
表6、青蒿素与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制率
| VCR浓度(μg/ml) | VCR(％) | VCR+青蒿素(％) | VCR+青蒿素(％) | VCR+青蒿素(％) |
| 0.1250.2500.5001.0002.000 | 6.51±2.599.06±3.1313.9±3.5425.6±1.7166.3±0.01 | 28.92±3.8631.44±3.9937.69±4.7160.23±1.6486.33±3.76 | 28.98±8.2931.91±0.9640.37±4.6261.78±1.6289.72±5.78 | 32.36±4.8432.69±6.6543.91±3.9671.71±3.4291.36±7.58 |
注：当VCR浓度不变时，不同浓度的青蒿素与VCR伍用时具有不同的逆转KBV200耐药效应，10umol/l、20umol/l与40umol/l浓度的逆转倍数分别为2.29、2.68与3.0。
从表6与图6可以看出，VCR浓度不变，与对KBV200细胞的抑制率低于20％的10umol/l、20umol/l与40umol/l三个浓度的青蒿素抑制率配伍使用后，其对KBV200细胞的抑制率明显提高。其中，以40umol/l效果最佳。说明青蒿素可部分逆转长春新碱耐药KBV200细胞的耐药性。
表7、青蒿琥酯与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制率
| VCR(μg/ml) | VCR(％) | VCR+青蒿琥酯(％) | VCR+青蒿琥酯(％) | VCR+青蒿琥酯(％) |
| 0.1250.2500.5001.0002.000 | 6.51±2.599.06±3.1313.9±3.5425.6±1.7166.3±0.01 | 13.65±0.2414.54±0.6217.62±0.0523.46±3.7273.01±0.54 | 25.52±1.0127.61±2.6729.72±6.7852.97±1.1977.09±1.06 | 37.42±7.2937.47±6.0940.86±7.6767.59±8.2582.24±1.84 |
注：当VCR浓度不变时，不同浓度的青蒿琥脂与VCR伍用时对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用。0.078umol/l、0.156umol/l与0.313umol/l浓度的逆转倍数分别为1.19、1.79与2.57。
从表7与图7可以看出，VCR浓度不变，与对KBV200细胞的抑制率低于20％的0.078umol/l、0.156umol/l与0.313umol/l三个浓度的青蒿琥酯抑制率伍用后，对KBV200细胞的抑制率略有提高。其中，以0.313umol/l效果最佳。说明青蒿琥酯对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用。
表8、二氢青蒿素与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制率
| VCR(μg/ml) | VCR(％) | VCR+二氢青蒿素(％) | VCR+二氢青蒿素(％) | VCR+二氢青蒿素(％) |
| 0.1250.2500.5001.0002.000 | 6.510±2.599.060±3.1313.96±3.5425.65±1.7166.31±0.01 | 9.69±7.20020.92±7.9121.96±0.6135.35±3.8271.34±4.38 | 20.60±4.4021.30±5.4227.62±5.6549.56±1.1172.90±3.22 | 29.50±1.433.15±5.5636.43±7.6552.39±5.3176.62±6.29 |
注：当VCR浓度不变时，不同浓度的二氢青蒿素与VCR伍用时对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用，0.625umol/l、1.25umol/l与2.5umol/l浓度的逆转倍数分别为1.35、1.515与1.74。
从表8与图8可以看出，VCR浓度不变，与对KBV200细胞的抑制率低于20％0.625umol/l、1.25umol/l与2.5umol/l的三个浓度的二氢青蒿素抑制率伍用后，对KBV200细胞的抑制率略有提高。其中，以2.5umol/l效果最佳。说明二氢青蒿素对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用。
表9、青蒿提取物与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制率
| VCR(μg/ml) | VCR(％) | VCR+青蒿提取物(％) | VCR+青蒿提取物(％) | VCR+青蒿提取物(％) |
| 0.1250.2500.5001.0002.000 | 6.51±2.599.06±3.1313.9±3.5425.6±1.7166.3±0.01 | 22.21±7.5622.89±1.3424.51±4.9572.14±4.2683.12±1.26 | 24.28±2.2926.71±0.1249.94±5.6274.52±4.7182.12±2.54 | 51.20±5.9452.68±5.4271.68±8.1281.59±3.4782.12±1.68 |
注：当VCR浓度不变时，不同浓度的青蒿提取物与VCR伍用时具有不同的逆转KBV200耐药效应，4.44μg/ml、8.88μg/ml mol/l与17.75μg/ml浓度的逆转倍数分别为2.11、2.98与12.74。
