CN102746308A - 别嘌醇衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了如式Ⅰ所示别嘌醇衍生物及其制备方法和用途。本发明别嘌醇衍生物能够有效抑制肿瘤生长，具有良好的抗肿瘤活性；它还能够有效抑制黄嘌呤氧化酶活性，可用于痛风的治疗，为治疗癌症和痛风提供了一种新的用药选择；同时，本发明化合物的制备方法简单，成本较低，收率高，具有良好的工业应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及别嘌醇衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
肿瘤，是当今世界危及人类生命的一种最常见、最严重的疾病之一。化疗、放疗、手术疗法是目前治疗肿瘤的主要手段。而目前用于肿瘤治疗的药物数量有限，其售价较高，为肿瘤患者带来了较大的经济负担。因此，开发出更多的可有效抗肿瘤的药物显得尤为必要。
别嘌呤醇（Allopurinol），化学名：4-羟基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶，其结构式如下：
它是天然次黄嘌呤的同分异构体，能抑制黄嘌呤氧化酶的活性，阻止黄嘌呤和次黄嘌呤氧化产生尿酸，从而降低血清尿酸的浓度，主要用于治疗高尿酸血症及痛风。自1963年别嘌呤成为治疗痛风的首选药物以来，一直是临床上用于治疗痛风的一线药物。
目前，还未见将别嘌醇作为先导化合物，对其进行结构修饰和改造后，用于抗肿瘤的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种别嘌醇衍生物及其制备方法和用途。本发明还提供了一种抗肿瘤、治疗痛风的药物组合物。
具体地，本发明提供了如式Ⅰ所示的化合物，其结构式如下：
其中，R3为-SO2R4或-COR5，R2为H或C1-5的烷基；
所述R4为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基；所述R5为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基、或C1~5的烷基或取代烷基。
其中，所述R4为苯基或取代苯基；R5为苯基或取代苯基、或C1~3的烷基或取代烷基；R2为H或C1-3的直链烷基。
进一步地，所述取代烷基为卤代烷基。
更进一步地，所述R4为-C6H5、-C6H4NO2或-C6H4Br；所述R5为-CH3、-CH2Cl或-C6H5。
进一步优选地，所述化合物为
N-4-(4-溴苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-硝基苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-苯甲酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-溴苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-硝基苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-苯甲酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-氯乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、或
N-4-(4-乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸。
本发明还提供了上述化合物的制备方法，它包括如下操作步骤：
A、取4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，与BrCH2COOR2通过亲电取代反应生成化合物A；其中，R2为H或C1-5的烷基；
B、取化合物A，与对苯二胺通过亲电取代反应生成化合物B；
C、取化合物B，与R4SO2Cl或/和R5COCl通过亲核取代反应生成式Ⅰ化合物；或取(N-4-(4-氨基苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-)乙酸乙酯，与R4SO2Cl或R5COCl发生亲核取代反应后，再将酯水解，生成式Ⅰ化合物；
其中，R4为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基；所述R5为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基、或C1~5的烷基或取代烷基。
其中，步骤A中，4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶与BrCH2COOR2的摩尔用量比为1：1~2；步骤B中，化合物A与对苯二胺的摩尔用量比为1：1~2；步骤C中，化合物B与R4SO2Cl或R5COCl的摩尔用量比为1：1~2。
更进一步地，步骤A中，4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶与BrCH2COOR2的摩尔用量比为1：1.0~1.5；步骤B中，化合物A与对苯二胺的摩尔用量比为1：1.0~1.5；步骤C中，化合物B与R4SO2Cl或R5COCl的摩尔用量比为1：10~15。
其合成路线如下：
上述反应式中，
2：4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶
6：(4-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-)乙酸乙酯
7：(N-4-(4-氨基苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-)乙酸乙酯
8a：N-4-(4-溴苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯
8b：N-4-(4-硝基苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯
8c：N-4-(4-苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯
8d：N-4-(4-苯甲酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯
8f：N-4-(4-乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯
9a：N-4-(4-溴苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸
9b：N-4-(4-硝基苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸
9c：N-4-(4-苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸
9d：N-4-(4-苯甲酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸
9e：N-4-(4-氯乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸
9f：N-4-(4-乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸。
