CN102869369B - 利用可溶性cd24治疗类风湿性关节炎的方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供了利用CD24蛋白质治疗类风湿性关节炎的方法。所述CD24蛋白质可包括成熟人或鼠CD24以及哺乳动物免疫球蛋白的N-端或C-端融合部分。

Description

利用可溶性CD24治疗类风湿性关节炎的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求与2010年4月28日提交的美国临时专利申请号61/329,078的权益，其内容通过参考并入本文。
技术领域
本发明涉及用于治疗类风湿性关节炎的组合物和方法。
背景技术
本章节提供背景信息，其不必是现有技术，而且是对本公开内容的综合概述，该公开内容不是其全部范围或其所有特征的全面公开。
CD24被称为耐热抗原(1)。其表达为糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定分子(2)，并且在不同谱系中具有广泛的分布(3)。由于CD24倾向于在未成熟细胞上表达，其也已经被用作部分干细胞标记物以及用于淋巴细胞分化。与CD24有关的第一功能是对抗原特异性T细胞反应的共刺激活性(4-6)。体内试验表明，作为淋巴器官中T细胞激活的共刺激因子，CD24是多余的，但是在缺乏CD28时其变成必要的(7,8)。这并不适合并非作为“共刺激因子富集的”的局部靶器官的情况。与这种概念一致，我们证明了具有CD24定向突变的小鼠完全抵抗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的诱导(9)(10)。
人CD24的多态现象与数种自身免疫性疾病的风险和进展相关(11-15)，包括多发性硬化症和类风湿性关节炎(RA)。在多发性硬化症的情况中，我们已经报告了由鼠CD24和人IgGlFc的胞外部分组成的可溶性CD24改善实验性自身免疫性疾病多发性硬化症的鼠模型的临床症状(9)。由我们中的一员进行的最近的研究表明，CD24与危险相关分子模式(DAMPs)的宿主反应相互作用并对其进行抑制(16)。
RA影响0.5-1%的人口数量。尽管很多缓解疾病的抗风湿性药物(DMARDs)目前可用，但是根据美国风湿病学改善标准学会，即使生物学DMARDs的金标准，即靶向肿瘤坏死因子α的治疗法在小于50%的接受该治疗的患者中导致50%改善(ACR50)(17)。不能达到对RA的治愈。因此，测试另外的RA治疗法的必要的。RA被假定为关节中的自身免疫性疾病，尽管该疾病的病因很大程度上仍然不明。很多研究在类风湿性关节炎的发病机理中涉及T细胞(18)。最近，已经显示，抗体转移能引发小鼠关节炎症的发展(19-21)。损伤病理学类似于人类类风湿性关节炎。
从RA通过抗体的被动转移的研究中建立的最有趣的概念之一是：即使所述抗体无所不在被表达的蛋白质具有特异性，也能观察到组织特异性的自身免疫性疾病(19-21)。这种概念是重要的，因为其表明，尽管具有共同的发病机理，不同器官/组织的自身免疫性疾病可能需要不同治疗。支持这种概念的是，广泛用于治疗多发性硬化症的干扰素β对治疗RA显示很小的效果RA(22)。
与人RA相关的动物模型对DMARDs方面治疗发展的进展起着重要作用。例如，在小鼠和大鼠中胶原诱导的关节病对开发RA治疗法是关键的(23)。最近，已经证实，抗胶原抗体的适应性转移在小鼠中引发强烈的类似RA的损害(19)。因为在疾病发作之前RA患者的自身抗体增加(24,25)，因此胶原特异性抗体的被动转移是人类RA的相关模型。
因为RA的发病机理涉及对DAMP的宿主反应(26,27)，而且因为CD24分子负调节对DAMP的宿主反应(16)，因此我们研究了利用可溶性CD24治疗RA的可能性。选择RA的被动转移模型，原因在于其与人类疾病相关且实验设计简单。
发明内容
本文提供了通过向需要其的哺乳动物施用CD24蛋白质而治疗类风湿性关节炎的方法。所述CD24蛋白质可包括成熟小鼠CD24或成熟人CD24的序列或其变体。成熟人CD24可由SEQIDNO:1或2组成。成熟小鼠CD24可由SEQIDNO:3序列组成。所述CD24蛋白质还可包括小鼠或人CD24的胞外域，其可与成熟CD24的N-端融合。CD24的胞外域可由SEQIDNO:4序列组成。所述CD24蛋白质还可包括一部分哺乳动物免疫球蛋白(Ig)，其可与成熟CD24的N-端或C-端融合。所述Ig部分可以是人Ig蛋白质的Fc部分，其可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgA。该Fc部分可由人Ig蛋白质的铰链区和CH2与CH3结构域组成。所述Fc部分还可以由人IgM的铰链区和CH3与CH4结构域组合。
CD24蛋白质可以是可溶性的，而且可以是糖基化的。CD24蛋白质可利用真核蛋白表达系统生产。该表达系统可包括包含在中国仓鼠卵巢细胞系中的载体或复制缺陷逆转录病毒载体。所述复制缺陷逆转录病毒载体可稳定地整合到真核细胞的基因组中。
附图简述
图1.CD24融合蛋白CD24IgGlFc(SEQIDNO:5)的氨基酸组成。下划线的26个氨基酸是CD24的信号肽(SEQIDNO:4)。该序列的框住的黑体部分是融合蛋白中使用的成熟CD24蛋白质(SEQIDNO:1)。通常存在于成熟CD24蛋白质中的末尾氨基酸（A或V）已经从构建物中删除以避免免疫原性。非下划线的、非粗体的字母是包含铰链区和CH1与CH2结构域的IgGlFc序列(SEQIDNO:6)。
图2.纯化和处理从哺乳动物细胞系表达的CD24IgGlFc的方法。
图3.来自小鼠的成熟CD24蛋白质(SEQIDNO:3)与来自人的成熟CD24蛋白质(SEQIDNO:2)之间的氨基酸序列变化。潜在糖基化位点被加粗，其中N-糖基化位点为红色。
