CN102776202A - 一种培育雄性不育植物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种培育雄性不育植物的方法。本发明提供的方法，是将OsSUI1蛋白的编码基因导入目的植物中，得到雄性育性低于所述目的植物的转基因植物；所述OsSUI1蛋白是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的由序列1衍生的蛋白质。研究表明，OsSUI1基因与花药的发育调控有密切关系，过表达OsSUI1基因可引起花粉不育，而对其他器官的营养生长不产生负面作用，所以OsSUI1基因可用于培育雄性不育系，并为将来更广泛的应用杂种优势提高作物产量奠定技术基础。

Description

一种培育雄性不育植物的方法

技术领域

本发明涉及一种培育雄性不育植物的方法。

背景技术

水稻是世界上种植范围最广泛的作物之一，全世界有110多个国家种植水稻，有一半以上的人口以大米为主食。自20世纪70年代以来，杂交水稻的推广和应用，为中国乃至世界的粮食增产做出了巨大的贡献，对未来解决人类的食物安全问题具有重要意义。雄性不育是杂种优势利用的基础，对于雄性不育遗传机理的准确把握是杂种优势有效利用的前提。水稻雄性不育包括细胞核不育和核质互作不育，生产上利用的主要是核质互作型雄性不育和光温敏核不育。目前，关于水稻雄性不育的遗传研究报道较多，特别是随着分子生物学的研究进展，分子标记和QTL等分子技术的不断成熟和应用，水稻雄性不育的遗传机理研究不断得到深化，为传统育种和分子育种进一步结合奠定了坚实的基础。

通过传统方法获得的不育系受到生殖隔离和杂交不亲和的限制，使杂交优势得不到充分利用。在作物育种工作面临着严峻挑战的时刻，植物基因工程的兴起为人类开辟了一条改良作物创造新品种的途径。基因工程方法不受生殖隔离和杂交亲和性的限制，可向优良品种中转移单一或少数基因一般不影响原有优良性状的遗传和表达，可避免传统杂交育种的不利性状连锁和远缘杂交分离的现象，而且具有两系的特点，这些都是传统杂交方法无法比拟的。随着人们对植物生殖发育的分子生物学及雄性不育机理研究的深入，利用基因工程创造雄性不育系成为作物杂交育种的迫切需要。

虽然利用基因工程创造水稻雄性不育系的工作还存在许多问题，但从目前的技术以及所取得的结果说明此途径是完全可行的，且由于其无可比拟的优越性而具有广阔的应用前景。相信随着分子生物学技术的发展和完善，以及对植物生殖发育的分子机制研究的进一步深入，并将其与传统的育种方法相结合，一定能创造出新的、稳定的、完全不育系和恢复系，从而将植物杂交优势的利用引向更高的水平。

发明内容

本发明的目的是提供一种培育雄性不育植物的方法。

本发明提供的培育转基因植物的方法，是将OsSUI1蛋白的编码基因导入目的植物中，得到雄性育性低于所述目的植物的转基因植物；

所述OsSUI1蛋白是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的由序列1衍生的蛋白质。

为了使(a)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述(b)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的蛋白质的编码基因可通过将序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

所述OsSUI1蛋白的编码基因可为如下1)至4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表的序列2自5’末端第75至806位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

所述编码基因可通过含有所述编码基因的重组表达载体导入所述目的植物中。

可用现有的植物表达载体构建含有所述编码基因的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端。使用所述编码基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用所述编码基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

所述重组表达载体可为将含有所述编码基因的表达盒插入双元表达载体pCAMBIA1300的多克隆位点得到的重组质粒。

所述重组表达载体具体可为将所述编码基因插入重组质粒pMD18-T-OsSUI1的CaMV35S启动子和CaMV35S终止子之间得到的重组质粒；所述重组质粒pMD18-T-OsSUI1具体可为将载体pJIT163的Kpn I与Xho I酶切位点间的小片段插入双元表达载体pCAMBIA1300得到的重组质粒。

含有所述编码基因的重组表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导、基因枪等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。所述目的植物既可以是单子叶植物也可以是双子叶植物。所述单子叶植物具体可为水稻。所述水稻具体可为粳稻(如品种309)或籼稻(如品种-11)。

本发明还保护所述OsSUI1蛋白或所述OsSUI1蛋白的编码基因在培育雄性不育植物中的应用。所述应用中，所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。所述单子叶植物具体可为水稻。所述水稻具体可为粳稻(如品种309)或籼稻(如品种-11)。

