CN102906244A - 片状细胞培养物解离系统 - Google Patents

片状细胞培养物解离系统 Download PDF

Info

Publication number
CN102906244A
CN102906244A CN2011800215972A CN201180021597A CN102906244A CN 102906244 A CN102906244 A CN 102906244A CN 2011800215972 A CN2011800215972 A CN 2011800215972A CN 201180021597 A CN201180021597 A CN 201180021597A CN 102906244 A CN102906244 A CN 102906244A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
cell culture
sheet
size
reaction vessel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011800215972A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102906244B (zh
Inventor
山本敬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Terumo Corp
Original Assignee
Terumo Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Terumo Corp filed Critical Terumo Corp
Publication of CN102906244A publication Critical patent/CN102906244A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102906244B publication Critical patent/CN102906244B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/04—Cell isolation or sorting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/02—Separating microorganisms from the culture medium; Concentration of biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/06—Quantitative determination
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

一种用于将片状细胞培养物解离成单个细胞的系统，其为在将片状的细胞培养物解离成单个细胞时用于使细胞的损伤达到最低限度的系统，所述系统包括：（i）使片状细胞培养物解离的反应部，（ii）用于获取存在于反应部内的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部、以及（iii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。

Description

片状细胞培养物解离系统
技术领域
本发明涉及用于解离片状的细胞培养物的系统及方法、以及用于评价片状的细胞培养物的解离状态的系统及方法。
背景技术
虽然近年心脏病治疗在不断革新进步，但仍然没有建立起重症心力衰竭的治疗体系。作为心力衰竭的治疗法，进行的是利用β阻滞剂、ACE抑制剂的内科治疗，但对于这些治疗不很奏效的重症化的心力衰竭，则进行辅助人工心脏、心脏移植等置换型治疗，也即外科治疗。
这类成为外科治疗对象的重症心力衰竭包括多种起因，如进行性心脏瓣膜症、高度的心肌缺血所致、急性心肌梗塞和其合并症、急性心肌炎、缺血性心肌病（ICM）、扩张型心肌病（DCM）等所致的慢性心力衰竭及其急性加重等。
根据上述原因和重症度，而应用瓣膜成形术/置换术、冠状动脉架搭桥术、左心室成形术、机械辅助循环等。
其中，对于ICM、DCM所致的高度左心室功能低下导致的心力衰竭而言，仅仅心脏移植和利用了人工心脏的置换型治疗可以视为其的有效治疗方法。但是，这些重症心力衰竭患者的置换型治疗存在慢性的供体不足、需要持续进行免疫抑制、引发合并症等很多需要解决的问题，难以称为适用于所有重症心力衰竭的普适治疗法。
由于这样严峻的心脏移植现状，在一个时期内曾尝试进行巴提斯塔（Batista operation）术等其它外科治疗，虽然作为心脏移植的代替治疗而广受关注，但最近这些手术的限制也逐渐显现，需要在手术法的改良和适应性的确立方面继续努力。
由这样的现状出发，作为重症心力衰竭治疗的解决方案，正在不断推进新型再生医疗的开发。
在重症心肌梗塞等中，心肌细胞陷入功能衰竭，进而发生成纤维细胞的增殖、间质纤维化，而呈现心力衰竭。随着心力衰竭的加重，心肌细胞受损直至细胞死亡，由于心肌细胞几乎不发生细胞分裂，因此心肌细胞数减少，心脏功能下降进一步加剧。
对于这类重症心力衰竭患者的心脏功能恢复而言，细胞移植法被认为是有用的，并已经开始了自身骨骼肌成肌细胞的临床应用。
近年，针对这些问题，通过使用利用组织工程学的温度响应性培养皿，提供一种包括来自于成体心肌以外部分的细胞的、能够用于心脏的三维结构的片状细胞培养物和其制造方法（专利文献1）。
在临床应用这样的细胞培养物时，为了确保其有效性、安全性，需要通过实施品质试验来进行品质管理。并且，在进行片状的细胞培养物的品质试验时，还需要对构成细胞培养物的细胞的细胞数、存活性、纯度等进行确认，但为了进行这些评价，利用酶将细胞培养物消化等而解离成单个细胞也是必不可少的。现状是，细胞培养物的解离例如如下进行：将细胞培养物放入管中，加入胰蛋白酶等酶，在培养箱内通过酶反应进行细胞间结合的解离，在规定时间后由培养箱取出，搅拌管内，确认细胞培养物的解离状态，在未完全解离时，再次放入培养箱内，然后手动重复同样的操作直至细胞培养物完全解离。
为了适当进行解离细胞的评价，利用酶反应的细胞培养物的解离需要充分进行使得不残留细胞块等。另一方面，当酶反应时间过长时会损伤细胞，从而不适合进行细胞的评价。因此，用于细胞培养物的解离的酶反应需要设置为必要的最低限度，为了适当进行细胞培养物的解离，需要在酶反应中再三确认解离的状态。但是，截至目前尚不存在用机械收到评价细胞培养物的解离状态的手段，需要操作者以肉眼进行确认，难以使酶反应时间达到最佳且导致操作者劳动量的增大。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2007－528755号公报
发明内容
发明要解决的问题
本发明涉及的是，为了对用于人及动物的疾病、伤病的治疗的片状的细胞培养物进行品质管理，通过酶消化等将细胞培养物适当解离。为了适当进行解离细胞的特性确认，需要以不伤害细胞的必要的最低限度的解离操作来制备可靠地进行了解离的、不残留细胞块的细胞。
本发明的目的在于提供能够简便可靠地进行构成细胞培养物的细胞的解离操作的系统，以制备适合实施片状细胞培养物的品质管理的细胞。
用于解决问题的方案
本发明人发现，为了在解离片状细胞培养物时获得适合品质管理的细胞，需要加入胰蛋白酶等细胞解离剂并在适于酶反应的温度条件下边适当搅拌边频繁地确认细胞的解离状态。并且发现，超过必要量的酶处理、搅拌操作会损伤细胞，进而会增大污染的风险，因此应使解离处理停止于最低限度，反复进行研究结果发现，可以基于细胞的粒度分布用机械手段评价片状细胞培养物的解离状态，使全部作业自动化，从而完成了本发明。
即，本发明涉及以下方案。
（1）一种用于将片状细胞培养物解离成单个细胞的系统，其包括：
（i）使片状细胞培养物解离的反应部，
（ii）用于获取存在于反应部内的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部，以及
（iii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。
（2）根据上述（1）所述的系统，其中，片状细胞培养物含有骨骼肌成肌细胞。
（3）根据上述（1）或（2）所述的系统，其包括用于对反应部内的细胞的解离进行调整的反应调整部。