图4.CD24Ig对RA的治疗效果。使8-10周龄雄性BALB/c小鼠静脉内免疫接种2mg/小鼠ArthritoMab诱导关节炎抗体鸡尾酒(MDbioproducts,StPaul,MN)。2天后，对小鼠腹腔注射溶于PBS中的9μgLPS。利用下述评分系统每日监控疾病发展。0，无反应，正常；1，轻微，但明确的踝/腕发红及肿胀或者限于个别趾的表观发红和肿胀，而不管受侵袭趾的数目；2，中度至严重的踝/腕发红及肿胀；3，整个手爪发红及肿胀；4，包括趾在内的四肢发炎最大化，涉及多个关节。所显示的数据是来自四肢的合成分数(平均值+SE)。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。两组之间的差异基于费雪PLSD测验也是显著的。
图5.CD24IgGl的药物代谢动力学的WinNonlin区室模拟分析。开环代表3只小鼠的平均值，线条是预期药物代谢动力学曲线，a.静脉注射1mgCD24IgGl。b.皮下注射1mgCD24IgGl。c.比较如通过曲线下面积(AUC)、半衰期和最大血液浓度测量的抗体总量。注意，皮下注射的全部AUC和Cmax是静脉注射的约80%，尽管该差异不是统计学上显著的。
图6.PAMP与DAMP之间的CD24-SiglecG(10)相互作用鉴别。A.对PAMP的宿主反应不受CD24-SiglecG(10)相互作用的影响。B.CD24-SiglecG(10)相互作用抑制对DAMP的宿主反应，可能是通过SiglecG/10-结合的SHP-1。
图7.A单次注射CD24Fc降低CAIA的临床分数。a.试验图标。BALB/c小鼠(8周龄)在第一天接受mAbs并结合载体或融合蛋白。在第三天对小鼠注射LPS并每日观察，连续3周，b.CD24Fc降低CAIA的临床分数。在第一天注射一次融合蛋白(1mg/小鼠)或载体。双盲法测定临床分数。*,P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001。CD24的效果在6个独立试验中再现，包括PBS组总计52只小鼠以及CD24Fc组总计54只小鼠。
图8.CD24Fc降低关节中的炎性细胞因子和CAIA的水平。如在图7a中所图解引发和处理CAIA。通过来自BDpharmingen的细胞因子小球微阵列测量炎性细胞因子。a.代表性FACS曲线，b.在关节匀浆中测量的减少的细胞因子(平均值+SE)的概述。
图9.CD24Fc减少关节中的炎症和软骨破坏。在第七天，从CD24Fc处理小鼠和对照小鼠中切下前爪和后爪，在4%多聚甲醛中固定24小时，之后用5%甲酸脱钙。然后将爪埋入石蜡中并用H&E和番红O红(Sigma-Aldrich)染色纵切面。
图10.在CAIA诱导第五天施用的CD24Fc的治疗效果。将CAIA-诱导的小鼠随机分成两组，接受载体(PBS)或CD24Fc。用双盲法为小鼠计分。显示了代表性的三个独立试验。
图11.低剂量CD24Fc防止CAIA发展。a.试验图，b.关节炎的临床分数，双盲法计分。
图12.Siglecg对于CD24Fc的治疗效果是基本的，WT(a)和Siglecg-/-小鼠(b)接受载体对照或CD24Fc并结合抗胶原mAbs的鸡尾酒。双盲法每天记录临床分数。
具体实施方式
本发明人已经发现，可溶形式的CD24对治疗类风湿性关节炎非常有效。
1.定义
本文使用的术语目的仅仅是描述特定实施方式，而非意图是限定性的。如在本说明书和所附权利要求中所述，单数形式“一个（a,an）”和“该(the)”包括复数指代，除非上下文另外清楚指示。
关于本文中的数值范围描述，具有相同精确程度的其间的每个居间的数值明确考虑在内。例如，对于范围6-9，除了6和9之外，数字7和8也考虑在内，而对于范围6.0-7.0，数值6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0明确考虑在内。
“肽”或“多肽”是氨基酸的连接序列，并且可以是天然的、合成的，或者天然或合成的修饰体或组合。
“基本相同的”可指第一氨基酸序列和第二氨基酸序列在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300个氨基酸的区域内至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。
“治疗（treatment或treating）”当指防止动物免遭疾病时，意指预防、压制、抑制或完全消除所述疾病。预防疾病包括在疾病发作之前向动物施用本发明的组合物。压制疾病包括在疾病引发之前但在其临床表现之前向动物施用本发明的组合物。抑制疾病包括在疾病临床表现之后向动物施用本发明的组合物。
“变体”可意指由于氨基酸的插入、缺失、或保守置换而使氨基酸序列不同但是保留至少一种生物活性的肽或多肽。“生物活性”的典型实例包括与Toll-样受体结合以及被特异性抗体结合的能力。变体还可指其氨基酸序列与具有保留至少一种生物活性的氨基酸序列的参考蛋白质基本相同的蛋白质。氨基酸的保守置换，即，氨基酸被类似性质(例如，亲水性、带电区的程度和分布)的不同氨基酸替换，在本领域被公认为典型涉及较小的变化。这些较小变化部分能通过考虑氨基酸的亲水性指数来鉴定，这在本领域是通晓的。Kyte等,J.Mol.Biol.157:105-132(1982)。氨基酸的亲水性指数基于对其疏水性和电荷的考虑。本领域公知，类似亲水性指数的氨基酸可进行置换，但仍保留蛋白质功能。在一个方面，亲水性指数为±2的氨基酸被置换。氨基酸的亲水性还可用于显示将产生保留生物功能的蛋白质的置换。在肽的情况下考虑氨基酸的亲水性使得可计算该肽的最大局部平均亲水性，这是一种已经被报告与抗原性和免疫原性非常相关的有用的量度。美国专利号4,554,101，其通过参考全部引入本文。具有类似亲水性值的氨基酸的置换可产生保留生物活性（例如，免疫原性）的肽，这在本领域是通晓的。置换可利用亲水性值在彼此的±2内的氨基酸进行。氨基酸的疏水性指数和亲水性值都受该氨基酸的特定侧链的影响。与该观察一致的是，应理解与生物功能相容的氨基酸置换取决于所述氨基酸相对近似性，特别是取决于那些氨基酸的侧链，如通过疏水性、亲水性、电荷、尺寸及其他性质所揭示的。
2.CD24