本发明还保护一种重组表达载体，它构建方法包括如下步骤：

(1)将载体pJIT163的Kpn I与Xho I酶切位点间的小片段插入双元表达载体pCAMBIA1300，得到重组质粒pMD18-T-OsSUI1；

(2)将权利要求2或3所述基因插入重组质粒pMD18-T-OsSUI1的CaMV35S启动子和CaMV35S终止子之间，得到所述重组表达载体。

研究表明，OsSUI1基因与花药的发育调控有密切关系，过表达OsSUI1基因可引起花粉不育，而对其他器官的营养生长不产生负面作用，所以OsSUI1基因可用于培育雄性不育系，并为将来更广泛的应用杂种优势提高作物产量奠定技术基础。

附图说明

图1为实施例2的步骤一中PCR扩增产物的电泳图；M代表Marker；1和2代表PCR扩增产物。

图2为实施例2的步骤一中阳性质粒的酶切鉴定电泳图；M：Marker；1、2、3分别代表不同的阳性质粒。

图3为双元表达载体pCAMBIA1300的结构示意图。

图4为载体pJIT163的结构示意图。

图5为重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1的HindIII酶切鉴定图；M：Marker；1-4：重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1。

图6为实施例2的步骤三中潮霉素基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的电泳图；M代表Marker；1-7分别代表不同阳性植株；8代表粳稻品种台北309；9代表重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1。

图7为实施例2的步骤三中OsSUI1基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的电泳图；M代表Marker；1代表粳稻品种台北309；2-9分别代表不同T₀代阳性植株；10代表重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1。

图8为实施例2的步骤三中转OsSUI1基因植株的Southern鉴定图；CK：代表重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1；TB-2、TB-3、TB-4和TB-5均代表转OsSUI1基因植株；箭头所指为杂交信号。

图9为实施例2的步骤三中转OsSUI1基因植株与台北309的植株照片。

图10为实施例2的步骤三中转OsSUI1基因植株与台北309的花药碘染结果。

图11为实施例2的步骤四中潮霉素基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的电泳图；M代表Marker；空白代表代表空白对照(以水为模板)；野生型代表籼稻品种93-11；1-7分别代表不同T₀代阳性植株；阳性代表重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1。

图12为实施例2的步骤四中OsSUI1基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的电泳图；M代表Marker；1-7分别代表不同T₀代阳性植株；8代表重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1；9代表籼稻品种93-11；10代表空白对照(以水为模板)。

图13为实施例2的步骤四中转OsSUI1基因植株与93-11的植株照片；WT：野生型植株；T0：转基因植株。

图14为实施例2的步骤四中转OsSUI1基因植株与93-11的花药碘染结果；WT：野生型植株；T0：转基因植株。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。大肠杆菌DH5α：天根生化科技(北京)有限公司，CB101-01。

水稻品种培矮64S：公众可以从中国科学院亚热带农业生态研究所获取；参考文献：罗孝和，邱趾忠，李任华.导致不育临界温度低的两用核不育系培矮64S.杂交水稻，1992，(1)：27-29。

粳稻品种台北309：公众可以从中国科学院亚热带农业生态研究所获取；参考文献：曹孟良，农杆菌介导的水稻高效遗传转化体系的建立.湖南农业大学学报(自然科学版).1999，25(5)：349-356。

籼稻品种93-11：公众可以从中国科学院亚热带农业生态研究所获取；参考文献：朱立煌，超级杂交水稻LYP9及其亲本的转录组学研究.中国基础科学.2010，4：20-22。

双元表达载体pCAMBIA1300：

CambiaLabs，http://www.cambia.org/daisy/bioforge_legacy/3725.html。

载体pJIT163：公众可以从中国科学院亚热带农业生态研究所获取；参考文献：Guerineau F，Lucy A，Mullineaux P.Effect of two consensus sequences precedingthe translation initiator codon on gene expression in plant protoplasts.PlantMol Biol，1992，18(4)：815-818.(http://www.pgreen.ac.uk/JIT/JIT_fr.htm)。

农杆菌菌株EHA105：公众可以从中国科学院亚热带农业生态研究所获取；参考文献：刘晓敏，张莉弘，刘金亮，魏毅，潘洪玉，张世宏.玉米逆境诱导型启动子克隆及其植物表达载体构建.生物技术通报.2011，3：86-90.。

