CN104116778B - 一种中药组合物、其提取物及应用 - Google Patents
一种中药组合物、其提取物及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104116778B CN104116778B CN201410361010.8A CN201410361010A CN104116778B CN 104116778 B CN104116778 B CN 104116778B CN 201410361010 A CN201410361010 A CN 201410361010A CN 104116778 B CN104116778 B CN 104116778B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chinese medicine
- medicine composition
- extract
- group
- barrenwort
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 85
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 64
- 235000018905 epimedium Nutrition 0.000 claims abstract description 70
- 241001016310 Epimedium grandiflorum Species 0.000 claims abstract description 56
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000893536 Epimedium Species 0.000 claims description 12
- 108700000707 bcl-2-Associated X Proteins 0.000 claims description 11
- 102000055102 bcl-2-Associated X Human genes 0.000 claims description 11
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 claims description 10
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 abstract description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 27
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 20
- 241001632410 Eleutherococcus senticosus Species 0.000 description 12
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 9
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 3
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 244000163122 Curcuma domestica Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000424773 Epimedium alpinum Species 0.000 description 2
- 244000264601 Juglans mandschurica Species 0.000 description 2
- 235000014075 Juglans mandschurica Nutrition 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 241000269420 Bufonidae Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000014375 Curcuma Nutrition 0.000 description 1
- 235000003392 Curcuma domestica Nutrition 0.000 description 1
- 240000009138 Curcuma zedoaria Species 0.000 description 1
- 235000003405 Curcuma zedoaria Nutrition 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- 241001362421 Epimedium brevicornu Species 0.000 description 1
- 241000893531 Epimedium koreanum Species 0.000 description 1
- 241001660849 Epimedium pubescens Species 0.000 description 1
- 241001362411 Epimedium sagittatum Species 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 235000002710 Ilex cornuta Nutrition 0.000 description 1
- 241001310146 Ilex cornuta Species 0.000 description 1