（4）根据上述（3）所述的系统，反应调整部包括环境调整部、化学作用调整部及机械作用调整部中的至少一者。
（5）一种用于在将片状细胞培养物解离成单个细胞的处理中判断片状细胞培养物的解离状态的系统，其包括：
（i）获取接受解离处理的片状细胞培养物中的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部，和
（ii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。
（6）一种将片状细胞培养物解离成单个细胞的方法，其包括：
（i）将片状细胞培养物供于解离处理的工序，
（ii）获取接受解离处理的片状细胞培养物的细胞的粒度分布的相关信息的工序，和
（iii）由获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的工序。
（7）一种判断片状细胞培养物的解离状态的方法，其包括基于接受解离处理的片状细胞培养物中的细胞的粒度分布判断并输出解离状态的工序。
（8）根据上述（6）或（7）所述的方法，片状细胞培养物含有骨骼肌成肌细胞。
发明的效果
根据本发明的系统，由于调制了适合实施片状细胞培养物的品质管理的细胞，因此不仅能够简便、可靠且自动地进行构成片状细胞培养物的细胞的解离操作、使解离操作对细胞的损伤降至最低，而且能够大幅消减操作者的劳动量。此外，通过与细胞培养用的培养箱以及片状细胞培养物的剥离装置、用于解析解离细胞的特性的装置如：用于测定细胞数的细胞计数装置（例如ベックマン公司制造的库尔特（coulter）计数器）、用于测定存活性的死活细胞自动测定装置、用于测定纯度的流式细胞仪一体化，还能够使从细胞的培养、片状的细胞培养物的制作、至其品质管理实现自动化。
附图说明
图1是本发明系统的一个方式的框图。
图2是本发明系统的一个方式的解离判定处理的流程图。
图3是进行了解离的、不含聚集物的片状细胞培养物的粒度分布图。
图4是解离过程中的、含有聚集物的片状细胞培养物的粒度分布图。
图5表示本发明系统的一个方式的整体图。
图6表示本发明系统的一个方式的部分剖面图。
图7是本发明系统的一个方式中的解离判定处理的流程图。
图8是本发明系统的一个方式中的温度调整子程序处理的流程图。
具体实施方式
本发明涉及用于将片状细胞培养物解离成单个细胞的系统，所述系统包括：
（i）使片状细胞培养物解离的反应部，
（ii）用于获取存在于反应部内的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部
（iii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。
本系统还可以任选包含用于对反应部内的细胞的解离进行调整的反应调整部。
在本发明的系统中进行解离的“片状细胞培养物”中包括可以形成片状细胞培养物的任意的细胞。对所述细胞的例子没有限定，包括成肌细胞（例如骨骼肌成肌细胞）、心肌细胞、成纤维细胞、滑膜细胞、上皮细胞、内皮细胞等。这些之中，本发明中优选形成单层的细胞培养物的细胞，如成肌细胞等。细胞可以来自于能够利用细胞培养物进行治疗的任意的生物。所述生物没有限定，包括例如人、非人灵长类、犬、猫、猪、马、山羊、绵羊等。此外，片状细胞培养物的形成中使用的细胞既可以仅为1种，也可以使用2种以上细胞。本发明的优选方式中，在形成细胞培养物的细胞为2种以上时，最多的细胞的比率（纯度）在细胞培养物制造结束时为65％以上，优选为70％以上，更优选为75％以上。
本发明中，“片状细胞培养物”是指细胞彼此连结呈片状（sheet-shaped）的培养物，典型的是由1个细胞层构成的培养物，也包括由2个以上细胞层构成的培养物。细胞彼此可以直接和／或介由中间物而相互连结。作为中间物，只要是至少能够使细胞彼此物理地（机械地）连结的物质即可，没有特别限定，可以列举出例如胞外基质等。中间物优选为来源于细胞的物质，尤其是来源于构成细胞培养物的细胞的物质。细胞虽然至少进行物理性（机械性）连结，也可以进一步进行功能性连结，如化学性连结、电连结。
本发明中，作为解离处理的对象的片状细胞培养物既可以是附着于培养容器等培养基材的状态，也可以是由培养基材剥离的状态。在前者的情况下，既可以由培养装置中将片状细胞培养物连同培养基材一起组装到本系统中，也可以同时进行由基材剥离和细胞彼此的解离。在后者的情况下，既可以将放入了由基材剥离的片状细胞培养物的容器用作本系统的反应容器，也可以从容器中取出已剥离的片状培养物，转移至本系统的反应容器中。此外，本发明中的片状细胞培养物还可以是以在同一条件下制作的多个片状细胞培养物所构成的片状细胞培养物组为代表的培养物。
本发明中，片状细胞培养物优选不包含支架（支持体）。该技术领域中，有时为了使细胞附着在其表面上和／或其内部而维持细胞培养物的物理一体性而使用支架，已知的是例如聚偏氟乙烯（PVDF）、聚乳酸（PLA）、聚醇酸（PGA）制膜等合成聚合物支架等，本发明的细胞培养物即使在不存在该支架时也能够维持其物理一体性。此外，本发明中的细胞培养物优选仅包含来源于构成细胞培养物的细胞的物质，不含其以外的物质。在片状细胞培养物包含支架时，可以包括在获取粒度分布的相关信息之前去除该支架的工序。
本发明中，“反应部”是指在其中进行片状细胞培养物的解离、由其获取粒度分布的相关信息的部分，包括收纳片状细胞培养物的反应容器和支持其的支持部。反应容器和支持部既可以彼此分离，也可以一体化。
反应容器只要能够收纳片状细胞培养物、进行解离处理、获取粒度分布相关信息即可，没有特别限定，既可以是市售的细胞用容器、例如培养皿、管、烧瓶等，也可以是为了本发明而特别制作的容器，可以包括各种材质、形状及尺寸的容器。片状细胞培养物的解离由于是在例如培养基、生理盐水、PBS等适合细胞生存的介质中用细胞解离剂等进行作用来进行，因此反应容器的材质优选具有不使这些液体通过的性状、在细胞解离剂等作用下不劣化或不易劣化的性状、和／或对细胞的状态无影响的性状。此外，就形状而言，既可以是具有1或2个以上的面、边和／或顶点的多角体、锥体、球体、半球体、或这些的组合等，也可以具有用于观察细胞的至少1个平坦面。尺寸也没有特别限定，可以根据片状细胞培养物的大小、粒度分布相关信息的获取方法等适当确定。优选的尺寸可以列举出例如最大截面面积为1～400cm2、4～225cm2、9～144cm2、16～100cm2、25～81cm2或截面的最大直径为1～20cm、2～15cm、3～12cm、4～10cm、5～9cm，等。反应容器既可以是可多次使用的，也可以是一次性的。此外，就反应容器而言，既可以是其至少1部分、例如其上表面开放，进而为了避免污染等，也可以是开放部可以根据希望而用盖等封闭。
支持部只要是具有能够至少稳定地支持反应容器的结构即可，没有特别限定，可以利用市售的各种培养箱、恒温槽、加热块、热板、振荡器等，也可以是为了本发明而特别制作的构件。
反应部（反应容器和／或支持部）的整体或一部分可以用光透过性的材质制作。在至少使反应容器为光透过性的材质、尤其是透明的材质时，可以从反应容器的外部获取与反应容器内的片状细胞培养物的解离状态有关的光学信息（例如图像、激光衍射像等），而无需打开反应容器。此时，只要是光学信息的获取所必需的部分为光透过性即可，其以外的部分为遮光性时也能获得相同的效果。此外，为了阻止外部光的影响，可以用遮光性材料包覆反应容器的周围。
反应部可以利用具有适合于所使用的粒度分布测定法的性状的结构，也可以制成该性状。例如，在利用使用光学信息的图像解析法、激光衍射散射法等作为粒度分布测定法时，可以使反应容器的至少1部分为透明、或者为开放状态。此外，为了能够均一地测定细胞的状态，可以将反应容器的底面制成平坦状；为了避免图像获取时、激光照射时细胞彼此在平面上重合，可以按照使反应容器的底面积与解离处理前的片状细胞培养物的表面积相同、比其更大、如为片状细胞培养物的表面积的1.1倍以上、1.25倍以上、1.5倍以上、2倍以上等方式制作。此外，传感器部可以设置用于导出解离处理中的细胞的取样口。取样口为例如树脂、金属的管，可以设置为能够吸取解离处理中的细胞的结构。在获取光学信息时需要利用光源的情况下，可以在反应部、例如支持部设置光源、例如灯，与灯连接的光纤，激光，用于反射光的手段、例如反射板等。光源可以设置在例如反应容器的光透过性部分附近的支持部。光源的位置只要能够使传感器部良好地获取图像即可，没有特别限定，可以配置在反应容器的上方、下方、侧方中的任一处或在这些中的2个以上位置配置多个光源。此外，还可以制成支持部可以支持多个反应容器的形式，从而能够同时或依次地由多个反应容器获取信息。