本文提供了CD24蛋白质，其具有成熟人CD24的氨基序列，该序列可以是SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK(SEQIDNO:1)或SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK(V/A)(SEQIDNO:2)，或者其具有小鼠CD24的氨基序列，该序列可以是NQTSVAPFPGNQNISASPNPTNATTRG(SEQIDNO:3)，或者其变体。所述CD24可以是可溶的。所述CD24还可包括N-端信号肽，其可以具有氨基酸序列MGRAMVARLGLGLLLLALLLPTQIYS(SEQIDNO:4)。该CD24还可具有如图1或3所述的氨基酸序列。该CD24可以以两种等位形式之一存在，以使成熟人CD24的C-端氨基酸可以是缬氨酸或丙氨酸。C-缬氨酸或丙氨酸可能是免疫原性的而且可以从CD24中省去以降低其免疫原性。两种等位基因之间的差异可影响包括多发性硬化症和RA在内的自身免疫性疾病的风险。然而，因为这两种等位形式影响膜结合形式的表达水平，因此变异应当不影响CD24的功能。
尽管来自小鼠和人的成熟CD24蛋白质的氨基酸序列的序列变化相当大，但是在与危险相关分子模式(DAMP)相互作用方面的它们在功能上是等价的。因为对DAMP的宿主反应被认为对RA的发病机理是重要的，因此小鼠和人CD24在治疗RA方面功能等价。作为小鼠与人CD24之间主要在C-端和许多糖基化位点上的序列保守的结果，成熟CD24蛋白质的显著变化可耐受利用CD24治疗RA，特别是如果这些变化不影响C-端的保守残基或者不影响来自小鼠或人CD24的糖基化位点。
a.融合
CD24可在其N-端或C-端与部分哺乳动物Ig蛋白质（其可以是人或小鼠）融合。Fc区域可包括Ig蛋白质的铰链区和CH2与CH3结构域。Ig蛋白质可以是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM或IgA。Fc部分可以包括SEQIDNO:6。Ig蛋白质还可以是IgM，且Fc部分可以包括IgM的铰链区和CH3与CH4结构域。所述CD24还可在其N-端或C-端与蛋白质标记融合，该蛋白质标记可以是GST、His或FLAG。制备融合蛋白质以及纯化融合蛋白质的方法在本领域是公知的。
b.生产
CD24可以是大量糖基化的，而且可以参与CD24的功能，诸如共刺激以及与危险相关分子模式相互作用。该CD24利用真核表达系统制备。该表达系统可需要从哺乳动物细胞中的载体表达，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。该系统还可以是病毒载体，诸如复制缺陷逆转录病毒载体，其可用于感染真核细胞。CD24还可以从稳定的细胞系产生，该稳定的细胞系从已经被整合到细胞基因组中的载体或载体的一部分表达CD24。所述稳定的细胞系可从整合的复制缺陷逆转录病毒载体表达CD24。表达系统可以是GPEx(TM)。
3.治疗方法
所述CD24可用于治疗类风湿性关节炎。该CD24可施用于需要其的对象。所述对象可以是哺乳动物诸如人。
a.联合CD24治疗
所述CD24可以另一种药物联合，诸如缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)。所述药物可以是非类固醇抗炎药(NSAID)，其可以是丙酸衍生物、乙酸衍生物、烯醇酸衍生物、芬那酸（fenamicacid）衍生物或选择性Cox2抑制剂。所述药物还可以是皮质类固醇或甲氨喋呤。所述药物可以是生物类的，其可以是TNF-α拮抗剂，诸如抗TNF-α抗体或与TNF-α结合的融合蛋白(Enbrel)，抗-CD20mAb，共刺激分子CD80和CD86的拮抗剂，诸如与这两个分子结合的单克隆抗体或融合蛋白(CTLA4Ig)，或者IL-1或IL-6受体的拮抗剂。CD24和另一种药物可以一起或顺序施用。
b.药物组合物
CD24可以包含在药物组合物中，该药物组合物还可包含溶剂，其可使CD24长期间保持稳定。所述溶剂可以是PBS，其可使CD24在-20℃稳定保持至少36个月。溶剂还能够适应CD24与另一种药物相结合。
c.剂量
用于人类的剂量最终可通过临床试验以测定具有可接受毒性和功效的剂量来确定。用于人类的初始临床剂量可通过在啮齿类和非人灵长类中的药物动力学和毒性研究来估计。CD24的剂量可以是0.01mg/kg至1000mg/Kg，并且可以是1至500mg/kg，这取决于被治疗疾病的严重度和施用途径。
d.施用
药物组合物的施用途径可以是肠胃外的。肠胃外施用包括但不限于静脉、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内、关节内和直接注射到受侵袭关节中。对于兽医应用，药物可以作为适当可接受的制剂按照正常的兽医实践来施用。兽医可容易地确定最适合特定动物的给药方案和施用途径。药物组合物可以施用于人类患者、猫、狗、大型动物或禽类。
CD24可与其他治疗同时或有规律地（metronomically）施用。如本文所用的术语“同时的”或“同时地”意指CD24和其他治疗可在彼此的48小时内、优选24小时内、更优选12小时内、仍更优选6小时内以及最优选3小时或更少内施用。如本文所用的术语“有规律地（metronomically）”意指药剂在不同于另一治疗的时间以及与重复施用相关的某一频率下施用。
CD24可以在另一治疗之前的任何时刻施用，包括约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50小时、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟和1分钟。CD24可以在第二CD24治疗之前的任何时刻施用，包括约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50小时、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟和1分钟