本发明还提供了上述化合物在制备抗肿瘤、治疗痛风的药物中的用途。
进一步地，所述药物是抗肝癌细胞药物或黄嘌呤氧化酶抑制剂。
本发明还提供了一种抗肿瘤、治疗痛风的药物组合物，它是由上述的化合物为活性成分，加上药学上可用的辅料制备而成的制剂。
本发明别嘌醇衍生物能够有效抑制肿瘤生长，具有良好的抗肿瘤作用；它还能够有效抑制黄嘌呤氧化酶活性，可用于痛风治疗，为临床治疗癌症和痛风提供了一种新的用药选择；同时，本发明化合物的制备方法简单，成本较低，收率高，具有良好的工业应用前景。
具体实施方式
实施例1(4-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-)乙酸乙酯（简称化合物6）的合成
将TEA(1.78g，17.62mmol)慢慢加入到已溶解在20mL干燥DMF的4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(0.8lg，5.26mmol)中，室温搅拌30min，再将已溶解在5mL干燥DMF的溴乙酸乙酯(1.06g，6.39mmol)慢慢滴加到混合物中并继续搅拌2h。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到30mL水中，用稀盐酸调节pH值至酸性后，加入乙酸乙酯萃取(3×25mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得絮状物。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶乙酸乙酯(6∶1)洗脱，得到白色针状晶体（化合物6）。
化合物6:白色晶体，83～84℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.91(s,1H,CH),8.58(s,1H,CH),5.45(s,2H,CH2),4.17(dd,J=7.10Hz,J=14.22Hz,2H,CH2),1.20(t,J=7.10Hz,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)167.90,156.53,151.47,151.09,135.32,106.29,61.80,48.86,14.36;IR(KBr,ν,cm-1):3458,3116,2992,2938,1734,1591,1556,1486,1404,1357,1250,1218,1188,1134,1019,950,861,786,713,568;HRMS(ESI)calcd for C9H9ClN4O2[M＋H]＋240.0414found241.0492.
实施例2(N-4-(4-氨基苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-)乙酸乙酯（简称化合物7）的合成
将化合物6(1.73g，7.21mmol)溶解在25mL乙腈中，再将对苯二胺(0.78g，7.21mmol)慢慢加入到混合液中，反应物升温至80℃搅拌3h，用TLC检测至完全反应。反应液经浓缩得固体粗产物，粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)再加几滴三乙胺洗脱，得到棕色片状晶体（化合物7）。
化合物7:灰色固体，179.8～181.9℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.76(br，1H,NH),8.27(s,2H,CH),7.37(s,2H,ArH),6.62(s,2H,ArH),5.02～5.18(m,4H),4.14(dd,J＝7.04Hz,J＝14.16Hz,2H,CH2),1.19(t,J＝7.08Hz,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)167.80,155.73,154.30,153.61,132.52,127.41,123.34,113.94,100.76,61.18,47.80,13.94;IR(KBr,ν,cm-1):3476,3381,3200,2940,1735,1591,1514,1440,1329,1291,1254,1212,1019,915,795,740,706,603,516;HRMS(ESI)calcd for C15H16N6O2[M＋H]+312.1335found313.1439.
实施例3化合物8a~8c的合成
将化合物7(0.36g，1.15mmol)溶解在10mL THF中，并在冰欲条件下将NaH(0.069g，2.88mmol)慢慢加入到混合液中，冰欲搅拌30min，再将已溶解在3mL THF中的对溴苯磺酰氯(0.34g，1.34mmol)慢慢滴加到反应液中，滴加完毕后继续搅拌1h，最后移入室温搅拌过夜。反应液倒入到15mL水中，用稀盐酸调节pH值为3左右，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色固体8a。
将化合物7(0.36g，1.15mmol)溶解在10mL THF中，并在冰欲条件下将NaH(0.069g，2.88mmol)慢慢加入到混合液中，冰欲搅拌30min，再将已溶解在3mL THF中的对硝基苯磺酰氯(1.34mmol)慢慢滴加到反应液中，滴加完毕后继续搅拌1h，最后移入室温搅拌过夜。反应液倒入到15mL水中，用稀盐酸调节pH值为3左右，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到黄色固体8b。
将化合物7(0.36g，1.15mmol)溶解在10mL THF中，并在冰欲条件下将NaH(0.069g，2.88mmol)慢慢加入到混合液中，冰欲搅拌30min，再将已溶解在3mL THF中的苯磺酰氯(1.34mmol)慢慢滴加到反应液中，滴加完毕后继续搅拌1h，最后移入室温搅拌过夜。反应液倒入到15mL水中，用稀盐酸调节pH值为3左右，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到浅黄色固体8c。
8a:白色固体，201.5～203℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.28(br,1H,NH),10.09(br，1H,NH),8.38(s,1H,CH),8.22(s,1H,CH),7.79(d,J＝8.60Hz,2H,ArH),7.65～7.71(m,4H,ArH),7.10(d,J＝8.88Hz,2H,ArH),5.23(s,2H,CH2),4.15(dd,J＝7.12Hz,J＝14.24Hz,2H,CH2),1.19(t,J＝7.10Hz,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)168.20,155.99,154.67,154.05,139.16,136.31,133.24,132.79,129.19,127.22,122.63,122.16,101.32,61.71,48.41,14.44;IR(KBr,ν,cm-1):3369,3221,2927,2854,1747,1622,1576,1508,1435,1321,1291,1209,1157,1091,1026,917,793,742,655,606,549,419;HRMS(ESI)calcd for C21H19BrN6O4S[M＋H]＋530.0372found531.0442.