在利用电感带（Electrical Sensing Zone Method）法时，可以制成例如下述方式：将反应容器设置为介由电感带法用细孔（aperture）分隔成至少2部分的结构，能够获取解离处理中的细胞通过细孔时电压脉冲的变化等的数据。具体而言，例如，支持部可以采取如下结构：通过调整上述至少2部分的高度，反应容器内的细胞由于自重及因重力所产生的水流而通过细孔。此时，例如还可以采取以细孔分隔成的2部分彼此上下错开，细胞介由细孔往返于两部分的结构。数据既可以在细胞由一个部分移动至另一部分时和返回时的两个时刻获取，也可以在其中任意一个时刻获取。当在任意一个时刻获取时，还可以设置仅在不获取数据时开放的、连接两部分的其它联络部。在另一方式中，可以采取如下结构：使反应容器呈略面包圈状的形态，在其至少1个位置设置通过细胞的细孔，对反应容器内进行循环且产生通过细孔的水流，细胞随着该水流通过细孔。上述任意一个方式中，为了避免细胞附着于细孔周围和损伤，可以将细孔的上游制成圆锥（taper）形状（研钵状）。这里，“上游”是以细胞的流动方向为基准的，在细胞仅沿着一个方向流动时，可以使细孔相应侧为圆锥形状，在能够沿着两个方向流动时，可以使细孔的两侧为圆锥形状。通过采取上述这样的结构，可以同时并行地进行利用液流促进细胞彼此的解离和粒度分布相关信息的获取。
本发明中的“传感器部”是用于获取存在于反应容器内的细胞的粒度分布的相关信息的部分。作为粒度分布的相关信息，可以列举出图像、例如静止画面及动画等，电信号的变化、激光衍射像及3维计测值等，可以获取适合于所利用的特定的粒度分布的计算方法的信息。作为粒度分布的计算方法，可以利用已知的任意方法，例如图像解析法、激光衍射散射法、电感带法、或将它们组合而成的方法等。
图像解析法为如下方法：解析所获取的图像，测定图像中包含的粒子（例如细胞等）的尺寸、数量，基于此计算粒度分布的方法，具体而言，例如由以CCD相机、显微镜和CCD相机组合而成的装置获取的图像，例如提取各个细胞或细胞块的轮廓，计算尺寸的相关指标如短轴径、长轴径、定方向接线径（Feret径）、定方向最大径（Krummbein径）、定方向等分径（Martin径）、长短平均径、外接长方形相当径、正方形相当径、圆相当径（Heywood径）、投影面积等，对这些进行累积而计算粒度分布。为了提取各个细胞或细胞块的轮廓，可以利用强调所述轮廓的图像，例如暗视野像、相位差像、微分干涉像等。此外，为了强调细胞的轮廓，还可以利用用于对细胞质、细胞膜进行染色的染料，对细胞进行染色。图像解析法由于在至少具有用于获取反应容器内的图像的手段、例如CCD相机等时即可实行，因此可以简化装置，此外，选择的自由度也高。
图像既可以从反应容器整体获取，也可以从反应容器的一部分获取。当从反应容器的一部分获取时，既可以从反应容器的1个位置获取，也可以从多个位置如2、3、4、5、6、7、8、9、10个位置或更多位置获取。此外，还可以通过取样口从反应容器的一部分、或多个位置进行取样。
激光衍射散射法是对介质中的粒子（例如细胞等）照射激光并基于此时生成的激光的衍射散射像计算粒子分布的方法。在对粒子照射激光时，由于会根据粒子的尺寸生成特有的衍射散射图案，因此可以利用其推测粒子的尺寸。例如，当粒子相对于激光的光束大时，衍射散射光集中在前方（激光的行进方向），但随着粒子减小，衍射散射光的分布域扩展到侧方，当粒子进一步减小时，甚至能扩展到后方。因此，通过检测衍射散射光的分布（例如光强度分布等），可以推测各个粒子的尺寸。该方法由于检测衍射散射光的分布，因此数据处理较简单，测定时间也短，因此能够在短时间内计算粒度分布。因此，容易高频度进而实时地进行粒度分布的计算。此外，通过调节检测部的检测位置、检测灵敏度，还能够仅检测例如某一尺寸以上、或某一尺寸以下的粒子，从而能够仅获取必要数据而不必获取全部粒子的数据，能够提高处理效率。
衍射散射像既可以从反应容器整体获取，也可以从反应容器的一部分获取。在从反应容器的一部分获取时，既可以从反应容器的1个位置获取，也可以从多个位置如2、3、4、5、6、7、8、9、10个位置或更多位置获取。此外，还可以通过取样口从反应容器的一部分、或多个位置进行取样。
电感带法是利用电解质溶液中的粒子通过细孔时的细孔内的电解质溶液的电阻（impedance）的变化来推测粒子的体积的方法。在粒子通过细孔时，在细孔中，相当于粒子体积的量的电解质溶液被粒子置换，从而细孔内的电解质溶液的电阻与被置换的电解质溶液的体积相应地变化，因此可以通过例如细孔内流动的电流、电压脉冲的变化来计测该变化。本方法由于利用电学的测定值，因此数据处理较简单，此外，即使在难以提取细胞或细胞块的轮廓的条件下也能应用。
传感器部还包括用于获取上述计算方法所需信息的手段。例如，在图像解析法中，还包含光学上用于放大或缩小图像的镜头、CCD相机、光源、反射板、放大器（例如光信号放大器、电信号放大器）等。此外，电感带法中，还包含电气·电子电路、细胞所通过的细孔（aperture）、用于测定电阻或电压脉冲的元件、数字波形解析处理电路等。此外，激光衍射散射法中，还包含激光、傅里叶镜头、多功能检测器（Multi Detector）、CMOS传感器等。
传感器部进而还可以用于获取反应部内的环境的相关信息，例如，可以计测反应部内的温度、湿度、压力、照度、二氧化碳浓度、酶浓度、振动等信息。
予以说明，这些信息（包括粒度分布相关信息及反应部内环境相关信息）既可以是某一特定时点的信息，也可以是在一定间隔内获得的多个时点的信息，还可以是实时获取的信息。
传感器部既可以与反应部分开，也可以与其一体化。例如，传感器部可以设置在反应容器的上方、侧方和／或下方的支持部。当反应部具有多个反应容器时以及本发明系统具有多个反应部时，既可以与反应容器、反应部设置相同数量的传感器部，也可以使1个传感器部负责多个反应容器、反应部。此时，可以将传感器部的设置场所固定，使反应容器、反应部移动至相应的传感器部的测定位置；也可以相反地将反应容器、反应部固定，使传感器部移动至与各反应容器、反应部相应的测定位置。在前者的情况下，例如，通过将支持部制作为能够旋转，从而可以旋转支持部使得呈环状地排列在支持部上的多个反应容器依次移动至测定位置。
本发明中的“解析部”为接受来自传感器部的信息并对该信息进行解析的部分。解析部至少包括接受来自传感器部的信息并对该信息进行解析的处理器，进而还可以包括存储部、控制部、输入部及输出部等。存储部是用于保存由传感器部接受的信息、解析结果等的部分，包括各种电子存储介质、例如半导体存储器、硬盘等。控制部是基于解析结果而将信号等送至反应调整部等的部分，包括信号发生回路等。输入部是系统利用者或其它系统根据需要而输入设定参数等信息的部分，包括各种输入接口如由其它系统接受电、光等信号的手段（电线、光线、连接器、无线通信装置等）、按钮、键盘、触控板等。输出部是基于解析结果而发出规定信号的部分，包括各种输出端口，如将电、光等信号传递至其它系统等的手段（电线、光纤、连接器、无线通信装置等）、监视器、打印机、显示灯、蜂鸣器、声音合成装置等。输入部和输出部可以是包括输入端口和输出端口的、以输入输出端口形式一体化的结构，也可以利用用于此的通用的计算机。
解析部进行如下这样的处理。首先，接受来自传感器部的信息，计算细胞的粒度分布、反应部内的环境并作为测定参数，与设定参数进行比较。然后，由比较结果判断细胞的解离状态、反应部内的状态，确定解离是否已完成、是否停止解离处理等。解离状态的解析所必需的设定参数既可以是已预先确定的参数，也可以是系统的利用者由输入部输入的参数。在判断为解离已完成时，可以由控制部输出解离操作停止信号，在判断为解离不充分时，可以由控制部输出用于使解离反应进行的信号。
解离操作停止信号的输出可以是在解离不充分、如超过规定的设定时间时、达到规定的解离状态时等。作为规定的设定时间例如可以采用0.5～30分钟，1～25分钟，2～20分钟，3～15分钟，4～12分钟，5～10分等，没有限定，此外，作为规定的解离状态，可以采用例如单细胞的个数或体积比率为全部的50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上等的状态。即使是聚集物以某种程度存在，也可以使用细胞筛网等分离装置除去聚集物，仅取出在为了后续品质管理而进行的各种测定操作中能够使用的单细胞。
上述信号被送至反应调整部，进行解离操作的调整。此外，控制部还可以进行传感器部的控制，可以控制反应部内的测定场所、测定时间。由此，上述设定参数还可以是包括了考虑时间变化的类型（pattern）的参数。输出部中可以监视并显示设定参数、测定参数、由传感器部获取的图像等，也可以进行用于通知解离完成的指示器的点亮输出。解离完成可以通过蜂鸣器、声音提醒等声音输出通知利用者，也可以介由电信号、光信号等传递到其它系统。