CD24可在另一治疗之后的任何时刻施用，包括约1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时、50小时、52小时、54小时、56小时、58小时、60小时、62小时、64小时、66小时、68小时、70小时、72小时、74小时、76小时、78小时、80小时、82小时、84小时、86小时、88小时、90小时、92小时、94小时、96小时、98小时、100小时、102小时、104小时、106小时、108小时、110小时、112小时、114小时、116小时、118小时和120小时。CD24可在先前的CD24治疗之后的任何时刻施用，包括约120小时、118小时、116小时、114小时、112小时、110小时、108小时、106小时、104小时、102小时、100小时、98小时、96小时、94小时、92小时、90小时、88小时、86小时、84小时、82小时、80小时、78小时、76小时、74小时、72小时、70小时、68小时、66小时、64小时、62小时、60小时、58小时、56小时、54小时、52小时、50小时、48小时、46小时、44小时、42小时、40小时、38小时、36小时、34小时、32小时、30小时、28小时、26小时、24小时、22小时、20小时、18小时、16小时、14小时、12小时、10小时、8小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟和1分钟。
提供下述实施例来阐述本发明的方法，而且其绝不是限制所述方法的应用。
实施例
实施例1
可溶性CD24蛋白质
将CD24的胞外域与IgGlFc融合。该CD24融合蛋白质的氨基酸组成在图1中提供。然后产生推动CD24Ig融合蛋白质表达的复制缺陷逆转录病毒。GPEx(TM)(基因产物表达的首字母缩写)系统提供若干重要的优势，其中最重要的一种就是平均起来>1000个插入/细胞，但是每个插入仅1个拷贝。此外，因为逆转录病毒优选插入转录活性基因座，因此GPExTM产生高水平的靶蛋白表达。产生稳定的细胞系，其生产高收率的CD24Ig。另外，生产45gGLP级产物和~100gcGMP级产物。用于下游加工从生物反应器收获的培养基的方法总结在下面的流程图中(图2)。
收获物澄清
利用Cuno60M02Maximizer深度过滤器之后是MilliporeOpticap0.22μm过滤器，澄清生物发言权培养基。将滤液收集到无菌收集袋中。通过ELISA获得样品的CD24-Fc收率测量。
蛋白质A捕获
使已澄清的培养基通过A蛋白树脂柱(GEHealthcareMabSelect)，其浓度不超过16g/L树脂(基于ELISA)，且接触时间为4分钟。用平衡缓冲液(50mMTris+0.15MNaClpH7.5)，然后用10mM柠檬酸钠/柠檬酸pH6.0以5柱容(cv)洗涤该柱。已结合CD24Ig从柱中利用10mM柠檬酸钠/柠檬酸pH3.5洗脱。
病毒灭活
通过添加2M盐酸，使该蛋白A洗脱馏分立刻达到pH3.0，并在环境温度下于该pH下保持30分钟。然后，通过添加1MTris碱使其达到pH5.0，并利用0.65μm玻璃纤维过滤(SartoriusSartopureGF2)过滤至澄清，以及利用0.2μm(SartoriusSartopore2)过滤到无菌收集袋中。
SP-Sepharose色谱法
将病毒灭活材料应用于SP-Sepharose柱(GEHealthcare)，其浓度不不超过25g/L树脂(基于A280nm，1.22=1mg/mL)，以及线性流速为250cm/hr。用平衡缓冲液(10mM柠檬酸钠/柠檬酸pH5.0)洗涤该柱，并利用10mM柠檬酸钠/柠檬酸+0.2MNaClpH5.0从柱中洗脱出已结合CD24Ig。将流出物收集到无菌收集袋中。
MustangQ色谱法
通过添加1MTris碱将SP-Sepharose洗脱物调节到pH7.5并利用WFI稀释以降低电导率。将稀释的物质应用于MustangQ过滤器(Pall)，其浓度不超过0.5g/L树脂(基于A280nm，1.22=1mg/mL)，且流速为5柱体积/分钟。用平衡缓冲液(10mMTrispH7.5)洗涤该过过滤器，CD24-Fc包含在穿流（flowthrough）中且被收集到无菌收集袋中。
病毒过滤
然后在30psi恒压下使MustangQ穿流经过0.2mM过滤器和MilliporeNFP病毒过滤器(标称孔径20nm)过滤，并收集到无菌收集袋中。
浓缩和最终配制
浓缩产物并利用10kDa超滤性膜(MilliporePrep/Scale)以约10mg/mL的终浓度（如通过280nm下的吸光度所测）滤过到10mM磷酸钠、150mM氯化钠pH7.2中。从同时位于生物安全厨中的批量中抽取分析样品。进行标记，并将样品递送至QC进行测试，同时将批量的等分试样贮存在2-8℃等待释放（pendingrelease）。
病毒清除率研究
在CardinalHealth,NC在于CHM制备的样品上进行病毒清除验证。来自GalaBiotech的有资质的科学家在CardinalHealthViralValidation实验室在Cardinal卫生人员的协助下进行色谱和过滤步骤。自200L规模过程展开按比例缩减的步骤。选择两种病毒用于该研究。第一种是嗜异性鼠白血病病毒(XMuLv)，其是一种来自逆转录病毒科家族的大小为80-130nm的包膜RNA病毒。第二种是猪细小病毒(PPV)，其是一种大小为18-26nm的非包膜DNA病。这被认为是一种强壮病毒，并且预期相比XMuLv通过提纯方案会展示低得多的病毒减少。
实施例2
利用CD24Fc治疗RA
该实施例显示CD24可用于治疗RA。因为在基本发作之前抗胶原抗体存在于RA患者中，而且因为该抗胶原抗体能够在小鼠中诱导RA-样病理学，因此利用已建立的RA被动转移模型来测试可溶性CD24的功效。将融合蛋白质以10mg/ml溶于PBS载体中。如在图4中所示，4种抗胶原抗体组合在所有四肢中引起严重的临床症状，这在载体和CD24Fc处理组中均于第7天达到顶峰。所述疾病的特征在于所有四肢中的整个爪发红及肿胀。一些四肢最大程度发炎，包括趾和多个关节。因此，该可溶性蛋白质不影响所述疾病的开始。惊人的是，CD24Fc处理组显示出迅速得多的康复。临床分数的下降在第9天开始是非常显著的，并最后持续整个24天的观察期。因此，CD24Fc提供有效的RA治疗。有趣的是，因为这种效果想是该病高峰之后观察到的，因此，很可能是阻断CD24影响炎症开始之后的慢性疾病过程。
实施例3
CD24药物动力学
