EA036805B1 - Белок cd24 для подавления повреждения ткани, опосредованного damp - Google Patents
Белок cd24 для подавления повреждения ткани, опосредованного damp Download PDFInfo
- Publication number
- EA036805B1 EA036805B1 EA201790538A EA201790538A EA036805B1 EA 036805 B1 EA036805 B1 EA 036805B1 EA 201790538 A EA201790538 A EA 201790538A EA 201790538 A EA201790538 A EA 201790538A EA 036805 B1 EA036805 B1 EA 036805B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- protein
- seq
- human
- mice
- sequence
- Prior art date
Links
- 101150082143 CD24 gene Proteins 0.000 title description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 title description 3
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 title description 2
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 claims abstract description 137
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 claims abstract description 122
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 16
- 102000044489 human CD24 Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 6
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract 1
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 abstract 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 48
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 19
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 15
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 108010047827 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Proteins 0.000 description 10
- 102000007073 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Human genes 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 230000003367 anti-collagen effect Effects 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 8
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 8
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 101100533516 Mus musculus Siglec10 gene Proteins 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 6
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 101000884281 Rattus norvegicus Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 5
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 5
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 3
- 241000713893 Xenotropic murine leukemia virus Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 3
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 3
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 2
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 2
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 102100021657 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 2
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 2
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 108010045634 B7 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 102000055207 HMGB1 Human genes 0.000 description 1
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 1
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 description 1
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000651021 Homo sapiens Splicing factor, arginine/serine-rich 19 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000617285 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101000836952 Mus musculus Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100021010 Nucleolin Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000005622 Receptor for Advanced Glycation End Products Human genes 0.000 description 1
- 108010045108 Receptor for Advanced Glycation End Products Proteins 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 101710143293 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Proteins 0.000 description 1
- 102100027164 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100027779 Splicing factor, arginine/serine-rich 19 Human genes 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 101710128901 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 231100000230 acceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003286 arthritogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 1
- 108010061103 cyclic citrullinated peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 229940073621 enbrel Drugs 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000003481 heat shock protein 90 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010019692 hepatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 231100000149 liver necrosis Toxicity 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 108010044762 nucleolin Proteins 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000005599 propionic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012562 protein A resin Substances 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Предложен белок CD24 для подавления ответа хозяина на молекулярные паттерны, связанные с опасностью (DAMP) у субъекта, где аминокислотная последовательность белка CD24 состоит из зрелого полипептида CD24 человека, слитого с Fc фрагментом белка иммуноглобулина человека (Ig), где последовательность зрелого полипептида CD24 человека состоит из последовательности SEQ ID NO: 1 и где белок CD24 не содержит аланина или валина в положении, непосредственно С-терминальном по отношению к SEQ ID NO: 1.
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данный документ заявляет приоритет по первоначальной заявке США US 61/329,078, поданной 28 апреля 2010, которая включена в данный документ во всей полноте путем ссылки.
Область техники
Изобретение относится к белку CD24 для подавления ответа хозяина на молекулярные паттерны, связанные с опасностью (DAMP), у субъекта.
Предшествующий уровень техники
Этот раздел содержит информацию, которая необязательно является уровнем техники, и краткое описание настоящего изобретения, которое не является раскрытием его в полном объеме или всех его признаков.
CD24 известен как устойчивый к нагреванию антиген (1). Он экспрессируется как гликозилфосфатидил-инозитол (ГФИ)-якорная молекула (2) и имеет широкое распространение в различных клеточных путях (3). Благодаря тенденции CD24 экспрессироваться на незрелых клетках, он используется также как часть маркеров стволовых клеток и для дифференцировки лимфоцитов. Первой функцией, связанной с CD24, является со-стимулирующая активность (совместная) для антиген-специфического ответа Т-клеток (4-6). Изучение in vivo показало, что как со-стимулятор для активации Т-клеток в лимфоидных органах, CD24 избыточен, но он становится необходимым в отсутствие CD28 (7, 8). Это не будет происходить в случае локальных органов-мишеней, которые не так богаты со-стимулятором. В соответствии с этим понятием авторы изобретения показали, что мыши с целевой мутацией CD24 полностью устойчивы к индуцированию экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ) (9) (10).
Полиморфизмы CD24 человека связаны с риском и развитием серьезных аутоиммунных заболеваний (11-15), включающих множественный склероз и ревматоидный артрит (РА). В случаях множественного склероза авторы изобретения сообщали, что растворимый CD24, состоящий из внеклеточной части CD24 мыши и IgG1 Fc человека, улучшает клинический симптом экспериментальных аутоиммунных заболеваний, модель рассеянного склероза на мышах (9). Более поздние исследования одного из авторов изобретения показали, что CD24 взаимодействует и подавляет ответ хозяина на молекулярные паттерны, связанные с опасностью (DAMP) (16).
РА поражает 0,5-1% населения. Хотя в настоящее время существует ряд облегчающих заболевание антиревматических лекарств (DMARD), но даже золотой стандарт биологических DMARD, лекарственные средства, нацеленные на фактор некроза опухоли-альфа, приводят к 50% улучшению в соответствии с Критериями Улучшения Американского Колледжа Ревматологии (АКР50) менее чем у 50% пациентов, получающих такое лечение (17). Не существует лечения для РА. Таким образом, необходимо тестировать дополнительные варианты терапии для РА. Предполагается, что РА является аутоиммунным заболеванием суставов, хотя причины заболевания остаются в значительной степени неясными. Ряд исследований вовлекают Т-клетки в патогенез ревматоидного артрита (18). Недавно было показано, что перенос антител может вызвать развитие воспаления суставов у мышей (19-21). Патология повреждений напоминает ревматоидный артрит человека.
Одной из наиболее интересных концепций, установленных в ходе исследований с пассивным переносом РА с помощью антител, является то, что могут наблюдаться тканеспецифичные аутоиммунные заболевания, даже если антитела специфичны для белков, которые экспрессируются везде (19-21). Это замечание важно, поскольку оно предполагает, что, несмотря на общий патогенез, аутоиммунные заболевания различных органов/тканей могут требовать различного лечения. В поддержку этого замечания, интерферон бета, который широко используется для лечения рассеянного склероза, показывает слабый эффект при лечении РА (22).
Модели на животных, относящиеся к РА человека, играют важную роль для улучшения развития терапии с DMARD. Например, индуцированный коллагеном артрит у мышей и крыс был критичен для развития лекарственных средств для РА (23). Недавно было показано, что адаптивный перенос антиколлагеновых антител вызывает сильное РА-подобное поражение у мышей (19). Так как содержание антител повышено у РА пациентов перед началом заболевания (24, 25), пассивный перенос коллагенспецифических антител является соответствующей моделью для РА у людей.
Так как патогенез РА включает ответ хозяина на DAMP (26, 27) и так как молекула CD24 негативно регулирует ответ хозяина на DAMP (16), авторы изобретения исследовали возможность применения растворимого CD24 для лечения РА. Модель пассивного переноса для РА была выбрана из-за отношения к болезням человека, а также простоты постановки эксперимента.
Краткое описание изобретения
Предложен белок CD24 для подавления ответа хозяина на молекулярные паттерны, связанные с опасностью (DAMP), у субъекта. Белок CD24 содержит последовательность зрелого CD24 человека. Зрелая форма CD24 человека, входящая в состав белка по изобретению, состоит из полипептида, имеющего последовательность SEQ ID NO: 1. Дополнительно также раскрывается вариант белка зрелого CD24 человека, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2, и зрелый белок CD24 мыши, имеющий последовательность SEQ ID NO: 3. Белок CD24 по изобретению состоит из зрелого полипептида CD24 человека и фрагмента иммуноглобулина человека (Ig), который может быть слит с N-концом или С-концом зрелого
- 1 036805
CD24. Часть Ig может являться Fc частью белка Ig человека, которая может представлять собой IgG1,
IgG2, IgG3, IgG3 или IgA. Fc фрагмент может также состоять из шарнирного участка и СН3 и СН4 доменов IgM человека.