计算的粒度分布与设定参数的比较可以以各种方式进行。例如，由获取的粒度分布相关信息计算平均粒径，如个数平均径、长度平均径、面积平均径、质量平均径、平均表面积径、平均体积径、比表面积球相当径、中位径（中值粒径）、众数径等，但并非仅限于此，将其与相应的设定平均粒径比较；将规定粒径以上或规定粒径以下的粒子数或其相对于体积或整体的比率与相应的设定值比较；与设定了粒度分布图的形状的形状进行比较。当细胞彼此的解离未充分进行时，由于多个细胞结合而成的细胞块（聚集物）的残存数多，因此与解离完全的状态即一个细胞块也不存在的状态、或解离充分进行的状态相比，通常平均粒径大、规定粒径以上的粒子的个数或其相对于体积或整体的比率大，并且，粒度分布图的形状变成：除了以单细胞的平均粒径为中心的峰以外，在粒径较大的方向（通常为图的右侧）具有1或2个以上的其它峰。随着解离处理的进行，细胞块逐渐解离成单个细胞，上述测定参数逐渐变化。并且，可以设定为：当上述测定参数与设定参数一致时则判断为解离完成。
本系统自身和／或系统的利用者可以基于解析部所输出的信息对设定参数进行变更、取出完成解离的细胞并送至下一工序、对完成解离的细胞进行下一步处理。设定参数不仅可以预先设定各种细胞的粒度分布的相关参数，还能够预先设定解离反应的特性、适合解离调整的温度、酶浓度、处理时间、振动的振幅、周期等。此外，输入部还可以兼做操作开关，介由传感器部操作相机、光源等，把握细胞的解离状态，由输入部手动输入、更改最适的设定参数。进而，通过在存储部存储上述一连的设定参数的变更操作、测定参数及解析结果，可以导出各种细胞培养物的解离中的粒度分布的变化、适合解离操作的设定参数，由该技术信息（know-how）能够简便地进行设定参数的初始值的设定。
本发明中的“反应调整部”是用于调整反应容器内的细胞的解离的部分。反应调整部可以包括化学作用调整部、机械作用调整部和／或环境调整部。
化学作用调整部是通过化学／生物化学的作用对反应容器内的细胞的解离反应进行调整的部分。化学作用调整部可以具备：用于调整添加到反应部内的化学物质如蛋白质水解酶等细胞解离剂、细胞解离中和剂、pH调整剂、染料等的量、浓度、添加场所、时机的手段（例如处理器、化学药品调制装置等）、用于添加所述化学物质的手段（例如液体注入装置等）、用于增加或排出反应容器内的液体的手段（例如液体注入装置、液体抽吸装置等）等。化学作用调整部可以采取在反应容器内添加细胞解离剂从而使解离处理开始的方式构成。此外，化学作用调整部还可以采取在添加了细胞解离剂的反应容器中加入细胞解离中和剂、冷却了的液体等使解离处理结束的构成。进而，化学作用调整部还可以采取在解离处理进展迟缓时增加反应容器内的细胞解离剂的构成。
作为细胞解离剂，只要是能够使细胞间的连结解离的物质即可，没有特别限定，可以使用例如蛋白质水解酶和／或螯合剂等。作为蛋白质水解酶，没有限定，可以使用例如丝氨酸蛋白酶（胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、纤溶酶等）、巯基蛋白酶（木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L等）、羧基蛋白酶（胃蛋白酶、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、凝乳酶等）、金属蛋白酶（胶原酶、中性蛋白酶等）等，螯合剂没有限定，可以使用例如EDTA、EGTA等。细胞解离剂可以含有上述成分中的任一种，也可以含有两种以上。
细胞解离中和剂没有限定，可以列举出例如用于降低细胞解离剂的浓度的培养基、生理盐水、PBS等适于细胞生存的介质、细胞解离剂中包含的蛋白质水解酶的底物、细胞解离剂中包含的被螯合剂所螯合的金属等。
此外，化学作用调整部还可以采取为了避免细胞彼此在平面上重合而能够对反应容器内的液量进行调整的构成。反应容器内的液量可以利用例如液面检测传感器、重量传感器等进行适当测定。通过减少液量，可以降低细胞彼此在平面上重合的概率，在通过图像解析法、激光衍射散射法等计算粒度分布时是有利的。
机械作用调整部用于通过机械作用对反应容器内的细胞的解离反应进行调整，具备使反应容器发生振动、旋转、上下运动或在反应容器内发生超声波、水流等的机械作用手段，通过操作这些来调整解离反应。作为机械作用手段没有限定，可以列举出例如搅拌器、棒状、板状、搅拌桨状等各种形状及材质的搅拌子、产生水流的泵、超声波发生器等。通过对反应容器施加机械作用，可以促进片状细胞培养物的解离。所施加的机械作用通常是恒定的，也可以使其根据规定的信号、例如来自解析部的信号而变化。
环境调整部是用于通过调整反应部内的环境而调整细胞的解离反应的部分。环境调整部对反应部内的环境、例如温度、湿度、二氧化碳浓度、气压等进行调整，但并非仅限于此。因此，环境调整部还可以具备：温度调整装置（包括例如加热器、Peltier装置、恒温箱等）、湿度调整装置（包括例如除湿装置、加湿装置、湿度计、控制装置等）、二氧化碳调整装置（包括例如二氧化碳发生装置、排气装置、控制装置等）、气压调整装置（包括例如减压装置、压缩机、控制装置等）等。在使用蛋白质水解酶作为细胞解离剂时，环境调整部可以将反应容器内的温度调整至适合酶作用的温度并维持，从而开始解离反应并进行该反应，此外，还可以调整至酶的作用温度之外而抑制、停止解离反应。蛋白质水解酶的最适温度根据其种类而可能不同，具体而言，例如为35～40℃、36～39℃、37～38℃等，但并非限定于此。反应容器内的温度调节既可以通过对反应容器直接加热或冷却而进行（例如介由与反应容器接触或靠近的温度调整装置），也可以通过对反应容器的周围（例如包围反应容器的空气等）进行加热或冷却而进行。
反应调整部可以位于反应部的内侧，也可以位于外侧，还可以是一部分位于内侧、一部分位于外侧。例如，就反应调整部而言，既可以安装在支持部，也可以具有支持反应部或包围其的结构，还可以一部分安装在支持部、一部分支持反应部或包围反应部。具体而言，例如可以使支持部和温度调整装置一体化而制成热板状，也可以将支持部和机械作用调整部一体化而制成搅拌器状，还可以将支持部和环境调整部一体化而制成培养箱状，此外，既可以在培养箱状的环境调整部的内部设置将支持部和机械作用调整部一体化而成的搅拌器状部件，还可以在搅拌器状的机械作用调整部搭载将支持部和环境调整部一体化而成的培养箱状部件。
从而，可以在能够实现规定的目的的范围内，以各种方式配置构成本发明系统的各构成要素，还可以根据需要组合或一体化。
图1表示本发明系统的一个方式的框图。本方式中，系统具备：包含反应容器及支持部的反应部，包括机械作用调整部、化学作用调整部及环境调整部的反应调整部，以及包括传感器部、处理器、控制部、存储部、输入部及输出部的解析部，反应调整部在反应部内与支持部一体化而存在，传感器部位于反应容器的上部，解析部在这些的外部以与它们相互连接的状态存在，从而能够进行设定参数、测定参数、控制信号等的接受和发送。当然，该框图表示的不过是本发明系统的一个方式，可以理解还存在着多个与该框图不同的可能的各部的配置、组合。
图2表示本发明系统的一个方式中的细胞解离的处理流程图。本方式中，当系统接受片状细胞培养物的解离开始指示时，系统确认设定参数，将适合于细胞解离处理的参数（设定参数）送至反应调整部。反应调整部内的环境调整部测定反应部内的温度，按照达到设定的温度的方式进行温度调整。反应调整部内的化学作用调整部在反应部内进行化学／生物化学处理，利用细胞解离剂推进细胞间结合的解离。反应调整部内的机械作用调整部对反应容器施加机械操作、例如适当振动等，从而促进解离。当反应部内的测定参数在通过反应调整部的调整而达到设定参数时，传感器部获取存在于反应容器内的细胞粒度分布的相关信息。
解析部由传感器部所获取的信息计算存在于反应部内的细胞的粒度分布。当解离进行时，粒径小的单细胞的比例占优势，在粒度分布方面，如图3所示那样，在单细胞的平均粒径处具有峰，几乎为单峰性的分布。另一方面，在解离处理的过程中，当残存有未解离的细胞块（聚集物）时，如图4所示，呈包含粒径小的单细胞的峰（左侧）和粒径大的聚集物的峰（右侧）的分布。进而，当解离处理推进时，聚集物的解离也推进，变成仅粒径小的单细胞的峰，几乎不再变化。即，粒度分布不再经时变化、达到稳定表明解离不会进一步进行、进而表明解离已完成。因此，本发明的一个方式中，解析部可以在粒度分布的变化量或变化率低于设定参数时判断为解离已完成。系统在解离完成时将输出解离完成信号，结束处理流程。这里，反应调整部可以独立于解析部地进行动作。例如，解析处理中还可以通过反应调整部进行温度调整、振动调整。
