CN102846499A - 一种具有美白祛斑换肤作用的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有美白祛斑换肤作用的组合物。该组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末按质量比1-10∶1-10∶1-10混合均匀组成。该组合物可与化妆制剂或药物的赋形剂混合制成皮肤外用制剂，如膏霜乳液、凝胶、贴膜、皮下注射剂等。药理试验研究表明，本发明具有抑制皮肤酪氨酸酶活性和黑色素生成的作用。临床试用表明，本发明对面色暗黄、面部色斑人群具有显著的美白祛斑换肤效果，有效率达100％，使用安全无副作用。
Description
技术领域
本发明属于治疗性化妆技术及生物医药领域，具体涉及用于美白祛斑换肤的外用化妆品或药品，即一种天然来源的银杏黄酮、芝麻素与黄芪总苷组合物。
背景技术
随着人们对美的不断追求和健康意识的增强，药妆已成为一种潮流和化妆品市场蓬勃发展的新生力量。欧洲某权威机构历时6年，抽样调查25-60岁的中国女性数千名，进行“中国人皮肤类型学”研究表明，与欧洲女性相比，中国女性在皮肤老化过程中，首先表现出来的是色斑问题，随着年龄的增长而增加。据我国知名博雅美容化妆品咨询机构统计数据，以“2011年中国人口及人口结构统计公报”、“2011年消费行为与生产形态年鉴”和“美容化妆品业咨询机构”统计数据为测算依据，女性20-35岁，共15个年龄段人群中，40％为祛斑美白消费群。人们对去除色斑、皮肤变白、减少皮肤松懈、皱纹、粗糙等有强烈的需求，中国祛斑美白用品的基本市场容量每年接近100亿元。
银杏是我国珍贵的药用植物，银杏的叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值。据《本草纲目》记载，银杏性甘、苦、平、涩；有定喘止咳、止带浊、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便频数、赤白带下、手足皲裂等。特别是近几十年来人们发现银杏叶中含有多种有效成分，主要有效成分为黄酮类化合物，具有抗氧化、防治心脑血管疾病的功能。芝麻素是芝麻中的主要功能成分，分子式为C20H18O6，属于木脂素类；芝麻素具有消除体内自由基、降低血清胆固醇，保护肝功能，促进醇代谢，抗菌活性等多种生理活性功能。黄芪总苷是药食同源中药黄芪中的主要有效成分，具有延缓衰老、抗氧化、保肝、抗肿瘤等多种活性。银杏黄酮、芝麻素与黄芪总苷组合，可明显提高各自抗氧化的作用，具有协同增强生理活性的优势。未见银杏黄酮、芝麻素与黄芪总苷配伍用于美白祛斑换肤的用途的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有美白祛斑换肤作用的组合物，可与用于化妆制剂或药物的赋形剂混合制成皮肤外用制剂，它具有美白祛斑换肤效果好，疗效显著、使用安全的特点。
银杏叶中所含的银杏黄酮和银杏内酯是主要活性成分，其中银杏黄酮含量最高。芝麻中所含的芝麻素、芝麻林素、芝麻酚是主要活性成分，其中芝麻素含量最高。黄芪中含有皂苷、多糖、黄酮、氨基酸、酚类和微量元素等，其中皂苷和多糖为主要活性成分。本发明对银杏叶、芝麻粕、黄芪进行提取得到银杏黄酮粉末(有效部位)、芝麻素粉末(有效部位)和黄芪总苷粉末(有效部位)，按质量比1-10∶1-10∶1-10混合均匀得到美白祛斑换肤用组合物。最佳的质量比为1∶1∶1。银杏黄酮粉末中的银杏黄酮含量大于50％；芝麻素粉末中的芝麻素含量大于50％；黄芪总苷粉末中的黄芪总苷含量大于50％。该组合物可以按公知的工艺加工成皮肤外用制剂，如膏霜乳液、凝胶、贴膜、皮下注射剂等。
本发明的有益效果是，药理药效学试验研究表明，本发明具有抑制皮肤色素沉着、抑制黑素细胞增生，抑制黑素细胞酪氨酸酶活性和黑色素生成，并能明显地促进角质形成细胞的增殖和细胞凋亡；具有显著的美白祛斑换肤效果。局部刺激性实验研究表明本发明安全，无皮肤刺激、过敏等不良反应。临床试用结果表明，本发明对面色暗黄、面部色斑具有显著的防治作用，有效率达100％，使用安全无副作用。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地描述。
实施例1：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比1∶1∶1混合均匀组成。
银杏黄酮提取工艺如下：将银杏叶粉碎，用70％乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量，加在已处理好的AB-8大孔吸附树脂上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，浓缩成浸膏，真空干燥，称重，得银杏黄酮粉末，并测定银杏黄酮的含量(mg/g)。本品性状为：浅棕黄色粉末，无臭，味微苦，有吸湿性，溶于醇，不溶于水。
银杏黄酮含量测定：采用HPLC法进行测定。根据标样的保留时间进行定性，用外标法计算银杏黄酮的含量。本品银杏黄酮含量为502.75mg/g。
银杏黄酮提取工艺和含量测定方法为公知公用的方法。
芝麻素提取工艺如下：将芝麻研磨成粉末，加入约2倍体积的正己烷进行搅拌脱脂，维时3h，过滤后再加入约2倍体积的正己烷进行第二次脱脂，维时3h，风干。准确称取一定量粉末，加入料液比1∶8.5(g/ml)93％的乙醇，在水浴温度55℃下搅拌，提取时间2.5h，重复提取一次。提取液过滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸出部分乙醇(剩余体积＜25mL)，减压浓缩，并于60℃真空干燥，称重，得芝麻素粉末，并测定芝麻素的含量(mg/g)。本品性状为：浅褐色粉末，无臭，无味，有吸湿性，溶于醇，不溶于水。
芝麻素含量测定：采用HPLC法进行测定。根据标样的保留时间进行定性，用外标法计算芝麻素的含量。本品芝麻素含量为636.02mg/g。
芝麻素提取工艺和含量测定方法为公知公用的方法。
黄芪总苷制备工艺如下：黄芪药材，切约0.5cm厚的饮片，加70％乙醇回流提取2次，第一次加10倍量，提取90min；第2次加8倍量，提取60min，合并70％乙醇提取液，过滤，滤液减压浓缩蒸尽乙醇，微热，加水至2000ml，放置12h，过滤，滤液用适量的D101大孔吸附树脂，吸附过的滤液弃去，继续用水冲洗吸附后的D101大孔吸附树脂，至洗液检不出还原糖为止，弃去水洗液，再用适量30％乙醇冲洗，弃去30％醇洗液，再用70％乙醇洗脱，至洗脱液检不出黄芪甲苷为止，减压浓缩70％乙醇洗脱液，并于60℃真空干燥，称重，得黄芪总苷粉末，并测定黄芪总苷的含量(mg/g)。本品性状为：棕褐色粉末，无臭，味微苦，有吸湿性，溶于醇和水。
黄芪总苷含量测定：采用分光光度法：测定波长为560nm，显色剂选用香草醛-高氯酸发色体系，从标准曲线上读出供试品溶液中相当于黄芪甲苷的量，求得黄芪总苷含量。本品黄芪总苷含量为577.17mg/g。
黄芪总苷制备工艺和含量测定方法为公知公用的方法。
霜剂的制备，按公知公用的霜剂制备工艺方法制备霜剂。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为100mg+100mg+100mg。
实施例2：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比2∶1∶2混合均匀组成。
凝胶剂的制备，按公知公用的凝胶剂制备工艺方法制备凝胶剂。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为200mg+100mg+200mg。
其它同实施例1。
实施例3：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比1∶2∶2混合均匀组成。
乳液剂的制备，按公知公用的乳液剂制备工艺方法制备乳液剂。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为100mg+200mg+200mg。
其它同实施例1。
实施例4：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比5∶2∶2混合均匀组成。
霜剂的制备，按公知公用的霜剂制备工艺方法制备霜剂。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为250mg+100mg+100mg。
其它同实施例1。
实施例5：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比2∶1∶10混合均匀组成。
乳液剂的制备，按公知公用的乳液剂制备工艺方法制备乳液。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为40mg+20mg+200mg。
其它同实施例1。
实施例6：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比10∶5∶1混合均匀组成。
凝胶剂的制备，按公知公用的凝胶剂制备工艺方法制备凝胶。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为200mg+100mg+20mg。
其它同实施例1。
实施例7：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比1∶10∶2混合均匀组成。
凝胶剂的制备，按公知公用的凝胶剂制备工艺方法制备凝胶。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为20mg+200mg+40mg。
其它同实施例1。
实施例8：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比5∶5∶8混合均匀组成。
霜剂的制备，按公知公用的霜剂制备工艺方法制备霜剂。每克含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为50mg+50mg+80mg。
其它同实施例1。
实施例9：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比3∶2∶5混合均匀组成。
贴膜剂的制备，按公知公用的贴膜剂制备工艺方法制备贴膜。每片含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为30mg+20mg+50mg。
其它同实施例1。
实施例10：
一种具有美白祛斑换肤作用的组合物由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末，按质量比2∶5∶5混合均匀组成。
皮下注射剂的制备，按公知公用的皮下注射剂制备工艺方法制备皮下注射剂。每毫升含银杏黄酮+芝麻素+黄芪总苷为20mg+50mg+50mg。
其它同实施例1。
用以上方法制成的外用制剂，进行相关的药理药效学试验、局部刺激性安全性评价实验和临床试用试验。下面是本发明的实验数据：
以色素沉着动物模型研究与评价本发明的应用效果。对成年雌性棕黄色豚鼠背部剃毛后进行UVB照射，首次照射亚红斑量，以后隔日照射1次五分之一亚红斑量，共照射6次总量为8500mj/cm2，以诱导色素沉着。于第2次照射开始，每天向实验动物背部皮肤的相应区域分别外涂本发明美白祛斑换肤凝胶，以进行干预治疗。3周后进行评价：肉眼观察豚鼠皮肤红斑、鳞屑及色素沉着情况并进行计分。结果表明，本发明对UVB照射诱导豚鼠皮肤色素沉着具有明显的抑制作用。
体外培养正常表皮黑素细胞，将传代黑素细胞计数按种于6个培养瓶中，确保每瓶细胞数相同，另设1瓶为空白对照组。6个培养瓶中分别加入本发明美白祛斑换肤液100μl，200μl，400μl，600μl，800μl，1000μl，培养3天。消化细胞，重新按种于96孔板(每孔细胞数2×103)。采用氢氧化钠溶解法测定细胞黑素含量，每孔加入100μl lmol/L的氢氧化钠，37℃保温1小时，测其在450nm处的吸光度值，绘制黑素标准曲线，计算黑素含量。结果表明(见表1)，与空白对照组相比，本发明美白祛斑换肤液可使黑素细胞内黑素含量明显降低。说明本发明具有抑制黑色素生成的作用。
采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色测定细胞增殖活力，将细胞接种于96孔板(每孔细胞数为2×103)，仍用上述6种药物剂量培养3天后，吸出培养液，于每孔加入MTT溶液100μl于37℃反应4小时，弃去MTT，每孔加入100μl DMSO并振荡10分钟，充分溶解结晶物，490nm处测定吸光度A值，实验结果用细胞增殖率表示(实验组A值/对照组A值×100)。结果表明(见表2)，与空白对照组相比，本发明美白祛斑换肤液可使黑素细胞增殖率明显降低。说明本发明具有抑制黑素细胞增生的作用。
以L-Dopa为底物，采用体外氧化多巴反应方法测定黑素细胞酪氨酸酶活性。将细胞接种于96孔板(每孔细胞数为2×103)，仍用上述6种药物剂量培养72小时后，收集细胞，离心弃去上清液，用0.01mol/L的PBS洗2次，加入200μL0.1％TritonX-100裂解液，置于-80℃冰箱中0.5小时，37℃水浴箱中复温0.5小时，加2mg/mL L-Dopa400μL，继续37℃孵育2小时，分光光度计读取450nm处吸光度A值，用L-Dopa的自动氧化进行校正。重复3次。实验结果用酪氨酸酶活性(％)＝实验组A值/对照组A值×100％表示。结果表明(见表3)，与空白对照组相比，本发明美白祛斑换肤液对黑素细胞酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用，从而抑制黑素细胞内黑色素的生成。
表1.对黑素细胞内黑素含量的影响
x±s.n＝12.与空白对照相比，*P＜0.05，**P＜0.01.
表2.对黑素细胞增殖的影响
x±s.n＝12.与空白对照相比，**P＜0.01.
表3.对酪氨酸酶活性的影响
x±s.n＝12.与空白对照相比，**P＜0.01.
用完全培养基培养角质形成细胞株HaCaT，置于37℃ 5％CO2孵育箱中培养，每3d-4d传代1次。取对数生长期的细胞用于实验.用MTT法测定细胞增殖情况。将HaCaT细胞以2×104的密度接种于96孔板，200μL/孔，24h细胞贴壁后弃去原培养液，加入含本发明美白祛斑换肤液的培养基培养，每组均设3个复孔，培养24h，加入MTT液(20μL/孔)，继续培养4h，小心吸弃孔内上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡10min后，在酶标仪上测0D值，波长为492nm。取对数生长期细胞1瓶，稀释成1×104/mL细胞悬液.取100mL培养瓶，每瓶加入细胞悬液10mL(1×105个细胞/瓶)，预培养24h.按实验分组加入含本发明美白祛斑换肤液培养基后，细胞继续培养24h.制备成细胞悬液，加入70％冷乙醇，离心去除固定液，加入3mL PBS洗两遍，加入1mL PI染色液，4℃冰箱避光孵育30min，500目铜网过滤。用流式细胞仪检测。结果表明，本发明美白祛斑换肤液能明显地促进HaCaT角质形成细胞的增殖和细胞凋亡，且呈浓度依赖性，与对照组比较有显著性差异。说明本发明具有促进皮肤角质形成细胞增殖和凋亡的作用，从而达到换肤的功效。
局部刺激性实验：取成年家兔8只，雌雄各半，每只动物分笼饲养，先在实验室条件饲养3-4天。然后将家兔脊柱两侧背毛用电动剃毛器剃去，每侧面积5×10cm2。仔细检查脱毛区是否有红肿和损伤，如有应弃之，不能进行试验。采用多次给药的试验方法，在脱毛区涂抹本发明美白祛斑换肤外用制剂，每日2次，连续涂抹7天。末次涂抹24小时后用温水洗去涂抹物，分别于l、24、48、72小时后观察局部皮肤反应，如红斑、水肿、脱屑、结痂等，是否有出血点、皮肽粗糙或菲薄等，记录发生时间及消退时间。实验结果表明，在连续涂抹本发明美白祛斑换肤外用制剂7天后，各家兔皮肤均未表现出明显的皮肤刺激和过敏反应。表明本发明产品安全，无不良反应。
临床试用试验：用以上方法制成的美白祛斑换肤外用制剂，经面色暗黄、面部色斑人群试用，年龄18-50岁。临床疗效判定标准：治愈；皮损全部或基本消失，颜色正常或接近正常；有效：皮损明显缩小，颜色明显降低；无效：皮损无明显缩小，颜色可以稍淡。所有患者用本发明外涂面部，每天2次，连续30天；在使用本发明期间面部均不使用任何其它化妆品或皮肤外用药物。治愈率＝治愈人数/总病例X100％；有效率＝(治愈人数+有效人数)/总病例X100％。结果见表4。临床试用结果表明，面色暗黄、面部色斑人群使用本发明外用制剂均有效，有效率达100％；治愈率均超过90％。所有患者在应用本发明期间均未出现皮肤刺激、过敏等不良反应。因此本发明是一种理想的美白祛斑换肤的外用制剂，疗效显著，使用安全可靠。
表4本发明美白祛斑换肤的临床效果
Claims (3)
1.一种具有美白祛斑换肤作用的组合物，其特征在于：由从银杏叶中提取的银杏黄酮粉末、从芝麻粕中提取的芝麻素粉末和从黄芪中提取的黄芪总苷粉末按质量比1-10∶1-10∶1-10混合均匀组成；
所述银杏黄酮粉末由银杏叶中提取，其中银杏黄酮含量大于50％；
所述芝麻素粉末由芝麻粕中提取，其中芝麻素含量大于50％；
所述黄芪总苷粉末由黄芪中提取，其中黄芪总苷含量大于50％。
2.根据权利要求1所述的一种具有美白祛斑换肤作用的组合物，其特征在于：由银杏黄酮粉末、芝麻素粉末和黄芪总苷粉末按质量比1∶1∶1混合均匀组成。
3.根据权利要求1所述的一种具有美白祛斑换肤作用的组合物，可与化妆制剂或药物的赋形剂混合制成皮肤外用制剂，如膏霜乳液、凝胶、贴膜、皮下注射剂等。
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