Белок CD24 может быть растворимым и может быть гликозилирован. Белок CD24 может быть продуцирован с применением системы экспрессии белка в эукариотах. Система экспрессии может включать вектор, содержащийся в клеточной линии СНО (линия клеток яичника китайского хомячка), или дефектный по репликации ретровирусный вектор. Дефектный по репликации ретровирусный вектор может быть стабильно интегрирован в геном эукариотической клетки.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 Аминокислотный состав гибридного белка, CD24 IgG1 Fc (SEQ ID NO: 5). Подчеркнутые 26 аминокислот являются сигнальным пептидом CD24 (SEQ ID NO: 4). Взятая в рамку, выделенная жирным шрифтом, часть последовательности представляет собой зрелый белок CD24, используемый в гибридном белке (SEQ ID NO: 1). Последняя аминокислота (А или V), которая обычно присутствует в зрелом белке CD24, была убрана из конструкции для того, чтобы избежать иммуногенности. Не подчеркнутые, не выделенные жирным шрифтом буквы являются последовательностью IgG1 Fc, включая шарнирную область и домены СН1 и СН2 (SEQ ID NO: 6).
Фиг. 2. Способ очистки и процессирования CD24 IgG1 Fc, экспрессированного в клеточных линиях млекопитающих.
Фиг. 3. Варьирования аминокислотной последовательности между зрелыми белками CD24 из мыши (SEQ ID NO: 3) и человека (SEQ ID NO: 2). Жирным шрифтом выделены потенциальные сайты гликозилирования, сайты N-гликозилирования выделены красным.
Фиг. 4. Терапевтический эффект CD24Ig для РА. Самцов мышей линии BALB/c в возрасте 8-10 недель иммунизировали внутривенно в количестве 2 мг/мышь индуцирующей артрит смесью антител ArtritoMab (MDbioproducts, St Paul, MN). Через 2 суток мышам инъецировали внутрибрюшинно 90 мкг ЛПС (LPS-липополисахарид), растворенного в ФСБ (фосфатно-солевом буфере). Развитие болезни наблюдали ежедневно по следующей системе оценки:
- нет реакции, норма; 1 - слабое, но отчетливое покраснение и опухание лодыжки/запястья или несомненное покраснение и опухание, ограниченное отдельными пальцами, независимо от количества пораженных пальцев.; 2 - среднее или сильное покраснение и опухание лодыжки/запястья; 3 - покраснение и опухание всей лапы; 4 - максимально воспаленная конечность, включая пальцы, с участием многих суставов. Приведенные данные являются комбинированной оценкой четырех конечностей (среднее значение ± ошибка среднего). * Р<0,05, ** Р<0,01, *** Р<0,001. Разница между двумя группами является также значимой на основании теста Фишера PLSD (или безопасный t-тест по Фишеру).
Фиг. 5. WinNonlin компартментный моделирующий анализ фармакокинетики CD24 IgG1. Белые кружки представляют среднее значение из 3 мышей, а линия графика является предсказанной фармакокинетической кривой.
а) Внутривенная инъекция 1 мг CD24 IgG1. б) Подкожная инъекция 1 мг CD24 IgG1. в) Сравнение общих количеств антител в крови с помощью измерения площади под кривой (ПИК), периода полувыведения и максимальной концентрации в крови. Заметим, что полностью ПИК и Кмакс для подкожной инъекции составляет около 80% от внутривенной инъекции, хотя разница не является статистически значимой.
Фиг. 6. Взаимодействие CD24-Siglec G (10) различается между РАМР и DAMP.
A. На ответ хозяина на РАМР не влияет взаимодействие CD24-Siglec G (10).
Б. CD24-Siglec G (10) взаимодействие подавляет ответ хозяина на DAMP, возможно, через CD24Siglec G/10-ассоциированный SHP-1.
Фиг. 7. Единичная инъекция CD24 Fc снижает клинические показатели АИАК (артрит, индуцированный антителами к коллагену).
А. Схема экспериментов. Мыши BALB/c (возраст 8 недель) получали моноклональные антитела на 1 сутки в сочетании либо с носителем, либо с гибридными белками. Мышам инъецировали ЛПС на 3 сутки и наблюдали ежедневно в течение 3 недель.
Б. CD24 Fc снижает клинические показатели АИАК. Гибридные белки (1 мг/мышь) или носители инъецировали один раз на 1 сутки. Клинические показатели определяли двойным слепым методом. *, Р<0,05; **, Р<0,01; ***, Р<0,001. Влияние CD24 воспроизводили в 6 независимых экспериментах, в которые было включено в общем 52 мыши в группе ФСБ и 54 мыши в группе CD24 Fc.
Фиг. 8. CD24 Fc снижает уровни воспалительных цитокинов в суставе и АИАК. АИАК инициируют и лечат как показано на схеме фиг. 7А. Воспалительные цитокины измеряли с помощью набора гранул с антителами от BD Pharmingen.
А. Репрезентативный профиль СКАФ.
Б. Общее значение сниженных цитокинов (среднее значение ± ошибка среднего), измеренное в гомогенате сустава.
Фиг. 9. CD24 Fc снижает воспаление и разрушение хряща в суставе. На 7 сутки переднюю и заднюю лапы отделяли, как от обработанных CD24 Fc, так и от контрольных мышей, фиксировали в 4% па- 2 036805 раформальдегиде в течение 24 ч с последующей декальцификацией 5% муравьиной кислотой. Лапы затем заливали в парафин и продольный срез окрашивали гематоксилин-эозином и Сафранином О (SigmaAldrich).
Фиг. 10. Терапевтический эффект CD24 Fc, введенного на 5 сутки индуцирования АИАК. Индуцированные АИАК мыши были случайным образом разделены на две группы, получающие либо носитель (ФСБ), либо CD24 Fc. Мышей оценивали двойным слепым методом. Показан репрезентативный из трех независимых экспериментов.
Фиг 11. Низкие дозы CD24 Fc предупреждают развитие АИАК.
А. Схема экспериментов.
Б. Клиническая оценка артрита, оценка двойным слепым способом.
Фиг. 12. Siglecg (иммуноглобулин-подобный лектин, связывающий сиаловую кислоту) необходим для терапевтического эффекта CD24 Fc, WT (дикий тип) (а) и Siglecg -/- мыши (б) получали либо контроль с носителем, либо CD24 Fc в сочетании с коктейлем антиколлагеновых моноклональных антител. Клинические показатели определяли ежедневно двойным слепым методом.
Подробное описание изобретения
Изобретатели обнаружили, что растворимая форма CD24 высоко эффективна при лечении ревматоидного артрита.
1. Определения.
Терминология, используемая здесь, предназначена для описания только конкретных воплощений и не ограничивается ими. При использовании в описании и формуле изобретения формы единственного числа включают также множественное число, если в контексте не указано явно на другое.
Для перечисления числовых интервалов, указанных здесь, каждый промежуточный номер между ними ожидается с той же степенью точности. Например, для интервала 6-9, числа 7 и 8 предполагаются в дополнение к 6 и 9, а для интервала 6,0-7,0 явно предполагаются числа 6,0; 6,1; 6,2; 6,3; 6,4; 6,5; 6,6; 6,7; 6,8; 6,9 и 7,0.
Пептид или полипептид является связанной последовательностью аминокислот и может быть естественной, синтетической или сочетанием естественной и синтетической.
По существу идентичны может означать, что первая и вторая аминокислотные последовательности по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% перекрывают область из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 или 300 аминокислот.
Лечение или лечить по отношению к защите животного от заболевания, означает предупреждение, подавление, прекращение или полное устранение заболевания. Предупреждение заболевания включает введение композиции по настоящему изобретению животному до начала заболевания. Подавление заболевания включает введение композиции по настоящему изобретению животному после индуцирования заболевания, но до его клинического проявления. Подавление заболевания включает введение композиции по настоящему изобретению животному после клинического проявления заболевания.