当然，该流程图表示的不过是本发明系统的一个动作方式，可以理解还存在着多个与该流程图不同的动作方式。
本发明系统还可以与细胞培养用的培养箱、片状细胞培养物的剥离装置、以及对解离细胞的特性进行解析的装置如用于测定细胞数的细胞计数装置（例如ベックマン公司制造的库尔特（coulter）计数器）、用于测定存活性的死活细胞自动测定装置、用于测定纯度的流式细胞仪等连接和／或一体化。通过采取所述构成，还能够使从细胞的培养、片状的细胞培养物的制作、至其品质管理实现自动化。
此外，本发明涉及一种将片状细胞培养物解离成单个细胞的方法，其包括：
（i）将片状细胞培养物供于解离处理的工序，
（ii）获取接受解离处理的片状细胞培养物的细胞的粒度分布的相关信息的工序，和
（iii）由获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的工序。
本方法中的解离处理中可包括将构成片状细胞培养物的细胞解离成单个单细胞的任意处理，具体而言，例如可以在培养基、生理盐水、PBS等适合细胞生存的介质中用细胞解离剂进行作用将细胞解离。细胞解离剂与细胞解离系统中的上述细胞解离剂相同。在利用蛋白质水解酶作为细胞解离剂时，将包含片状细胞培养物的反应液的温度调整至适合酶作用的温度并维持，可以促进解离。蛋白质水解酶的最适温度如上所述。此外，当添加细胞解离剂后片状细胞培养物在介质中移动时，可以促进解离。例如，该操作可以通过使加入了片状细胞培养物的容器振动、旋转、上下运动、使该容器内产生超声波、水流等等来进行。此外，本方法中的解离处理还可以介由上述细胞解离系统的至少反应部及反应调整部来进行。
本方法中的接受解离处理的片状细胞培养物的细胞粒度分布的相关信息的获取、粒度分布的计算、及解离状态的判断与细胞解离系统中所述相同，还可以介由该系统的至少传感器部及解析部来进行。本法的一个方式可以列举出上述说明的、图2的流程图。
本方法本身已经可以完结，但也可以作为一个部分并入包含片状细胞培养物构成细胞的培养、片状细胞培养物的制作、自培养基材的剥离、细胞彼此的解离、解离的细胞的分析（例如生存率、纯度等）等工序的、从片状细胞培养物的制作直至品质管理的流程中。
此外，本发明涉及一种用于判断片状细胞培养物的解离状态的系统，其包括：
（i）获取接受解离处理的片状细胞培养物中的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部，和
（ii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。
本系统中的传感器部及解析部与上述片状细胞培养物解离系统基本相同。本系统中，传感器部获取存在于本系统外的接受解离处理的片状细胞培养物的细胞粒度分布的相关信息，解析部基于此而计算粒度分布，判断并输出解离状态。因此，本系统可以不包含片状细胞培养物解离系统所具有的反应部和／或反应调整部。本系统可以通过传感器部获取例如在与本系统之外的培养箱、搅拌器等中接受解离处理的片状细胞培养物的细胞粒度分布的相关信息、例如图像等，判断细胞的解离状态，通过声音、指示器的点亮等通知利用者等。
此外，本发明涉及一种判断片状细胞培养物的解离状态的方法，其包括基于接受解离处理的片状细胞培养物中的细胞的粒度分布判断并输出解离状态的工序。本方法中的判断解离状态的工序的细节如细胞解离系统中所述。
以下参照附图更详细地说明本发明的细胞解离系统，其示出的是本发明的特定的具体例子，本发明不受其限定。
图5及6中示出本发明的细胞解离系统的一个方式。图5为系统整体的概要图，图6为表示壳体（5）内的各要素的配置的剖面图。本方式中，采取的是在配置于壳体（5）内的具有温度调整功能的能够振动的支持部（2）上承载放入了片状细胞培养物（7）的反应容器（1）的结构，在反应容器（1）上方配置有用于将细胞解离剂等注入反应容器的添加喷头（4）和用于获取反应容器内的图像的相机（3）。支持部将反应容器支持在具有温度测定传感器（9）和Peltier装置（8）的温度调整板（10）上，并具有从下侧照射反应容器的光源（11）。通过在光源和反应容器之间设置相位差聚光器等，可以获取反应容器内的对比度（contrast）像。支持部与振动装置连结并能够振动。本体（12）内部具备振动装置、试剂槽、由粒度分布评价解离状态并控制各要素的处理器、电源单元，本体正面设置有输入输出接口（6）。
接着，参照图7的流程图说明上述系统的细胞解离处理的流程。将装入了片状细胞培养物的反应容器设置在支持部后，系统由输入输出接口（6）接受解离开始指示时，系统进行初始化处理（K000）、即确认各要素的正常动作以及检查反应容器的温度、反应容器内的液量、液面的高度等初期测定参数，确认系统初期状态。系统随后进行基于初期状态的设定参数的确认（K001）。例如，就反应部内的温度而言，在初次利用系统时接近室温，在间断利用时则接近前次的设定温度，因此系统可以进行最佳的温度调整的时间的设定。此外，设定参数还可以从输入部所输入的参数、预先存储的参数进行设定。
确认设定参数后，系统调整反应容器内的细胞解离反应（K002）。温度调整：通过温度调整板将反应容器内的温度调整至例如37℃，以适合酶反应等的进行（K002’）。解离剂量的调整：为了促进酶反应所致的细胞间结合的解离，而调整反应容器内的解离剂浓度（K002”）。振动调整：为了调整解离的速度而调整振动装置的振动时间、振幅（K002’’’）。这些调整可以按顺序进行，也可以同时进行，还可以各自进行。此外，反应调整还可以是包含图8所示的温度调整的子程序在内的、各种子程序的组合，可以独立于细胞解离处理的流程而进行动作。即，可以在使支持部的温度保持恒定的状态下取出完成了解离处理的反应容器，并放入下一个反应容器。进而，设定参数还可以设定包含时间信息在内的详细的值。例如，可以按照仅在传感器部获取信息时停止振动、或以一定间隔改变振动的方向的方式进行详细设定。
在适当进行反应调整后，系统获取存在于反应容器内的细胞的图像（K003）。此时，系统可以按照获得最佳拍摄条件的方式进行例如光源的调整、或者相机的对焦。此外，在细胞的轮廓检测困难时、同时测定细胞的存活性等时等，系统还可以从添加喷头将细胞染色用的染料注入反应容器，对反应容器内的细胞进行染色。此后，系统由所获取的图像测定细胞的大小、体积、数量等，计算粒度分布（K004）。接着，系统将包括粒度分布、反应容器内的环境信息在内的测定参数与设定参数进行比较，解析解离的状态、反应部内的状态（K005），判断解离状态（例如平均粒径、平均粒径的经时变化量／率、粒度分布图等）是否达到设定值（K006）。
在达到设定值时，通过从添加喷头向反应容器内添加解离中和剂、或使温度调整板的温度降低等处理使解离处理停止（K007），通过指示器的点亮（K008）通知利用者解离处理完成。
另一方面，在判断为解离状态未达设定值时，系统判断解离处理时间是否超过设定值（K010），当未超过时根据需要变更设定参数（K009），重复K001以后的步骤。相反，当解离处理时间超过设定值时，系统与K007同样地停止解离处理（K011），并报错（K012）。
上述流程中，这些一连的处理既可以同时进行，也可以改变顺序而进行，还可以省略其中的几个。例如，在进行温度调整（K002’）后，进行测定参数和设定参数的比较（K005），还可以进行解离剂量的调整（K002”）、振动调整（K002”’）。即，当预先在反应部以外进行反应容器内的解离操作后，收纳在系统中判断解离状态时，可以通过测定参数和设定参数的比较（K005）判断是否需要进行反应调整，或者可以省略后面的解离剂量的调整（K002”）、振动调整（K002”’）。此外，解离处理停止（K007或K011）及指示器点亮（K008）或错误显示（K012）既可以同时进行，也可以在指示器点量或错误显示后进行解离处理停止。进而，上述流程中，当判断为解离状态未达设定值（K006）时，系统还可以由测定参数和设定参数的比较结果（K005）计算最适参数并变更设定参数（K009）。
以上说明了本发明的细胞解离系统，但也可以为除上述以外的各种方式。因此，本领域技术人员可以理解的是，在不脱离本发明的思想的范围内改变上述方式而成的各种方式也包括在本发明的范围内。
附图标记说明
1 反应容器
2 支持部
3 相机
4 添加喷头
5 壳体
6 输入输出接口
7 片状细胞培养物
8 Peltier装置
9 温度测定传感器
10 温度调整板
11 光源
12 本体

