CN102746309B

CN102746309B - 1-N-乙基-4-N-2′-取代酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶类衍生物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102746309B
Application number: CN 201210235671
Authority: CN
Inventors: 尹述凡; 李财虎; 张露韵; 杨芳; 蒋丽娟; 李颖; 董林
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2012-07-09
Filing date: 2012-07-09
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2032-07-09
Also published as: CN102746309A

Abstract

本发明提供了如式Ⅰ所示别嘌醇衍生物及其制备方法。本发明别嘌醇衍生物能够有效抑制肿瘤生长，具有良好的抗肿瘤活性；它还能够有效抑制黄嘌呤氧化酶活性，可用于痛风的治疗，为治疗癌症和痛风提供了一种新的用药选择；同时，本发明化合物的制备方法简单，成本较低，收率高，具有良好的工业应用前景。

Description

1-N-乙基-4-N-2′-取代酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶类衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及别嘌醇衍生物及其制备方法和用途。

背景技术

肿瘤，是当今世界危及人类生命的一种最常见、最严重的疾病之一。化疗、放疗、手术疗法是目前治疗肿瘤的主要手段。而目前用于肿瘤治疗的药物数量有限，其售价较高，为肿瘤患者带来了较大的经济负担。因此，开发出更多的可有效抗肿瘤的药物显得尤为必要。

别嘌呤醇（Allopurinol），化学名：4-羟基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶，其结构式如下：

它是天然次黄嘌呤的同分异构体，能抑制黄嘌呤氧化酶的活性，阻止黄嘌呤和次黄嘌呤氧化产生尿酸，从而降低血清尿酸的浓度，主要用于治疗高尿酸血症及痛风。自1963年别嘌呤成为治疗痛风的首选药物以来，一直是临床上用于治疗痛风的一线药物。

目前，还未见将别嘌醇作为先导化合物，对其进行结构修饰和改造后，用于抗肿瘤的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种别嘌醇衍生物及其制备方法和用途。本发明还提供了一种抗肿瘤、治疗痛风的药物组合物。

具体地，本发明提供了如式Ⅰ所示的化合物，其结构式如下：

其中，R₁选自H、-SO₂R₃或-COR₄，R₂选自H或-CO-R₅；

所述R₃为C6~10的芳香烃或取代芳香烃；所述R₄为C6~10的芳香烃或取代芳香烃、或C1~5的烷烃或取代烷烃；所述R₅为C6~10的芳香烃或取代芳香烃。

进一步地，所述R₃为苯基或取代苯基；R₄为苯基或取代苯基、或C1~3的烷烃或取代烷烃；R₅为苯基或取代苯基。

更进一步地，所述R₃为-C₆H₄CH₃、-C₆H₅、-C₆H₄NO₂或-C₆H₄Br；所述R₄为-CH₃、-CH₂Cl或-C₆H₅；所述R₅为-C₆H₅。

进一步优选地，所述化合物为

1-N-乙基-4-N-2′-（4-甲基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-（4-硝基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-苯磺酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-（4-溴苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-1′，2′-二苯甲酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、或

1-N-乙基-4-N-2′-氯乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶。

本发明还提供了上述化合物的制备方法，它包括如下操作步骤：

A、取4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶和溴乙烷，通过亲电取代反应生成4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶；

B、取4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶和水合肼，通过亲核取代反应生成1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶；

C、取1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶，与R₃SO₂Cl或/和R₄COCl通过亲核取代反应生成式Ⅰ化合物；所述R₃为C6~10的芳香烃或取代芳香烃；所述R₄为C6~10的芳香烃或取代芳香烃、或C1~5的烷烃或取代烷烃。

进一步地，步骤A中，4-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与溴乙烷的摩尔比为1∶1-2；步骤B中，4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶和水合肼的摩尔比为1∶1-2；步骤C中，R₃SO₂Cl和R₄COCl的总量与1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶的摩尔比为（1-3）：1。

更进一步地，步骤A中，4-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与溴乙烷的摩尔比为1∶1.0-1.5；步骤B中，4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶和水合肼的摩尔比为1∶1.0-1.5；步骤C中，R₃SO₂Cl和R₄COCl的总量与1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶的摩尔比为（1.2-1.6）：1或（2.3-2.7）：1。

进一步优选地，其制备方法如下：

5a：R₁=SO₂C₆H₄CH₃，R₂=H 5b：R₁=SO₂C₆H₄NO₂，R₂=H

5c：R₁=SO₂C₆H₅，R₂=H 5d：R₁=SO₂C₆H₄Br，R₂=H

5e：R₁=COCH₃，R₂=H 5f：R₁=R₂=COC₆H₅

5g：R₁=COCH₂Cl，R₂=H

上述反应式中，

1：别嘌醇

2：4-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

3：4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

4：1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5a：1-N-乙基-4-N-2′-（4-甲基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5b：1-N-乙基-4-N-2′-（4-硝基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5c：1-N-乙基-4-N-2′-苯磺酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5d：1-N-乙基-4-N-2′-（4-溴苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5e：1-N-乙基-4-N-2′-乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5f：1-N-乙基-4-N-1′，2′-二苯甲酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

5g：1-N-乙基-4-N-2′-氯乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶

（1）4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶3的合成

原料及其配方：

4-氯-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与溴乙烷的摩尔数之比为1∶1.2，

溶剂DMF；

工艺步骤：

于常压、将化合物2溶解在干燥的DMF中，反应液在室温搅拌10min，用滴液漏斗慢慢滴加量好的三乙胺，混合物继续在室温搅拌30min。再将已溶解在干燥DMF的溴乙烷慢慢滴加到混合物中，继续搅拌1h后加入催化量的KI。反应液用TLC检测至完全反应，混合液倒入到15mL水中，用稀盐酸调节pH至酸性后，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得油状物。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)洗脱，得到白色晶体3。

（2）1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶4的合成

原料及其配方：

4-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶和水合肼的摩尔数之比为1∶1.21，

溶剂乙腈

工艺步骤：

于常压、将化合物3溶解在5mL乙腈中，再将水合肼慢慢加入到混合液中，反应物室温搅拌3h，用TLC检测至完全反应。反应液经浓缩得固体粗产物，粗产物经水洗、乙酸乙酯重化后得白色晶体4。

（3）1-N-乙基-4-N-2′-（4-甲基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5a的合成

原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与4-甲基苯磺酰氯的摩尔数之比为1∶1.43，

溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将4-甲基苯磺酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5a。

（4）1-N-乙基-4-N-2′-（4-硝基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5b的合成

原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与4-硝基苯磺酰氯的摩尔数之比为1∶1.43，

溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将4-硝基苯磺酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶

1)洗脱，得到白色晶体5b。

（5）1-N-乙基-4-N-2′-苯磺酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5c合成

原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与苯磺酰氯的摩尔数之比为1∶1.43，溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将苯磺酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5c。

（6）1-N-乙基-4-N-2′-（4-溴苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5d的合成

原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与4-溴苯磺酰氯的摩尔数之比为1∶1.43，

溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将苯磺酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5d。

（7）1-N-乙基-4-N-2′-乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5e的合成原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与乙酰氯的摩尔数之比为1∶1.43，溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将乙酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5e。

（8）1-N-乙基-4-N-1′，2′-二苯甲酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5f的合成

原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与苯甲酰氯的摩尔数之比为1∶2.5，

溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将乙酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5f。

（9）1-N-乙基-4-N-2′-氯乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶5g的合成

原料及其配方：

1-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶与氯乙酰氯的摩尔数之比为1∶1.43，

溶剂THF；

工艺步骤：

于常压、将化合物4溶解在THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶，混合物继续搅拌1h。再将乙酰氯慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5g。

本发明还提供了上述化合物在制备抗肿瘤或治疗痛风的药物中的用途。

进一步地，所述药物是抗肝癌细胞药物或黄嘌呤氧化酶抑制剂。

本发明还提供了一种抗肿瘤、治疗痛风的药物组合物，它是由上述的化合物为活性成分，加上药学上可用的辅料制备而成的制剂。

本发明别嘌醇衍生物能够有效抑制肿瘤生长，具有良好的抗肿瘤活性；它还能够有效抑制黄嘌呤氧化酶活性，可用于痛风的治疗，为治疗癌症和痛风提供了一种新的用药选择；同时，本发明化合物的制备方法简单，成本较低，收率高，具有良好的工业应用前景。

具体实施方式

实施例14-氯-1-乙基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(简称化合物3)的制备方法

于常压、将4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(0.1g，0.65mmol)溶解在5mL干燥的DMF中，反应液在室温搅拌10min，用滴液漏斗慢慢滴加量好的三乙胺(0.20g，1.95mmol)，混合物继续在室温搅拌30min。再将已溶解在3mL干燥DMF的溴乙烷(0.084g，0.78mmol)慢慢滴加到混合物中，继续搅拌1h后加入催化量的KI。反应液用TLC检测至完全反应，混合液倒入到15mL水中，用稀盐酸调节pH至酸性后，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得油状物。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)洗脱，得到白色晶体3。

化合物3:白色晶体，76～77℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.87(s,1H,CH),8.49(s,1H,CH),4.51(dd,J=7.24Hz,J=14.52Hz,2H,CH₂),1.45(t,J=7.26Hz,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)156.65,150.77,150.35,134.40,106.12,42.43,15.12;IR(KBr,ν,cm^-1):3466,3094,2924,2854,1690,1575,1538,1460,1389,1283,1209,1131,1007,956,782,680,594,533,406.HRMS(ESI)calcd for C₇H₇ClN₄[M＋H]^＋182.0359found183.0535.

实施例21-乙基-4-肼基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(简称化合物4)的合成

于常压、将化合物3(0.1g，0.56mmol)溶解在5mL乙腈中，再将水合肼(0.034g，0.68mmol)慢慢加入到混合液中，反应物室温搅拌3h，用TLC检测至完全反应。反应液经浓缩得固体粗产物，粗产物经水洗、乙酸乙酯重化后得白色晶体4。

化合物4:白色固体，198～200℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.29(s,1H,CH),8.05(s,1H,CH),4.85(s,2H,NH₂),4.65(s,1H,NH),4.30(dd,J=7.18Hz,J=14.38Hz,2H,CH₂),1.36(t,J=7.22Hz,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)161.03,155.41,153.66,135.16,99.12,41.50,15.20;IR(KBr,ν,cm^-1):1717,1659,1599,1538,1497,1441,1375,1346,1295,1251,1182,1091,962,913,860,785,694,620,541.HRMS(ESI)calcdfor C₇H₁₀N₆[M＋H]^＋178.0967found179.1044.

实施例31-N-乙基-4-N-2′-（4-甲基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(简称化合物5a)

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)溶解在5mL THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶(0.19g，2.41mmol)，混合物继续搅拌1h。再将4-甲基苯磺酰氯(0.39g2.05mmol)慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5a。

5a:白色固体，186～187℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.28(br，1H,NH),10.04(br,1H,NH),8.16(s,2H,CH),7.73(d,J＝8.20Hz,2H,ArH),7.41(d,J＝7.08Hz,2H,ArH),4.34(dd,J＝7.18Hz,J＝14.42Hz,2H,CH₂),2.39(s,3H,CH₃),1.37(t,J＝7.20Hz,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)161.24,154.86,153.24,144.15,135.82,133.83,130.03,128.22,99.54,41.79,21.47,15.14;IR(KBr,ν,cm^-1):3437,3194,3052,2924,2855,1923,1592,1499,1454,1336,1292,1245,1162,1091,960,917,810,789,718,658,582,538,486,423.HRMS(ESI)calcdfor C₁₄H₁₆N₆O₂S[M＋H]⁺332.1055found333.1128.

实施例41-N-乙基-4-N-2′-（4-硝基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶（简称化合物5b)的合成

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)溶解在5mL THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶(0.19g，2.41mmol)，混合物继续搅拌1h。再将4-硝基苯磺酰氯(0.39g2.05mmol)慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5b。

化合物5b:浅黄色固体，194～195℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.78(br,1H,NH),10.17(br,1H,NH),8.43(s,2H,CH),8.17(s,2H,ArH),8.09(d,J＝8.76Hz,2H,ArH),4.34(dd,J＝7.14Hz,J＝14.44Hz,2H,CH₂),1.37(t,J＝7.24Hz,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)159.45,157.86,155.31,152.62,148.07,138.51,134.74,129.58,104.26,46.61,19.86;IR(KBr,ν,cm^-1):3364,3262,3106,2625,2855,1698,1657,1597,1530,1449,1350,1312,1242,1171,1088,1010,961,855,746,703,612,462.HRMS(ESI)calcd for C₁₃H₁₃N₇O₄S[M＋H]^＋363.0750found364.0837.

实施例51-N-乙基-4-N-2′-苯磺酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(简称化合物5c)的合成

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)溶解在5mL THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶(0.19g，2.41mmol)，混合物继续搅拌1h。再将苯磺酰氯(0.39g2.05mmol)慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到白色晶体5c。

化合物5c:白色固体，194～195℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.40(br,1H,NH),10.10(br,1H,NH),8.16(s,2H,CH),7.85(d,J＝7.36Hz,2H,ArH),7.60～7.69(m,3H,ArH),4.33(dd,J＝7.12Hz,J＝14.48Hz,2H,CH₂),1.37(t,J＝7.12Hz,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)160.38,154.85,153.22,138.80,133.74,129.60,128.16,99.55,41.81,15.15;IR(KBr,ν,cm^-1):3227,3077,2979,2861,1593,1548,1500,1442,1353,1292,1248,1167,1090,1008,959,919,857,790,739,693,637,577,542,502.HRMS(ESI)calcd forC₁₄H₁₄N₆O₂S[M＋H]^＋318.0899found319.0984.

实施例61-N-乙基-4-N-2′-（4-溴苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(简称化合物5d)的合成.

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)溶解在5mL THF中，冰浴条件下加入量好的吡啶(0.19g，2.41mmol)，混合物继续搅拌1h。再将4-溴苯磺酰氯(0.39g2.05mmol)慢慢滴加到混合液中继续搅拌1h，移入室温用TLC检测至反应完全。反应液倒入到10mL水中，用稀盐酸调节PH值为3左右，加入乙酸乙酯萃取(4×20mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得固体。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到5d。

化合物5d:白色固体，194～195℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.49(br,1H,NH),10.09(br,1H,NH),8.16(s,2H,CH),7.76～7.84(m,4H,ArH),4.34(m,J＝7.08Hz,J＝14.32Hz,2H,CH₂),1.38(t,J＝7.20Hz,3H,CH₃);¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)158.84,154.87,153.18,137.72,133.99,132.70,130.26,127.80,99.51,41.84,15.15;IR(KBr,ν,cm^-1):3361,3259,3185,3130,3090,2924,2854,1913,1658,1598,1565,1537,1388,1318,1282,1159,1087,1066,1007,959,907,821,759,717,674,615,575,530.HRMS(ESI)calcd forC₁₃H₁₃BrN₆O₂S[M＋H]^＋396.0004found397.0088.

实施例71-N-乙基-4-N-2′-乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶(简称化合物5e)的合成

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)和TEA(0.51g，5.05mmol)在冰欲条件下依次加入到10mL二氯甲烷中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL二氯甲烷中的乙酰氯(0.16g，2.04mmol)慢慢滴加到混合物中并继续搅拌1.5h。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到15mL水中，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得油状物。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到浅黄色油状物5e。

化合物5e:浅黄色油状物¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.38(br，1H,NH),10.09(br,1H,NH),8.29(s,1H,CH),8.16(s,1H,CH),4.34(dd,J＝7.12Hz,J＝14.48Hz,2H,CH₂),2.03(s,3H,CH₃),1.37(t,J＝7.20Hz,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)170.06,160.53,155.35,153.53,132.34,99.12,41.83,21.06,15.16;IR(KBr,ν,cm^-1):3200,3056,2925,2855,1956,1634,1592,1449,1350,1277,1230,1156,1074,1012,891,762,708,663,597,532.HRMS(ESI)calcdfor C₉H₁₂N₆O[M＋H]^＋220.1073found221.1148.

实施例81-N-乙基-4-N-1′，2′-二苯甲酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶的合成(简称化合物5f)的合成

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)和TEA(0.51g，5.05mmol)在冰欲条件下依次加入到10mL二氯甲烷中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL二氯甲烷中的乙酰氯(0.16g，2.04mmol)慢慢滴加到混合物中并继续搅拌1.5h。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到15mL水中，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得油状物。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到浅黄色油状物5f。

化合物5f:白色固体，144～145.8℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:10.52(br，1H,NH),8.67(s,1H,CH),8.09(s,1H,CH),7.92～7.96(m,4H,ArH),7.80～7.82(m,2H,ArH),7.74～7.76(m,2H,ArH),7.68～7.70(m,2H,ArH),4.49(dd,J＝7.30Hz,J＝14.54Hz,2H,CH₂),1.44(t,J＝7.22Hz,3H,CH₃);¹³CNMR(100MHz,DMSO-d₆)171.73,170.99,166.33,154.61,153.69,134.57,133.67,132.97,132.37,128.99,128.94,127.97,127.93,104.60,42.37,15.06;IR(KBr,ν,cm^-1):3261,3057,2925,2854,1714,1664,1631,1578,1552,1527,1486,1454,1421,1341,1313,1270,1105,958,913,869,821,795,708,691,578,545.HRMS(ESI)calcd for C₂₁H₁₈N₆O₂[M＋H]₊386.1491found387.1577.

实施例91-N-乙基-4-N-2′-氯乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶的合成(简称化合物5g)的合成

于常压、将化合物4(0.3g，1.69mmol)和TEA(0.51g，5.05mmol)在冰欲条件下依次加入到10mL二氯甲烷中，搅拌一段时间，再将已溶解在2mL二氯甲烷中的氯乙酰氯(0.16g，2.04mmol)慢慢滴加到混合物中并继续搅拌1.5h。反应液用TLC检测至反应完全后倒入到15mL水中，加入二氯甲烷萃取(3×15mL)，有机层用饱和氯化钠洗涤，浓缩得油状物。粗产物经硅胶柱层析，用石油醚∶丙酮(2∶1)洗脱，得到5g。

化合物5g:灰色固体，202～204℃¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.27(br,1H,NH),8.11～8.50(m,2H,CH),4.37～4.41(m,4H,CH₂),1.41(s,3H,CH₃);¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)164.75,150.37,148.88,146.33,133.19,96.40,41.15,40.10,13.37;IR(KBr,ν,cm^-1):3428,3134,2949,2629,1722,1663,1611,1499,1403,1345,1223,1106,965,884,799,700,639,527;HRMS(ESI)calcd for C₉H₁₁N₆OCl[M＋H]^＋254.0683found255.0794.以下通过试验例来说明本发明的有益效果。下述试验例中所用的化合物4、5a、5b、5c、5d、5e、5f、5g，分别是由实施例2-9制备得到。

试验例1本发明化合物抗肿瘤效果

利用MTT法对化合物4、5a、5b、5c、5d、5e、5f、5g和阳性对照物17-AAG（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin简称17-AAG是第一代格尔德霉素衍生物）进行Hsp90抑制实验。

将生长良好的人肝癌细胞7402和7221接种于96孔板，7×10³/孔。24h后将浓度梯度(终浓度)为2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml和64μg/ml的试药分别加入板中，培养72h之后，加入MTT溶液10μl(5mg/ml)，37℃作用4h，弃上清，加入DMSO150μl/孔，室温振摇30min，测定OD570nm值。根据细胞增殖抑制率公式计算：抑制率(%)=(对照组OD值—实验组OD值)/对照组OD值×100%。IC₅₀值利用统计软件进行计算。实验结果见表1。

表1目标化合物抗肿瘤活性测定结果

“--”:无活性值；IC₅₀值>64，表示所述化合物的IC₅₀超过了64μgmL^-1，具体浓度未明确，但仍表明所述化合物对上述肿瘤有抑制作用，仅活性弱于阳性对照；IC₅₀值>100，同上。

由上述试验可知，别嘌醇对Bel-7402、SMMC-7221无抗肿瘤活性，而本发明化合物4-5g，对上述肿瘤抑制活性良好，表明本发明式Ⅰ化合物具有良好的抗肿瘤活性。其中，相对于阳性药物而言，化合物4与阳性药物活性相当，而化合物5a-5g的活性稍弱。

试验例2本发明化合物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性研究

XOD活力测定：在黄嘌呤氧化酶的催化下，底物黄嘌呤被氧化成尿酸，即发生下列反应：

XOD活力由检测产物尿酸的特征吸收峰（λ=290nm）附近的光度值确定。

实验方法，在290nm处用分光光度法测定。在石英比色皿中,加入缓冲溶液、底物溶液和酶溶液,25℃预温2min，在290nm处测定吸光度变化值,每隔5sec记录一次,共测1min,在这段时间内反应，吸光度随时间呈线性增加，斜率为反应速率(dA/min)，斜率越大，说明酶的活力越强。

样品测定：按同样的方法，在酶促反应体系中分别加入样品溶液(5μL,10μL,15μL,20μL)，25℃预温2min，每隔5sec在290nm处纪录吸光度增长的数值，共计1min。每个样品平行操作3次，分别记录反应速率，取平均值计算样品的抑制率。

结果参见表2.

表2目标化合物对黄嘌呤氧化酶抑制活性测定结果

由上述实验可知，本发明式Ⅰ化合物能够有效抑制黄嘌呤氧化酶，具有良好的抗痛风活性。

综上所述，本发明别嘌醇衍生物能够有效抑制肿瘤生长，具有良好的抗肿瘤活性；它还能够有效抑制黄嘌呤氧化酶活性，可用于痛风的治疗，为治疗癌症和痛风提供了一种新的用药选择；同时，本发明化合物的制备方法简单，成本较低，收率高，具有良好的工业应用前景。

Claims

1.如下所述的化合物之一：

1-N-乙基-4-N-2′-（4-甲基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-（4-硝基苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-苯磺酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-（4-溴苯磺酰基）肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-2′-乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、

1-N-乙基-4-N-1′，2′-二苯甲酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶、或

1-N-乙基-4-N-2′-氯乙酰基肼-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶。

2、权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤或治疗痛风的药物中的用途。

3、根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述药物是抗肝癌细胞药物或黄嘌呤氧化酶抑制剂。

4、一种抗肿瘤、治疗痛风的药物组合物，其特征在于：它是由权利要求1所述的化合物为活性成分，加上药学上可用的辅料制备而成的制剂。