Вариант может означать пептид или полипептид, который отличается по аминокислотной последовательности путем вставки, удаления или консервативной замены аминокислот, но сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность. Показательные примеры биологической активности включают способность связывать толл-подобный рецептор и быть связанным специфическим антителом. Вариант может также означать белок с аминокислотной последовательностью, которая по существу идентична контрольному белку с аминокислотной последовательностью, которая сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность. Консервативное замещение аминокислоты, то есть замещение аминокислоты другой аминокислотой с аналогичными свойствами (например, гидрофильностью, степенью и распределением заряженных участков) обычно считают незначительным изменением. Эти незначительные изменения могут быть идентифицированы, в частности, учитыванием индекса гидрофобности аминокислот, как известно специалистам. Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982). Индекс гидрофобности аминокислоты основан на рассмотрении ее гидрофобности и заряда. Специалистам известно, что аминокислоты, имеющие похожие индексы гидрофобности, могут быть замещены и при этом сохранять функцию белка. В одном аспекте аминокислоты, имеющие индексы гидрофобности ±2, являются замещенными. Гидрофильность аминокислот может также быть использована для выявления замещений, которые приведут к получению белков, сохраняющих биологическую функцию. Рассмотрение гидрофильности аминокислот в контексте пептида позволяет вычислить наибольшую локальную среднюю гидрофильность этого пептида, полезный критерий, который, как было показано, хорошо коррелирует с антигенностью и иммуногенностью (патент США № 4554101, включен сюда полностью путем ссылки). Замещение аминокислот, имеющих похожие значения гидрофильности, может привести к пептидам, сохраняющим биологическую активность, например, иммуногенность, как известно специалистам. Замещения могут быть произведены аминокислотами, имеющими значения гидрофильности, находящиеся в пределах ±2 друг от друга. Как на индекс гидрофобности, так и на индекс гидрофильности влияет, в ча- 3 036805 стности, боковая цепь этой аминокислоты. В соответствии с этим наблюдением аминокислотные замещения, которые совместимы с биологической функцией, как известно, зависят от относительного подобия аминокислот, и в частности боковых цепей этих аминокислот, как показывают гидрофобность, гидрофильность, заряд, размер и другие свойства.
2. CD24.
В данном описании приведен белок CD24, который содержит аминокислотную последовательность зрелого полипептида CD24 человека, представляющую собой SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK (SEQ ID NO: 1). CD24 может быть растворим. CD24 по изобретению является слитым с Fc фрагментом белка иммуноглобулина человека (Ig). CD24 может существовать в одной из двух аллельных форм таким образом, что С-терминальная аминокислота зрелого CD24 человека может быть валином или аланином. С-терминальный валин или аланин может быть иммуногенным, он исключен из CD24 по изобретению, для снижения его иммуногенности. Разница между двумя аллелями может влиять на риск развития аутоиммунных заболеваний, включая множественный склероз и РА. Тем не менее, так как две аллельные формы влияют на уровни экспрессии формы, связанной с мембраной, изменения не должны влиять на функцию CD24.
Несмотря на существенные изменения последовательности в аминокислотной последовательности зрелых CD24 мыши и человека, они являются функционально эквивалентными во взаимодействии с молекулярными паттернами, связанными с опасностью (DAMP). Поскольку ответ хозяина на DAMP считается важным для патогенеза PA, CD24 мыши и человека могут быть функционально эквивалентными при лечении РА. Как результат консервативности последовательностей между CD24 мыши и человека, прежде всего в С-конце и в частоте сайтов гликозилирования, значительные изменения в зрелых CD24 белках могут допущены при применении CD24 для лечении РА, особенно если эти изменения не влияют на консервативные остатки на С-конце или не влияют на сайты гликозилирования CD24 либо мыши, либо человека.
А. Слияние.
CD24 может быть слит по своему N- или С-концу с Fc фрагментом белка IgG человека. Fc часть может включать шарнирную область и СН2 и СН3 домены белка IgG.
Белок IgG может быть IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, или IgA человека. Fc часть может включать SEQ ID NO: 6. Белок Ig может также быть IgM, a Fc часть может включать шарнирную область и СН3 и СН4 домены IgM. CD24 может также быть слит по своему N- или С-концу с белковой меткой, которая может являться GST, His или FLAG. Способы получения гибридных белков и очистка гибридных белков хорошо известны специалистам.
Б. Продуцирование.
CD24 может быть сильно гликозилирован и может участвовать в функциях CD24, таких как состимулирование и взаимодействие с молекулярными паттернами, связанными с опасностью. CD24 может быть получен с применением эукариотической системы экспрессии. Система экспрессии может повлечь за собой экспрессию из вектора в клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО). Система может также быть вирусным вектором, таким как ретровирусным вектором, дефектным по репликации, который может быть использован для инфицирования эукариотических клеток. CD24 может также был получен из стабильной линии клеток, которые экспрессируют CD24 из вектора или части вектора, которая была интегрирована в клеточный геном. Стабильная клеточная линия может экспрессировать CD24 из интегрированного ретровирусного вектора, дефектного по репликации. Система экспрессии может быть GPEx™.
3. Способ лечения.
CD24 может быть применен для лечения ревматоидного артрита. CD24 может быть введен субъекту при необходимости. Субъект может быть млекопитающим, таким как человек.
А. Комбинированная терапия CD24.
CD24 может быть комбинирован с другим лекарственным средством, таким как лекарства, модифицирующие течение заболевания (ЛМТЗ). Препарат может быть нестероидным противовоспалительным препаратом (НПВП), который может быть производным пропионовой кислоты, производным уксусной кислоты, производным еноловой кислоты, производным фенаминовой кислоты или селективным ингибитором Сох2. Лекарственное средство может также быть кортикостероидом или метотрексатом. Лекарственное средство может быть биологическим, которое может быть антагонистом ФНО-а (фактор некроза опухоли), таким как анти-ФНО-а антителом или гибридным белком, который связывается с ФНО-а (Enbrel), анти-СО20 моноклональным антителом, антагонистом со-стимуляторной молекулы CD80 или CD86, таким как моноклональное антитело или гибридный белок (CTLA4Ig), который связывается с двумя молекулами, или антагонистом для рецептора либо IL-1, либо IL-6. CD24 и другой препарат могут быть введены вместе или последовательно.
Б. Фармацевтическая композиция.
CD24 может содержаться в фармацевтической композиции, которая может включать растворитель, который может сохранять CD24 стабильным в течение длительного периода. Растворитель может быть
- 4 036805
ФСБ, который может сохранять CD24 стабильным в течение по меньшей мере 36 месяцев при -20°С (-15 —25°С). Растворитель может быть способен содержать CD24 в комбинации с другим лекарственным средством.
В. Дозировка.
Доза для применения для человека может в конечном счете быть определена через клинические испытания для определения дозы с приемлемой токсичностью и клинической эффективностью. Начальная клиническая доза для человека может быть определена через изучение фармакокинетики и токсичности у грызунов и нечеловекообразных приматов. Доза CD24 может быть от 0,01 до 1000 мг/кг и может быть от 1 до 500 мг/кг, в зависимости от серьезности заболевания, подлежащего лечению и способа введения.
Г. Введение.
Способ введения фармацевтической композиции может быть парентеральным. Парентеральное введение включает, но не ограничено, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное подкожное, внутримышечное, подоболочечное, внутрисуставное и непосредственную инъекцию в пораженный сустав. Для ветеринарного применения агент может быть введен как соответствующая приемлемая формулировка в соответствии с обычной ветеринарной практикой. Ветеринар может легко определить режим дозирования и способ введения, который является наиболее подходящим для конкретного животного. Фармацевтическая композиция может быть введена пациенту, являющемуся человеком, кошкой, собакой, большим животным, или птице.
CD24 может быть введен одновременно или метрономически с другим лечением. Термин одновременный или одновременно, используемый здесь, означает, что CD24 и другое лечение вводятся в течение 48 ч, предпочтительно 24 ч, более предпочтительно 12 ч, еще более предпочтительно 6 ч и наиболее предпочтительно 3 ч или менее друг от друга. Термин метрономически, используемый здесь, означает введение агента во время, отличное от другого лечения и с определенной частотой относительно повторного введения.
CD24 может быть введен в любой момент перед другим лечением, включая приблизительно 120, 118, 116, 114, 112, 110, 108, 106, 104, 102, 100, 98, 96, 94, 92, 90, 88, 86, 84, 82, 80, 78, 76, 74, 72, 70, 68, 66, 64, 62, 60, 58, 56, 54, 52, 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1 ч; 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 и 1 мин.
CD24 может быть введен в любой момент перед вторым лечением CD24, включая приблизительно 120, 118, 116, 114, 112, 110, 108, 106, 104, 102, 100, 98, 96, 94, 92, 90, 88, 86, 84, 82, 80, 78, 76, 74, 72, 70, 68, 66, 64, 62, 60, 58, 56, 54, 52, 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1 ч; 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 и 1 мин.
CD24 может быть введен в любой момент перед другим лечением, включая приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 мин; 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118 и 120 ч.
CD24 может быть введен в любой момент после предварительного лечения CD24, включая приблизительно 120, 118, 116, 114, 112, 110, 108, 106, 104, 102, 100, 98, 96, 94, 92, 90, 88, 86, 84, 82, 80, 78, 76, 74, 72, 70, 68, 66, 64, 62, 60, 58, 56, 54, 52, 50, 48, 46, 44, 42, 40, 38, 36, 34, 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 8, 6, 4, 3, 2, 1 ч; 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 и 1 мин.
Следующие примеры приведены здесь для иллюстрации способов по настоящему изобретению и никоим образом не ограничивают применение указанных способов.
Пример 1.
Растворимые белки CD24.
Внеклеточный домен CD24 был слит с IgG1 Fc. Аминокислотный состав CD24 гибридного белка приведен на фиг. 1. Затем создали ретровирусный вектор, дефектный по репликации, который направляет экспрессию гибридного белка CD24Ig. GPEx™ (сокращение для продукта генной экспрессии) система предлагает несколько важных преимуществ, наиболее важным из которых является образование в среднем >1000 вставок/клетку, но только с 1 копией/вставку. Более того, так как ретровирус предпочтительно вставляется в транскрипционно активный локус, GPEx™ дает в результате высокий уровень экспрессии целевого белка. Были получены стабильные клеточные линии, которые продуцируют высокий выход CD24Ig. В дополнение были получены 45 г продукта GLP стадии и ~100 г продуктов cGMP стадии. Способы, использованные для дальнейшей переработки среды, собранной из биореактора, резюмированы на технологической схеме ниже (фиг. 2).
Осветление выхода.
Культуральную среду из биореактора осветляют с применением Cuno 60M02 Maximzer глубинных фильтров с последующим фильтрованием через Millipore Opticap фильтр с размером пор 0,22 мкм. Фильтрат собирают в стерильные мешки для сбора образцов. Отбирают пробы для определения выхода с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
Очистка на белке А.
Осветленную среду пропускают через колонку со смолой с белком A (GE Healthcare MabSelect) в
- 5 036805 концентрации, не превышающей 16 г/л смолы (по ИФА), и при времени контакта 4 мин. Колонку промывают уравновешивающим буфером (50 мМ Трис+0,15М NaCl, pH 7,5), затем 10 мМ натрий цитрат/лимонная кислота рН 6,0 в течение 5 cvs. Связанный CD24Ig элюируют с колонки с применением мМ цитрат натрия/лимонная кислота, рН 3,5.
Инактивация вируса.
Фракцию элюата с белка А немедленно доводят до рН 3,0 добавлением 2М соляной кислоты и выдерживают при этом рН в течение 30 мин при температуре окружающей среды. Затем ее доводят до рН 5,0 добавлением 1М триса основного и фильтруют для осветления с применением 0,65 нм стекловолоконного фильтра (Sartorius Sartopure GF2) и 0,2 нм (Sartorius Sartopure 2) в стерильный мешок для отбора проб.
Хроматография на SP-Сефарозе.
Вирусно-инактивированный материал наносят на колонку с SP-Sepharose (GE Healthcare) в концентрации, не превышающей 25 г/л смолы (но основании А280 нм, составляющей 1,22=1 мг/мл) и линейной скорости потока 250 см/ч. Колонку промывают уравновешивающим буфером (10 мМ цитрата натрия/лимонная кислота рН 5,0), и связанный CD24Ig элюируют с колонки с применением 10 мМ цитрата натрия/лимонная кислота + NaCl, pH 5,0. Вытекающий раствор собирают в стерильный мешок для сбора.
Хроматография на Mustang Q.
Элюат после SP-Sepharose доводят до рН 7.5 добавлением 1М трис основания и разводят водой для инъекций для понижения проводимости. Разбавленный материал наносят на фильтр Mustang Q (Pall) в концентрации, не превышающей 0,5 г/л смолы (на основании А280, составляющего 1,22=1 мг/мл) и при скорости потока 5 объемов колонки/мин. Фильтр промывают уравновешивающим буфером (10 мМ трис рН 7,5) и CD24-Fc находится в протоке и его собирают в стерильный мешок для отбора.
Фильтрация вируса.
Проток после Mustang Q затем фильтруют при постоянном давлении 30 фунтов/кв.дюйм (206842,8 Па) через 0,2 мМ фильтр и Millipore NFP вирусный фильтр (номинальный размер пор 20 нм) и собирают в стерильные мешки для отбора.
Концентрирование и конечная формулировка.
Продукт концентрируют и диафильтрируют, применяя мембрану для ультрафильтрации 10 кДа (Millipore Prep/Scale) в 10 мМ фосфат натрия, 150 мМ хлорида натрия при рН 7,2 при приблизительно 10 мг/мл конечной концентрации, как определено по поглощению при 280 нм. Из общего объема, находящегося в боксе биобезопасности, отбирают аналитические образцы. Проводят маркирование и отправляют образцы на контроль качества, в то время как аликвоты общего объема хранят при 2-8°С до разрешения выпуска.
Изучение вирусной очистки.
Оценку очистки от вируса проводили в Cardinal Health, NC по образцам, подготовленным в СНМ. Квалифицированные ученые из Gala Biotech провели стадии хроматографии и фильтрации на Cardinal Health Viral Validation предприятии с помощью персонала Cardinal Health. Процедура уменьшения масштаба была разработана из 200 л масштабного процесса. Для этого исследования были выбраны два вируса. Первым был Xenotropic murine Leukemia вирус (XMuLv), который является оболочечным РНК вирусом размером 80-130 нм из семейства вирусов Retroviridae. Вторым был свиной Parvovirus (PPV), который является безоболочечным ДНК вирусом размером 18-26 нм. Он считается грубым вирусом, и ожидалось, что для него будет показано гораздо более низкое снижение вируса с помощью указанного протокола очистки, чем для XMuLv.
Пример 2.
Применение CD24Fc для лечения РА.
Этот пример демонстрирует, что CD24 может быть применен для лечения РА. Так как антиколлагеновые антитела присутствуют у пациентов с РА до начала заболевания и так как антиколлагеновые антитела способны индуцировать РА-подобную патологию у мышей, установленная модель пассивного переноса РА была использована для проверки эффективности растворимого CD24. Гибридный белок был растворен в ФСБ носителе при 10 мг/мл. Как показано на фиг. 4, комбинация 4 антиколлагеновых антител вызвала тяжелые клинические симптомы на всех конечностях, имеющие пиковые значения на 7 сутки в обоих группах как с носителем, так и обработанных CD24Fc. Заболевания характеризовались краснотой и опуханием всей лапы во всех суставах. Некоторые суставы максимально воспалены, и затронуты пальцы и множественные суставы. Таким образом, растворимый белок не влияет на начало заболеваний. Удивительно, но группа, обработанная CD24Fc, показала гораздо более быстрое восстановление. Снижения клинических показателей весьма значительны, начиная с 9 суток и продолжая в течение всего периода наблюдения 24 суток. Таким образом, CD24Fc обеспечивает эффективное лечение РА. Интересно, так как эффект наблюдается после пика заболевания, то, по-видимому, блокирование CD24 влияет на процесс хронического заболевания после инициирования воспаления.
Пример 3.
Фармакокинетика CD24.
мг CD24IgG1 инъецировали интактным C57BL/6 мышам и собирали образцы крови в различные
- 6 036805 временные точки (5 мин; 1, 4, 24, 48 ч; 7, 14 и 21 сутки), по 3 мыши на каждую временную точку. Сыворотку развели 1:100 и определили уровни CD24Ig, используя сэндвич ИФА, применяя очищенные антитела к CD24 человека (3.3 мкг/мл) в качестве первых антител и конъюгированные с пероксидазой антитела козы против IgG Fc человека (5 мкг/мл) как детектирующие антитела. Как показано на фиг. 5а, кривая распада CD24Ig выявила типичный двухфазовый распад белка. Первая фаза биораспределения имеет срок полувывода 12,4 ч. Вторая фаза следует модели первоочередного вывода из центрального компартмента. Время полувывода для второй фазы составляет 9,54 суток, что подобно времени полувывода для антител in vivo. Эти данные позволяют предположить, что гибридный белок очень стабилен в кровеносном русле. В другом исследовании, в котором гибридный белок инъецировали подкожно, наблюдали почти идентичное время полувывода 9,52 суток (фиг. 5б). Более того, так как это заняло приблизительно 48 ч для достижения пиковых уровней CD24Ig в крови, а общее количество гибридного белка, как было измерено с помощью AUC (площади под кривой), было существенно то же при любом пути инъецирования. Таким образом, с терапевтической точки зрения разные пути введения инъекции не должны влиять на терапевтический эффект лекарственного средства. Это наблюдение значительно упрощает разработку экспериментов для изучения токсичности на приматах и клинические испытания.
Пример 4.
CD24 для лечения РА.
В течение десятилетий считалось, что РА является преимущественно аутоиммунным заболеванием, опосредованным Т-клетками. В последние два десятилетия снова пересматривают возможную роль антител и В-лимфоцитов в патогенезе РА. Таким образом, в дополнение к ревматоидным факторам, источник аутореактивных антител найден у пациентов с РА, хотя это не было окончательно отнесено к человеку. Однако несколько линий данных показали, что на мышиных моделях антитела, специфичные либо для общих, либо для ткане-специфичных антигенов, достаточны для того, чтобы вызвать симптомы РА. Например, обнаружено, что антитела из K/BxN TCR трансгенных мышей полностью способны переносить РА-подобные заболевания к новому хозяину. Эта модель теперь называется АИАК - артрит, индуцированный антителами к коллагену (CAIA).
Г енетический анализ модели АИАК указал на критическую роль комплемента. Хотя существуют и другие возможности, эти требования предполагают возможное включение повреждение ткани, опосредованное антителами, в патогенез РА. Связь между повреждением ткани и воспалением является давним наблюдением в иммунологии. Почти два десятилетия назад Матцингер (Matzinger) предложил то, что обычно называют теорией опасности. По существу, предполагалось, что иммунная система включается, когда организм хозяина находится в опасности. Хотя природа опасности была не очень точно определена в то время, было установлено, что некроз связан с высвобождением внутриклеточных компонентов, таких как HMGB1 и белки теплового шока, которые были названы DAMP, то есть молекулярные паттерны, связанные с опасностью. Обнаружили, что DAMP усиливают продуцирование воспалительных цитокинов и аутоиммунные заболевания. В моделях на животных найдено, что ингибиторы HMGB1 и HSP90 усиливают РА. Участие DAMP усилило перспективность того, что негативная регуляция ответа хозяина на DAMP может быть изучена для терапии РА.
Взаимодействие CD24-Siglec 10 в ответе хозяина на повреждение ткани.
Применив индуцированный ацетаминофеном некроз печени и обеспечив воспаление, мы наблюдали, что через взаимодействие с Siglec G, CD24 дает сильную негативную регуляцию ответа хозяина на повреждение ткани. CD24 является ГФИ-якорной молекулой, которая широко экспрессируется в гематопоэтических клетках и стволовых клетках других тканей. Генетический анализ ряда аутоиммунных заболеваний у человека, включая множественный склероз, системную волчанку, РА и артрит гигантских клеток, показал существенную связь между полиморфизмом CD24 и риском аутоиммунных заболеваний. Siglec G является членом семейства I-лектинов, выделенным по их способности распознавать структуры, содержащие сиаловые кислоты. Siglec G распознает структуры, содержащие сиаловые кислоты, на CD24 и негативно регулирует продуцирование воспалительных цитокинов дендритными клетками (16). С точки зрения своей способности взаимодействовать с CD24 Siglec 10 мыши и Siglec G человека функционально эквивалентны. Однако неясно, существует ли точная корреляция между мышиным и человеческим гомологами. Хотя механизм остается полностью изученным, вполне вероятно, что связанный с Siglec G SHP1 может быть вовлечен в негативную регуляцию. Эти данные, опубликованные недавно в журнале Science, приводят к новой модели, в которой взаимодействие CD24-Siglec G/10 может играть критическую роль в разграничении молекулярных паттернов, связанных с патогеном (РАМР) и DAMP (фиг. 6).
По меньшей мере два перекрывающихся механизма могут объяснять функцию CD24. Во-первых, путем связывания с рядом DAMP CD24 может быль ловушкой для воспалительных стимулов для предотвращения их взаимодействия с TLR или RAGE. Это мнение поддерживается наблюдениями, которые показывают, что CD24 ассоциирован с некоторыми молекулами DAMP, включая HSP70, 90, HMGB1 и нуклеолин. Во-вторых, возможно после ассоциации с DAMP, CD24 может стимулировать передачу сигнала с помощью Siglec G. Оба механизма могут действовать совместно, так как мыши с направленной мутацией по любому из генов показывали более сильный воспалительный ответ. На самом деле DC (дендритные клетки), полученные из костного мозга, взятого либо от CD24-/-, либо от Siglec G -/- мышей,
- 7 036805 продуцировали гораздо больше воспалительных цитокинов, чем при стимуляции любым из HMGB1,
HSP70 или HSP90. Напротив, не было найдено никакого эффекта при их ответе на РАМР, такой как ЛПС и PolyI:C. Эти данные не только обеспечили механизм для врожденного иммунитета для распознавания патогена от повреждения ткани, но также предполагают, что CD24 и Siglec G могут быть потенциальными терапевтическими мишенями для лечения заболеваний, связанных с повреждением тканей.
Терапевтический эффект CD24 на артрит, индуцированный антителами к коллагену.
Возможность стимулирования этого пути для лечения РА была изучена, учитывая возможную роль врожденного иммунитета к повреждению ткани в патогенезе РА и роль CD24-Siglec G/10 пути в негативном регулировании такого ответа.
Патогенез практически всех аутоиммунных заболеваний включает индуцирование иммунного ответа на аутоантиген и аутоиммунное разрушение. Фокус был сделан на аутоиммунной фазе разрушения на основании новой функции взаимодействия CD24/Siglec G. Таким образом, для предварительного анализа модель артрита, индуцированного антителами к коллагену, была принята для оценки потенциального терапевтического эффекта.
Как показано на фиг. 7а, АИАК индуцировали у мышей BALB/c в возрасте 8 недель посредством внутривенной инъекции коктейля 4 анти-коллагеновых моноклональных антител (MD Biosciences, St. Paul, MN) при концентрации 2 мг/мышь на 1 сутки, и внутрибрюшинной инъекции 100 мкг/мышь LPS (MD Bioscience) на 3 сутки. Мыши были обработаны на 1 сутки либо 1 мг CD24Fc, либо равным объемом 1-кратного ФСБ носителя в качестве негативного контроля. Как показано на фиг. 7б, по сравнению с контролем с носителем, CD24Fc обеспечивает высоко значимый терапевтический эффект.
Для понимания механизма, по которому CD24Fc снижает артрит в данной модели, измеряли цитокины из гомогенизированных суставов мышей, обработанных CD24Fc или ФСБ контролем, и измерен супернатант из 200 мкг гомогената ткани с помощью набора гранул с антителами к цитокинам. Типичный пример показан на фиг. 8а, в то время как сводные данные показаны на фиг. 8б. Эти данные показывают, что систематически вводимый CD24 снижает уровни многих воспалительных цитокинов, включая TNF-a, IL-6, MCP-1(CCL2) и JL-Τβ.
Эффект CD24Fc подтверждается гистологическим анализом синовиальных суставов АИАК мышей, как показано на фиг. 9. На 7 сутки после индуцирования артрита гематоксилин-эозиновое окрашивание показало, что синовиальная оболочка сустава в группе с ФСБ сильно инфильтрирована воспалительными клетками, включающими нейтрофилы, макрофаги и лимфоциты (фиг. 9а). Это было намного меньше у мышей, обработанных CD24Fc. В дополнение сильные повреждения суставов были выявлены по потере окрашивания сафранином О красным у обработанных ФСБ мышей (фиг. 9в), но не у обработанной CD24Fc группы (фиг. 9г).
Чтобы определить, будет ли у мышей CD24Fc иметь терапевтическое влияние на текущий РА, лечение начинали либо на 5, либо на 7 сутки после индуцирования РА. Как показано на фиг. 10, существенное снижение РА показателей наблюдали уже через 2 суток после обработки CD24Fc. Терапевтический эффект сохранялся в течение оставшегося периода наблюдения даже без дополнительной обработки. Эти данные далее усилили терапевтический потенциал CD24Fc для текущих заболеваний.
Для определения терапевтических дозировок CD24Fc для человека, для CD24Fc был определен титр в широком интервале дозировок. Как показано на фиг. 11, уже 2 мкг/мышь было достаточным для получения статистически значимого терапевтического эффекта.
Siglecg-зависимый терапевтический эффект CD24Fc.
Чтобы определить, будет ли CD24Fc защищать мышей путем взаимодействия с Siglec G, мы определили, зависит ли терапевтический эффект от гена Siglecg. Так как Siglecg-зависимые мыши были получены с помощью ES клеток из C57BL/6 мышей, мы использовали WT C57BL/6 мышей в качестве контроля. Как показано на рис. 12а, так как известно, что В6 мыши менее подвержены АИАК, то общие показатели заболевания ниже, чем наблюдали для мышей BALB/c. Тем не менее, уже одна инъекция CD24Fc по существу уничтожила клинические признаки у мышей дикого типа. Важно отметить, что даже если заболевание менее сильное у Siglecg-дефицитных мышей, CD24Fc не имеет терапевтического эффекта. Таким образом, терапевтический эффект CD24Fc строго зависит от гена Siglecg.
Взятые вместе, приведенные данные показывают высокую терапевтическую эффективность CD24Fc для АИАК. Учитывая наши обширные данные по безопасности, стабильности и наше успешное производство CD24Fc, все указывает на большой потенциал указанного гибридного белка как терапевтического средства для РА.
Пример 5.
Токсичность.
Обширные исследования токсичности на грызунах и нечеловекообразных приматах не показали связанной с лекарственным средством токсичности при дозах от 12.5 до 125 мг/кг у мышей и нечеловекообразных приматов.
- 8 036805
Цитированные источники.
1. Springer, Т., G. Galfre, D.S. Secher, and C. Milstein. 1978. Monoclonal xenogeneic antibodies to murine cell surface antigens: identification of novel leukocyte differentiation antigens. Eur J Immunol 8:539-551.
2. Pierres, Μ., P. Naquet, J. Barbet, S. Marchetto, I. Maries, C. Devaux, M. Barad, R. Hyman, and G. Rougon. 1987. Evidence that murine hematopoietic cell subset marker JI Id is attached to a glycosyl-phosphatidylinositol membrane anchor. Eur J Immunol 17: 1781-1785.
3. Rougon, G., L.A. Alterman, K. Dennis, X.J. Guo, and C. Kinnon. 1991. The murine heat-stable antigen: a differentiation antigen expressed in both the hematolymphoid and neural cell lineages. Eur J Immunol 21: 1397-1402.
4. Liu, Y., and C.A.J. Janeway. 1992. Cells that present both specific ligand and the costimulatory activity are the most efficient inducer of clonal expansion of normal CD4 T cells.
- 9 036805
Proc Natl Acad Sci USA 89:3845-3849.
5. Liu, Y., B. Jones, A. Aruffo, K.M. Sullivan, P.S. Linsley, and C.A. Janeway, Jr. 1992. Heat-stable antigen is a costimulatory molecule for CD4 T cell growth. J Exp Med 175:437-445.
6. Liu, Y., B. Jones, W. Brady, C.A. Janeway, Jr., P.S. Linsley, and P.S. Linley. 1992. Co- stimulation of murine CD4 T cell growth: cooperation between B7 and heat-stable antigen [published erratum appears in Eur J Immunol 1993 Mar;23(3):780], Eur J Immunol 22:28552859.
7. Liu, Y., R.H. Wenger, M. Zhao, and P.J. Nielsen. 1997. Distinct costimulatory molecules are required for the induction of effector and memory cytotoxic T lymphocytes. J Exp Med 185:251-262.
8. Wu, Y., Q. Zhou, P. Zheng, and Y. Liu. 1998. CD28 -independent induction of T helper cells and immunoglobulin class switches requires costimulation by the heat-stable antigen. J Exp Med 187: 1151-1156.
9. Bai, X.F., J.Q. Liu, X. Liu, Y. Guo, K. Cox, J. Wen, P. Zheng, and Y. Liu. 2000. The heat-stable antigen determines pathogenicity of self-reactive T cells in experimental autoimmune encephalomyelitis. J Clin Invest 105: 1227-1232.
10. Bai, X.F., O. Li, Q. Zhou, H. Zhang, P.S. Joshi, X. Zheng, Y. Liu, Y. Wang, and P. Zheng. 2004. CD24 Controls Expansion and Persistence of Autoreactive T Cells in the Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J Exp Med 200:447-458.
11. Otaegui, D., A. Saenz, P. Camano, L. Blazquez, M. Goicoechea, J. Ruiz-Martinez, J. Olaskoaga, J. A. Emparanza, and A. Lopez de Munain. 2006. CD24 V/V is an allele associated with the risk of developing multiple sclerosis in the Spanish population. Mult Scler 12:511-514.
12. Rueda, B., J. A. Miranda-Filloy, J. Martin, and M.A. Gonzalez-Gay. 2008.
Association of CD24 gene polymorphisms with susceptibility to biopsy-proven giant cell arteritis. J. Rheumatol. 35:850-854.
13. Sanchez, E., A.K. Abelson, J.M. Sabio, M.A. Gonzalez-Gay, N. Ortego-Centeno, J. Jimenez- Alonso, E. de Ramon, J. Sanchez-Roman, M.A. Lopez-Nevot, I. Gunnarsson, E. Svenungsson, G. Sturfelt, L. Truedsson, A. Jonsen, M.F. Gonzalez-Escribano, T. Witte, M.E. Alarcon-Riquelme, and J. Martin. 2007. Association of a CD24 gene polymorphism with susceptibility to systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum. 56:3080-3086.
14. Wang, L., S. Lin, K. Rammohan, Z. Liu, J. Liu, R.-H. Liu, N. Guinther, Q. Zhou, T. Wang, X. Zheng, D.J. Birmingham, B.H. Rovin, L.A. Herbert, Y. Wu, D.J. Lynn, G. Cooke, C.Y. Yu, P. Zheng, and Y. Liu. 2007. A di-nucleotide deletion in CD24 confers protection against autoimmune diseases. Pios Genetics 3:e49.
15. Zhou, Q., K. Rammohan, S. Lin, N. Robinson, O. Li, X. Liu, X.F. Bai, L. Yin, B.
- 10 036805
Scarberry, P. Du, M. You, K. Guan, P. Zheng, and Y. Liu. 2003. CD24 is a genetic modifier for risk and progression of multiple sclerosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 100: 15041-15046.
16. Chen, G.Y., J. Tang, P. Zheng, and Y. Liu. 2009. CD24 and Siglec-10 Selectively Repress Tissue Damage-Induced Immune Responses. Science 323: 1722-1725.
17. Wiens, A., R. Venson, C.J. Correr, M.F. Otuki, and R. Pontarolo. Meta-analysis of the efficacy and safety of adalimumab, etanercept, and infliximab for the treatment of rheumatoid arthritis. Pharmacotherapy 30:339-353.
18. Panayi, G.S., J.S. Lanchbury, and G.H. Kingsley. 1992. The importance of the T cell in initiating and maintaining the chronic synovitis of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 35:729-735.
19. Banda, N.K., J.M. Thurman, D. Kraus, A. Wood, M.C. Carroll, W.P. Arend, and V.M. Holers. 2006. Alternative complement pathway activation is essential for inflammation and joint destruction in the passive transfer model of collagen-induced arthritis. J Immunol 177: 1904-1912.
20. Korganow, A.S., H. Ji, S. Mangialaio, V. Duchatelle, R. Pelanda, T. Martin, C. Degott, H. Kikutani, K. Rajewsky, J.L. Pasquali, C. Benoist, and D. Mathis. 1999. From systemic T cell self -reactivity to organ-specific autoimmune disease via immunoglobulins. Immunity 10:451-461.
21. Maccioni, M., G. Zeder-Lutz, H. Huang, C. Ebel, P. Gerber, J. Hergueux, P. Marchal, V. Duchatelle, C. Degott, M. van Regenmortel, C. Benoist, and D. Mathis. 2002. Arthritogenic monoclonal antibodies fromK/BxN mice. J Exp Med 195: 1071-1077.
22. van Holten, J., K. Pavelka, J. Vencovsky, H. Stahl, B. Rozman, M. Genovese, A.J. Kivitz, J. Alvaro, G. Nuki, D.E. Furst, G. Herrero-Beaumont, LB. McInnes, P. Musikic, and P.P. Tak. 2005. A multicentre, randomised, double blind, placebo controlled phase II study of subcutaneous interferon beta- la in the treatment of patients with active rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis 64:64-69.
23. Vilcek, J., and M. Feldmann. 2004. Historical review: Cytokines as therapeutics and targets of therapeutics. Trends in pharmacological sciences 25:201-209.
24. Rantapaa-Dahlqvist, S., B.A. de Jong, E. Berglin, G. Hallmans, G. Wadell, H. Stenlund, U. Sundin, and W.J. van Venrooij. 2003. Antibodies against cyclic citrullinated peptide and IgA rheumatoid factor predict the development of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 48:2741-2749.
25. van Venrooij, W.J., and G.J. Pruijn. 2000. Citrullination: a small change for a protein with great consequences for rheumatoid arthritis. Arthritis research 2:249-251.
- 11 036805
26. Jiang, W., and D.S. Pisetsky. 2007. Mechanisms of Disease: the role of high-mobility group protein 1 in the pathogenesis of inflammatory arthritis. Nature clinical practice 3:52-58.
27. van Beijnum, J.R., W.A. Buurman, and A.W. Griffioen. 2008. Convergence and amplification of toll-like receptor (TLR) and receptor for advanced glycation end products (RAGE) signaling pathways via high mobility group Bl (HMGB1). Angiogenesis 11:91-99.
28. Sanchez, E., B. Fernandez-Gutierrez, M.A. Gonzalez-Gay, A. Balsa, A. Garcia, L.
Rodriguez, D. Pascual-Salcedo, M.F. Gonzalez-Escribano, and J. Martin. 2008. Investigating the role of CD24 gene polymorphisms in rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis 67: 1197-1198.
29. Kay, R., P.M. Rosten, and R.K. Humphries. 1991. CD24, a signal transducer modulating В cell activation responses, is a very short peptide with a glycosyl phosphatidylinositol membrane anchor. J Immunol 147: 1412-1416.
30. Kay, R., F. Takei, and R.K. Humphries. 1990. Expression cloning of a cDNA encoding M1/69-J1 Id heat-stable antigens. J Immunol 145: 1952-1959.
31. Motari, E., X. Zheng, X. Su, Y. Liu, M. Kvaratskhelia, M. Freitas, and P.G. Wang.
2009. Analysis of Recombinant CD24 Glycans by MALDI-TOF-MS Reveals Prevalence of
Sialyl-T Antigen. American journal of biomedical sciences 1: 1-11.
32. Liu, Y. 1994. The costimulatory pathway for T cell response. RG Landes, Austin.
Claims (10)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Белок CD24 для подавления ответа хозяина на молекулярные паттерны, связанные с опасностью (DAMP) у субъекта, где аминокислотная последовательность белка CD24 состоит из зрелого полипептида CD24 человека, слитого с Fc фрагментом белка иммуноглобулина человека (Ig), где последовательность зрелого полипептида CD24 человека состоит из последовательности SEQ ID NO: 1 и где белок CD24 не содержит аланина или валина в положении, непосредственно С-терминальном по отношению к SEQ ID NO: 1.
- 2. Белок CD24 по п.1, где Fc фрагмент слит с С-концом белка CD24.
- 3. Белок CD24 по п.1, который является гликозилированным.
- 4. Белок CD24 по п.1, где Fc фрагмент состоит из шарнирной области и CH2 и CH3 доменов белка Ig человека и где Ig выбран из группы, состоящей из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и IgA.
- 5. Белок CD24 по п.1, где Fc фрагмент состоит из шарнирной области и СН3 и СН4 доменов IgM.
- 6. Белок CD24 по п.1, полученный с помощью эукариотической системы экспрессии белка.
- 7. Белок CD24 по п.6, где система экспрессии включает вектор, содержащийся в клеточной линии яичников китайского хомячка (СНО), или ретровирусный вектор, дефектный по репликации.
- 8. Белок CD24 по п.7, где ретровирусный вектор, дефектный по репликации, стабильно интегрирован в геном эукариотической клетки.
- 9. Белок CD24 по п.1, где аминокислотная последовательность белка CD24 состоит из последовательности SEQ ID NO: 1 и последовательности Fc фрагмента SEQ ID NO: 6, где SEQ ID NO: 6 слита с Сконцом SEQ ID NO: 1.
- 10. Белок CD24 по любому из пп. 1-9, который является растворимым.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US32907810P | 2010-04-28 | 2010-04-28 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201790538A2 EA201790538A2 (ru) | 2017-07-31 |
| EA201790538A3 EA201790538A3 (ru) | 2017-11-30 |
| EA036805B1 true EA036805B1 (ru) | 2020-12-23 |
| EA036805B8 EA036805B8 (ru) | 2021-02-25 |
Family
ID=44903987
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201290961A EA027735B1 (ru) | 2010-04-28 | 2011-04-28 | Слитый белок cd24 для лечения ревматоидного артрита |
| EA201790538A EA036805B8 (ru) | 2010-04-28 | 2011-04-28 | Белок cd24 для подавления ответа хозяина на damp |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201290961A EA027735B1 (ru) | 2010-04-28 | 2011-04-28 | Слитый белок cd24 для лечения ревматоидного артрита |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8808697B2 (ru) |
| EP (3) | EP2563385B1 (ru) |
| JP (5) | JP5899206B2 (ru) |
| KR (1) | KR20130086126A (ru) |
| CN (2) | CN102869369B (ru) |
| AU (1) | AU2011248540B2 (ru) |
| CA (1) | CA2795823C (ru) |
| DK (1) | DK2563385T3 (ru) |
| EA (2) | EA027735B1 (ru) |
| ES (2) | ES2645262T3 (ru) |
| HK (2) | HK1176007A1 (ru) |
| IL (1) | IL222739A0 (ru) |
| NO (1) | NO2563385T3 (ru) |
| NZ (1) | NZ603196A (ru) |
| PL (2) | PL3260128T3 (ru) |
| PT (2) | PT2563385T (ru) |
| SG (1) | SG184907A1 (ru) |
| WO (1) | WO2011139820A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130231464A1 (en) * | 2010-04-28 | 2013-09-05 | Oncolmmune, Inc. | Methods of use of soluble cd24 for therapy of rheumatoid arthritis |
| CA2982612A1 (en) * | 2015-05-07 | 2016-11-10 | Oncoimmune, Inc. | Use of cd24 for lowering low-density lipoprotein cholesterol levels |
| WO2017136492A1 (en) * | 2016-02-02 | 2017-08-10 | Oncoimmune, Inc. | Use of cd24 proteins for treating leptin-deficient conditions |
| US10758574B2 (en) | 2016-04-28 | 2020-09-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cartilage cells with a high regenerative potential and low immune response for use in cellular therapy |
| KR101789449B1 (ko) * | 2016-12-08 | 2017-10-23 | 박문수 | 폐유지를 이용한 지방산 메틸에스테르 제조방법 |
| AU2018231166A1 (en) * | 2017-03-07 | 2019-09-26 | Oncoimmune, Inc. | Methods of use of soluble CD24 for treating systemic lupus erythematosus |
| KR20200034957A (ko) * | 2017-05-15 | 2020-04-01 | 온코이뮨, 아이앤씨. | 신경 보호 및 재수초화를 위한 가용성 cd24의 사용 방법 |
| CN110799206A (zh) * | 2017-05-22 | 2020-02-14 | 肿瘤免疫股份有限公司 | 使用可溶性cd24治疗癌症疗法中免疫相关不良事件的方法 |
| SG11202007815TA (en) * | 2018-03-05 | 2020-09-29 | Oncoimmune Inc | Methods of use of soluble cd24 for treating acquired immune deficiency syndrome (hiv/aids) |
| AU2019282044A1 (en) * | 2018-06-04 | 2021-01-07 | Oncoimmune, Inc. | Methods of use of CD24 for the prevention and treatment of graft versus host disease and mucositis |
| CN112480237B (zh) * | 2019-09-12 | 2023-10-17 | 上海津曼特生物科技有限公司 | 一种融合蛋白及其制备方法和应用 |
| WO2023051480A1 (en) * | 2021-09-28 | 2023-04-06 | Acroimmune Guangzhou Biotech Ltd | Fusion proteins comprising 071 core peptide and use thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030095966A1 (en) * | 2000-03-29 | 2003-05-22 | Yang Liu | Method of blocking tissue destruction by autoreactive T cells |
| US20050214290A1 (en) * | 2001-03-29 | 2005-09-29 | Yang Liu | Methods of blocking tissue destruction by autoreactive T cells |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
| US5541087A (en) * | 1994-09-14 | 1996-07-30 | Fuji Immunopharmaceuticals Corporation | Expression and export technology of proteins as immunofusins |
| US5798448A (en) * | 1994-10-27 | 1998-08-25 | Genentech, Inc. | AL-1 neurotrophic factor antibodies |
| CN101254302B (zh) * | 1999-05-07 | 2011-05-11 | 杰南技术公司 | 使用与b细胞表面标志结合的拮抗剂治疗自身免疫病 |
| US20030106084A1 (en) * | 2000-03-29 | 2003-06-05 | Yang Liu | Methods of blocking tissue destruction by autoreactive T cells |
| CA2404340C (en) * | 2000-03-29 | 2012-10-16 | The Ohio State University Research Foundation | Methods of blocking tissue destruction by autoreactive t cells |
| EP1361891A2 (en) * | 2001-02-19 | 2003-11-19 | MERCK PATENT GmbH | Artificial fusion proteins with reduced immunogenicity |
| HUP0400340A2 (hu) * | 2001-07-13 | 2004-08-30 | Merck Patent Gmbh. | Polipeptidek immunogenitásának csökkentésére szolgáló eljárások |
| AU2003298650B2 (en) | 2002-11-15 | 2010-03-11 | Musc Foundation For Research Development | Complement receptor 2 targeted complement modulators |
| AU2007242919B8 (en) * | 2003-04-09 | 2011-11-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a TNF-alpha inhibitor |
| MXPA05010778A (es) * | 2003-04-09 | 2005-12-12 | Genentech Inc | Terapia para enfermedad autoinmune en un paciente con una respuesta inadecuada a un inhibidor tnf-alfa. |
| WO2005054810A2 (en) * | 2003-11-26 | 2005-06-16 | The Ohio State University Research Foundation | Polymorphic cd24 genotypes that are predictive of multiple sclerosis risk and progression |
| WO2005113599A1 (en) * | 2004-05-21 | 2005-12-01 | Xencor, Inc. | C1q family member proteins with altered immunogenicity |
| US20060160220A1 (en) * | 2004-11-12 | 2006-07-20 | Iogenetics | Retroviral vectors with introns |
-
2011
- 2011-04-28 EP EP11778000.7A patent/EP2563385B1/en active Active
- 2011-04-28 PL PL17183045T patent/PL3260128T3/pl unknown
- 2011-04-28 AU AU2011248540A patent/AU2011248540B2/en active Active
- 2011-04-28 PT PT117780007T patent/PT2563385T/pt unknown
- 2011-04-28 EP EP17183045.8A patent/EP3260128B1/en active Active
- 2011-04-28 KR KR1020127028301A patent/KR20130086126A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-04-28 DK DK11778000.7T patent/DK2563385T3/da active
- 2011-04-28 JP JP2013508244A patent/JP5899206B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-04-28 EP EP20188241.2A patent/EP3845238A1/en not_active Withdrawn
- 2011-04-28 ES ES11778000.7T patent/ES2645262T3/es active Active
- 2011-04-28 EA EA201290961A patent/EA027735B1/ru unknown
- 2011-04-28 NZ NZ603196A patent/NZ603196A/en unknown
- 2011-04-28 CN CN201180021423.6A patent/CN102869369B/zh active Active
- 2011-04-28 EA EA201790538A patent/EA036805B8/ru unknown
- 2011-04-28 ES ES17183045T patent/ES2826445T3/es active Active
- 2011-04-28 NO NO11778000A patent/NO2563385T3/no unknown
- 2011-04-28 CA CA2795823A patent/CA2795823C/en active Active
- 2011-04-28 SG SG2012077095A patent/SG184907A1/en unknown
- 2011-04-28 PT PT171830458T patent/PT3260128T/pt unknown
- 2011-04-28 CN CN201510683408.8A patent/CN105381451B/zh active Active
- 2011-04-28 US US13/643,527 patent/US8808697B2/en active Active
- 2011-04-28 PL PL11778000T patent/PL2563385T3/pl unknown
- 2011-04-28 WO PCT/US2011/034282 patent/WO2011139820A1/en active Application Filing
-
2012
- 2012-10-28 IL IL222739A patent/IL222739A0/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-03-19 HK HK13103375.4A patent/HK1176007A1/zh unknown
- 2013-03-19 HK HK16110735.1A patent/HK1222554A1/zh unknown
-
2015
- 2015-07-09 JP JP2015137457A patent/JP6062502B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-12-14 JP JP2016242313A patent/JP2017057216A/ja not_active Withdrawn
-
2018
- 2018-05-16 JP JP2018094404A patent/JP6526872B2/ja active Active
-
2019
- 2019-05-08 JP JP2019088170A patent/JP6888221B2/ja active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030095966A1 (en) * | 2000-03-29 | 2003-05-22 | Yang Liu | Method of blocking tissue destruction by autoreactive T cells |
| US20050214290A1 (en) * | 2001-03-29 | 2005-09-29 | Yang Liu | Methods of blocking tissue destruction by autoreactive T cells |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BAI Xue-Feng et al. The heat-stable antigen determines pathogenicity of self-reactive T cells in experimental autoimmune encephalomyelitis. The Journal of Clinical Investigation, May 2000, Vol. 105, no. 9, p.1227-1232 * |
| CHEN Guo-Yun et al. CD24 and Siglec-10 selective repress tissue damage-induced immune responses. Science, 2009 March 27; 323(5922): 1722-1725, doi:10.1126/science.1168988,p.1-12 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6526872B2 (ja) | 関節リウマチの治療のための可溶性ｃｄ２４の使用方法 | |
| US10793617B2 (en) | Methods of use of soluble CD24 for therapy of rheumatoid arthritis | |
| AU2011248540A1 (en) | Methods of use of soluble CD24 for therapy of rheumatoid arthritis | |
| US11547741B2 (en) | Methods of use of soluble CD24 for treating immune related adverse events in cancer therapies | |
| KR20180100701A (ko) | 재조합 IgG Fc 다량체 | |
| WO2015171863A1 (en) | USING B-CELL-TARGETING ANTIGEN IgG FUSION AS TOLEROGENIC PROTEIN THERAPY FOR TREATING ADVERSE IMMUNE RESPONSES | |
| AU2018279010B2 (en) | ALK1 receptor and ligand antagonists and uses thereof | |
| JP6488376B2 (ja) | 免疫原性を低減するかまたは予防するためのヒト化コブラ毒因子を含む医薬組成物、薬剤および組み合わせ医薬 | |
| Chamberlain-Banoub | Role of complement and complement regulators in peripheral nerve and neuromuscular disorders |