Claims (8)

1.一种用于将片状细胞培养物解离成单个细胞的系统，其包括：
（i）使片状细胞培养物解离的反应部，
（ii）用于获取存在于反应部内的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部，以及
（iii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。
2.根据权利要求1所述的系统，其中，片状细胞培养物含有骨骼肌成肌细胞。
3.根据权利要求1或2所述的系统，其包括用于对反应部内的细胞的解离进行调整的反应调整部。
4.根据权利要求3所述的系统，其中，反应调整部包括环境调整部、化学作用调整部及机械作用调整部中的至少一者。
5.一种用于在将片状细胞培养物解离成单个细胞的处理中判断片状细胞培养物的解离状态的系统，其包括：
（i）获取接受解离处理的片状细胞培养物中的细胞的粒度分布的相关信息的传感器部，和
（ii）由传感器部所获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的解析部。
6.一种将片状细胞培养物解离成单个细胞的方法，其包括：
（i）将片状细胞培养物供于解离处理的工序，
（ii）获取接受解离处理的片状细胞培养物的细胞的粒度分布的相关信息的工序，和
（iii）由获取的信息计算细胞的粒度分布、判断并输出解离状态的工序。
7.一种判断片状细胞培养物的解离状态的方法，其包括基于接受解离处理的片状细胞培养物中的细胞的粒度分布判断并输出解离状态的工序。
8.根据权利要求6或7所述的方法，片状细胞培养物含有骨骼肌成肌细胞。
CN201180021597.2A 2010-07-29 2011-07-29 片状细胞培养物解离装置 Expired - Fee Related CN102906244B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2010170667 2010-07-29
JP2010-170667 2010-07-29
PCT/JP2011/067435 WO2012015030A1 (ja) 2010-07-29 2011-07-29 シート状細胞培養物解離システム