从表9与图9可以看出，VCR浓度不变，与对KBV200细胞的抑制率低于30％的4.44μg/ml、8.88μg/ml与17.75μg/ml三个浓度的青蒿提取物抑制率伍用后，对KBV200细胞的抑制率明显提高。其中，以17.75μg/ml效果最佳。说明青蒿提取物可部分逆转长春新碱耐药KBV200细胞的耐药性。
本发明的研究结果：
①当VCR与青蒿素浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。同时，当VCR小于1.58±1.22μg/ml时，其对KBV200细胞的抑制率小于50％；当青蒿素浓度大于172.4umol/l以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于80umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于30％；小于40umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于20％；小于2.50umol/l时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应。上述研究证实，青蒿素大浓度具有一定的抑制KBV200细胞增殖效应。②当VCR与青蒿琥酯浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。同时，当青蒿琥酯浓度大于1.466umol/l以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于0.313umol/时对KBV200细胞的抑制率低于20％；小于0.039umol/l时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应.上述研究证实，青蒿琥酯大浓度具有一定的抑制KBV200细胞增殖效应。③当VCR与二氢青蒿素浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。同时，当二氢青蒿素浓度大于11.16umol/l以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于2.5umol/l时对KBV200细胞的抑制率低于20％；小于0.313umol/l时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应。上述研究证实，二氢青蒿素大浓度具有一定的抑制KBV200细胞增殖效应。④当VCR与青蒿提取物浓度呈梯度稀释时，其对KBV200细胞的抑制作用也逐渐减低。同时，当青蒿提取物浓度大于29.25ug/ml以上浓度时，其对KBV200细胞的抑制率大于50％；小于17.75ug/ml时对KBV200细胞的抑制率低于30％；小于0.555ug/ml时对KBV200细胞的抑制率几乎无抑制效应。上述研究证实，青蒿提取物浓度大浓度具有一定的抑制KBV200细胞增殖效应。
本实验中青蒿琥酯对KBV200细胞的IC50为1.466μmol/l(0.563μg/ml)，实验结果说明青蒿琥酯对KBV200细胞有选择性杀伤作用。
本实验结果对青蒿素骨架上12-C上内酯环为羰基(第12位上)进行衍生化处理后的青蒿琥酯IC50为1.466μmol/l(0.563μg/ml)，对肿瘤细胞的抑制作用比青蒿素显著增强，青蒿素IC50为172.4μmol/l(48.58μg/ml)，而酮基被还原后的产物二氢青蒿素对肿瘤细胞的抑制作用较青蒿琥酯次之，二氢青蒿素IC50为11.16μmol/l(3.18μg/ml)。
青蒿提取物，取200g的生药(产地：河北)，提取成22.9g的乙醇粗提物。本实验用的青蒿提取物约含青蒿素为0.83％，而本实验中青蒿提取物对KBV200细胞IC50为29.25μg/ml。
本发明的研究结果发现：①当VCR浓度不变时，与对KBV200细胞抑制率低于20％的10umol/l、20umol/l与40umol/l三个浓度的青蒿素抑制率伍用后，逆转倍数分别为2.29、2.68与3.0。对KBV200细胞的抑制率明显提高。实验结果证明，青蒿素可部分逆转长春新碱耐药KBV200细胞的耐药性且逆转长春新碱耐药KBV200细胞效应与用药剂量成正比。②当VCR浓度不变时，与对KBV200细胞抑制率低于20％的0.078umol/l、0.156umol/l与0.313umol/l三个浓度的青蒿琥酯抑制率伍用后，逆转倍数分别为1.19、1.79与2.57。对KBV200细胞的抑制率略有提高。实验结果证明，青蒿琥酯对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用且对VCR杀伤KBV200的增敏作用与用药剂量成正比。③当VCR浓度不变时，与对KBV200细胞抑制率低于20％的0.625umol/l、1.25umol/l与2.5umol/l三个浓度的二氢青蒿素抑制率伍用后，逆转倍数分别为1.35、1.515与1.74。对KBV200细胞的抑制率略有提高。实验结果证明，二氢青蒿素对VCR杀伤KBV200有一定的增敏作用且对VCR杀伤KBV200的增敏作用与用药剂量成正比。④当VCR浓度不变时，与对KBV200细胞抑制率低于30％的4.44μg/ml、8.88μg/ml与17.75μg/ml三个浓度的青蒿提取物抑制率伍用后，逆转倍数分别为2.11、2.98与12.74。对KBV200细胞的抑制率明显提高。实验结果证明，青蒿提取物可逆转长春新碱耐药KBV200细胞的耐药性且逆转长春新碱耐药KBV200细胞效应与用药剂量成正比。
英文缩写
OD(Opitical density) 吸光度
RPMI1640(RPMI mediμm 1640) RPMI1640培养基
DMSO(Dimethyl Sμlfoxide) 二甲基亚砜
MTT(3-4，5-dimethylthiazol-2-y1) 四氮唑蓝
VCR(Vincristine) 长春新碱
KB 口腔鳞上皮癌状细胞系