将1mgCD24IgGl注射到幼稚C57BL/6小鼠中，并在不同时间点收集血样(5分钟、1小时、4小时、24小时、48小时、第7天、第14天和第21天)，其中每个时间点3只小鼠。稀释血清1:100，并利用夹心酶联免疫分析利用纯化的抗人CD24(3.3μg/ml)作为捕获抗体以及过氧化物酶缀合的羊抗-人IgGFc(5μg/ml)作为检测抗体检测CD24Ig的水平。如在图5a中所示，CD24Ig的衰减曲线显示出典型的蛋白质双相衰减。第一个生物扰动相具有12.4小鼠的半衰期。第二相遵从来自中央区室的一级消除模型。第二相的半衰期是9.54天，其类似于抗体的体内半衰期。这些数据表明，所示融合蛋白质在血流中非常稳定。在融合蛋白质被皮下注射的另一研究中，观察到几乎相同的9.52天的半衰期(图5b)。更重要的是，尽管CD24Ig在血液中达到峰值水平需要约48小时，但是血液中融合蛋白质的总量（如通过AUC所测量的）对于任一种注射途径而言基本相同。因此，从治疗的观点而言，不同的注射途径应当不影响药物的治疗效果。该观察极大简化了灵长类毒性和临床试验的试验设计。
实施例4
用于治疗RA的CD24
数十年来，一直假定RA主要是T-细胞介导的自身免疫性疾病。在最近二十年，在抗体以及B淋巴细胞在RA发病机理中可能起到的作用再度觉醒。因此，除类风湿因子之外，在RA患者中已经发现自体反应抗体的宿主，尽管其在人类中还未被最终阐明鉴别。然而，若干证据系已经证实，在小鼠模型中，对无所不在或组织特异性抗原具有特异性的抗体足以引发RA症状。例如，发现来自K/BxNTCR转基因小鼠的抗体在新宿主中完全能够转移类似RA的疾病。同样，4种抗胶原抗体的鸡尾酒（混合物）现在广泛用于在小鼠中诱发RA。该模型现在被称为CAIA，即胶原抗体诱导的关节炎。
对CAIA模型的遗传分析表明了补体的关键作用。尽管其他可能性存在，但是这些需求表明在RA的发病机理中潜在涉及抗体介导的组织损害。组织损害与炎症之间的关联在免疫学中是一种长期的观察。几乎二十年以前，Matzinger提出通常被称为危险理论的说法。大体上，她指出，当免疫系统在宿主中感觉到危险时其就会打开。尽管危险的性质在当时未被充分定义，但是已经确定，坏死与胞内成分诸如的HMGB1和热休克蛋白的释放相关，其被称为DAMP，即危险相关分子模式。发现DAMP促进炎性细胞因子和自身免疫性疾病的产生。在动物模型中，发现HMGB1和HSP90的抑制剂可改善RA。DAMP的参与唤起了如下的前景：针对对DAMP的宿主反应的负调节可用于RA治疗。CD24-Siglec10在对组织损害的宿主反应中相互作用。
利用扑热息痛引发的肝坏死并确保炎症，我们观察到通过相互作用，SiglecG,CD24对组织损害的宿主反应提供负调节。CD24是GPI锚定的分子，其在造血细胞和其他组织肝细胞中广泛表达。对人中的多种自身免疫性疾病（包括多发性硬化症、全身性红斑狼疮、RA和巨大细胞关节炎）的遗传分析显示在CD24多态现象与自身免疫性疾病的风险之间有着显著关联。SiglecG是I-凝集素家族成员，其通过其识别含唾液酸的结构来定义。SiglecG识别CD24上含唾液酸的结构并且通过树突状细胞负调节炎性细胞因子的产生(16)。就其与CD24相互作用的能力而言，人Siglec10和小鼠SiglecG在功能上是等价的。然而，不清楚是否存在在小鼠和人同源物之间是否存在一对一的对应。尽管机理仍需得到完整的解释，但是好似合理的是，SiglecG-相关的SHP1可能参与负调节。最近在Science中报告的这些数据导致一个新模型，在该模型中，CD24-SiglecG/10相互作用在识别病原体相关的分子模式(PAMP)与DAMP上可能起着关键作用(图6)。
至少两种重叠的机理可解释CD24的功能。首先，通过与多种DAMP结合，CD24可捕捉炎症刺激物，以防止它们与TLR或RAGE相互作用。这种概念通过下述观察而得到支持：即，CD24与包括HSP70、90、HMGB1和核仁素在内的数种DAMP分子缔合。第二，可能在与DAMP缔合之后，CD24可通过SiglecG刺激信号传导。两张机理可能一致地起作用，因为具有任一种基因的定向突变的小鼠发动了强得多的炎症应答。实际上，从来自CD24-/-或SiglecG-/-小鼠的骨髓培养的DC当用HMGB1、HSP70或HSP90刺激上产生高得多的炎性细胞因子。相反，在其对PAMP（诸如LPS和PolyLC.）的反应中没有发现效果。这些数据不仅提供了先天免疫系统区分病原体与组织损害的机理，而且表明CD24和SiglecG可作为针对与组织损害相关的疾病的潜在治疗靶标。
CD24Fc对胶原-抗体诱导的关节炎的治疗作用
考虑到在RA发病机理中对组织损害的先天免疫的疑似作用，以及在负调节此类反应方面CD24-SiglecG/10途径的作用，研究了刺激这种途径以治疗RA的可能性。基本上所有自身免疫学疾病的发病机理涉及诱导对自体抗原和自身免疫性破坏的免疫反应。自身免疫性破坏阶段集中在、基于CD24-SiglecG相互作用的新功能。因此，对于初步分析，采用胶原抗体诱导的关节炎来评价潜在的治疗效果。
如图7a所示，通过在第1天以2mg/小鼠静脉内注射四种抗胶原mAbs(MDBiosciences,St.Paul,MN)，以及在第3天腹膜内注射100μg/小鼠LPS(MDBioscience)，在8周龄BALB/c小鼠上诱导CAIA。在第1天用1mgCD24Fc或等体积的1xPBS载体作为负对照处理小鼠。如图7b所示，与载体对照相比，CD24Fc提供非常显著的治疗效果。
为理解CD24Fc在该模型中藉此降低关节炎的机理，从CD24Fc处理小鼠或PBS对照组的匀浆关节中测量细胞因子，以及通过细胞因子小球微阵列测量200μg组织匀浆的上清液。典型的实例示于图8a中，而概括数据示于图8b中。这些数据证明，全身施用的CD24降低可包括TNF-a、IL-6、MCP-1(CCL2)和IL-1β在内的多种炎性细胞因子的水平。
CD24Fc的效果通过CAIA小鼠的滑膜关节的组织学分析得以证实，如在图9中所呈现的。在第7天，在关节炎诱导之后，H&E染色证实PBS组中的关节滑膜被包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞在内的炎性细胞严重侵袭(图9a)。这在CD24Fc处理小鼠中要低得多(图9b)。另外，通过在PBS-处理(图9c)小鼠中番红O红色染色损失暴露出严重的关节损害，但在CD24Fc-处理组中未发生(图9d)。