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102906244A true CN102906244A (zh) 2013-01-30
CN102906244B CN102906244B (zh) 2014-01-29

Family

ID=45530229

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180021597.2A Expired - Fee Related CN102906244B (zh) 2010-07-29 2011-07-29 片状细胞培养物解离装置

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9670453B2 (zh)
EP (1) EP2584029B1 (zh)
JP (1) JP5854999B2 (zh)
CN (1) CN102906244B (zh)
WO (1) WO2012015030A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105980852A (zh) * 2014-04-17 2016-09-28 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 细胞分析方法和系统、装置
CN107557328A (zh) * 2017-10-31 2018-01-09 妙顺（上海）生物科技有限公司 一种用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法
CN112313324A (zh) * 2018-07-05 2021-02-02 三菱电机株式会社 细胞培养装置、细胞培养方法和程序
CN114413209A (zh) * 2022-03-29 2022-04-29 北京寻因生物科技有限公司 监测装置及解离装置

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9885652B2 (en) * 2012-10-08 2018-02-06 University Of Virginia Patent Foundation Miniaturized multiwell plate reader for phenotypic screening
JP6359931B2 (ja) * 2014-09-29 2018-07-18 富士フイルム株式会社 細胞情報取得装置および方法並びにプログラム
JP6811545B2 (ja) * 2016-03-31 2021-01-13 テルモ株式会社 細胞解離剤の評価方法
JP6955251B2 (ja) * 2017-07-31 2021-10-27 国立大学法人広島大学 細胞解離剤、細胞解離方法および細胞シートの製造方法
WO2020020913A1 (en) * 2018-07-24 2020-01-30 Andrew Simon Goldsborough Dissociation of biological samples
JP7228711B2 (ja) * 2019-10-15 2023-02-24 株式会社エビデント 細胞単離支援方法、システム、及び、コンピュータ可読媒体
JP7185820B2 (ja) 2020-01-31 2022-12-08 株式会社石垣 スクリュープレスにおける背圧制御方法
JPWO2022071469A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07
WO2022071467A1 (ja) * 2020-09-30 2022-04-07 テルモ株式会社 生細胞分離システム