KBV200 耐药口腔鳞上皮癌状细胞系
IR(Inhibitory rate) 抑制率
IC10(10％Inhibitory concentration) 抑制率为10％药物浓度
IC20(20％Inhibitory concentration) 抑制率为20％药物浓度
IC30(30％Inhibitory concentration) 抑制率为30％药物浓度
IC50(50％inhibitory concentration) 抑制率为50％药物浓度
MDR(mμltidrμg resistance) 多药耐药
RI(Reversal index) 逆转指数
附图说明：
将上述实验中涉及的图在此作为附图进行说明
图1：VCR对KBV200细胞生长抑制率标准折线图
图2、青蒿素对KBV200细胞生长抑制率标准折线图
图3、青蒿琥酯对KBV200细胞生长抑制率标准折线图
图4、二氢青蒿素对KBV200细胞生长抑制率标准折线图
图5、青蒿提取物对KBV200细胞生长抑制率折线图
图6、青蒿素与VCR伍用后对KBV200细胞生长率标准折线图
图7、青蒿琥酯与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制率折线图
图8、二氢青蒿素与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制折线图
图9、青蒿提取物与VCR伍用对KBV200细胞生长抑制折线图
下述实施例均能够实现上述实验所述的效果
具体实施方式
实施例1：青蒿素片剂
口服剂量30-50mg。每日2次。
实施例2：二氢青蒿素片剂
口服剂量30-50mg。每日2次。
实施例3：青蒿琥酯片剂
口服剂量50-100mg。每日2次。
实施例4：青蒿提取物片剂
青蒿提取物，取200g的生药提取成22.9g的乙醇粗提物，加入常规辅料，压片，制得100片。口服剂量2-3片。每日2次。
Claims (10)
1.青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用。
2.二氢青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用。
3.青蒿琥酯在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用。
4.青蒿提取物在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用。
5.青蒿素在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
6.二氢青蒿素在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
7.青蒿琥酯在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
8.青蒿提取物在制备作为长春新碱抗肿瘤增效剂药物中的应用。
9.青蒿素在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用。
10.二氢青蒿素、青蒿琥酯或青蒿提取物中的任一中药物在制备治疗口腔鳞上皮癌药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA2007101433931A CN101125142A (zh) | 2007-07-24 | 2007-08-23 | 青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200710119428.8 | 2007-07-24 | ||
| CN200710119428 | 2007-07-24 | ||
| CNA2007101433931A CN101125142A (zh) | 2007-07-24 | 2007-08-23 | 青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101125142A true CN101125142A (zh) | 2008-02-20 |
Family
ID=39093333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2007101433931A Pending CN101125142A (zh) | 2007-07-24 | 2007-08-23 | 青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101125142A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8314142B2 (en) | 2006-04-11 | 2012-11-20 | Sanofi | Dimers of artemisinin derivatives, preparation thereof and therapeutic use thereof |
| CN102908405A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-02-06 | 暨南大学 | 一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法 |
| CN101940569B (zh) * | 2009-07-07 | 2013-02-13 | 鼎泓国际投资（香港）有限公司 | 含有索拉非尼和青蒿素及青蒿素类衍生物的药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的应用 |
| CN106727586A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 遵义医学院附属医院 | 一种青蒿琥酯的新应用 |