- 241000758789 Juglans Species 0.000 description 1
- 235000013757 Juglans Nutrition 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010326 Osmanthus heterophyllus Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 102000013535 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010090931 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 235000002594 Solanum nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 240000002307 Solanum ptychanthum Species 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- 241000130764 Tinea Species 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000001644 anti-hepatocarcinoma Effects 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000496 cardiotonic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000003373 curcuma longa Nutrition 0.000 description 1
- 239000001812 curcuma zedoaria berg. rosc. Substances 0.000 description 1
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N dimethoate Chemical compound CNC(=O)CSP(=S)(OC)OC MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000013146 percutaneous coronary intervention Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002277 temperature effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- -1 tetramethyl azo azoles Salt Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013976 turmeric Nutrition 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 235000019509 white turmeric Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明一种中药组合物、其提取物及应用,属于中医药技术领域。所述中药组合物由青龙衣和淫羊藿按重量比1:1组成。中药组合物的提取物是通过将重量比1:1的青龙衣与淫羊藿加水浸泡后回流提取2次,合并滤液后减压浓缩干燥即得浸膏粉末。本发明还公开了所述中药组合物及其提取物在制备治疗肝癌药物中的应用。本发明具有配制简单,疗效好,无副作用,安全性高,有利于患者及时减轻病状,并且优于青龙衣与刺五加药材组合对肝癌的治疗,具有良好的开发前景及社会和经济效益的优点。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域,具体涉及一种中药组合物、其提取物及应用。
背景技术
随着环境污染的日益严重,人们受病毒、化学因素(亚硝酸、黄曲霉素、农药)、物理因素(电离辐射、紫外线)等的影响,癌症的发病率和死亡率都呈逐渐增加趋势。其中,原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)简称肝癌(hepatoma),是指原发于肝细胞或肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤,是最常见的恶性肿瘤之一,被称为“肿瘤之王”。我国为原发性肝癌高发区,起病隐匿,潜伏期长,恶性度高,生存期短,生存质量差,且治疗棘手。若不能早期发现并彻底手术切除,肝癌患者的总体5年生存率不超过5%。目前,肝癌的治疗方法有手术、放疗、化疗和介入治疗。这些治疗手段不仅价格昂贵,而且治疗过程常给患者带来巨大的痛苦。因此,寻找高效、安全、经济的抗肿瘤药物也成为医药学者的重要课题。
近年来,中医药在肝癌的治疗中发挥着不可替代的作用。大量药理实验证明,中药复方如活血软坚解毒方、“晚癌康2号”、仙芦抗癌胶囊、蟾酥胶等,及单味中药如龙葵、三棱、姜黄、莪术等,具有直接抗肝癌作用。同时,已有临床疗效观察研究表明,中医药治疗肝癌的优势一方面在于能有效稳定病情,减轻毒副作用,改善临床症状,延长患者带瘤生存时间,使部分患者肿瘤缩小;另一方面治疗费用相对低廉。因此,中医药治疗成为肝癌治疗中不可或缺的重要组成部分。
发明内容