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006238707A (ja) * 2005-02-28 2006-09-14 Terumo Corp 細胞培養装置、器具及びそのシステム
CN1871343A (zh) * 2003-11-04 2006-11-29 株式会社宝玛斯特 从脂肪组织制备干细胞的方法和系统
JP2007089442A (ja) * 2005-09-28 2007-04-12 Terumo Corp 骨格筋芽細胞の分離方法
CN201305602Y (zh) * 2008-10-21 2009-09-09 中国人民解放军军事医学科学院卫生装备研究所 一种仿生型心肌组织生物反应器
JP2010081829A (ja) * 2008-09-30 2010-04-15 Terumo Corp 医療用細胞シートの製造方法
CN101711277A (zh) * 2007-07-31 2010-05-19 阿斯比奥制药株式会社 心肌细胞的细胞块制备方法和该心肌细胞块的用途

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS615796A (ja) * 1984-06-19 1986-01-11 Mitsubishi Electric Corp 微生物濃度計測方法および装置
SE8801098D0 (sv) * 1988-03-24 1988-03-24 Pharmacia Ab Apparatus and method for automatic extraction of extra-chromosomal dna from a cell suspension in a container
US5162204A (en) * 1988-05-06 1992-11-10 Hitachi, Ltd. Apparatus and method of culturing and diagnosis of animal cells using image processing
US5786207A (en) * 1997-05-28 1998-07-28 University Of Pittsburgh Tissue dissociating system and method
US20020001577A1 (en) 2000-06-30 2002-01-03 Axel Haverich Use of cells with the ability to generate excitation within a cell preparation
EP2266499B1 (en) 2003-08-01 2015-06-10 Cellseed Inc. Three-dimensional tissue structure
US20050221476A1 (en) * 2004-03-18 2005-10-06 Arindom Sen Chemical dissociation of cell aggregates
US8254657B2 (en) * 2007-01-08 2012-08-28 Pollack Laboratories, Inc. Image recognition and analysis system and software
US8628976B2 (en) * 2007-12-03 2014-01-14 Azbil BioVigilant, Inc. Method for the detection of biologic particle contamination
US8337711B2 (en) * 2008-02-29 2012-12-25 Biomet Biologics, Llc System and process for separating a material
US7619734B2 (en) * 2008-03-03 2009-11-17 Agilent Technologies, Inc. Methods and systems for computing a size distribution of small particles

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1871343A (zh) * 2003-11-04 2006-11-29 株式会社宝玛斯特 从脂肪组织制备干细胞的方法和系统
JP2006238707A (ja) * 2005-02-28 2006-09-14 Terumo Corp 細胞培養装置、器具及びそのシステム
JP2007089442A (ja) * 2005-09-28 2007-04-12 Terumo Corp 骨格筋芽細胞の分離方法
CN101711277A (zh) * 2007-07-31 2010-05-19 阿斯比奥制药株式会社 心肌细胞的细胞块制备方法和该心肌细胞块的用途
JP2010081829A (ja) * 2008-09-30 2010-04-15 Terumo Corp 医療用細胞シートの製造方法
CN201305602Y (zh) * 2008-10-21 2009-09-09 中国人民解放军军事医学科学院卫生装备研究所 一种仿生型心肌组织生物反应器

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105980852A (zh) * 2014-04-17 2016-09-28 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 细胞分析方法和系统、装置
CN105980852B (zh) * 2014-04-17 2019-07-26 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 细胞分析方法和系统、装置
CN107557328A (zh) * 2017-10-31 2018-01-09 妙顺（上海）生物科技有限公司 一种用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法
CN112313324A (zh) * 2018-07-05 2021-02-02 三菱电机株式会社 细胞培养装置、细胞培养方法和程序
CN112313324B (zh) * 2018-07-05 2024-03-01 三菱电机株式会社 细胞培养装置、细胞培养方法和存储介质
CN114413209A (zh) * 2022-03-29 2022-04-29 北京寻因生物科技有限公司 监测装置及解离装置
CN114413209B (zh) * 2022-03-29 2022-06-28 北京寻因生物科技有限公司 监测装置及解离装置

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2012015030A1 (ja) 2013-09-12
US9670453B2 (en) 2017-06-06
JP5854999B2 (ja) 2016-02-09
EP2584029B1 (en) 2017-06-21
EP2584029A1 (en) 2013-04-24
CN102906244B (zh) 2014-01-29
EP2584029A4 (en) 2014-01-01
WO2012015030A1 (ja) 2012-02-02
US20130143315A1 (en) 2013-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102906244B (zh) 片状细胞培养物解离装置
RU2630667C2 (ru) Мультиорганный чип с улучшенной долговечностью и гомеостазом
KR101391679B1 (ko) 세포 배양 장치, 세포 배양 장기 관찰 장치, 세포 장기 배양 방법, 및 세포 배양 장기 관찰 방법
US20220333056A1 (en) System and method for creating tissue
EP3535383B1 (en) Method for creating tissue
US20240052288A1 (en) Image analysis and non-invasive data collection from cell culture devices
US20210054319A1 (en) Flow bioreactor device for monitoring cellular dynamics
JP2020191783A (ja) 培養培地分析による多能性幹細胞の未分化状態の位置特異的な判定方法
JP2012029598A (ja) シート状細胞培養物の強度測定システム
JP2022519256A (ja) 細胞培養および組織培養のリアルタイムモニタリングのための方法および装置
CN105754856A (zh) 一种抽屉式三维类血管化组织培养器官芯片及其构建方法
US20240287455A1 (en) Computer-based systems for controlling and monitoring metabolic rate and environmental factors of at least one bioreactor and methods of use thereof
CN116445285B (zh) 一种类器官共培养芯片、构建方法及共培养方法
US20230348830A1 (en) Self-enclosed bioreactor for vascularized tissue constructs
Asif Investigating Ultrasound for 3D Biofabrication and Non-Destructive Quality Monitoring of Biomimetic Engineered Tissues
Mantay Design and validation of a low-cost bioreactor system for therapeutic mesenchymal stromal cell expansion
CN116445285A (zh) 一种类器官共培养芯片、构建方法及共培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20140129

Termination date: 20200729