实施例1、OsSUI1蛋白及其编码基因(OsSUI1基因)的序列分析

OsSUI1蛋白(由243个氨基酸残基组成)，如序列表的序列1所示，包含有SUI1结构域的保守序列(自N末端第139-243位氨基酸残基)。

OsSUI1基因，全序列如序列表的序列2所示(90ibp)，开放阅读框为序列表的序列2自5’末端第75至806位核苷酸(732bp)，位于水稻4号染色体上，不含内含子。

实施例2、转基因植物的获得

一、OsSUI1基因(cDNA)的克隆

1、采用TRIzol试剂提取水稻品种培矮64S的总RNA。

2、反转录反应

取2μg步骤1的总RNA，加入0.5μg/μL Oligo(dT)1μL，加入去离子水补足到12μL，70℃保温5min后，依次加入5×RT buffer 4μL，20U/μL RNase抑制剂1μL，10mmol/L dNTP 2μL，37℃保温5min后加入200U/μL M-MLV反转录酶1μL，反应终体积为20μL。42℃反应60min，70℃加热10min终止反应，得到cDNA。

3、PCR体外扩增

以步骤2的cDNA为模板，用OsSUI1-F和OsSUI1-R组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。

OsSUI1-F：5’-ACT TGG ACT CCT CGG CTT GAA C-3’；

OsSUI1-R：5’-CGA CAC ACT GCT AAA CTG AAC C-3’。

PCR体系(50μl)：GC×Buffer溶液25μl，dNTP Mixture 8μl，LA Taq聚合酶(TaKaRa)0.5μl，OsSUI1-F(10nmol)2μl，OsSUI1-R(10nmol)2μl，cDNA模板3.5μl，ddH₂O 9μl。

PCR程序：95℃预变性6min；94℃变性30s，56℃退火40s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸10min。

PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图见图1。

4、PCR产物的纯化

在紫外光照射下切胶，利用凝胶回收试剂盒(天为时代)回收琼脂糖凝胶上的目的基因片段(约900bp)。

5、DNA连接反应

将步骤4回收的目的基因片段与pMD18-T Vector(TaKaRa)连接，得到连接产物。

6、转化大肠杆菌(热激法)

无菌条件下取5μl步骤5的连接产物与大肠杆菌DH5α感受态细胞轻轻混匀，冰浴30min，42℃热激90s，将离心管迅速转到冰浴中放置2-3min。加入LB培养基800μl，37℃摇床(100-160rpm)，温和摇振1h左右。在LB固体培养基(含氨苄青霉素50μg/ml)上加入X-Gal和IPTG涂匀，然后涂布200μl培养液，37℃倒置培养12-16h。

7、阳性克隆的筛选及鉴定

LB固体培养基上长出许多的蓝色和白色菌斑，待菌斑长到合适大小时，用灭菌的芽签挑取几个白斑(阳性克隆)，分别于LB液体培养基(含氨苄青霉素50μg/m)中振荡培养12-16h，进行扩大培养。

碱裂解法分别提取扩大培养后的阳性克隆的质粒。

用限制性内切酶HindIII和EcoR I双酶切质粒，酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。电泳显示约2692bp和约901bp条带的质粒为酶切鉴定阳性质粒。部分阳性质粒的酶切产物电泳图见图2。

将阳性质粒进行测序，测序结果表明，序列表的序列2所示的DNA(OsSUI1基因cDNA)插入了pMD18-T Vector，即得到了重组质粒pMD18-T-OsSUI1。

二、重组表达载体的构建

1、用限制性内切酶Kpn I与Sal I双酶切双元表达载体pCAMBIA1300(结构示意图见图3)，回收载体骨架(约8930bp)。

2、用限制性内切酶Kpn I与Xho I载体pJIT163(结构示意图见图4)，回收小片段(约2193bp)，该小片段中含有2×CaMV35S启动子和CaMV35S终止子。

3、将步骤1的载体骨架和步骤2的小片段连接(Sal I与Xho I为同尾酶)，得到重组质粒pCAMBIA1300-163。

4、用限制性内切酶Sal I与Smal I双酶切重组质粒pCAMBIA1300-163，回收载体骨架(约10450bp)。

5、用限制性内切酶Sal I与Smal I双酶切重组质粒pMD18-T-OsSUI1，回收OsSUI1片段(约901bp)。

6、将步骤4的载体骨架和步骤5的OsSUI1片段连接，得到重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1。

7、将重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1用HindIII单酶切，酶切产物的电泳图见图5，得到了约1800bp的目的条带。