| CN109602739A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-04-12 | 苏州大学 | 青蒿琥酯在制备抑制肿瘤细胞耐药性药物中的应用 |
-
2007
- 2007-08-23 CN CNA2007101433931A patent/CN101125142A/zh active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8314142B2 (en) | 2006-04-11 | 2012-11-20 | Sanofi | Dimers of artemisinin derivatives, preparation thereof and therapeutic use thereof |
| CN101940569B (zh) * | 2009-07-07 | 2013-02-13 | 鼎泓国际投资（香港）有限公司 | 含有索拉非尼和青蒿素及青蒿素类衍生物的药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的应用 |
| CN102908405A (zh) * | 2012-09-29 | 2013-02-06 | 暨南大学 | 一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法 |
| CN102908405B (zh) * | 2012-09-29 | 2014-12-31 | 暨南大学 | 一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法 |
| CN106727586A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 遵义医学院附属医院 | 一种青蒿琥酯的新应用 |
| CN109602739A (zh) * | 2019-01-18 | 2019-04-12 | 苏州大学 | 青蒿琥酯在制备抑制肿瘤细胞耐药性药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yao et al. | Traditional Chinese medicine (TCM) as a source of new anticancer drugs | |
| Wang et al. | Fighting fire with fire: poisonous Chinese herbal medicine for cancer therapy | |
| Tang et al. | Berberine and Coptidis rhizoma as novel antineoplastic agents: a review of traditional use and biomedical investigations | |
| Han | Traditional Chinese medicine and the search for new antineoplastic drugs | |
| Da-Yong et al. | Herbal medicine in new era | |
| CN101125142A (zh) | 青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用 | |
| CN101711796B (zh) | 黄芩黄酮在制备治疗肠道病毒感染药物的应用 | |
| Lu et al. | Drug discoveries from natural resources | |
| Song et al. | Myricetin exhibit selective anti-lymphoma activity by targeting BTK and is effective via oral administration in vivo | |
| CN101805246B (zh) | 漆酚化合物,其药物组合物及其制备方法和应用 | |
| CN106668041A (zh) | 重楼皂苷vi在制备抗肺癌药物中的应用 | |
| CN102078317A (zh) | 一种双氢青蒿素磷脂复合物及其制备与应用 | |
| CN109106716A (zh) | 芒柄花素与氟尿嘧啶的组合在制备抗肿瘤药物中的用途 | |
| CN104208073A (zh) | 原人参二醇在制备肿瘤多药耐药逆转剂中的用途 | |
| CN102423384B (zh) | 一种治疗肺癌的中药制剂及其制备方法 | |
| CN105902561A (zh) | 龙须菜多糖作为抗肿瘤化疗药增效剂的应用及抗肿瘤药物 | |
| CN101199534B (zh) | 一种原人参二醇衍生物的抗肿瘤用途 | |
| CN103191268B (zh) | 一种治疗肺癌的中药组合物 | |
| CN101269100A (zh) | 一枝黄花在制备治疗和预防癌症的药物中的应用 | |
| CN109602775B (zh) | 乳苣醇提物在制备抗乳腺癌药物中的用途 | |
| CN109331031A (zh) | 一种重楼皂苷vii的新用途 | |
| CN104116778B (zh) | 一种中药组合物、其提取物及应用 | |
| CN102440994A (zh) | 灵芝酸g在肿瘤治疗中作为免疫增效剂和超抗原依赖的治疗药物的应用 | |
| CN104473946A (zh) | 一种治疗白血病的药物组合物 | |
| CN101732373B (zh) | 干漆提取物及其作为有效成份的抗癌药物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080220 |