CN102731594A

CN102731594A - 一种新的黄酮苷及其衍生物、其制备方法及其医药用途

Info

Publication number: CN102731594A
Application number: CN 201110088407
Authority: CN
Inventors: 刘建群; 舒积成; 张锐; 张维
Original assignee: Jiangxi Institute Of Chinese Medicine
Current assignee: Jiangxi Institute Of Chinese Medicine; Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2011-04-08
Filing date: 2011-04-08
Publication date: 2012-10-17

Abstract

本发明涉及天然药物领域，具体涉及从中草药凤尾草中提取分离得到的一种如图1的新的黄酮苷及其衍生物，还公开了其制备方法，以及该新的黄酮苷在制备治疗肝炎药物中的应用。

Description

一种新的黄酮苷及其衍生物、其制备方法及其医药用途

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及从中草药凤尾草中提取分离得到的一种新的黄酮苷及其衍生物，其制备方法，以及该新的黄酮苷在制备治疗肝炎药物中的应用。

技术背景

肝炎是发病率和死亡率高、危害严重的重大疾病之一。目前，全世界慢性乙型肝炎病毒携带者已超过3.5亿，我国是肝炎病毒感染的高流行地区，约有超过1.2亿乙肝表面抗原携带者，慢性乙型肝炎还容易发展为肝硬化甚至肝癌，每年约有50万人死于病毒性肝炎相关疾病。

研究表明，许多黄酮化合物具有显著的保肝作用。从水飞蓟种子中得到的水飞蓟素、异水飞蓟素及次水飞蓟素等黄酮类物质经动物试验及临床实践均证明有很强的保肝作用，临床上用以治疗急、慢性肝炎，肝硬化及多种中毒性肝损伤等疾病，均取得了较好的效果。水飞蓟素和水飞蓟宾能保护肝脏免受四氯化碳和毒伞素等的肝毒性损害，水飞蓟素还可以有效抑制由乙醇诱导的大鼠肝脏急性中毒而导致的谷胱甘肽缺乏症。槲皮素和桑黄素具有显著的保肝作用，能够显著抑制微囊藻素在动物体内的肝毒性作用。另外(+)-儿茶素在欧洲用作抗肝脏毒性药物，对脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝损伤均有一定效果。

凤尾草为旧版中国药典收载品种，其药材来源为凤尾蕨科植物凤尾草(Pterismultifida Poir.)全草，具有清热解毒、凉血止血、消肿解毒等功效，民间用于治疗肝炎、菌痢、淋浊、便血、扁桃体炎、痈肿疮毒、湿疹等。据文献报道，黄酮类为凤尾草的主要功效成分之一，在凤尾草中含量为3.2％左右。目前国内外学者从凤尾草中分离鉴定的黄酮类化合物，主要有芹菜素、木犀草素、槲皮素、柚皮素和木香素III等为母核的黄酮苷和苷元。为了阐明凤尾草治疗肝炎的药效物质基础，发明人对凤尾草进行了化学成分研究。

发明内容

本发明公开了一种新的黄酮苷及其衍生物，其通式如下：

其中R₁和R₂为H，R₃为一个鼠李糖基；也可以是R₁和R₃为H，R₂为一个鼠李糖基；还可以是R₂和R₃为H，R₁为一个鼠李糖基。即鼠李糖基与葡萄糖基可以是1-4位、1-3位或1-2位连接。

优选的结构式：

化合物I的分子式为：C₂₇H₃₀O₁₄，分子量为：578。

化学名称为：5，4′-二羟基-黄酮-7-O-[α-L-鼠李糖-(1→3)]-β-D-葡萄糖苷。

本发明的新的黄酮苷及其衍生物，可以单独或与其它中药及中药提取物组合配制成药物。

本发明的新的黄酮苷及其衍生物可与药学上可接受的载体混合，用于制备治疗用药物组合物。可制备成药剂学上通用的剂型，如胶囊、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂、酊剂、缓释剂、注射剂等剂型。

本发明的新的黄酮苷可以用以下方法制备：

取凤尾草(Pteris multifida Poir.)药材，以0-95％乙醇水溶液回流提取，提取液减压浓缩得浸膏；加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行溶剂分配，减压浓缩，得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位；将水部位上大孔树脂吸附后，依次用蒸馏水、20％、50％、70％，95％乙醇洗脱，收集50-95％乙醇洗脱液，减压蒸干，得凤尾草总黄酮；凤尾草总黄酮再经聚酰胺和葡聚糖凝胶填料进一步分离，即得。

较优选的制备方法是：凤尾草药材以70％乙醇回流提取，提取液减压浓缩至无醇味，加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行溶剂分配，减压浓缩，得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位；将水部位上大孔树脂吸附后，依次用蒸馏水、20％、50％、70％，95％乙醇洗脱，收集50-70％乙醇洗脱液，减压蒸干，得凤尾草总黄酮；凤尾草总黄酮再经聚酰胺和葡聚糖凝胶填料进一步分离后即可制备得到化合物I。其中大孔树脂优选HPD100型、HPD200型、HPD300型、D101型或LSA-40型大孔树脂。葡聚糖凝胶优选Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶。

化合物I可以加入乙酰化试剂形成乙酰化产物，或根据具体需要，加入其它试剂形成新的衍生物，还可以利用生物活性酶的作用，改变鼠李糖基与葡萄糖基的连接位置，如由1-3连接改变为1-2或1-4连接，制备得到通式(II)的化合物。通过对本发明黄酮苷的研究发现其具有很好的保肝降酶作用，可用于治疗各种肝炎。

一般地，本发明的新的黄酮苷及其衍生物用于治疗时，剂量范围为100-500mg/天，也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。

附图说明

图1化合物I的结构图

图2化合物I的质谱图

图3化合物I的高分辨质谱图

图4化合物I的¹H-NMR图

图5化合物I的¹³C-NMR图

图6化合物I的碳-氢相关图(HSQC)

图7化合物I的远程偶合图(HMBC)

具体实施方式

下面通过实施例做进一步描述，但本发明并不限于实施例所述范围。

实施例1：

将干燥凤尾草全草15kg，粉碎，用150升70％乙醇在室温下浸泡12h后加热回流提取3次，每次2h，合并滤液，减压浓缩得浸膏。浸膏加4倍量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将水相减压浓缩，得水部位1kg。将水部位上LSA-40型大孔树脂柱吸附3h后，以4～5ml/min速度依次用蒸馏水、20％、50％、70％，95％乙醇洗脱，得各洗脱部位，收集50-70％乙醇洗脱液，减压蒸干，得凤尾草总黄酮40g。将总黄酮上聚酰胺(60-100目)柱层析，依次用蒸馏水、25％，50％，75％，95％乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检测合并相同流份，收集25％乙醇洗脱液，减压蒸干，得25％乙醇洗脱流份浸膏10g。将25％乙醇洗脱流份浸膏经Sephadex LH-20柱层析，5％甲醇水洗脱，每个流份收集5ml，薄层色谱检测合并相同流份，减压挥干溶剂，甲醇重结晶，即可制备得到化合物I(500mg)。结构式为：

表1化合物I的¹H-NMR和¹³C-NMR数据(溶剂DMSO-d₆，500和125MHz)

Position	δC(ppm)	δH(ppm)	Position	δ_C(ppm)	δ_H(ppm)
						2	164.2		1″	97.8	5.23，d，7.4Hz
3	103.2	6.86，s	2″	77.0	3.48
						4	181.9		3″	76.2	3.53
5	156.9		4″	69.6	3.22
						6	99.3	6.38，d，2.1Hz	5″	77.2	3.50
7	162.5		6″	60.5	3.52-3.55
						8	94.5	6.80，d，2.1Hz	1″′	100.4	5.14，br.s
9	161.3		2″′	70.3	3.34
						10	105.4		3″′	70.4	3.70
1′	121.0		4″′	71.8	3.24
						2′	128.5	7.93，d，8.8Hz	5″′	68.3	3.75
3′	116.0	6.95，d，8.8Hz	6″′	18.0	1.21，d，6.2Hz
						4′	161.1
5′	116.0	6.95，d，8.8Hz
						6′	128.5	7.93，d，8.8Hz

表1数据根据HSQC和HMBC谱归属。

经Agilent LC-MSD-Trap-SL质谱仪分析，m/z(ESI，+)：601[M+Na]，579[M+H]，433，271；m/z(ESI，-)：577[M-H]。经Agilent-TOF-MS高分辨质谱仪测得精确分子量为：577.1563[M-H](理论值577.1562)，从而确定化合物I分子量为：578，分子式为：C₂₇H₃₀O₁₄。

取化合物I 10mg，溶于甲醇，加硫酸加热水解完全后，经标准品对照薄层色谱分析，确定苷元为5，7，4′-三羟基-黄酮(即芹菜素)，并含有葡萄糖和鼠李糖两种单糖成分。

根据以上波谱数据和理化性质，鉴定化合物I为：5，4′-二羟基-黄酮-7-O-[a-L-鼠李糖-(1→3)]-β-D-葡萄糖苷。

实施例2：

将干燥凤尾草全草15kg，粉碎，用150升水在室温下浸泡12h后加热回流提取3次，每次2h，合并滤液，减压浓缩得浸膏。浸膏加4倍量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将水相减压浓缩，得水部位1.5kg。将水部位上LSA-40型大孔树脂柱吸附3h后，以4～5ml/min速度依次用蒸馏水、20％、50％、70％，95％乙醇洗脱，得各洗脱部位，收集50-70％乙醇洗脱液，减压蒸干，得凤尾草总黄酮30g。将总黄酮上聚酰胺(60-100目)柱层析，依次用蒸馏水、25％，50％，75％，95％乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检测合并相同流份，收集25％乙醇洗脱液，减压蒸干，得25％乙醇洗脱流份浸膏8g。将25％乙醇洗脱流份浸膏经Sephadex LH-20柱层析，5％甲醇水洗脱，每个流份收集5ml，薄层色谱检测合并相同流份，减压挥干溶剂，甲醇重结晶，即可制备得到化合物I(300mg)。

实施例3：

将干燥凤尾草全草15kg，粉碎，用150升95％乙醇在室温下浸泡12h后加热回流提取3次，每次2h，合并滤液，减压浓缩得浸膏。浸膏加4倍量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将水相减压浓缩，得水部位0.7kg。将水部位上LSA-40型大孔树脂柱吸附3h后，以4～5ml/min速度依次用蒸馏水、20％、50％、70％，95％乙醇洗脱，得各洗脱部位，收集50-70％乙醇洗脱液，减压蒸干，得凤尾草总黄酮25g。将总黄酮上聚酰胺(60-100目)柱层析，依次用蒸馏水、25％，50％，75％，95％乙醇洗脱，聚酰胺薄层色谱检测合并相同流份，收集25％乙醇洗脱液，减压蒸干，得25％乙醇洗脱流份浸膏5g。将25％乙醇洗脱流份浸膏经Sephadex LH-20柱层析，5％甲醇水洗脱，每个流份收集5ml，薄层色谱检测合并相同流份，减压挥干溶剂，甲醇重结晶，即可制备得到化合物I(100mg)。实施例4：

化合物I对四氯化碳(CCl₄)所致小鼠急性肝损伤的影响

实验采用常规CCl₄急性肝损伤模型，具体方法如下：

昆明种小鼠60只，随机分为6组(见表2)，给药组按剂量每日灌胃给药1次，对照组和模型组同时给予等容量饮用水，连续6日，第五日上午给药后1h，模型组和各给药组小鼠皮下注射0.5％CCl₄花生油10ml/kg(体重)，正常对照组皮下注射等容量生理盐水，当日下午加强给药一次。禁食12h后，于第六日上午给药后1h断头取血，离心。用赖氏法测定血清中ALT和AST活力单位。结果见表2。

表2化合物(A)对CCl₄所致急性肝损伤小鼠血清转氨酶的影响

注：与模型组比较，*p＜0.01

小鼠皮下注射CCl₄后24h，血清ALT和AST水平明显高于对照组。化合物I高剂量组(0.5g/kg)和中剂量组(0.3g/kg)以及联苯双酯(0.3g/kg)连用6日，可使血清中ALT和AST活力明显低于模型组，且与模型组比较有极显著性差异(p＜0.01)，化合物I高、中剂量组效果优于阳性对照药联苯双酯。实验结果表明本发明化合物I有明显的保肝作用，可应用于制备治疗肝炎药物。

实施例5：

化合物I的片剂制备

取制得的化合物I 100mg与淀粉50mg，糊精50mg混合，用适量30％乙醇做湿润剂，制成软材，用常规方法制粒，加入适量硬脂酸镁混合，制成片剂。

实施例6：

化合物I的胶囊剂制备

取化合物I 100mg与淀粉120mg，糊精20mg，糖粉20mg混合，用适量30％乙醇做湿润剂，制成软材，用常规方法制粒，装入硬胶囊中，即得。

实施例7：

化合物I的缓释胶囊剂制备

取化合物I 100mg与羟丙基甲基纤维素K15M 120mg，乙基纤维素45cps40mg，乳糖40mg混合，加适量10％聚乙烯吡咯烷酮k30乙醇溶液，制成软材，用常规方法制粒，装入硬胶囊中，即得。

Claims

1.下列通式的黄酮苷化合物：

R₁、R₂或R₃其中一个为鼠李糖基，另两个为H。

2.根据权利要求1所述的化合物，其为以下结构：

3.权利要求2所述的化合物的制备方法，包括以下步骤：取凤尾草(Pteris multifidaPoir.)药材，以0-95％乙醇水溶液回流提取，提取液减压浓缩得浸膏；加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行溶剂分配，减压浓缩，得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位；将水部位上大孔树脂吸附后，依次用蒸馏水、20％、50％、70％，95％乙醇洗脱，收集50-95％乙醇洗脱液，减压蒸干，得总黄酮；总黄酮再经聚酰胺和葡聚糖凝胶填料进一步分离，即得。

4.权利要求3所述的制备方法，其中的大孔树脂为HPD100型、HPD200型、HPD300型、D101型或LSA-40型大孔树脂，葡聚糖凝胶为Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶。

5.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1或2的化合物和药学上可接受的载体。

6.权利要求1或2的化合物在制备治疗肝炎药物中的用途。