8b:黄色固体，182～183℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.53(br,1H,NH),10.10(br，1H,NH),8.37～8.41(m,3H),8.20(s,1H,CH),8.00(d,J＝8.88Hz,2H,ArH),7.72(d,J＝8.72Hz,2H,ArH),7.12(d,J＝8.88Hz,2H,ArH),5.22(s,2H,CH2),4.15(dd,J＝7.12Hz,J＝14.24Hz,2H,CH2),1.19(t,J＝7.12Hz,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)168.18,155.94,154.66,154.03,150.25,145.33,136.66,132.87,132.68,128.80,125.04,122.49,101.31,61.72,48.38,14.41;IR(KBr,ν,cm-1):3390,3253,3108,1734,1620,1573,1529,1481,1379,1346,1213,1166,1090,1015,919,857,792,737,607,547,464;HRMS(ESI)calcdfor C21H19N7O6S[M＋H]＋497.1118found498.1199.
8c:浅黄色固体，224～226℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.21(br,1H,NH),10.06(br,1H,NH),8.37(s,1H,CH),8.20(s,1H,CH),7.76(d,J＝7.12Hz,2H,ArH),7.54～7.67(m,5H,ArH),7.11(d,J＝8.84Hz,2H,ArH),5.22(s,2H,CH2),4.14(dd,J＝7.12Hz,J＝14.20Hz,2H,CH2),1.19(t,J＝7.10Hz,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)167.72,155.51,154.23,153.56,139.43,135.46,133.20,132.81,132.38,129.18,126.67,122.32,121.30,100.76,61.21,47.91,13.95;IR(KBr,ν,cm-1):3345,3236,2927,2854,1740,1621,1573,1508,1483,1441,1375,1294,1212,1235,1162,1093,1016,909,870,783,725,657,583,547;HRMS(ESI)calcd for C21H20N6O4S[M＋H]+452.1267found453.1355.
实施例4化合物8d、8f的合成
方法一：
将化合物7(0.50g，1.60mmol)和TEA(0.50g，4.95mmol)在冰浴条件下依次加入到13mL二氯甲烷中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL二氯甲烷中的苯甲酰氯(0.25g，1.79mmol)慢慢滴加到混合物中，滴加完毕后移入室温加热到50℃继续搅拌1h。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到20mL水中，用稀盐酸调节pH值至酸性后，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮∶二氯甲烷∶氯仿(1∶1∶3∶1)洗脱，得白色固体8d。
将化合物7(0.50g，1.60mmol)和TEA(0.50g，4.95mmol)在冰浴条件下依次加入到13mL二氯甲烷中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL二氯甲烷中的乙酰氯(1.79mmol)慢慢滴加到混合物中，滴加完毕后移入室温加热到50℃继续搅拌1h。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到20mL水中，用稀盐酸调节pH值至酸性后，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮∶二氯甲烷∶氯仿(1∶1∶3∶1)洗脱，得白色固体8f。
8d:白色固体，233～235℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.30(br,1H,NH),10.15(br,1H,NH),8.42(s,1H,CH),8.27(s,1H,CH),7.97(d,J＝7.72Hz,2H,ArH),7.78～7.83(m,4H,ArH),7.52～7.62(m,3H,ArH),5.24(s,2H,CH2),4.16(dd,J＝7.10Hz,J＝14.22Hz,2H,CH2),1.20(t,J＝7.08Hz,3H,CH3);WCNMR(100MHz,DMSO-d6)168.25,165.83,156.11,154.88,154.11,135.45,135.12,132.98,131.94,128.82,128.09,122.30,121.25,101.29,61.72,48.41,14.45;IR(KBr,ν,cm-1):3328,3268,3165,2995,2933,1948,1893,1743,1631,1587,1544,1514,1488,1432,1381,1317,1303,1242,1214,1108,1025,919,831,784,681,524;HRMS(ESI)calcd for C22H20N6O3[M＋H]+416.1597found417.1672.
8f：白色固体,201～203℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.42(br,1H,NH),10.25(br,1H,NH),8.42～8.68(m,2H,CH),7.61～7.72(m,4H,ArH),5.31(s,2H,CH2),4.18(dd,J＝7.00Hz,J＝14.08Hz,2H,CH2),2.08(s,3H,CH3),1.21(t,J＝7.04Hz,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)168.31,167.45,152.20,134.17,119.58,100.19,61.38,48.32,23.94,13.97;IR(KBr,ν,cm-1):3359,2921,2851,1746,1665,1524,1396,1295,1211,1096,1022,850,791,692,596,553;HRMS(ESI)calcd for C17H18N6O3[M＋H]+354.1440found355.1451.
也可以采用方法二：
将化合物7(0.50g，1.60mmol)和TEA(0.50g，4.95mmol)在冰浴条件下依次加入到13mL THF中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL THF中的苯甲酰氯(0.25g，1.79mmol)慢慢滴加到混合物中，冰浴条件下继续搅拌。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到20mL水中，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水甲醇重结晶得白色固体8d。
将化合物7(0.50g，1.60mmol)和TEA(0.50g，4.95mmol)在冰浴条件下依次加入到13mL THF中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL THF中的乙酰氯(1.79mmol)慢慢滴加到混合物中，冰浴条件下继续搅拌。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到20mL水中，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水甲醇重结晶得白色固体8f。
实施例5化合物9a~9f的合成
将化合物8a(0.30g，0.57mmol)溶解在12mL的无水乙醇中，慢慢滴加一定量浓度为1N的氢氧化钠溶液，室温搅拌，并用TLC检测至完全反应，然后将反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节pH为2左右，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水乙醇重结晶得淡黄色固体9a。
将化合物8b(0.57mmol)溶解在12mL的无水乙醇中，慢慢滴加一定量浓度为1N的氢氧化钠溶液，室温搅拌，并用TLC检测至完全反应，然后将反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节pH为2左右，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水乙醇重结晶得淡黄色固体9b。
将化合物8c(0.57mmol)溶解在12mL的无水乙醇中，慢慢滴加一定量浓度为1N的氢氧化钠溶液，室温搅拌，并用TLC检测至完全反应，然后将反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节pH为2左右，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水乙醇重结晶得淡黄色固体9c。
将化合物8d(0.57mmol)溶解在12mL的无水乙醇中，慢慢滴加一定量浓度为1N的氢氧化钠溶液，室温搅拌，并用TLC检测至完全反应，然后将反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节pH为2左右，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水乙醇重结晶得淡黄色固体9d。
将化合物8e(0.57mmol)溶解在12mL的无水乙醇中，慢慢滴加一定量浓度为1N的氢氧化钠溶液，室温搅拌，并用TLC检测至完全反应，然后将反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节pH为2左右，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水乙醇重结晶得淡黄色固体9e。
将化合物8f(0.57mmol)溶解在12mL的无水乙醇中，慢慢滴加一定量浓度为1N的氢氧化钠溶液，室温搅拌，并用TLC检测至完全反应，然后将反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节pH为2左右，加入乙酸乙酯萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得固体。粗产物用无水乙醇重结晶得淡黄色固体9f。
9a:浅黄色晶体，212～213℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.02(br,1H,NH),8.28(s,1H,CH),8.07(s,1H,CH),7.65～7.72(m,J＝8.70Hz,J＝21.46Hz,4H,ArH),7.59(s,2H,ArH),7.00(d,J＝8.88Hz,2H,ArH),4.72(s,2H,CH2);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)175.45,154.76,154.19,152.79,139.19,135.63,133.27,132.15,131.03,128.71,126.39,122.02,121.65,100.73,50.62;IR(KBr,ν,cm-1):3226,1574,1511,1430,1330,1287,1161,1091,1067,1034,924,821,788,741,706,664,602,549;HRMS(ESI)calcd for C19H15BrN6O4S[M＋K]+502.0059found540.9611.
9b:黄色晶体，>230℃开始变色，变成土黄色。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.82(br，1H,NH),8.48(s,1H,CH),8.28(d,J＝8.80Hz,2H,ArH),8.24(s,1H,CH),7.95(d,J＝8.84Hz,2H,ArH),7.44(s,2H,ArH),6.95(d,J＝8.84Hz,2H,ArH),4.71(s,2H,CH2);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)174.91,155.24,154.68,153.41,149.81,146.98,135.92,131.69,128.67,124.80,122.31,101.24,50.95;IR(KB r,ν,cm-1):3108,1614,1533,1434,1349,1165,1092,1034,926,855,789,740,664,613,551;HRMS(ESI)calcd for C19H15N7O6S[M＋K]+469.0805 found508.0348.
9c:灰色固体，151～152℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.85(br，1H,COOH),10.25(br，2H,NH),8.37(s,1H,CH),8.23(s,1H,CH),7.77(d,J＝7.04Hz,2H,ArH),7.54～7.68(m,5H,ArH),7.12(d,J＝8.88Hz,2H,ArH),5.12(s,2H,CH2);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)169.55,154.93,154.21,153.55,139.92,135.45,133.33,133.23,129.68,127.18,123.20,121.75,101.18,48.61;IR(KB r,ν,cm-1):3227,2924,2854,1731,1621,1576,1508,1385,1332,1290,1218,1160,1091,1036,922,839,810,687,582;HRMS(ESI)calcd for C19H16N6O4S[M＋H]＋424.0954 found425.1029.
9d:白色固体，>240℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.20(br，1H,COOH),10.30(br,1H,NH),10.12(br,1H,NH),8.41(s,1H,CH),8.25(s,1H,CH),7.97(d,J＝7.74Hz,2H,ArH),7.76～7.83(m,4H,ArH),7.52～7.62(m,3H,ArH),5.13(s,2H,CH2);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)169.70,165.84,156.00,154.88,154.02,135.44,135.16,133.06,132.69,131.96,128.84,128.09,122.28,121.27,101.29,48.50;IR(KBr，ν,cm-1):3306,3113,2922,1738,1633,1530,1491,1405,1300,1266,1216,1042,926,815,717,678,543,416.HRMS(ESI)calcdfor C20H16N6O3[M＋H]+388.1284 found389.1367.
9e:粉红色固体,236℃开始变色（变黑）1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.19(br,1H,COOH),10.35(br，1H,NH),10.13(br,1H,NH),8.40(s,1H,CH),8.24(s,1H,CH),7.78(d,J＝8.60Hz,2H,ArH),7.63(d,J＝8.96Hz,2H,ArH),5.12(s,2H,CH2),4.27(s,2H,CH2);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)169.67,164.89,155.89,154.74,153.96,135.29,134.82,132.72,122.48,120.27,101.29,48.49,44.04;IR(KBr,ν,cm-1):3296,3126,3072,2924,2854,2507,1914,1652,1607,1556,1510,1464,1414,1380,1275,1255,1219,1144,1041,969,840,775,731,700,642,619,520;HRMS(ESI)calcd for C15H13ClN6O3[M＋H]+360.0738found361.0823.
9f：粉色固体,＞240℃1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.20(br,1H,COOH),10.20(br,1H,NH),10.01(br，1H,NH),8.26～8.43(m,2H,CH),7.60～7.72(m,4H,ArH),5.12(s,2H,CH2),2.05(s,3H,CH3);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)169.13,168.06,155.15,153.36,133.76,132.35,119.34,100.69,48.02,23.90;IR(KBr,ν,cm-1):3296,2923,1666,1613,1558,1512,1382,1277,1220,1093,1047,968,837,781,702,619;HRMS(ESI)calcd for C15H14N6O3[M＋H]＋326.1127found327.1141.
以下通过试验例来说明本发明的有益效果。下述试验例中所用的化合物6、7、8a、8b、8c、8d、8f、9a、9b、9c、9d、9e、9f，分别是由实施例1-5制备得到。
试验例1本发明化合物抗肿瘤效果
利用MTT法对化合物7、8a、8b、8c、8d、8f、9a、9b、9c、9d、9e、9f和阳性对照物17-AAG（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin简称17-AAG是第一代格尔德霉素衍生物）进行Hsp90抑制实验。
将生长良好的人肝癌细胞7402和7221接种于96孔板，7×103/孔。24h后将浓度梯度(终浓度)为2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml和64μg/ml的试药分别加入板中，培养72h之后，加入MTT溶液10μl(5mg/ml)，37℃作用4h，弃上清，加入DMSO150μl/孔，室温振摇30min，测定OD570nm值。根据细胞增殖抑制率公式计算：抑制率(%)=(对照组OD值—实验组OD值)/对照组OD值×100%。IC50值利用统计软件进行计算。实验结果见表1。
表1目标化合物抗肿瘤活性测定结果
“--”：无活性值；IC50值>64，表示所述化合物的IC50超过了64μgmL-1，具体浓度未明确，但仍表明所述化合物对上述肿瘤有抑制作用，仅活性弱于阳性对照；IC50值>100，同上。
由上述试验可知，别嘌醇对Bel-7402、SMMC-7221无抗肿瘤活性，而本发明化合物7-9f，对上述肿瘤抑制活性良好，表明本发明式Ⅰ化合物具有良好的抗肿瘤活性。相对于阳性药物而言，化合物7-9f活性稍弱。
试验例2本发明化合物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性研究
XOD活力测定：在黄嘌呤氧化酶的催化下，底物黄嘌呤被氧化成尿酸，即发生下列反应：
XOD活力由检测产物尿酸的特征吸收峰（λ=290nm）附近的光度值确定。
实验方法，在290nm处用分光光度法测定。在石英比色皿中,加入缓冲溶液、底物溶液和酶溶液,25℃预温2min，在290nm处测定吸光度变化值,每隔5sec记录一次,共测1min,在这段时间内反应，吸光度随时间呈线性增加，斜率为反应速率(dA/min)，斜率越大，说明酶的活力越强。
样品测定：按同样的方法，在酶促反应体系中分别加入样品溶液(5μL,10μL,15μL,20μL)，25℃预温2min，每隔5sec在290nm处纪录吸光度增长的数值，共计1min。每个样品平行操作3次，分别记录反应速率，取平均值计算样品的抑制率。
结果参见表2.
表2目标化合物对黄嘌呤氧化酶抑制活性测定结果
由上述实验可知，本发明式Ⅰ化合物能够有效抑制黄嘌呤氧化酶，具有良好的抗痛风活性。
综上所述，本发明别嘌醇衍生物能够有效抑制肿瘤生长，具有良好的抗肿瘤作用；它还能够有效抑制黄嘌呤氧化酶活性，可用于痛风治疗，为临床治疗癌症和痛风提供了一种新的用药选择；同时，本发明化合物的制备方法简单，成本较低，收率高，具有良好的工业应用前景。
Claims (10)
1.如式Ⅰ所示的化合物，其结构式如下：
其中，R3为-SO2R4或-COR5，R2为H或C1-5的烷基；
所述R4为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基；所述R5为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基、或C1~5的烷基或取代烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述R4为苯基或取代苯基；R5为苯基或取代苯基、或C1~3的烷基或取代烷基；R2为H或C1-3的直链烷基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于：所述取代烷基为卤代烷基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于：所述R4为-C6H5、-C6H4NO2或-C6H4Br；所述R5为-CH3、-CH2Cl或-C6H5。
5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于：所述化合物为
N-4-(4-溴苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-硝基苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-苯甲酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸乙酯、
N-4-(4-溴苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-硝基苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-苯磺酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-苯甲酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、
N-4-(4-氯乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸、或
N-4-(4-乙酰氨基)苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-乙酸。
6.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
A、取4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，与BrCH2COOR2通过亲电取代反应生成化合物A；其中，R2为H或C1-5的烷基；
B、取化合物A，与对苯二胺通过亲电取代反应生成化合物B；
C、取化合物B，与R4SO2Cl或/和R5COCl通过亲核取代反应生成式Ⅰ化合物；或取(N-4-(4-氨基苯基)氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-N-1-)乙酸乙酯，与R4SO2Cl或R5COCl发生亲核取代反应后，再将酯水解，生成式Ⅰ化合物；
其中，R4为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基；所述R5为C6~10的芳香烃基或取代芳香烃基、或C1~5的烷基或取代烷基。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤A中，4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶与BrCH2COOR2的摩尔用量比为1：1~2；
步骤B中，化合物A与对苯二胺的摩尔用量比为1：1~2；
步骤C中，化合物B与R4SO2Cl或R5COCl的摩尔用量比为1：1~2。
8.权利要求1-5任意一项所述的化合物在制备抗肿瘤或治疗痛风的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物是抗肝癌细胞药物或黄嘌呤氧化酶抑制剂。
10.一种抗肿瘤、治疗痛风的药物组合物，其特征在于：它是由权利要求1-5任意一项所述的化合物为活性成分，加上药学上可用的辅料制备而成的制剂。
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