为确定小鼠CD24Fc对进行中的RA是否具有治疗效果，在RA诱导后第5或7天开始处理。如图10所示，在快达CD24Fc处理之后两天观察到RA评分显著降低。即使没有附加的处理，治疗效果在剩下的观察期一直持续。这些数据还增强了CD24Fc对进行中疾病的治疗潜力。
为了评价CD24Fc在人类中的治疗剂量，通过很大反应的剂量来滴定测量CD24Fc。如图11所示，少达2微克/小鼠足以具有统计学显著的治疗效果。
CD24Fc的Siglecg-依赖性治疗效果
为测定CD24Fc通过与SiglecG相互作用是否保护小鼠，我们测定了治疗效果是否依赖于Siglecg基因。因为Siglecg-缺乏型小鼠利用来自C57BL/6小鼠的ES细胞产生，我们采用WTC57BL/6小鼠作为对照。如图12所示，因为B小鼠已知对CAIA较不敏感，因此总疾病分数低于在BALB/c小鼠中所观察到的。然而，单次注射CD24Fc基本消除了WT小鼠中的临床症状。重要的是，即使疾病在Siglecg-缺乏型小鼠中不太严重，但是CD24Fc没有治疗效果。因此，CD24Fc的治疗效果严格依赖于Siglecg基因。
总言之，本文所述的数据证实了CD24Fc对CAIA具有很高的治疗效果。鉴于我们在安全性、稳定性方面的大量数据以及我们成功地制造出CD24Fc，所有这些都表明所述融合蛋白质作为RA治疗剂的巨大潜力。
实施例5
毒性
对啮齿类和非人类灵长类的广泛毒性研究已经显示，在小鼠和非人类灵长类中12.5至125mg/g的剂量没有药物相关的毒性。
所引用的参考文献
1.Springer,T.,G.Galfre,D.S.Secher,andC.Milstein.1978.Monoclonalxenogeneicantibodiestomurinecellsurfaceantigens:identificationofnovelleukocytedifferentiationantigens.EurJImmunol8:539-551.
2.Pierres,M.,P.Naquet,J.Barbet,S.Marchetto,I.Maries,C.Devaux,M.Barad,R.Hyman,andG.Rougon.1987.EvidencethatmurinehematopoieticcellsubsetmarkerJlIdisattachedtoaglycosyl-phosphatidylinositolmembraneanchor.EurJImmunol17:1781-1785.
3.Rougon,G.,L.A.Alterman,K.Dennis,X.J.Guo,andC.Kinnon.1991.Themurineheat-stableantigen:adifferentiationantigenexpressedinboththehematolymphoidandneuralcelllineages.EurJImmunol21:1397-1402.
4.Liu,Y.,andC.A.J.Janeway.1992.CellsthatpresentbothspecificligandandthecostimulatoryactivityarethemostefficientinducerofclonalexpansionofnormalCD4Tcells.ProcNatlAcadSciUSA89:3845-3849.
5.Liu,Y.,B.Jones,A.Aruffo,K.M.Sullivan,P.S.Linsley,andC.A.Janeway,Jr.1992.Heat-stableantigenisacostimulatorymoleculeforCD4Tcellgrowth.JExpMed175:437-445.
6.Liu,Y.,B.Jones,W.Brady,C.A.Janeway,Jr.,P.S.Linsley,andP.S.Linley.1992.Co-stimulationofmurineCD4Tcellgrowth:cooperationbetweenB7andheat-stableantigen[publishederratumappearsinEurJImmunol1993Mar;23(3):780].EurJImmunol22:2855-2859.
7.Liu,Y.,R.H.Wenger,M.Zhao,andP.J.Nielsen.1997.DistinctcostimulatorymoleculesarerequiredfortheinductionofeffectorandmemorycytotoxicTlymphocytes.JExpMed185:251-262.
8.Wu,Y.,Q.Zhou,P.Zheng,andY.Liu.1998.CD28-independentinductionofThelpercellsandimmunoglobulinclassswitchesrequirescostimulationbytheheat-stableantigen.JExpMed187:1151-1156.
9.Bai,X.F.,J.Q.Liu,X.Liu,Y.Guo,K.Cox,J.Wen,P.Zheng,andY.Liu.2000.Theheat-stableantigendeterminespathogenicityofself-reactiveTcellsinexperimentalautoimmuneencephalomyelitis.JClinInvest105:1227-1232.
10.Bai,X.F.,O.Li,Q.Zhou,H.Zhang,P.S.Joshi,X.Zheng,Y.Liu,Y.Wang,andP.Zheng.2004.CD24ControlsExpansionandPersistenceofAutoreactiveTCellsintheCentralNervousSystemduringExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis.JExpMed200:447-458.