青龙衣(Pericarpium Juglandis)为胡桃科胡桃属植物核桃楸(Juglansmandshurica Maxim.)和核桃(Juglans regia L.)未成熟的外果皮。该药始载于《开宝本草》,称其为胡桃青龙,《救急方》中则称之为青胡桃皮,自《山东中草药手册》称之为“青龙衣”后,现多延用此名称。主产于河北、山东、东北等地,为民间常用中药。古代诸家多以其清热解毒、祛风疗癣、止痛止痢等功效入药。现代研究表明,青龙衣在临床应用广泛,可用于治疗足部臭汗证、银屑病以及多种癌症等。
淫羊藿又名仙灵脾、羊藿叶等,为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornuMaxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens.Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶。李时珍在《本草纲目》中称其“益精气、坚筋骨、补腰膝、强心力”之功效。现代药理实验研究表明,淫羊藿能增加心脑血管血流量,促进造血功能、免疫功能及骨代谢,具有抗衰老、抗肿瘤等功效。
本发明的目的在于公开了一种中药组合物。
本发明的第二个目的在于公开了上述中药组合物的提取物。
本发明的第三个目的在于公开了上述中药组合物和提取物的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种中药组合物,其中,所述中药组合物由青龙衣和淫羊藿组成,其中青龙衣与淫羊藿的重量比为1:1。
上述技术方案所述的中药组合物,其中,青龙衣为30g,淫羊藿为30g。
上述技术方案所述的中药组合物,其中,所述中药组合物用于制备治疗肝癌的药物。
一种中药组合物的提取物,其中,所述提取物通过下述步骤制备所得:
(1)、按照重量比1:1称取青龙衣与淫羊藿药材;
(2)、加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分别为药材总重量的8倍、6倍,每次提取1小时,趁热倾出上清液,滤过,合并滤液;
(3)、减压浓缩干燥即得浸膏粉末。
上述技术方案所述的中药组合物,其中,青龙衣为30g,淫羊藿为30g。
上述技术方案所述的提取物,其中,所述提取物用于制备治疗肝癌的药物。
上述技术方案所述的中药组合物或上述技术方案所述的提取物在制备治疗肝癌药物中的应用。
上述技术方案所述的应用,其中,中药组合物或提取物具有下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达的作用。
上述技术方案所述的应用,其中,中药组合物或提取物的剂型为医学上可接受的剂型。
上述技术方案所述的应用,其中,中药组合物或提取物的剂型为粉剂、注射液、胶囊、片剂或口服液中的一种。
本发明具有以下有益效果:
1、本发明中药组合物及其提取物不仅配制简单,疗效好,无副作用,安全性高,有利于患者及时减轻病状,并且优于青龙衣与刺五加药材组合对肝癌的治疗,具有良好的开发前景及社会和经济效益。
2、本发明中药组合物及其提取物对人肝癌细胞株HepG2和鼠肝癌细胞株H22的抑瘤效果明显强于青龙衣与刺五加组合、单独使用青龙衣和单独使用淫羊藿。
3、本发明中药组合物及其提取物对人肝癌细胞株HepG2移植性肿瘤生长和鼠肝癌细胞株H22移植性肿瘤生长的抑瘤效果明显强于青龙衣与刺五加组合、单独使用青龙衣和单独使用淫羊藿。
附图说明:
1、图1是各给药组对HepG2肝癌细胞生长抑制率的影响;
2、图2是各给药组对H22肝癌细胞生长抑制率的影响;
3、图3是各给药组对小鼠HepG2移植性肿瘤平均瘤重的影响;
4、图4是各给药组对小鼠H22移植性肿瘤平均瘤重的影响;
5、图5是各组HepG2细胞中Bcl-2的表达;
6、图6是各组HepG2细胞中Bax的表达。
具体实施方式:
为使本发明的技术方案便于理解,以下结合具体实施例对本发明中药组合物及其提取物作进一步的说明。
实施例1:一种中药组合物:
一种中药组合物,由重量比1:1的青龙衣与淫羊藿组成。
实施例2:一种中药组合物:
一种中药组合物,由30g的青龙衣和30g淫羊藿组成。
实施例3:中药组合物提取物的制备:
(1)、按照重量比1:1称取青龙衣与淫羊藿药材;
(2)、加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分别为药材总重量的8倍、6倍,每次提取1小时,趁热倾出上清液,滤过,合并滤液,即得中药组合物提取物。
实施例4:中药组合物提取物的制备:
本实施例与实施例3相同,区别在于:步骤(1)中青龙衣为30g,淫羊藿为30g。
实施例5:中药组合物提取物浸膏粉末的制备:
将实施例3或4得到的中药组合物提取物减压浓缩干燥即得中药组合物提取物浸膏粉末。
以下结合具体实验例对本发明中药组合物(青龙衣与淫羊藿组合物)及其提取物在肝癌治疗中的有益效果作进一步说明。
一、实验材料:
1、药物及试剂:
青龙衣、淫羊藿、刺五加均购自河北省安国中药材市场,生产批号为20130322。环磷酰胺片由天津金世制药有限公司提供,生产批号20130613。生理盐水、MTT(四甲基偶氮唑盐)、苦味酸均由国药集团化学试剂北京有限公司提供,生产批号为20131012。胎牛血清购置于四季青公司,生产批号20130623。DMSO购置于Sigma公司,生产批号20130215。Bax及Bcl-2鼠抗人单抗、内参一抗(β-actin)购置Santa Cruz公司,生产批号20130808。
2、细胞及动物:
(1)细胞株:HepG2细胞系,H22肝癌瘤株,RH-35细胞系,BRL细胞系,均由军事医学科学院提供。
(2)动物:BALB/c小鼠,清洁级,雄性,6-8周龄,体重(20±2)g,购自军事医学科学院,动物合格证号SCXK-(军)2007-004。
3、材料及仪器:
Costar96孔细胞培养板(美国Corning公司);一次性0.22μm针筒式微孔滤膜(上海兴亚净化材料厂);RAK-2001耐高温塑料染色架(福州迈新);Forma恒温CO2培养箱(ThermoElectron Shanghai Instruments Co.,Ltd.);BioTek多功能酶标仪(Thermo ElectronShanghai Instruments Co.,Ltd.);ABI7500荧光定量PCR仪(美国CY-TECH);FA2004分析天平(上海天平仪器厂);ALC4239低温高速离心机(美国Sigma公司产品);725型超低温冰箱(美国Forma公司);SW-CJ-2FD超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)。
二、实验项目
所有处理数据均以表示,使用SPSS19.0统计软件中的单因素方差分析处理数据,用LSD法进行组间比较;否则采用非参数秩和检验,P<0.05表示有差异,P<0.01表示有显著性差异。
实验例1:以下实验例2~6中的各实验样品的提取制备:
(1)、本发明中药组合物(青龙衣与淫羊藿)的提取物浸膏粉末的制备:
精密称取青龙衣与淫羊藿药材各30g置圆底烧瓶中,加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分别为药材总重量的8倍、6倍,每次提取1小时,趁热倾出上清液,滤过,合并滤液,减压浓缩干燥即得浸膏粉末。
(2)、青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末的制备:
精密称取青龙衣与刺五加药材各30g置圆底烧瓶中,其余提取步骤同上。
(3)、青龙衣提取物浸膏粉末的制备:
精密称取青龙衣药材30g置圆底烧瓶中,其余提取步骤同上。
(4)、淫羊藿提取物浸膏粉末的制备:
精密称取青淫羊藿药材30g置圆底烧瓶中,其余提取步骤同上。
(5)、刺五加提取物浸膏粉末的制备:
精密称取刺五加药材30g置圆底烧瓶中,其余提取步骤同上。
实验例2:MTT法检测各给药组对人肝癌细胞株HepG2的影响:
将处于对数生长期的人肝癌细胞株HepG2用0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液稀释成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔100μl,在37℃、CO2培养箱中培养。培养HepG2细胞系至细胞生长到50-60%融合时,对照组培养液中加入溶解化合物所用的DMSO(二甲基亚砜)培养液,阳性组加入0.005g/mL环磷酰胺,青龙衣+淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL本发明中药组合物提取物浸膏粉末,青龙衣+刺五加组加入相当于原药材2g/mL青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末,青龙衣组加入相当于原药材2g/mL青龙衣提取物浸膏粉末,淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL淫羊藿提取物浸膏粉末,刺五加组加入相当于原药材2g/mL刺五加提取物浸膏粉末,各100μl,每孔总液体量为200μl。培养24h后,弃上清,加入0.5mg/ml的MTT检测细胞活性。方法如下:去上清,磷酸盐缓冲液(PBS)洗2遍,MTT、37℃孵育4小时,PBS洗2遍,DMSO溶解结晶,490nm测定吸光度。
实验结果:如表1和图1(图1为各给药组对HepG2肝癌细胞生长抑制率的影响,图中▲为P<0.05,▲▲为P<0.01)所示,环磷酰胺给药后对HepG2肝癌细胞的生长抑制率为63.15%,青龙衣+淫羊藿组给药后对HepG2肝癌细胞的生长抑制率为59.39%,青龙衣+刺五加组药后对HepG2肝癌细胞的生长抑制率为50.64%,青龙衣给药后对HepG2肝癌细胞的生长抑制率为43.88%,淫羊藿给药后对HepG2肝癌细胞的生长抑制率为36.40%,刺五加给药后对HepG2肝癌细胞的生长抑制率为33.29%。与对照组相比,阳性组和青龙衣+淫羊藿组的吸收值有显著差异(P<0.01),且青龙衣+淫羊藿组的抑瘤效果明显强于青龙衣与刺五加组、青龙衣组、淫羊藿组。说明该发明专利青龙衣与淫羊藿药物组合的抑瘤效果明显。
表1 各给药组对HepG2肝癌细胞存活力的影响
注:与对照组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。
实验例3:MTT法检测各给药组对鼠肝癌细胞株H22的影响:
将处于对数生长期的人肝癌细胞株H22用0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液稀释成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔100μl,在37℃、CO2培养箱中培养。培养H22细胞系至细胞生长到50-60%融合时,对照组培养液中加入溶解化合物所用的DMSO(二甲基亚砜)培养液,阳性组加入0.005g/mL环磷酰胺,青龙衣+淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL本发明中药组合物提取物浸膏粉末,青龙衣+刺五加组加入相当于原药材2g/mL青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末,青龙衣组加入相当于原药材2g/mL青龙衣提取物浸膏粉末,淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL淫羊藿提取物浸膏粉末,刺五加组加入相当于原药材2g/mL刺五加提取物浸膏粉末,各100μl,每孔总液体量为200μl。培养24h后,弃上清,加入0.5mg/ml的MTT测细胞活性。方法如下:去上清,磷酸盐缓冲液(PBS)洗2遍,MTT、37℃孵育4小时,PBS洗2遍,DMSO溶解结晶,570nm测定吸光度。