三、转基因植物的获得和鉴定(以粳稻品种台北309为受体植物)

1、转基因植物的获得

(1)将重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1导入农杆菌菌株EHA105，得到重组农杆菌。

(2)将步骤(1)的重组农杆菌与粳稻品种台北309愈伤组织共培养3天，用50mg/L潮霉素进行抗生筛选，分化、生根后得到阳性植株(T₀代)。

2、转空载体植物的获得

(1)将重组质粒pCAMBIA1300-163导入农杆菌菌株EHA105，得到重组农杆菌。

(2)将步骤(1)的重组农杆菌与粳稻品种台北309愈伤组织共培养3天，用50mg/L潮霉素进行抗生筛选，分化、生根后得到对照植株(T₀代)。

3、转基因植物的分子鉴定

(1)PCR鉴定

CATA法提取阳性植株(T₀代)或对照植株(T₀代)叶片的基因组DNA，作为模板进行PCR鉴定。PCR鉴定分别采用潮霉素基因特异引物对(hpt-F和hpt-R；靶序列约504bp)和OsSUI1基因特异引物对(OsSUI1-F和OsSUI1-ter-R；为避免水稻自身同源基因的扩增，OsSUI1-F为基因特异引物，OsSUI1-ter-R为载体终止子特异引物；靶序列约580bp)。

hpt-F(上游引物)：5′-ACCTGCCTGAAACCGAACTG-3′；

hpt-R(下游引物)：5′-CTGCTCCATACAAGCCAACC-3′。

OsSUI1-F(上游引物)：5’-GCG AGT ACA ACT ACG CCA AGG TGC TCC-3’；

OsSUI1-ter-R(下游引物)：5’-GCT CCA GGT TTA GTC GTC TCG TGT CTG GT-3’。

潮霉素基因鉴定和OsSUI1基因鉴定的PCR体系(50μl)：10×Buffer溶液5μl，dNTP 4μl，Tap DNA聚合酶0.5μl，上游引物(10pmol)2μl，下游引物(10pmol)2μl，模板4μl，ddH₂O 32.5μl。

潮霉素基因鉴定的PCR程序：94℃预变性5min；94℃变性40s，57℃退火40s，72℃延伸1min，共35个循环；最后72℃延伸10min。

OsSUI1基因鉴定的PCR程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火45s，72℃延伸45s，共35个循环；最后72℃延伸10min。

潮霉素基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的部分电泳图见图6。OsSUI1基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的部分电泳图见图7。T₀代阳性植株的PCR鉴定结果显示：共有6株T₀代阳性植株潮霉素基因鉴定和OsSUI1基因鉴定均为阳性，为转OsSUI1基因植株。但部分植株采用OsSUI1基因特异引物对进行PCR扩增后，电泳显示的扩增条带较弱(见图7的样本2至4)。

T₀代对照植株的PCR鉴定结果显示：共有8株T₀代对照植株潮霉素基因鉴定为阳性，为转空载体植株。

(2)Southern鉴定

①制备探针

以重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1为模板，用OsSUI1-ter-F和OsSUI1-ter-R组成的引物对进行PCR扩增，制备Southern鉴定的探针。

OsSUI1-ter-F：5’-GCG AGT ACA ACT ACG CCA AGG TGC TCC-3’；

OsSUI1-ter-R：5’-GCT CCA GGT TTA GTC GTC TCG TGT CTG GT-3’。

PCR程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火45s，72℃延伸45s，共35个循环；最后在72℃下延伸10min。

②Southern鉴定

提取转OsSUI1基因植株苗期叶片的基因组DNA，用限制性内切酶EcoRV过夜酶切，然后依次进行电泳、转膜和预杂交，然后用步骤1制备的探针65℃杂交16h，然后依次洗膜、显色、终止反应并拍照。部分结果见图8。6株转OsSUI1基因植株中，3株为单拷贝目的基因植株(TB-2、TB-3和TB-4；分别对应图7的样本2至4)，另外3株为多拷贝目的基因植株(TB-5、TB-6和TB-7；TB-5对应图7的样本5)。

(3)表型鉴定

将成熟期的6株T₀代转OsSUI1基因植株(TB-2、TB-3、TB-4、TB-5、TB-6和TB-7)、8株T₀代转空载体植株和8株野生型植株(台北309；WT)分别进行表型观察和雄性育性分析，雄性育性以花粉碘染率表征。