11.Otaegui,D.,A.Saenz,P.Camano,L.Blazquez,M.Goicoechea,J.Ruiz-Martinez,J.Olaskoaga,J.A.Emparanza,andA.LopezdeMunain.2006.CD24V/VisanalleleassociatedwiththeriskofdevelopingmultiplesclerosisintheSpanishpopulation.MultScler12:511-514.
12.Rueda,B.,J.A.Miranda-Filloy,J.Martin,andM.A.Gonzalez-Gay.2008.AssociationofCD24genepolymorphismswithsusceptibilitytobiopsy-provengiantcellarteritis.J.Rheumatol.35:850-854.
13.Sanchez,E.,A.K.Abelson,J.M.Sabio,M.A.Gonzalez-Gay,N.Ortego-Centeno,J.Jimenez-Alonso,E.deRamon,J.Sanchez-Roman,M.A.Lopez-Nevot,I.Gunnarsson,E.Svenungsson,G.Sturfelt,L.Truedsson,A.Jonsen,M.F.Gonzalez-Escribano,T.Witte,M.E.Alarcon-Riquelme,andJ.Martin.2007.AssociationofaCD24genepolymorphismwithsusceptibilitytosystemiclupuserythematosus.ArthritisRheum.56:3080-3086.
14.Wang,L.,S.Lin,K.Rammohan,Z.Liu,J.Liu,R.-H.Liu,N.Guinther,Q.Zhou,T.Wang,X.Zheng,D.J.Birmingham,B.H.Rovin,L.A.Herbert,Y.Wu,D.J.Lynn,G.Cooke,C.Y.Yu,P.Zheng,andY.Liu.2007.Adi-nucleotidedeletioninCD24confersprotectionagainstautoimmunediseases.PlosGenetics3:e49.
15.Zhou,Q.,K.Rammohan,S.Lin,N.Robinson,O.Li,X.Liu,X.F.Bai,L.Yin,B.Scarberry,P.Du,M.You,K.Guan,P.Zheng,andY.Liu.2003.CD24isageneticmodifierforriskandprogressionofmultiplesclerosis.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica100:15041-15046.
16.Chen,G.Y.,J.Tang,P.Zheng,andY.Liu.2009.CD24andSiglec-10SelectivelyRepressTissueDamage-InducedImmuneResponses.Science323:1722-1725.
17.Wiens,A.,R.Venson,C.J.Correr,M.F.Otuki,andR.Pontarolo.Meta-analysisoftheefficacyandsafetyofadalimumab,etanercept,andinfliximabforthetreatmentofrheumatoidarthritis.Pharmacotherapy30:339-353.
18.Panayi,G.S.,J.S.Lanchbury,andG.H.Kingsley.1992.TheimportanceoftheTcellininitiatingandmaintainingthechronicsynovitisofrheumatoidarthritis.ArthritisRheum35:729-735.
19.Banda,N.K.,J.M.Thurman,D.Kraus,A.Wood,M.C.Carroll,W.P.Arend,andV.M.Holers.2006.Alternativecomplementpathwayactivationisessentialforinflammationandjointdestructioninthepassivetransfermodelofcollagen-inducedarthritis.JImmunol177:1904-1912.
20.Korganow,A.S.,H.Ji,S.Mangialaio,V.Duchatelle,R.Pelanda,T.Martin,C.Degott,H.Kikutani,K.Rajewsky,J.L.Pasquali,C.Benoist,andD.Mathis.1999.FromsystemicTcellself-reactivitytoorgan-specificautoimmunediseaseviaimmunoglobulins.Immunity10:451-461.
21.Maccioni,M.,G.Zeder-Lutz,H.Huang,C.Ebel,P.Gerber,J.Hergueux,P.Marchal,V.Duchatelle,C.Degott,M.vanRegenmortel,C.Benoist,andD.Mathis.2002.ArthritogenicmonoclonalantibodiesfromK/BxNmice.JExpMed195:1071-1077.
22.vanHolten,J.,K.Pavelka,J.Vencovsky,H.Stahl,B.Rozman,M.Genovese,A.J.Kivitz,J.Alvaro,G.Nuki,D.E.Furst,G.Herrero-Beaumont,LB.Mclnnes,P.Musikic,andP.P.Tak.2005.Amulticentre,randomised,doubleblind,placebocontrolledphaseIIstudyofsubcutaneousinterferonbeta-lainthetreatmentofpatientswithactiverheumatoidarthritis.AnnRheumDis64:64-69.
23.Vilcek,J.,andM.Feldmann.2004.Historicalreview:Cytokinesastherapeuticsandtargetsoftherapeutics.Trendsinpharmacologicalsciences25:201-209.
24.Rantapaa-Dahlqvist,S.,B.A.deJong,E.Berglin,G.Hallmans,G.Wadell,H.Stenlund,U.Sundin,andW.J.vanVenrooij.2003.AntibodiesagainstcycliccitrullinatedpeptideandIgArheumatoidfactorpredictthedevelopmentofrheumatoidarthritis.ArthritisRheum48:2741-2749.
25.vanVenrooij，W.J.,andG.J.Pruijn.2000.Citrullination:asmallchangeforaproteinwithgreatconsequencesforrheumatoidarthritis.Arthritisresearch2:249-251.
26.Jiang,W.,andD.S.Pisetsky.2007.MechanismsofDisease:theroleofhigh-mobilitygroupprotein1inthepathogenesisofinflammatoryarthritis.Natureclinicalpractice3:52-58.
27.vanBeijnum,J.R.,W.A.Buurman,andA.W.Griffioen.2008.Convergenceandamplificationoftoll-likereceptor(TLR)andreceptorforadvancedglycationendproducts(RAGE)signalingpathwaysviahighmobilitygroupBl(HMGB1).Angiogenesis11:91-99.
28.Sanchez,E.,B.Fernandez-Gutierrez,M.A.Gonzalez-Gay,A.Balsa,A.Garcia,L.Rodriguez,D.Pascual-Salcedo,M.F.Gonzalez-Escribano,andJ.Martin.2008.InvestigatingtheroleofCD24genepolymorphismsinrheumatoidarthritis.AnnRheumDis67:1197-1198.
29.Kay,R.,P.M.Rosten,andR.K.Humphries.1991.CD24,asignaltransducermodulatingBcellactivationresponses,isaveryshortpeptidewithaglycosylphosphatidylinositolmembraneanchor.JImmunol147:1412-1416.
30.Kay,R.,F.Takei,andR.K.Humphries.1990.ExpressioncloningofacDNAencodingMl/69-Jlldheat-stableantigens.JImmunol145:1952-1959.
31.Motari,E.,X.Zheng,X.Su,Y.Liu,M.Kvaratskhelia,M.Freitas,andP.G.Wang.2009.AnalysisofRecombinantCD24GlycansbyMALDI-TOF-MSRevealsPrevalenceofSialyl-TAntigen.Americanjournalofbiomedicalsciences1:1-11.
32.Liu,Y.1994.ThecostimulatorypathwayforTcellresponse.RGLandes,Austin.

Claims (7)

1.一种CD24蛋白质，其中所述CD24蛋白质的序列由在C端与人IgG1蛋白的铰链区和CH2与CH3结构域相融合的成熟人CD24序列构成，该成熟人CD24序列由SEQIDNO:1构成。
2.如权利要求1所述的CD24蛋白质，其中所述CD24蛋白质是可溶的。
3.如权利要求1所述的CD24蛋白质，其中所述CD24蛋白质是糖基化的。
4.如权利要求1所述的CD24蛋白质，其中所述CD24蛋白质利用真核蛋白质表达系统生产。
5.如权利要求4所述的CD24蛋白质，其中所述表达系统包括包含在中国仓鼠卵巢细胞系中的载体或复制缺陷逆转录病毒载体。
6.如权利要求5所述的CD24蛋白质，其中所述复制缺陷逆转录病毒载体被稳定整合到真核细胞的基因组中。
7.如权利要求1-6中任一项所述的CD24蛋白质在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130231464A1 (en) * 2010-04-28 2013-09-05 Oncolmmune, Inc. Methods of use of soluble cd24 for therapy of rheumatoid arthritis
CA2982612A1 (en) 2015-05-07 2016-11-10 Oncoimmune, Inc. Use of cd24 for lowering low-density lipoprotein cholesterol levels
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KR101789449B1 (ko) * 2016-12-08 2017-10-23 박문수 폐유지를 이용한 지방산 메틸에스테르 제조방법
EP3592375A4 (en) * 2017-03-07 2021-01-20 Oncoimmune, Inc. METHOD OF USING SOLUBLE CD24 FOR TREATMENT OF SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS
JP2020519627A (ja) * 2017-05-15 2020-07-02 オンコイミューン， インコーポレイテッド 神経保護および再ミエリン化のための可溶性ｃｄ２４の使用方法
US11547741B2 (en) * 2017-05-22 2023-01-10 Oncoimmune, Inc. Methods of use of soluble CD24 for treating immune related adverse events in cancer therapies
EP3762014A4 (en) * 2018-03-05 2021-08-25 Oncoimmune, Inc. METHOD OF USING SOLUBLE CD24 TO TREAT ACQUIRED IMMUNE DEFECTIVITY SYNDROME (HIV / AIDS)
CA3102372A1 (en) * 2018-06-04 2019-12-12 Oncoimmune, Inc. Methods of use of cd24 for the prevention and treatment of graft versus host disease and mucositis
CN112480237B (zh) * 2019-09-12 2023-10-17 上海津曼特生物科技有限公司 一种融合蛋白及其制备方法和应用
CN118076625A (zh) * 2021-09-28 2024-05-24 广州昂科免疫生物技术有限公司 包含071核心肽的融合蛋白及其用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101254302A (zh) * 1999-05-07 2008-09-03 杰南技术公司 使用与b细胞表面标志结合的拮抗剂治疗自身免疫病

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US5541087A (en) * 1994-09-14 1996-07-30 Fuji Immunopharmaceuticals Corporation Expression and export technology of proteins as immunofusins
US5759775A (en) * 1994-10-27 1998-06-02 Genetech, Inc. Methods for detecting nucleic acids encoding AL--1 neurotrophic factor
US20030106084A1 (en) * 2000-03-29 2003-06-05 Yang Liu Methods of blocking tissue destruction by autoreactive T cells
DK1267909T3 (da) * 2000-03-29 2010-11-08 Univ Ohio State Res Found Fremgangsmåder til blokering af vævsdestruktion ved autoreaktive T-celler
US20030095966A1 (en) * 2000-03-29 2003-05-22 Yang Liu Method of blocking tissue destruction by autoreactive T cells
PL362324A1 (en) * 2001-02-19 2004-10-18 Merck Patent Gmbh Artificial fusion proteins with reduced immunogenicity
US20050214290A1 (en) * 2001-03-29 2005-09-29 Yang Liu Methods of blocking tissue destruction by autoreactive T cells
BR0211091A (pt) * 2001-07-13 2004-06-15 Merck Patent Gmbh Métodos para redução de imunogenicidade de polipeptìdeos
CA2505601C (en) 2002-11-15 2014-10-28 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
WO2004091657A2 (en) * 2003-04-09 2004-10-28 Genentech, Inc. Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a tnf-alpha inhibitor
AU2007242919B8 (en) * 2003-04-09 2011-11-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a TNF-alpha inhibitor
US20090011407A1 (en) * 2003-11-26 2009-01-08 The Ohio State University Research Foundation Polymorphic Cd24 Genotypes that are Predictive of Multiple Sclerosis Risk and Progression
CA2567496A1 (en) * 2004-05-21 2005-12-01 Xencor, Inc. C1q family member proteins with altered immunogenicity
WO2006053245A2 (en) * 2004-11-12 2006-05-18 Iogenetics, Llc Retroviral vectors with introns

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101254302A (zh) * 1999-05-07 2008-09-03 杰南技术公司 使用与b细胞表面标志结合的拮抗剂治疗自身免疫病

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Investigating the role of CD24 gene polymorphisms in rheumatoid arthritis;Sanchez e et al;<Annals of the rheumatic diseases >;20080831;1197-1198 *

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