实验结果:如表2和图2(图2是各给药组对H22肝癌细胞生长抑制率的影响,图中▲为P<0.05,▲▲为P<0.01)所示,环磷酰胺给药后对H22肝癌细胞的生长抑制率为64.58%,青龙衣+淫羊藿组给药后对H22肝癌细胞的生长抑制率为55.32%,青龙衣+刺五加组药后对H22肝癌细胞的生长抑制率为42.62%,青龙衣给药后对H22肝癌细胞的生长抑制率为39.78%,淫羊藿给药后对H22肝癌细胞的生长抑制率为35.62%,刺五加给药后对H22肝癌细胞的生长抑制率为31.98%。与对照组相比,阳性组和青龙衣+淫羊藿组的吸收值有显著差异(P<0.01),且青龙衣+淫羊藿组的抑瘤效果明显强于青龙衣与刺五加组、青龙衣组、淫羊藿组。说明该发明专利青龙衣与淫羊藿药物组合的抑瘤效果明显。
表2 各给药组对H22肝癌细胞存活力的影响
注:与对照组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。
实验例4:人肝癌细胞株HepG2移植性肿瘤生长活性试验:
取70只雄性BALB/c小鼠,取0.2ml对数生长期的HepG2细胞(1×107/mL)注射到小鼠的右前腋窝皮下,24h后肿瘤体积长到足够测量的程度,将小鼠按肿瘤大小随机分为组:对照组加入等体积生理盐水、阳性组加入环磷酰胺0.05g/kg、青龙衣+淫羊藿组加入相当于原药材10g/kg(即每1kg小鼠给10g原药材)本发明中药组合物提取物浸膏粉末、青龙衣+刺五加组加入相当于原药材10g/kg青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末、青龙衣组加入相当于原药材10g/kg青龙衣提取物浸膏粉末、淫羊藿组加入相当于原药材10g/kg淫羊藿提取物浸膏粉末、刺五加组加入相当于原药材10g/kg刺五加提取物浸膏粉末。各给药组按0.2mL/10g灌胃给药,每日一次,连续15天。末次给药后处死小鼠,称取瘤重,计算抑瘤率。
实验结果:如表3和图3(图3是各给药组对小鼠HepG2移植性肿瘤平均瘤重的影响,图中▲为P<0.05,▲▲为P<0.01)所示,对照组瘤体重量为1.88±0.15g,阳性组瘤体重量为0.64±0.09g,抑瘤率为65.95%,青龙衣+淫羊藿组瘤体重量为0.81±0.13g,抑瘤率为56.91%,青龙衣+刺五加组瘤体重量为1.01±0.15g,抑瘤率为46.27%,青龙衣组瘤体重量为1.11±0.17g,抑瘤率为40.95%,淫羊藿组瘤体重量为1.21±0.12g,抑瘤率为35.63%,刺五加组瘤体重量为1.27±0.18g,抑瘤率为32.45%。与对照组相比,阳性组和青龙衣+淫羊藿组的吸收值有显著差异(P<0.05),且青龙衣+淫羊藿组的抑瘤效果明显强于青龙衣+刺五加组、青龙衣组、淫羊藿组。说明该发明专利青龙衣与淫羊藿药物组合对小鼠HepG2移植性肿瘤生长的抑瘤效果明显。
表3 各给药组对小鼠HepG2移植性肿瘤生长抑制情况
注:与对照组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。
实验例5:人肝癌细胞株H22移植性肿瘤生长活性试验:
取70只雄性BALB/c小鼠,取0.2ml对数生长期的H22细胞(1×107/mL)注射到小鼠的右前腋窝皮下,10天后,肿瘤体积长到足够测量的程度,将小鼠按肿瘤大小随机分为组:对照组加入等体积生理盐水、阳性组加入环磷酰胺0.05g/kg、青龙衣+淫羊藿组加入相当于原药材10g/kg(即每1kg小鼠给10g原药材)本发明中药组合物提取物浸膏粉末、青龙衣+刺五加组加入相当于原药材10g/kg青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末、青龙衣组加入相当于原药材10g/kg青龙衣提取物浸膏粉末、淫羊藿组加入相当于原药材10g/kg淫羊藿提取物浸膏粉末、刺五加组加入相当于原药材10g/kg刺五加提取物浸膏粉末。各给药组按0.2mL/10g灌胃给药,每日一次,连续15天。末次给药后处死小鼠,称取瘤重,计算抑瘤率。
表4 各给药组对小鼠H22移植性肿瘤生长抑制情况
注:与对照组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。
实验结果:如表4和图4(图4是各给药组对小鼠H22移植性肿瘤平均瘤重的影响,图中▲为P<0.05,▲▲为P<0.01)所示,对照组瘤体重量为1.76±0.21g,阳性组瘤体重量为0.65±0.09g,抑瘤率为63.06%,青龙衣+淫羊藿组瘤体重量为0.76±0.16g,抑瘤率为56.81%,青龙衣+刺五加组瘤体重量为0.89±0.15g,抑瘤率为49.43%,青龙衣组瘤体重量为1.03±0.17g,抑瘤率为41.47%,淫羊藿组瘤体重量为1.09±0.12g,抑瘤率为38.35%,刺五加组瘤体重量为1.11±0.13g,抑瘤率为36.93%。与对照组相比,阳性组和青龙衣+淫羊藿组的吸收值有显著差异(P<0.05),且青龙衣+淫羊藿组的抑瘤效果明显强于青龙衣+刺五加组、青龙衣组、淫羊藿组、刺五加组。说明该发明专利青龙衣与淫羊藿药物组合对小鼠H22移植性肿瘤生长的抑瘤效果明显。
实验例6:Western-blot检测各组细胞对Bcl-2、Bax在蛋白水平的表达差异:
将处于对数生长期的人肝癌细胞株HepG2用0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液稀释细胞,分装于培养瓶中,培养瓶中的细胞浓度为2×105个/mL,在37℃、CO2培养箱中培养。培养24h后,每瓶加1mL的药液,即对照组培养液中加入溶解化合物所用的DMSO(二甲基亚砜)培养液,阳性组加入0.005g/mL环磷酰胺,青龙衣+淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL本发明中药组合物提取物浸膏粉末,青龙衣+刺五加组加入相当于原药材2g/mL青龙衣与刺五加提取物浸膏粉末,青龙衣组加入相当于原药材2g/mL青龙衣提取物浸膏粉末,淫羊藿组加入相当于原药材2g/mL淫羊藿提取物浸膏粉末,刺五加组加入相当于原药材2g/mL刺五加提取物浸膏粉末。
药物作用24h后胰酶消化收集细胞。RIPA裂解液(含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)裂解细胞并收集蛋白,Bradford法蛋白定量检测试剂盒测定蛋白浓度。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离50μg蛋白,电转移至硝酸纤维素膜。膜用含3%脱脂奶粉的TBST缓冲液封闭30min,分别加入待测一抗4℃孵育过夜漂洗3次后加辣根过氧化物酶标记的二抗,室温作用1h,漂洗3次。加发光剂(ECL)反应,保鲜膜包裹,暗室进行X线胶片曝光、显影和定影。用Image-Pro Plus5.1图像分析软件对各蛋白条带和β-actin条带进行分析,以各条带的灰度值代表其蛋白的表达量,用β-actin条带灰度值进行校正,得出各条带的相对灰度值实验重复3次,取平均值。
实验结果:
(1)各组HepG2细胞中Bcl-2的表达
Western Blot结果由图5(图5为各组HepG2细胞中Bcl-2的表达,其中1为对照组,2为阳性组,3为青龙衣+淫羊藿组,4为青龙衣+刺五加组,6为淫羊藿组,7为刺五加组)可见,β-action作为内参,Bcl-2在对照组、阳性组、青龙衣+刺五加组、青龙衣组、淫羊藿组、刺五加组均有表达,其在青龙衣与淫羊藿组中表达较对照组明显降低,其表达量为对照组的65.43%。
(2)各组HepG2细胞中Bax的表达
Western Blot结果由图6(图6为各组HepG2细胞中Bax的表达,其中1为对照组,2为阳性组,3为青龙衣+淫羊藿组,4为青龙衣+刺五加组,6为淫羊藿组,7为刺五加组)可见,β-action作为内参,Bax在对照组、阳性组、青龙衣+刺五加组、青龙衣组、淫羊藿组、刺五加组均有表达,其在青龙衣与淫羊藿组中表达较对照组明显升高,其表达量为对照组的211.05%。
综上可知,Bcl-2和Bax作为凋亡相关基因,二者的作用是相互相反的,两者共同影响着肿瘤的生物学行为。通过给药后Bcl-2和Bax蛋白水平的变化来看,说明青龙衣与淫羊藿组合诱导肿瘤细胞的凋亡可能是通过下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达,而达到抗肿瘤作用。
本发明提供的中药组合物以及中药组合物的提取物不仅配制简单,疗效好,无副作用,安全性高,有利于患者及时减轻病状,并且优于青龙衣与刺五加药材组合对肝癌的治疗,具有良好的开发前景及社会和经济效益。
以上所述,仅为本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何形式上和实质上的限制,凡熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用以上所揭示的技术内容,而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化,均为本发明的等效实施例;同时,凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变,均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种用于治疗肝癌的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物由青龙衣和淫羊藿组成,其中青龙衣与淫羊藿的重量比为1:1。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:青龙衣为30g,淫羊藿为30g。
3.根据权利要求1或2所述的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物用于制备治疗肝癌的药物。
4.一种用于治疗肝癌的中药组合物的提取物,其特征在于,所述提取物通过下述步骤制备所得:
(1)、按照重量比1:1称取青龙衣与淫羊藿药材;
(2)、加水浸泡30min后回流提取2次,加水量分别为药材总重量的8倍、6倍,每次提取1小时,趁热倾出上清液,滤过,合并滤液;
(3)、减压浓缩干燥即得浸膏粉末。
5.根据权利要求4所述的一种用于治疗肝癌的中药组合物的提取物,其特征在于:青龙衣为30g,淫羊藿为30g。
6.根据权利要求4或5所述的提取物,其特征在于:所述提取物用于制备治疗肝癌的药物。
7.权利要求1~3中任一项权利要求所述的中药组合物或权利要求4~6中任一项权利要求所述的提取物在制备治疗肝癌药物中的应用。
8.权利要求7所述的应用,其特征在于:中药组合物或提取物具有下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达的作用。