各个转OsSUI1基因植株、转空载体植株均和台北309生长表型一致。TB-5和台北309的照片见图9。

TB-2的花粉碘染率为0％，TB-3的花粉碘染率为0％，TB-4的花粉碘染率为0％，TB-5的花粉碘染率为0％，TB-6的花粉碘染率为0％，TB-7的花粉碘染率为0％，8株台北309的花粉碘染率均为95-99％，8株转空载体植株的花粉碘染率均为95-99％。转OsSUI1基因植株的花粉均表现高度不育。TB-5和台北309的花药进行碘染后的照片见图10。

四、转基因植物的获得(以籼稻品种93-11为出发植物)

1、转基因植物的获得

(1)将重组质粒pCAMBIA1300-163-OsSUI1导入农杆菌菌株EHA105，得到重组农杆菌。

(2)将重组农杆菌与籼稻品种93-11愈伤组织共培养3天，用50mg/L潮霉素进行抗生筛选，分化、生根后得到阳性植株(T₀代)。

2、转空载体植物的获得

(1)将重组质粒pCAMBIA1300-163导入农杆菌菌株EHA105，得到重组农杆菌。

(2)将步骤(1)的重组农杆菌与籼稻品种93-11愈伤组织共培养3天，用50mg/L潮霉素进行抗生筛选，分化、生根后得到对照植株(T₀代)。

3、转基因植物的分子鉴定

(1)PCR鉴定

同步骤三的3的(1)。

潮霉素基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的部分电泳图见图11。OsSUI1基因特异引物对鉴定阳性植株(T₀代)的部分电泳图见图12。鉴定结果显示：共有7株T₀代阳性植株潮霉素基因鉴定和OsSUI1基因鉴定均为阳性，为转OsSUI1基因植株。

潮霉素基因特异引物对鉴定对照植株(T₀代)的结果显示：共有8株T₀代对照植株潮霉素基因鉴定为阳性，为转空载体植株。

(2)表型鉴定

将成熟期的7株T₀代转OsSUI1基因植株、8株T₀代转空载体植株和8株和野生型植株(93-11；WT)分别进行表型观察和雄性育性分析，雄性育性以花粉碘染率表征。

各个转OsSUI1基因植株的生长表型一致，均略矮于93-11。一株转OsSUI1基因植株(对应图12的样本5)和93-11的照片见图13。

7株转OsSUI1基因植株的碘染率分别为5％、1％、6％、4％、0％、1％和1％，8株台北309的花粉碘染率均为95-99％，8株转空载体植株的花粉碘染率均为95-99％。转OsSUI1基因植株的花粉表现高度不育。一株转OsSUI1基因植株(对应图12的样本5)和93-11的花药进行碘染后的照片见图14。

Claims (10)

1.一种培育转基因植物的方法，是将OsSUI1蛋白的编码基因导入目的植物中，得到雄性育性低于所述目的植物的转基因植物；

所述OsSUI1蛋白是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的由序列1衍生的蛋白质。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述OsSUI1蛋白的编码基因是如下1)至4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表的序列2自5’末端第75至806位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述编码基因通过含有所述OsSUI1蛋白的编码基因的重组表达载体导入所述目的植物中。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体为将含有所述OsSUI1蛋白的编码基因的表达盒插入双元表达载体pCAMBIA13002的多克隆位点得到的重组质粒。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体是将所述OsSUI1蛋白的编码基因插入重组质粒pMD18-T-OsSUI1的CaMV35S启动子和CaMV35S终止子之间得到的重组质粒；所述重组质粒pMD18-T-OsSUI1是将载体pJIT163的Kpn I与XhoI酶切位点间的小片段插入双元表达载体pCAMBIA1300得到的重组质粒。

6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物。

7.OsSUI1蛋白或OsSUI1蛋白的编码基因在培育雄性不育植物中的应用；

所述OsSUI1蛋白是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的由序列1衍生的蛋白质。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述OsSUI1蛋白的编码基因是如下1)至4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表的序列2自5’末端第75至806位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

10.一种重组表达载体，它构建方法包括如下步骤：

(1)将载体pJIT163的Kpn I与Xho I酶切位点间的小片段插入双元表达载体pCAMBIA1300，得到重组质粒pMD18-T-OsSUI1；

(2)将OsSUI1蛋白的编码基因插入重组质粒pMD18-T-OsSUI1的CaMV35S启动子和CaMV35S终止子之间，得到所述重组表达载体；

所述OsSUI1蛋白的编码基因是如下1)至4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表的序列2自5’末端第75至806位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

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