9.权利要求7或8所述的应用,其特征在于:中药组合物或提取物的剂型为医学上可接受的剂型。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:中药组合物或提取物的剂型为粉剂、注射液、胶囊、片剂或口服液中的一种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410361010.8A CN104116778B (zh) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | 一种中药组合物、其提取物及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410361010.8A CN104116778B (zh) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | 一种中药组合物、其提取物及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104116778A CN104116778A (zh) | 2014-10-29 |
CN104116778B true CN104116778B (zh) | 2017-09-29 |
Family
ID=51762558
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410361010.8A Expired - Fee Related CN104116778B (zh) | 2014-07-25 | 2014-07-25 | 一种中药组合物、其提取物及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104116778B (zh) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101091736A (zh) * | 2006-06-22 | 2007-12-26 | 黑龙江省中医研究院 | 一种治疗肿瘤的中药组合物及其制备方法 |
-
2014
- 2014-07-25 CN CN201410361010.8A patent/CN104116778B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101091736A (zh) * | 2006-06-22 | 2007-12-26 | 黑龙江省中医研究院 | 一种治疗肿瘤的中药组合物及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104116778A (zh) | 2014-10-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101862351B (zh) | 没食子有效部位在制备抗溃疡性结肠炎的药物的用途 | |
CN104116755A (zh) | 一种具有调节肿瘤微环境功效的灵芝、枸杞及黄精复合多糖及其制备方法和应用 | |
CN102861193B (zh) | 一种治疗胃癌的中药组合物 | |
CN106668041A (zh) | 重楼皂苷vi在制备抗肺癌药物中的应用 | |
CN102858359B (zh) | 一种含有醇溶性且非水溶性甘草提取物的药物组合物,及其药物制剂、制药用途、治疗方法和制备方法 | |
CN102008563B (zh) | 一种抗癌中药及其配制方法 | |
CN104116778B (zh) | 一种中药组合物、其提取物及应用 | |
CN105327115B (zh) | 一种防治ⅱ型糖尿病桑黄通泻配方及制备工艺 | |
CN102423384B (zh) | 一种治疗肺癌的中药制剂及其制备方法 | |
CN104367673B (zh) | 一种治疗鸡球虫的中药组合物 | |
CN103768570B (zh) | 一种治疗急性胆囊炎的中药组合物及其制备方法 | |
CN103191267B (zh) | 一种治疗肝癌的中药组合物 | |
CN106309758A (zh) | 一种抗胃肠癌的药物组合物 | |
CN102233084B (zh) | 一种用于治疗前列腺炎的中药组合物及其制备方法 | |
CN103191268B (zh) | 一种治疗肺癌的中药组合物 | |
CN104587017B (zh) | 一种清热通腑,行气活血的药物组合物及其制备方法和用途 | |
CN104069149A (zh) | 一种采用熊胆为基质的中药饮片炮制方法 | |
CN103330824A (zh) | 一种治疗肝损伤的蒙药 | |
Leng | A Comprehensive Review on Botany, Phytochemistry, Traditional Uses, Pharmacology, Analytical Methods, Processing Methods, Pharmacokinetics and Toxicity of Pulsatilla chinensis. | |
CN1981812B (zh) | 一种治疗艾滋病的中药制剂及其制备方法 | |
CN108079169A (zh) | 用于预防和治疗动脉粥样硬化及其并发症的中药组合物、中药制剂及应用 | |
CN111568935B (zh) | 赤苍藤提取物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN109602775B (zh) | 乳苣醇提物在制备抗乳腺癌药物中的用途 | |
CN102210725B (zh) | 田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的用途 | |
CN105055933B (zh) | 一种用于治疗癌症中药组合物及其制备方法、制剂与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170929 Termination date: 20180725 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |