CN102724880A - 1-磷酸鞘氨醇受体调节剂及手性合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了选择性调节1-磷酸鞘氨醇受体的化合物，其包括调节S1P受体亚型1的化合物。本发明提供了这样的化合物的手性合成方法。本发明还提供了与医疗上需要1-磷酸鞘氨醇受体的调节的疾病、病症或障碍的治疗或预防相关的包含本发明的化合物的组合物的用途、治疗或预防方法以及制备方法。

Description

1-磷酸鞘氨醇受体调节剂及手性合成方法
相关申请的交叉引用
本申请要求享有于2009年11月13日提交的美国序列号第61/261,282号和于2009年11月18日提交的美国序列号第61/262,474号的优先权，其公开的内容整体并入到本文中。
技术领域
本发明涉及作为1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的激动剂的化合物、它们的合成方法及其它们的治疗和/或预防应用的方法。
背景技术
S1P1/EDG1受体是G-蛋白偶联受体(GPCR)，且是内皮细胞分化基因(EDG)受体家族的成员。EDG受体的内源性配体包括溶血磷脂类，如1-磷酸鞘氨醇(S1P)。同所有的GPCR一样，受体的接合(ligation)通过G-蛋白(α，β和γ)的激活传递第二信使信号。
小分子S1P1激动剂和拮抗剂的发展已经提供了对于S1P1/S1P-受体信号传导系统的生理作用的了解。S1P1受体的激动干扰淋巴细胞归巢(lymphocytetrafficking)，将它们隔离(sequestering)在淋巴结和其它二级淋巴组织中。这导致快速和不可逆的淋巴细胞减少，且这可能是因为淋巴内皮细胞和淋巴细胞本身的受体接合(Rosen等人，Immunol.Rev.，195：160-177，2003)。淋巴细胞隔离的临床上有价值的结果是将它们从周围组织中的炎症和/或自身免疫反应视域中排除。
还有报道称S1P1的激动促进少突胶质细胞祖细胞的存活(Miron等人，Ann.Neurol.，63：61-71，2008)。这种活性与淋巴细胞隔离结合将在治疗中枢神经系统的炎症和自身免疫疾病十分有用。
发明内容
本发明涉及适于用作S1P受体亚型1，S1P1，的激动剂的杂环化合物、其制备方法和应用方法，例如在治疗由S1P1激活介导的病症(malcondition)中或者当医疗上需要(medically indicated)S1P1激活时的应用。
本发明的某些实施方式包括具有式I-R或I-S的结构的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物：
Figure BPA00001577340400021
X可以为-NR′R″或-OR″′，以及Y可以为-CN、-Cl、-CF3、I、-COOH或-COOR1。
R′可以为H、C1-4烷基、伯羟基C1-4烷基(n-hydroxy C1-4 alkyl)、-SO2-R1或-CO-R1。R″可以为H、-SO2-R3、任选地被一个或多个R2取代的C1-4烷基或者任选地被R4取代的环部分，其中这种环部分为哌啶基、环己基、吗啉基、吡咯烷基、咪唑基或苯基。R″′可以为H、C1-4烷基或-CO-R1。或者，R′和R″与它们连接的氮原子一起形成含有0或1个额外的杂原子的4、5或6元饱和杂环，其中，这种额外的杂原子为O或N，其中这种杂环任选地被独立地选自下面的取代基单取代或多取代：-OH、氧代(oxo)、-NH2、伯羟基-C1-4烷基、-COOH、-(CH2)m-COOH、-(CH2)m-COOR1、-N(R1R1)和-(CH2)m-CO-N(R5R5)。
各个R1可以独立地为C1-4烷基或H，以及各个R2可以独立地为H、卤素、OH、氧代、＝NH、NH2、-COOH、F、-NHR1、-N(R5R5)、-SO2-R1、-SO2-N(R5R5)、-N(R1)-SO2-R1、-COOR1、-OCO-R1、-CO-N(R5R5)、-N(R1)-COR1、C1-3烷基、C1-3烷氧基和任选地被R4取代的环部分，其中这种环部分为哌嗪基、哌啶基、吗啉基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、氮杂环丁烷基、cyclobutinyl或苯基。
各个R3可以独立地为R2、C1-4烷基、C3-6环烷基或任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基；以及各个R4可以独立地为卤素、OH、-NH2、-NHR1、-N(R1R1)、-COOH、-COOR1、-NHCO-R1。各个R5可以独立地为C1-4烷基或H，或者两个R5可以与它们连接的氮原子一起形成含有0或1个额外的杂原子的4、5或6元饱和杂环，其中这种额外的杂原子为O或N，其中这种杂环任选地被-OH、-NH2、-N(R1R1)、伯羟基C1-4烷基、-(CH2)m-COOH、-(CH2)m-COOR1取代。各个m独立地为0、1、2或3。
在某些实施方式中，提供了包含本发明的化合物和合适的赋形剂的药物组合物。
在某些实施方式中，提供了包含本发明化合物的药物制剂的使用方法。
在某些组合中，提供了包含本发明的化合物和第二药物的药物组合(pharmaceutical combination)。在各个实施方式中，所述第二药物的医用适应症为治疗多发性硬化症、移植排斥、急性呼吸窘迫综合征或成人呼吸窘迫综合征。
在某些实施方式中，提供了激活或者激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的方法，包括使该受体亚型1与权利要求1的化合物接触。在各个实施方式中，权利要求1的化合物激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1达到高于所述化合物激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型3的程度。
在某些实施方式中，提供了治疗患者的医疗上需要S1P1受体的激活或激动的病症的方法。在各个实施方式中，选择性激活或激动S1P1受体，例如相对于S1P3受体，是医疗上需要的。在各个实施方式中，所述病症包括多发性硬化症、移植排斥或急性呼吸窘迫综合征。
在某些实施方式中，提供了手性合成特定化合物(包括本发明的化合物)的方法。在其它的某些实施方式中，本发明提供了与这类手性合成方法相关的某些中间体化合物。
发明详述
本发明的某些实施方式包括具有式I-R或I-S的结构的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物：
Figure BPA00001577340400041
X可以为-NR′R″或-OR″′，以及Y可以为-CN、-Cl、-CF3、I、-COOH或-COOR1。R′可以为H、C1-4烷基，伯羟基C1-4烷基、-SO2-R1或-CO-R1。R″可以为H、-SO2-R3、任选地被一个或多个R2取代的C1-4烷基，或者任选地被R4取代的环部分，其中，这种环部分为哌啶基、环己基、吗啉基、吡咯烷基、咪唑基或苯基。R″′可以为H、C1-4烷基，或-CO-R1。或者，R′和R″与它们连接的氮原子一起形成含有0或1个额外的杂原子的4、5或6元饱和杂环，其中，这样的额外的杂原子为O或N，其中，这种杂环任选地被独立地选自下面的取代基单取代或多取代：-OH、氧代、-NH2、伯羟基-C1-4烷基、-COOH、-(CH2)m-COOH、-(CH2)m-COOR1、-N(R1R1)和-(CH2)m-CO-N(R5R5)。
各个R1可以独立地为C1-4烷基或H，以及各个R2可以独立地为H、卤素、OH、氧代、＝NH、NH2、-COOH、F、-NHR1、-N(R5R5)、-SO2-R1、-SO2-N(R5R5)、-N(R1)-SO2-R1、-COOR1、-OCO-R1、-CO-N(R5R5)、-N(R1)-COR1、C1-3烷基、C1-3烷氧基和任选地被R4取代的环部分，其中这种环部分为哌嗪基、哌啶基、吗啉基、吡咯烷基、吡唑基、噻唑基、咪唑基、苯并咪唑基、氮杂环丁烷基、cyclobutinyl或苯基。
各个R3可以独立地为R2、C1-4烷基、C3-6环烷基或任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基；以及各个R4可以独立地为卤素、OH、-NH2、-NHR1、-N(R1R1)、-COOH、-COOR1、-NHCO-R1。各个R5可以独立地为C1-4烷基或H，或者两个R5与它们连接的氮原子一起可以形成含有0或1个额外的杂原子的4、5或6元饱和杂环，其中这种额外的杂原子为O或N，其中这种杂环任选地被-OH、-NH2、-N(R1R1)、伯羟基C1-4烷基、-(CH2)m-COOH、-(CH2)m-COOR1取代。各个m独立地为0、1、2或3。
在某些实施方式中，本发明的化合物具有式I-R的结构，或具有其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物的结构。在其它实施方式中，本发明的化合物具有式I-S的结构，或具有其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物的结构。
在某些实施方式中，本发明提供了基本为光学纯的化合物。
在某些实施方式中，本发明提供了化合物，该化合物作为野生型S1P受体亚型1的激动剂具有比这种化合物作为突变体S1P受体亚型1(其相对于野生型受体S1P受体亚型1具有单一突变以使得第101个氨基酸残基由天冬酰胺变为丙氨酸)的激动剂的EC50小至少十倍的EC50。
在某些实施方式中，本发明提供了化合物，该化合物作为野生型S1P受体亚型1的激动剂具有比这种化合物作为突变体S1P受体亚型1(其相对于野生型受体S1P受体亚型1具有单一突变以使得第101个氨基酸残基由天冬酰胺变为丙氨酸)的激动剂的EC50小至少二十倍的EC50。
在某些实施方式中，本发明提供了在用所述化合物5或14天的给药后测量的大鼠的治疗指数至少为5的化合物，其中，所述治疗指数计算为(i)在这种5或14天的给药结束时实现肺与终末体重比增加小于或等于10％的这种化合物的最大剂量与(ii)在大鼠中实现50％的淋巴细胞减少的这种化合物的剂量的比率。在某些实施方式中，这一治疗指数为至少10，以及在某些实施方式中，所述治疗指数为至少20。在某些实施方式中，化合物的治疗指数比该化合物的对映体的治疗指数大至少5倍。
在某些实施方式中，本发明提供了在向大鼠用所述化合物5或14天的给药后测量的大鼠的治疗指数至少为5的化合物，其中所述治疗指数计算(i)在这种5或14天的给药结束时实现肺与终末体重比增加小于或等于10％的这种化合物的最大剂量与(ii)在大鼠中实现50％的淋巴细胞减少的这种化合物的剂量的比率。在某些实施方式中，这一治疗指数为至少10，以及在某些实施方式中，所述治疗指数为至少20。在某些实施方式中，化合物的治疗指数大于这种化合物的对映体的治疗指数。在某些实施方式中，化合物的治疗指数为这种化合物的对映体的治疗指数的至少150％。
在某些实施方式中，本发明提供了其中Y为Cl的化合物，在其它实施方式中，本发明提供了其中Y为CF3的化合物，以及在其它实施方式中，本发明提供了其中Y为CN的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中Y为I的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中Y为-COOH的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中Y为-COOR1的化合物。
在某些实施方式中，本发明提供了其中X为-NR′R″的化合物，在其它实施方式中，本发明提供了其中X为-OR″′的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了X为-OR″′的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中X为-OH的化合物，以及在其它实施方式中，本发明提供了其中X为-OCO-R1的化合物。
在某些实施方式中，本发明提供了其中R1为C1-3烷基的化合物；在其它实施方式中，本发明提供了其中R′为H的化合物。
在某些实施方式中，本发明提供了其中R′为-COR1的化合物；在其它实施方式中，本发明提供了其中R′为SO2-R1的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中R″为H的化合物。
在某些实施方式中，本发明提供了其中R″为-SO2-R3的化合物；在其它实施方式中，本发明提供了其中R″为C1-4烷基的化合物，其中所述C1-4烷基任选地被1个或多个由R2定义的取代基取代。在某些实施方式中，本发明提供了其中R″为-(CRaRb)n-R2的化合物，且各个Ra和各个Rb可以独立地为H、羟基和甲基中的任意一个，或者在Ra和Rb连接到相同的碳上的情况下，它们可以一起形成氧代(即，与它们连接的碳形成羰基部分)。在这样的某些实施方式中，n可以为0、1、2或3，以及在某些实施方式中，n为2。在这样的某些实施方式中，R2可以为-OH、-NH2、-NHR1、-N(R5R5)或-COOH。
在某些实施方式中，本发明提供了其中R3为任选地被一个或多个R2取代的C1-4烷基的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中R2为OH的化合物；在其它实施方式中，本发明提供了其中R2为C1-3烷氧基的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中R3为(CH2)2-OR1的化合物。
在某些实施方式中，本发明提供了其中Y为CN和X为-NH-SO2-R3的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中R3为-C2H5-N(R5R5)或-CH2-CO-N(R5R5)的化合物。在某些实施方式中，本发明提供了其中Y为CN和X为-NH-CO-N(R5R5)的化合物。
在某些实施方式中，X为-NH2，以及在这样的某些实施方式中，Y为CN。
在某些实施方式中，本发明提供了化合物1-55中的一种或多种化合物：
Figure BPA00001577340400071
Figure BPA00001577340400081
Figure BPA00001577340400091
Figure BPA00001577340400101
Figure BPA00001577340400111
Figure BPA00001577340400121
或者其任何药学上可接受的盐，互变异构体、立体异构体、溶剂合物、水合物或前药。在某些这样的实施方式中，本发明提供了选自化合物8、13、29、33、37和49或其任何药学上可接受的盐、酯、互变异构体、立体异构体、溶剂合物、水合物、同系物或前药中的化合物。
在某些实施方式中，提供了本发明的式I的化合物，其中所述化合物具有至少一个手性中心且基本为光学纯的。
在其它实施方式中，提供了包含本发明的式I的化合物和合适的赋形剂的药物组合物。
在其它实施方式中，提供了包含本发明的化合物和第二药物的药物组合。在再其它的实施方式中，提供了包含本发明的化合物和第二药物的药物组合，其中，所述第二药物的医用适应症是治疗多发性硬化症、移植排斥或成人呼吸窘迫综合征。
在某些实施方式中，提供了本发明的化合物用于制备药物的应用方法。
在某些实施方式中，提供了通过使1-磷酸鞘氨醇受体亚型1与有效量的本发明的化合物接触而激活或者激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的方法。在进一步的实施方式中，提供了通过使1-磷酸鞘氨醇受体亚型1与有效量的本发明的化合物接触而激活或者激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的方法，其中，所述化合物激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1达到高于所述化合物激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型3的程度。在进一步的实施方式中，提供了通过使1-磷酸鞘氨醇受体亚型1与有效量的本发明化合物接触而激活或者激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的方法，其中所述1-磷酸鞘氨醇受体亚型1是在活的哺乳动物体内处理(dispose)的。
在某些实施方式中，提供了治疗患者的医疗上需要1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的激活或激动的病症的方法，其通过以足以为患者提供有益效果的频率和持续时间向患者施用有效量的本发明的化合物进行。在进一步的实施方式中，提供了治疗患者的医疗上需要1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的激活或激动的病症的方法，其通过以足以为患者提供有益效果的频率和持续时间向患者施用有效量的本发明的化合物进行，其中相对于S1P受体其它亚型的S1P亚型1的选择性激活或激动是医疗上需要的。在再进一步的实施方式中，提供了治疗患者的医疗上需要1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的激活或激动的病症的方法，其通过以足以为患者提供有益效果的频率和持续时间向患者施用有效量的本发明的化合物，其中所述病症包括移植器官或组织的排斥；由移植引起的移植物抗宿主病；自身免疫综合征，包括类风湿性关节炎；急性呼吸窘迫综合征；成人呼吸窘迫综合征；流感；癌症；系统性红斑狼疮；桥本甲状腺炎；淋巴细胞性甲状腺炎；多发性硬化症；重症肌无力；I型和II型糖尿病；葡萄膜炎；后葡萄膜炎；与白塞病相关的葡萄膜炎；眼色素膜脑膜炎；变态反应性脑脊髓炎；慢性移植物血管病(chronic allograft vasculopathy)；感染后自身免疫病(post-infectious autoimmune disease)，包括风湿热和感染后肾小球性肾炎；炎症性增生性皮肤病；免疫介导疾病的表皮表现(cutaneousmanifestations of immunologically-mediated disorders)；牛皮癣；特应性皮炎；骨髓炎；接触性皮炎；湿疹性皮炎；脂溢性皮炎；扁平苔癣；天疱疮；大疱性类天疱疮；大疱性表皮松解症；荨麻疹；血管性水肿；脉管炎；红疹；表皮嗜酸粒细胞增多(cutaneous eosinophilia)；痤疮；斑秃；角膜结膜炎；春季结膜炎；角膜炎；疱疹性角膜炎；角膜上皮营养不良；角膜白斑；眼天疱疮；莫伦氏溃疡；溃疡性角膜炎；巩膜炎；格雷夫斯氏眼病；伏格特-小柳-原田三氏综合征；结节病；花粉过敏症；可逆阻塞性气道疾病；支气管哮喘；过敏性哮喘；内源性哮喘；外源性哮喘；尘埃性哮喘；慢性或长期哮喘(inveterateasthma)；迟发型哮喘和气道高压反应；支气管炎；胃溃疡；缺血性肠病；性肠疾病；坏死性小肠结肠炎；热灼伤相关的肠道损伤；脂泻病；直肠炎；嗜酸细胞性胃肠炎；肥大细胞增多症；克罗恩氏病；溃疡性结肠炎；由局部缺血症和血栓症引起的血管损伤；动脉粥样硬化；脂肪心；心肌炎；心肌梗塞；动脉硬化；主动脉炎综合征；由病毒病引起的恶病质；血管血栓症；偏头痛；鼻炎；湿疹；间质性肾炎；IgA-诱导的肾病；古德帕斯彻氏综合征；溶血尿毒症综合征；糖尿病性肾病；肾小球硬化症；肾小球肾炎；多发性肌炎；传染性神经元炎；梅尼尔氏病；多发性神经炎；多神经炎；单神经炎；神经根病；甲状腺机能亢进；巴塞多氏病；甲状腺毒症；纯红细胞再生障碍；再生障碍性贫血；再生不良性贫血；特发性血小板减少性紫癜；自身免疫性溶血性贫血；粒细胞缺乏；恶性贫血；巨幼细胞贫血；红细胞发生不能；骨质疏松；肉状瘤病；纤维化肺；特发性间质性肺炎；皮肌炎；寻常性白斑病；寻常性鱼鳞病；光变应性敏感(photoallergic sensitivity)；皮肤T细胞淋巴瘤；结节性多动脉炎；亨廷顿氏舞蹈病；西登哈姆氏舞蹈病；非炎性心肌病；硬皮病；坏死性肉芽肿；舍格伦综合症；肥胖病；嗜酸性细胞性筋膜炎；齿龈、牙周组织、牙槽骨、牙骨质的损伤；男性型脱发或老年脱发；肌肉萎缩症；脓皮病；塞泽里综合征；慢性肾上腺功能不全；阿狄森氏病；保持时发生的器官缺血-再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury of organs which occurs uponpreservation)；内毒素休克；假膜性结肠炎；由药物或辐射引起的结肠炎；缺血性急性肾功能不全；慢性肾功能不全；肺癌；淋巴源的恶性肿瘤(malignancyof lymphoid origin)；急性或慢性淋巴细胞性白血病(acute or chroniclymphocytic；leukemias)；淋巴瘤；银屑病；炎性肺损伤；肺气肿；白内障；肺铁末沉着病；视网膜色素变性；老年性黄斑变性；玻璃体瘢痕(vitreal scarring)；炎性眼病；角膜碱烧伤；皮炎红斑(dermatitis erythema)；大疱性皮病(ballousdermatitis)；水泥皮炎；牙龈炎；牙周炎；败血症；胰腺炎；癌病变；癌转移；低气压病；自身免疫性肝炎；原发性胆汁性肝硬化；硬化性胆管炎；肝部分切除；急性肝坏死；肝硬化；酒精性肝硬化；肝衰竭；暴发性肝功能衰竭；迟发性肝衰竭；慢加急性肝衰竭。在再进一步的实施方式中，所述病症为如下疾病中的一种或多种：移植器官或组织的排斥；由移植引起的移植物抗宿主病；自身免疫综合征，包括类风湿性关节炎、多发性硬化症、重症肌无力；花粉过敏症；I型糖尿病；牛皮癣的预防；克罗恩氏病；溃疡性结肠炎；急性呼吸窘迫综合征；成人呼吸窘迫综合征；流感；感染后自身免疫病，包括风湿热和感染后肾小球性肾炎；和癌转移。在再进一步的实施方式中，所述病症为如下疾病中的一种：流感、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、移植排斥、急性呼吸窘迫综合征或成人呼吸窘迫综合征。
在某些实施方式中，提供了本发明的化合物用于制备适合于治疗其中医疗上需要1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的激活或抑制的疾病或病症的药物的应用方法。
在某些实施方式中，本发明提供了用于手性合成包含在四氢萘部分六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物的方法，其中所述化合物是关于所述手性碳对映体富集的。在这样的实施方式中，本发明的方法提供了如下步骤：(i)提供包含四氢萘部分的化合物，其中其中所述四氢萘部分的六元饱和环中需要手性取代的环碳在该碳上被氧代取代；和(ii)使这一化合物与手性试剂反应以在之前连接氧代基团的四氢萘部分的碳处形成手性中心。在某些这样的实施方式中，所述手性试剂为RuCl(对异丙基甲苯)[(R，R)-Ts-DPEN]或RuCl(对异丙基甲苯)[(S，S)-Ts-DPEN]。
在某些这样的实施方式中，使在步骤(i)中提供的包含四氢萘部分的所述化合物与手性试剂反应以在步骤(ii)中形成式VI-R或VI-S的中间体：
Figure BPA00001577340400151
其中，Z为-CN、-Cl或-CF3。在某些这样的实施方式中，Z为-CN。
在某些实施方式中，本发明提供了包括通过用叠氮磷酸二苯酯(DPPA)处理式VI-R或VI-S的中间体使之前连接氧代基团上的位于四氢萘部分六元饱和环中的手性碳的手性构型翻转而形成式VII-S或VII-R的叠氮基四氢萘的步骤的方法：
Figure BPA00001577340400152
其中，所述四氢萘部分的六元饱和环中的叠氮基取代基取代了式VI-R或VI-S的羟基取代基，且所得到的连接叠氮基取代基的手性碳具有所述手性碳在之前连接到羟基取代基时相反的手性构型。
在某些实施方式中，本发明提供了其中Z为-CN的方法，且该方法进一步包括额外的步骤(a)形成在四氢萘部分上的取代的1，2，4-噁二唑，其通过(a)使VII-R或VII-S中间体与保护剂反应，然后使所得保护形式的式VII-R或VII-S的中间体与羟胺或盐酸羟胺反应以在已经连接Z的苯基碳上形成羟基脒，这一反应所得的化合物具有式VIII-R或VIII-S：
Figure BPA00001577340400161
(b)使式VIII-R或VIII-S的中间体与取代的苯甲酸和偶联剂接触以形成式IX-R或XI-S化合物：
Figure BPA00001577340400162
其中，X如上所定义，或者在某些实施方式中，其为OH、N3、NH-PG、NH2或NR′R″；PG可以为保护基团；R′可以为H、C1-4烷基、伯羟基C1-4烷基、-SO2-R1或-CO-R1；R″可以为H、-SO2-R3、任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基或者任选地被R4取代环部分，其中这种环部分为哌啶基、环己基、吗啉基、噻唑基、吡唑基、吡咯烷基、咪唑基或苯基；Ra为低级烷基，以及R1、R2、R3和R4如上所定义，进行。在某些这样的实施方式中，式IX-R或IX-S的化合物具有如下结构：
Figure BPA00001577340400163
在某些这样的实施方式中，所述偶联剂可以为包含羟基苯并三唑(HOBt)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)的混合物。
保护基团可以使得化学官能团对特定的反应条件呈惰性，并且可以附中到分子中的这一官能团上和从分子的该官能团上移除而基本不破坏所述分子的其余部分。本领域的从业者对用于本发明的合成方法中的合适的保护基十分熟悉。参见，例如Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基团)，2nd ed.，John Wiley & Sons，New York，1991。
在某些实施方式中，本发明提供了其中在步骤(i)中提供的化合物为
Figure BPA00001577340400171
的方法。
在某些实施方式中，本发明提供了其中所得的包含在四氢萘部分的六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物对映体富集至少90％的方法。在某些这样的实施方式中，所述的化合物对映体富集至少95％。在某些这样的实施方式中，所述的化合物对映体富集至少98％。在某些这样的实施方式中，所述的化合物对映体富集至少99％。
在某些这样的实施方式中，本发明提供了用于手性合成包含在四氢萘部分的六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的手性化合物或包含在四氢萘部分的六元饱和环中具有手性碳的噁二唑-四氢萘部分的手性化合物的方法，其中所述手性化合物的对映体富集为至少75％、85％、90％、95％、98％或99％。
在某些这样的实施方式中，本发明提供了用于合成对映体富集至少75％、85％、90％、95％、98％或99％的本发明手性化合物的方法。
在某些实施方式中，本发明提供了可以作为在本文中描述的用于手性合成的方法的中间体的化合物。在某些这样的实施方式中，本发明提供了一种或多种如下的中间体化合物：
Figure BPA00001577340400181
在某些这样的实施方式中，本发明提供了用于合成包含在四氢萘部分的六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物的方法，其中所述化合物是关于所述手性碳对映体富集的，该方法包括提供一种这样的中间体化合物的步骤。
在某些实施方式中，提供了用于合成包含在四氢萘部分的六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物的方法，其中所述化合物是关于所述手性碳对映体富集的。在某些实施方式中，提供了包括提供具有在本文中描述的结构的化合物的步骤的方法。
在某些实施方式中，本发明提供了用于合成式IX-R或XI-S的化合物的方法：
Figure BPA00001577340400191
其中，X如在本文中所定义，该方法包括提供一种如上所述的中间体化合物的步骤。在某些这样的实施方式中，本发明提供了用于合成本发明的化合物的方法。
在某些实施方式中，本发明提供了用于手性合成式IX-R或IX-S的结构，或其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物的方法。
Figure BPA00001577340400192
其中，X如上所定义，以及其中所述化合物是关于手性碳对映体富集的。在这样的实施方式中，本发明的方法提供了如下步骤：
(i)提供化合物
Figure BPA00001577340400201
(ii)使该化合物与手性试剂RuCl(对异丙基甲苯)[(R，R)-Ts-DPEN]或RuCl(对异丙基甲苯)[(S，S)-Ts-DPEN]反应；和
(iii)在之前连接氧代基团的四氢萘部分的碳处形成手性中心。
本文中公开的合成方法可以采用用于制备这样的化合物的额外的步骤，包括重结晶和用于纯化的其它方法。
如在说明书和所附的权利要求中所用的，单数形式的“一种”、“一个”包括多个指示物，除非在上下文中清楚地指明并非如此。
如在本文中所用，“个体”(如在治疗的受试者所使用的)同时表示哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物包括，例如，人类；非人类的灵长类，如类人猿和猴子；牛；马；绵羊和山羊。非哺乳动物包括，例如，鱼类和鸟类。
如在本文中所使用的术语“S1P1”指的是1-磷酸鞘氨醇受体亚型1，而其他1-磷酸鞘氨醇受体亚型以相应的形式提及，如1-磷酸鞘氨醇受体亚型3称作“S1P3”。
如在本领域中所公知的，“受体”是一种生物分子实体，其通常包含在活生物体中特异性结合一类结构的配体或单一天然配体的蛋白质，这种结合导致受体将结合信号转换为另一种生物作用，例如向细胞传导已经发生结合的信号，这导致该细胞以某种方式改变其功能。转换的实例为配体的受体结合引起活细胞的胞浆中“G-蛋白”活性的改变。结合受体并使其激活用于信号转换的任何天然存在的或非天然存在的分子被称作“激动剂”或“激活剂”。结合受体但不引起信号转换发生的及可以阻断激动剂的结合和随之发生的信号转换的任何天然存在的或非天然存在的分子被称作“拮抗剂”。
如在本文中所使用的术语“S1P1化合物”或“S1P1激动剂”或“S1P1激活剂”或“S1P1抑制剂”或“S1P1拮抗剂”指的是以某种方式与S1P受体亚型1相互作用的化合物。它们可以为激动剂或激活剂，或者它们可以为拮抗剂或抑制剂。本发明的“S1P1化合物”可以对S1P受体家族的亚型1的作用具有选择性；例如，本发明的化合物可以以对于S1P受体家族的其它亚型更低的浓度作用于S1P受体家族的亚型1；更具体而言，与其对亚型3或“S1P3”受体的作用相比，本发明所述的“S1P1化合物”可以选择性地作用于亚型1受体。
在某些实施方式中，本发明的化合物为正构激动剂(orthostatic agonist)。在某些实施方式中，本发明的化合物为变构激动剂(allosteric agonist)。受体激动剂可以分为正构的或变构的。正构激动剂结合与天然配体的结合明显重叠的受体中的位点并复制天然配体与受体的关键相互作用。正构激动剂通过类似于天然配体的分子机制激活受体，与天然配体竞争并被作为天然配体的竞争性拮抗剂的药剂竞争性地拮抗。变构激动剂结合产生与天然配体部分或完全不重叠的一些明显相互作用的受体中的位点。变构激动剂为真正的激动剂，而不是变构增强剂。因此，它们单独激活受体信号传导而不需要次最高浓度的天然配体。当已知的对正构配体具有竞争性的拮抗剂显示非竞争性拮抗时可以确认为变构激动剂。变构激动剂位点也可以通过受体诱变定位。在受体中引入保持变构激动剂的受体激活而减弱或废除由正构激动剂诱导的信号传导(或反之亦然)的单一点突变提供了结合相互作用的差异的形式证据。正构激动剂可以使GPCR结构和构象去稳定，而变构激动剂可以使GPCR结构和构象稳定或去稳定。由于它们与受体的不同的相互作用，变构激动剂可以为药学上有用的，因为变构位点可以在共有类似的正构配体的受体亚型的相关家族中对于激动剂潜能和选择性提供另外的可能性。此外，与正构配体相比，变构位点可能需要非常不同的激动剂物理和化学性质。这些化学-物理性质(其包括疏水性、芳香性、电荷分布和溶解性)也可能有利于产生具有有利于开发有效药物的不同药代动力学、口服生物利用度、分布和代谢选特性的激动剂。
如在本文中所使用的术语“基本上”表示完全或几乎完全；例如，“基本没有”某一组分的组合物表示没有该组分包含的痕量该组分(该痕量的存在不会影响所述组合物的任何相关功能性质)，或者化合物为“基本纯”为仅存在可忽略的痕量杂质。
基本光学纯表示一种对映体关于另一对映体的对映体富集水平为至少90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％。
本文所称的“治疗”或“疗法”指的是缓和与疾病或疾患相关的症状，或抑制那些症状的进一步进展或恶化，或者防止或预防所述疾患或疾病。
当用于描述本发明的化合物在为患有由1-磷酸鞘氨醇受体亚型1介导的疾病或病症的患者提供治疗的用途时的用语“有效量”指的本发明的化合物作为激动剂或作为拮抗剂有效地结合个体的组织中的S1P1受体的量，其中所述S1P1与该疾病相关，其中这种结合达到足够对患者产生有益的治疗效果的程度。类似地，如在本文中使用的，本发明化合物的“有效量”或“治疗有效量”指的是全部或部分地缓和与所述疾病或病症相关的症状，或停止或减缓那些症状的进一步进展或恶化，或者防止或预防所述疾病或病症的化合物的量。特别是，“治疗有效量”指的是通过作为1-磷酸鞘氨醇受体亚型1(S1P1)活性的激动剂发挥作用而以必要的剂量和持续时间有效地达到所需的治疗结果的量。治疗有效量也是其中本发明的化合物的有益治疗效果胜过任何毒性或有害作用的量。例如，在治疗由S1P1的激活介导的病症情况下，本发明的S1P1激动剂的治疗有效量为足以控制病症、减轻病症的进展或缓解病症的症状的量。可以被如此治疗的病症的实例包括多发性硬化症、移植排斥、成人呼吸窘迫综合征。
可以通过本发明的化合物治疗的疾患、疾病和病症包括移植器官或组织的排斥；由移植引起的移植物抗宿主病；自身免疫综合征，包括类风湿性关节炎；急性呼吸窘迫综合征；成人呼吸窘迫综合征；流感；癌症；系统性红斑狼疮；桥本甲状腺炎；淋巴细胞性甲状腺炎；多发性硬化症；重症肌无力；I型和II型糖尿病；葡萄膜炎；后葡萄膜炎；与白塞病相关的葡萄膜炎；眼色素膜脑膜炎；变态反应性脑脊髓炎；慢性移植物血管病；感染后自身免疫病，包括风湿热和感染后肾小球性肾炎；炎性增生性皮肤病；免疫介导的疾病的表皮表现；牛皮癣；特应性皮炎；骨髓炎；接触性皮炎；湿疹性皮炎；脂溢性皮炎；扁平苔癣；天疱疮；大疱性类天疱疮；大疱性表皮松解症；荨麻疹；血管性水肿；脉管炎；红疹；表皮嗜酸粒细胞增多；痤疮；斑秃；角膜结膜炎；春季结膜炎；角膜炎；疱疹性角膜炎；角膜上皮营养不良；角膜白斑；眼天疱疮；莫伦氏溃疡；溃疡性角膜炎；巩膜炎；格雷夫斯氏眼病；伏格特-小柳-原田三氏综合征；结节病；花粉过敏症；可逆阻塞性气道疾病；支气管哮喘；过敏性哮喘；内源性哮喘；外源性哮喘；尘埃性哮喘；慢性或长期哮喘；迟发型哮喘和气道高压反应；支气管炎；胃溃疡；缺血性肠病；性肠疾病；坏死性小肠结肠炎；热灼伤相关的肠道损伤；脂泻病；直肠炎；嗜酸细胞性胃肠炎；肥大细胞增多症；克罗恩氏病；溃疡性结肠炎；由局部缺血症和血栓症引起的血管损伤；动脉粥样硬化；脂肪心；心肌炎；心肌梗塞；动脉硬化；主动脉炎综合征；由病毒病引起的恶病质；血管血栓症；偏头痛；鼻炎；湿疹；间质性肾炎；IgA-诱导的肾病；古德帕斯彻氏综合征；溶血尿毒症综合征；糖尿病性肾病变；肾小球硬化症；肾小球肾炎；多发性肌炎；传染性神经元炎；梅尼尔氏病；多发性神经炎；多神经炎；单神经炎；神经根病；甲状腺机能亢进；巴塞多氏病；甲状腺毒症；纯红细胞再生障碍；再生障碍性贫血；再生不良性贫血；特发性血小板减少性紫癜；自身免疫性溶血性贫血；粒细胞缺乏；恶性贫血；巨幼细胞贫血；红细胞发生不能；骨质疏松；肉状瘤病；纤维化肺；特发性间质性肺炎；皮肌炎；寻常性白斑病；寻常性鱼鳞病；光变应性敏感；皮肤T细胞淋巴瘤；结节性多动脉炎；亨廷顿氏舞蹈病；西登哈姆氏舞蹈病；非炎性心肌病；硬皮病；坏死性肉芽肿；舍格伦综合症；肥胖病；嗜酸性细胞性筋膜炎；齿龈、牙周组织、牙槽骨、牙骨质的损伤；男性型脱发和老年脱发；肌肉萎缩症；脓皮病；塞泽里综合征；慢性肾上腺功能不全；阿狄森氏综合征；保持时发生的器官缺血-再灌注损伤；内毒素休克；假膜性结肠炎；由药物或辐射引起的结肠炎；缺血性急性肾功能不全；慢性肾功能不全；肺癌；淋巴源的恶性肿瘤；急性或慢性淋巴细胞白血病；淋巴瘤；银屑病；炎性肺损伤；肺气肿；白内障；肺铁末沉着病；视网膜色素变性；老年性黄斑变性；玻璃体瘢痕；炎性眼病；角膜碱烧伤；皮炎红斑；大疱性皮病；水泥皮炎；牙龈炎；牙周炎；败血症；胰腺炎；癌病变；癌转移；低气压病；自身免疫性肝炎；原发性胆汁性肝硬化；硬化性胆管炎；肝部分切除；急性肝坏死；肝硬化；酒精性肝硬化；肝衰竭；暴发性肝功能衰竭；迟发性肝衰竭；慢加急性肝衰竭。用本发明的化合物治疗的特别优选的疾病或病症包括如下疾病的组：移植器官或组织的排斥；由移植引起的移植物抗宿主病；自身免疫综合征，包括类风湿性关节炎、多发性硬化症、重症肌无力；花粉过敏症；I型糖尿病；牛皮癣的预防；克罗恩氏病；溃疡性结肠炎；急性呼吸窘迫综合征；成人呼吸窘迫综合征；流感；感染后自身免疫病，包括风湿热和感染后肾小球性肾炎；和癌转移。
此外，式I-R或I-S化合物的也可与一种或多种免疫抑制剂组合用于治疗与激活的免疫系统相关的和选自上述列表的疾病、病症和状态。根据本发明优选的实施方式，所述免疫抑制剂为选自包括或由环孢菌素、达克珠单抗、巴利昔单抗、依维莫司、他克莫司(FK506)、咪唑硫嘌呤(azathiopirene)、来氟米特、15-脱氧精胍菌素或其它免疫抑制药物的组。
除非特别指出了具体的立体化学或异构形式，本发明意欲包括所有的手性、非对映体、外消旋形式。在本发明中使用的化合物可以包括以任意程度富集的富集的或拆分的如描述中显而易见的任意或所有的不对称原子的旋光异构体。可以合成外消旋的和非对映体的混合物，以及单个旋光异构体从而几乎不含它们的对映体或非对映体伴体，诅它们都在本发明的特定实施方式的范围内。
由于手性中心的存在导致的异构体包含称作“对映体”的一对不可重叠的异构体。纯化合物的单一对映体为旋光性的，即，它们能够旋转平面偏振光的平面。单一对映体是按照Cahn-Ingold-Prelog系统命名的。一旦确定的四个基团中的优先次序，则使分子定向以使得最低优先级的基团指向远离观察者。然后，如果以顺时针进行其它基团的降序排列，则分子被命名为(R)构型，且如果以逆时针进行其它基团的降序排列，则分子被命名为(S)构型。在该实例中，Cahn-Ingold-Prelog优选次序为A＞B＞C＞D。所述排序最低的原子D远离观察者定向。
Figure BPA00001577340400241
“分离的旋光异构体”指的是已经从相同分子式的相应旋光异构体中基本纯化的化合物。优选地，分离的异构体为至少约80重量％纯，更优选至少约90重量％纯，甚至更优选至少98重量％纯，最优选至少约99重量％纯的。
旋转异构
应该理解的是，由于绕酰胺键连接的受限旋转(如下所示)的化学性质(即，使得某些双键特性给与C-N键的共振)，有可能观察到分离的旋转异构体物质，且甚至在一些情况下分离出这样的物质，其实例如下所示。还应该理解的是，某些结构要素，包括立体体积或在酰胺氮上的取代基，可以将旋转异构体的稳定性提高到化合物可以作为单一的稳定旋转异构体分离并长期地存在的程度。因此，本发明包括本发明的化合物的任何可能的稳定的旋转异构体，其在治疗其中如上所述本发明的化合物对其有效的疾病、病症或状态中是生物活性的。
Figure BPA00001577340400251
位置异构(Regioisomerism)
本发明优选的化合物具有在芳香环上的取代基的特定空间排列，其与由化合物分类表明的结构活性关系有关。通常这样的取代排列是通过编号体系表示的；然而，在不同的环系统之间的编号体系通常是不一致的。在六元环芳香系统中，空间排列由普通命名法指定，如下所示，“对”表示1，4取代，“间”表示1，3取代，以及“邻”表示1，2取代。
Figure BPA00001577340400252
涵盖在权利要求中的所有结构为“化学上可行的”，其意思是由权利要求所列举的任选的取代基的任意组合或子组合所显示的结构为通过结构化学原理和实验确定物理上能够以至少某种稳定性存在。化学上不可行的结构不在所要求保护的化合物集合的范围内。
一般而言，“取代的”指的是在本文中定义的有机基团，其中包含在其中的与氢原子的一个或多个键被与非氢原子的一个或多个键所取代，所述非氢原子例如，但不限于卤素(即，F、Cl、Br和I)；基团(例如，羟基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、氧代(羰基)、羧基包括：羧酸、羧酸盐和羧酸酯(carboyxlateesters))中的氧原子；基团(例如，巯基、烷基和芳基硫醚基、亚砜基、砜基、磺酰基和磺酰胺基)中的硫原子；基团(例如胺、羟胺、腈、硝基、N-氧化物、酰肼、叠氮化物和烯胺)中的氮原子；和其它各种基团中的其它杂原子。可以连接到取代的碳(或其它)原子上的取代基的非限制性的实例包括：F、Cl、Br、I、OR′、OC(O)N(R′)2、CN、CF3、OCF3、R′、O、S、C(O)、S(O)、亚甲二氧基、亚乙二氧基、N(R′)2、SR′、SOR′、SO2R′、SO2N(R′)2、SO3R′、C(O)R′、C(O)C(O)R′、C(O)CH2C(O)R′、C(S)R′、C(O)OR′、OC(O)R′、C(O)N(R′)2、OC(O)N(R′)2、C(S)N(R′)2、(CH2)0-2NHC(O)R′、(CH2)0-2N(R′)N(R′)2、N(R′)N(R′)C(O)R′、N(R′)N(R′)C(O)OR′、N(R′)N(R′)CON(R′)2、N(R′)SO2R′、N(R′)SO2N(R′)2、N(R′)C(O)OR′、N(R′)C(O)R′、N(R′)C(S)R′、N(R′)C(O)N(R′)2、N(R′)C(S)N(R′)2、N(COR′)COR′、N(OR′)R′、C(＝NH)N(R′)2、C(O)N(OR′)R′或C(＝NOR′)R′，其中R’可以为氢或基于碳基部分(carbon-based moiety)，以及其中所述碳基部分本身可以被进一步取代。
取代的烷基、链烯基、炔基、环烷基和环烯基以及其它取代的基团也可以包括其中与氢原子的一个或多个键被与碳原子或与杂原子的一个或多个键(包括双键或三键)取代的基团，所述杂原子包括，但不限于羰基(氧代)、羧基、酯、酰胺、酰亚胺、氨基甲酸酯(urethane)和脲基中的氧；和亚胺、羟基亚胺、肟、腙、脒、胍和腈中的氮。取代的基团的取代基可以进一步被如在本文中所定义的烷基、链烯基、环烷基、芳基、杂芳基和炔基(其本身可以进一步被取代)取代。例如，C1-4烷基可以被酰胺基取代，而酰胺基可以进一步被另一C1-4烷基取代，其可以进一步被取代。
取代的环状基团例如取代的芳基、杂环基和杂芳基也可以包括其中与氢的键与碳原子的键取代的环和稠合环系统。因此，取代的芳基、杂环基和杂芳基还可以被如在本文中所定义的烷基、链烯基、环烷基、芳基、杂芳基和炔基(其本身可以进一步被取代)取代。
在本文中使用的术语“杂原子”指的是非碳和非氢的原子，其能够与碳形成共价键，且没有其它的限制。典型的杂原子为N、O和S。当指的是硫(S)时，除非特别指明其氧化状态，应该理解的是所述硫可以为已发现的任何氧化状态，因此包括亚砜(R-S(O)-R′)和砜(R-S(O)2-R′)；因此，术语“砜”仅涵盖砜形式的硫；术语“硫醚”仅涵盖硫醚(R-S-R′)形式的硫。当使用如“选自O、NH、NR′和S的杂原子”或“[变量]为O、S...”的词语时，它们应该被理解为包括所有的硫醚、亚砜和砜氧化态的硫。
烷基包括含有1至20个碳原子的直链和支链的烷基和环烷基(C1-20烷基)，以及典型地为含有1至12个碳原子(C1-12烷基)，或在某些实施方式中，为含有1至8个碳原子(C1-8烷基)，或在某些实施方式中，为含有1至4个碳原子(C1-4烷基)，或在某些实施方式中，为含有1至3个碳原子(C1-3烷基)。直链烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。支链烷基的实例包括，但不限于，异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、新戊基、异戊基和2，2-二甲基丙基。代表性的取代的烷基可以被上述所列的任意基团(例如，氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代(thio)、烷氧基和卤素基团)取代一次或多次。基团“伯羟基C1-4烷基”表示被末端羟基取代的C1-4烷基。
环烷基为形成环结构的烷基，其可以被取代或未被取代。环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在一些实施方式中，环烷基为3至8元，而在其它实施方式中，环碳原子的数目为3至5、3至6或3至7。环烷基进一步包括多环的环烷基，例如，但不限于，降冰片基、金刚烷基、冰片基、莰基、异莰基和蒈烯基，以及稠合环，例如，但不限于，十氢萘基(decalinyl)等。环烷基还包括被如上定义的直链或支链烷基取代的环。代表性的取代的环烷基可以为单取代的或被取代超过一次的，例如，但不限于，2，2-，2，3-，2，4-2，5-或2，6-二取代的环己基或单-、或二-或三-取代的降冰片基或环庚基，其可以被，例如，氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代、烷氧基和卤素基团取代。
术语“碳环的”和“碳环”指的是其中环上的原子为碳的环结构。在一些实施方式中，碳环为3至8元，而在其它实施方式中，环碳原子的数目为4、5、6或7。除非特别做出相反的说明，碳环的环可以被多达N个取代基(如氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代、烷氧基和卤素基团)取代，其中N为碳环的大小。
(环烷基)烷基，也称作环烷基烷基，为其中烷基上的氢或碳键被与如上所定义的环烷基的键取代的如上所定义的烷基。
除了在两个碳原子之间存在至少一个双键之外，链烯基包括如上所定义的直链和支链及环状的烷基。因此，链烯基具有2至约20个碳原子，以及典型地2至12个碳原子，或在某些实施方式中，有2至8个碳原子。其实例包括，但不限于，CH＝CH(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2、乙烯基、环己烯基、环戊烯基、环己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。
术语“环烯基”单独或组合地表示坏状的烯基，其中在环结构中存在至少一个双键。环烯基包括具有至少一个位于两个相邻的碳原子之间的双键的环烷基。因此，例如，环烯基包括，但不限于，环己烯基、环戊烯基和环己二烯基。
(环烯基)烷基为其中烷基上的氢或碳键被与如上所定义的环烯基的键取代的如上所定义的烷基。
除了在两个碳原子之间存在至少一个三键之外，炔基包括直链和支链的烷基。因此，炔基具有2至约20个碳原子，以及典型地2至12个碳原子，或在某些实施方式中，有2至8个碳原子。其实例包括，但不限于-C≡CH、-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-CH2C≡CH、-CH2C≡C(CH3)和-CH2C≡C(CH2CH3)等。
芳基为不包含杂原子的环状芳香烃。因此，芳基包括，但不限于，苯基、薁基(azulenyl)、庚搭烯基(heptalenyl)、联苯基、indacenyl、芴基、菲基、苯并菲基(triphenylenyl)、芘基、萘并萘基(naphthacenyl)、
Figure BPA00001577340400281
基、亚联苯基(biphenylenyl)、蒽基和萘基。在一些实施方式中，芳基在基团的艺人环部分中包含6-14个碳。词语“芳基”包括含有稠合环的基团，例如稠合的芳香-脂族环系统(例如，茚满基、四氢萘基等)，且还包括具有其它基团的取代的芳基，所述其它基团包括，但不限于，连接到一个环原子上的烷基、卤素、氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代或烷氧基。代表性的取代的芳基可以为单取代或超过一次取代的，例如，但不限于2-，3-，4-，5-或6-取代的苯基或萘基，其可以被包括但不限于上面所列出的基团取代。
芳烷基为其中烷基的氢或碳键被与如上所定义的芳基的键取代的如上所定义的烷基。代表性的芳烷基包括苄基和苯乙基及稠合的(环烷基芳基)烷基，如4-乙基-茚满基。芳基部分或烷基部分或者这二者任选地被其它基团取代，包括，但不限于，烷基、卤素、氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代或烷氧基。芳烯基为其中烷基上的氢或碳键被与如上所定义的芳基的键取代的如上所定义的链烯基。
杂环基包括含有3个或多个环成员的芳族或非芳族环化合物(杂环的环)，所述环成员中一个或多个为杂原子，例如，但不限于，N、O、S或P。在一些实施方式中，杂环基包括3至20个环成员，而其它这样的基团具有3至15个环成员。至少一个环包含杂原子，但是多环系统中的不必每个环包含杂原子。例如，二氧戊烷环和苯并二氧戊环的环系统(亚甲二氧基苯基环系统)都为本文所称的杂环基。命名为C2-杂环基的杂环基可以为具有2个碳原子和3个杂原子的5元环，具有2个碳原子和4个杂原子的6元环等等。同样的，C4-杂环基可以为具有1个杂原子的5-元环，具有2个杂原子的6-元环等等。碳原子的数目加上杂原子的数目的总和等于环原子的总数。饱和的杂环指的是不包含不饱和碳原子的杂环。
词语“杂环基”包括含有那些具有稠合的芳族和非芳族基团的稠合环种类。该词语还包括含有杂原子的多环环系统，例如但不限于奎宁环基(quinuclidyl)，且还包括具有取代基的杂环基，所述取代基包括，但不限于，连接到一个环成员上的烷基、卤素、氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代或烷氧基。如本文所定义的杂环基可以为杂芳基或包括至少一个环杂原子的部分或完全饱和的环状基团。杂环基基团包括，但不限于，吡咯烷基、呋喃基、四氢呋喃基、二氧戊环基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二氢苯并呋喃基、吲哚基、二氢吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、氮杂苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑、咪唑并吡啶基、异噁唑并吡啶基、硫杂萘基(thianaphthalenyl)、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、喹噁啉基和喹唑啉基基团。杂环基可以被取代。代表性的取代杂环基可以为单取代的或超过一次取代的，包括但不限于，其中被上面列举的取代基单、二、三、四、五、六或更多次取代的包含至少一个杂原子的环，所述取代基包括，但不限于，烷基、卤素、氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代和烷氧基。
杂芳基为包含5个以上环原子的芳族环化合物，其中，至少一个环原子为杂原子，例如，但不限于N、O和S。命名为C2杂芳基的杂芳基可以为具有2个碳原子和3个杂原子的5元环，具有2个碳原子和4个杂原子的6元环等等。同样的，C4-杂芳基可以为具有1个杂原子的5-元环，具有2个杂原子的6-元环等等。碳原子的数目加上杂原子的数目的总和等于环原子的总数。杂芳基基团包括，但不限于，例如，吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、氮杂苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑、咪唑并吡啶基、异噁唑并吡啶基、硫杂萘基(thianaphthalenyl)、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、喹噁啉基和喹唑啉基基团。术语“杂芳基”和“杂芳基基团”包括稠合环化合物，例如，其中至少一个环，但不是必须地所有环，为芳族环，包括四氢喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基和2，3-二氢吲哚基。所述术语还包括含有连接到环原子之一上的其它基团的杂芳基，所述其它基团包括，但不限于，烷基、卤素、氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫代或烷氧基基团。代表性的取代的杂芳基基团可以被例如上面列举的那些基团取代一次或多次。
芳基和杂芳基的额外的实例包括，但不限于苯基、联苯基、茚基、萘基(1-萘基、2-萘基)、N-羟基四唑基、N-羟基三唑基、N-羟基咪唑基、蒽基(1-蒽基、2-蒽基、3-蒽基)、噻吩基(2-噻吩基、3-噻吩基)、呋喃基(2-呋喃基、3-呋喃基)、吲哚基、噁二唑基、异噁唑基、喹唑啉基、芴基、呫吨基、异茚满基(isoindanyl)、二苯甲基、吖啶基、噻唑基、吡咯基(2-吡咯基)、吡唑基(3-吡唑基)、咪唑基(1-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、三唑基(1，2，3-三唑-1-基、1，2，3-三唑-2-基、1，2，3-三唑-4-基、1，2，4-三唑-3-基)、噁唑基(2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基)、噻唑基(2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、吡啶基(2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基)、吡嗪基、哒嗪基(3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基)、喹啉基(2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、6-喹啉基、7-喹啉基、8-喹啉基)、异喹啉基(1-异喹啉基，3-异喹啉基、4-异喹啉基、5-异喹啉基、6-异喹啉基、7-异喹啉基、8-异喹啉基)、苯并[b]呋喃基(2-苯并[b]呋喃基、3-苯并[b]呋喃基、4-苯并[b]呋喃基、5-苯并[b]呋喃基、6-苯并[b]呋喃基、7-苯并[b]呋喃基)、2，3-二氢-苯并[b]呋喃基(2-(2，3-二氢-苯并[b]呋喃基)、3-(2，3-二氢-苯并[b]呋喃基)、4-(2，3-二氢-苯并[b]呋喃基)、5-(2，3-二氢-苯并[b]呋喃基)、6-(2，3-二氢-苯并[b]呋喃基)、7-(2，3-二氢-苯并[b]呋喃基))、苯并[b]噻吩基(2-苯并[b]噻吩基、3-苯并[b]噻吩基、4-苯并[b]噻吩基、5--苯并[b]噻吩基、6-苯并[b]噻吩基、7-苯并[b]噻吩基)、2，3-二氢-苯并[b]噻吩基(2-(2，3-二氢-苯并[b]噻吩基)、3-(2，3-二氢-苯并[b]噻吩基)、4-(2，3-二氢-苯并[b]噻吩基)、5-(2，3-二氢-苯并[b]噻吩基)、6-(2，3-二氢-苯并[b]噻吩基)、7-(2，3-二氢-苯并[b]噻吩基))、吲哚基(1-吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、7-吲哚基)、吲唑(1-吲唑基、3-吲唑基、4-吲唑基、5-吲唑基、6-吲唑基、7-吲唑基)、苯并咪唑基(1-苯并咪唑基、2-苯并咪唑基、4-苯并咪唑基、5-苯并咪唑基、6-苯并咪唑基、7-苯并咪唑基、8--苯并咪唑基)、苯并噁唑基(1-苯并噁唑基、2-苯并噁唑基)、苯并噻唑基(1-苯并噻唑基、2-苯并噻唑基、4-苯并噻唑基、5-苯并噻唑基、6-苯并噻唑基、7-苯并噻唑基)、咔唑基(1-咔唑基、2-咔唑基、3-咔唑基、4-咔唑基)、5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400311
基(5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400312
-1-基、5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400313
-2-基、5H-二苯并[b，f]氮杂-3-基、5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400315
-4-基、5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400316
-5-基)、10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400317
(10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400318
-1-基、10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA00001577340400319
-2-基、10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂-3-基、10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA000015773404003111
-4-基、10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂
Figure BPA000015773404003112
-5-基)等。
杂环基烷基基团为其中烷基的氢或碳键被与如上所定义的杂环基的键取代的如上所定义的烷基。代表性的杂环基烷基包括，但不限于呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、吡啶-2-基甲基(α-皮考基)、吡啶-3-基甲基(β-皮考基)、吡啶-4-基甲基(γ-皮考基)、四氢呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基。杂环基烷基基团可以在杂环基部分、烷基部分或者两者上被取代。
杂芳基烷基为其中烷基上的氢或碳键被与如上所定义的杂芳基的键取代的如上所定义的烷基。杂芳基烷基基团可以在杂芳基部分、烷基部分或者两者上被取代。
如在本文中使用的术语“环系统”表示包含1个、2个、3个或更多个环的部分，其可以被非环基团或被其它环系统或者被两者取代，其可以为完全饱和的、部分不饱和的、完全不饱和的或芳族的，且当所述环系统包含多于单一环的环系统时，所述环可以为稠合的、桥接的或螺环的。如在本领域内所公知的，“螺环的”表示其中两个环在单一的季碳原子(tetrahedral carbonatom)上稠合的一类结构，
在本文中所使用的术语“单环、双环或多环的芳香或部分芳香环”指的是包括具有4n+2个π电子的不饱和环或者其部分还原的(氢化的)形式的环系统。所述芳香或部分芳香的环可以包括额外的本身不为芳族的或部分芳族的稠合环、桥接环或螺环。例如，萘和四氢萘都为本文所称的“单环、双环或多环的芳香环或部分芳香环”。此外，例如，苯并-[2.2.2]-双环辛烷也是本文所称的“单环、双环或多环的芳香环或部分芳香环”，包含与桥连的双环系统稠合的苯环。完全饱和的环其中没有双键，并且根据本文所称的杂环子的存在与否而为碳环或杂环的。
如上所定义的，术语“烷氧基”指的是连接到烷基基团(包括环烷基)上的氧原子。直链烷氧基的实例包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。支链烷氧基的实例包括，但不限于，异丙氧基、仲-丁氧基、叔丁氧基、异戊氧基、异己氧基等。环烷氧基的实例包括，但不限于，环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
术语“芳氧基”和“芳基烷氧基”分别指的是连接到氧原子上的芳基和在烷基部分连接到氧原子上的芳基烷基。其实例包括但不限于苯氧基、萘氧基和苄氧基。
如在本文中所使用的术语“酰基”指的是包含羰基部分的基团，其中该基团通过羰基碳原子键合。所述羰基碳原子也键合另一碳原子，其可以为烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环烷基、杂芳基、杂芳基烷基基团等的部分。在其中所述羰基连接到氢上的特定情况中，该基团为“甲酰基”，其为如在本文中所定义的术语的酰基。酰基可以包括连接到羰基基团上的0至约12-20个额外的碳原子。本文所称的酰基可以包含双键或三键。丙烯酰基为酰基的实例。本文所称的酰基也可以包含杂原子。烟酰基(吡啶基-3-羰基)为本文所称的酰基的实例。其它的实例包括乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基、吡啶乙酰基、肉桂酰基和丙烯酰基等。当包含连接到羰基碳原子上的碳原子的基团包含卤素素时，该基团称作“卤代酰基”基团。实例为三氟乙酰基。
术语“胺”包括具有式N(基团)3的伯、仲和叔胺，其中各基团可以独立地为H或非氢，例如烷基、芳基等。胺包括，但不限于，RNH2，例如，烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺；R2NH，其中各R独立选择，例如，二烷基胺、二芳基胺、芳烷基胺、杂环基胺等；和R3N，其中各R独立地选择，例如三烷基胺、二烷基芳基胺、烷基二芳基胺、三芳基胺等。术语“胺”还包括如在本文中使用的铵离子。
“氨基”是-NH2、-NHR、-NR2、-NR3 +形式的取代基(其中各R独立地选择)和其各质子化的形式。因此，被氨基取代的任何化合物可以视为胺。
“铵”离子包括未取代的铵离子NH4 +，但是除非另外指出，其还包括胺的任何质子化的或季铵化的形式。因此，三甲基胺盐酸盐和四甲基氯化铵同时为本文所称的铵离子和胺。
术语“酰胺”(或“酰氨基”)分别包括C-和N-酰胺基团，即-C(O)N R′R″和-NR′C(O)R″基团。C-酰胺的R′和R″可以结合在一起以形成具有氮原子的杂环。因此，其酰胺基包括，但不限于，氨基甲酰基(-C(O)NH2)和甲酰胺基团(-NHC(O)H)。“酰胺(carboxamido)”基团为通式C(O)NR2的基团，其中，R可以为H、烷基、芳基等。
术语“氨基甲酸酯(urethane)”(或“氨基甲酰基”)分别包含N-和O-氨基甲酸酯基团，即，-NRC(O)OR和-OC(O)NR2基团。
术语“磺酰胺”(或“磺酰氨基(sulfonamido)”)分别包含S-和N-磺酰胺基，即-SO2NR2和-NRSO2R基团。因此，磺酰胺基团包括，但不限于，氨磺酰基基团(-SO2NH2)。
术语“脒(amidine)”或“脒基(amidino)”包括式-C(NR)NR2的基团。通常，脒基为-C(NH)NH2。
术语“胍(guanidine)”或“胍基(guanidino)”包括式-NRC(NR)NR2的基团。通常，胍基为-NHC(NH)NH2。
“卤代”、“卤素”和“卤化物”包括氟、氯、溴和碘。
在本文中使用的术语“包含”、“包括”、“含有”、“具有”和“由...组成”为开放式术语，并且不排除额外的成分或组分的存在。在所称的成分中，使用“包含”、“包括”、“含有”、“具有”或“由...组成”表示不管包含、包括、含有、具有或组成什么成分，其并不必定是包括该词的句子的主题涵盖的唯一成分。
正如本领域所公知的，“盐”包括有机化合物，例如，以离子形式与抗衡离子组合的羧酸、磺酸或胺。例如，其阴离子形式的酸可以与阳离子例如，金属阳离子，如钠、钾等；与铵盐，如NH4 +或各种胺的阳离子，包括四烷基铵盐如四甲基铵和烷基铵盐如氨丁三醇盐；或其它阳离子，如三甲基硫等形成盐。“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”盐是由已经批准用于人类消费的并且通常是无毒的离子形成的盐，例如，氯盐或钠盐。“两性离子”为内盐，例如可以在具有至少两个可离子化的基团(一个形成阴离子而另一个形成阳离子，其用于彼此平衡)的分子内形成的内盐。例如，氨基酸(如甘氨酸)可以以两性离子形式存在。“两性离子”属于本文所称的盐。本发明的化合物可以采取盐的形式。术语“盐”包括作为本发明的化合物的游离酸或游离碱的加成盐。盐可以为“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”指的是提供药物应用中效用范围内的毒性特性的盐。但是，药学上不可接受的盐可以具有例如高结晶度的性能，其在本发明的实施中是有效用的，例如，如在本发明的化合物的合成、纯化或配制过程中的效用。
合适的药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸或有机酸制备。无机酸的实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。合适的有机酸可以选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族(araliphatic)、杂环、羧酸和磺酸类的有机酸，其实例包括，甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、羟基乙酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天门冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、亚甲基双羟萘酸(扑酸)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、三氟甲磺酸、2-羟基乙磺酸、对甲苯磺酸、磺胺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、海藻酸、β-羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸和半乳糖醛酸。药学上不可接受的酸加成盐的实例包括，例如，高氯酸盐和四氟硼酸盐。
本发明的化合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包括，例如，金属盐，包括碱金属盐、碱土金属盐和过渡金属盐，例如，如钙盐、镁盐、钾盐、钠盐和锌盐。药学上可接受的碱加成盐还包括由碱性胺制备的有机盐，例如，如N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺(N-甲基葡萄糖胺)和普鲁卡因。药学上不可接受的碱加成盐的实例包括锂盐和氰酸盐。尽管药学上不可接受的盐通常不用作药物，这样的盐可以用作，例如，化合物合成过程中的中间体，例如，在通过重结晶的其纯化过程中。所有这些盐可以通过使例如，合适的酸或碱与相应的化合物反应而常规的方式由该化合物制备。术语“药学上可接受的盐”指的是无毒的无机或有机酸和/或碱加成盐，参见例如Lit等人，Salt Selection for Basic Drugs(1986)，Int J.Pharm.，33，201-217，其通过引用的方式并入到本文中。
本发明的潜在盐的非限制性实例包括，但不限于，盐酸盐、柠檬酸盐、羟乙酸盐、延胡索酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、肉桂酸盐、羟乙基磺酸盐、硫酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、丁二酸盐、甲酸盐、乙酸盐、二氯乙酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、棕榈酸盐、吡酮酸盐(pidolate)、扑酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、苯甲酸盐、4-乙酰氨基苯甲酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、羟乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸盐、癸酸盐、己酸盐、环己烷氨基磺酸盐、十二烷基硫酸盐、乙二磺酸盐、龙胆酸盐、半乳糖二酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、酮戊二酸盐、马尿酸盐、乳糖醛酸盐、丙二酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、萘磺酸盐、萘二磺酸盐、草酸盐、油酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫氰酸盐、十一碳烯酸盐和昔萘酸盐。
“水合物”是以与水分子的组合物存在的化合物。该组合物可以包括化学计量的量的水，例如单水合物或二水合物，或者可以包括任意量的水。在本文中使用的术语“水合物”指的是固体形式，即，在水溶液中的化合物虽然可以为水合的，但是其不是如在本文中使用的术语的水合物。
本发明的化合物的“同系物”是该化合物的一个或多个原子被该原子的同位素替代的化合物。例如，同系物包括用氘取代化合物中的一些氢原子的化合物，例如，其中式I-R和I-S的异丙基部分的甲基全部或部分被氘化(例如，(D3C)2C-O-)的本发明的化合物。在本发明的同系物的形成中可以进行的同位素取代包括非放射性的(稳定的)原子，例如，氘和碳13，以及放射性的(不稳定的)原子，例如，氚、碳14、碘123、碘125等。
除了使用水以外的溶剂代替水之外，“溶剂合物”为类似的组合物。例如，甲醇或乙醇可以形成“醇化物”，其也可以为化学计量或非化学计量的。在本文中使用的术语“溶剂合物”指的是固体形式，即，在溶剂的溶液中的化合物虽然为溶剂化的，但是它不是如在本文中使用的术语的溶剂合物。
如本领域所公知的，“前药”是可以施用给患者的物质，其中该物质在体内通过在患者体内的生物化学物质(例如，酶)的作用转化为活性的药物成分。前药的实例包括羧酸基团的酯，其可以通过内源的酯酶(如在人类和其它哺乳动物的血液中发现的)被水解。
可以通过化学或生化转换功能在体内转化为活性药物的任何化合物可以作为前药发挥作用。本发明涵盖了所述化合物的前药。
在本发明范围内的前药的一些实例包括：
i.如果化合物包含羟基，则该羟基可以被修饰以形成酯、碳酸酯或氨基甲酸酯。其实例包括乙酸酯、特戊酸酯、甲基和乙基碳酸酯和二甲基氨基甲酸酯。该酯还可以由氨基酸，例如甘氨酸、丝氨酸或赖氨酸衍生。
ii.如果化合物包含胺基，则该胺基可以被修饰以形成酰胺。其实例包括乙酰胺或与氨基酸(例如，甘氨酸、丝氨酸或赖氨酸)的衍生物。
本发明的某些化合物和它们的盐可以以超过一种晶型存在，以及本发明包括各晶型及其混合物。此外，本发明的化合物可以以非溶剂化和与药学上可接受的溶剂(例如水)溶剂化以形成水合物或与醇(如C1-4-烷醇)的加成物等的形式存在。此外，本发明的化合物可以通过从合适溶剂的蒸发结晶与溶剂分子缔合而分离。这样的溶剂包括，但不限于，甲苯、四氢呋喃、二噁烷、二甲基甲酰胺、乙腈、乙酸酯如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、乙酸丙酯和异丙酯、醚如二乙醚和乙基醚、醇如甲醇、乙醇、1-或2-丁醇、1-或2-丙醇、戊醇和二甲亚砜。一般而言，通过结构或名称描述化合物被认为是包括任何形式的该化合物(例如，化合物本身，水合物、溶剂合物，或混合物的其它形式)。
此外，本发明的特征和方面是通过马库什基团的形式描述的，本领域的普通技术人员将认识到本发明也因此是通过马库什基团的任意单个成员或成员的亚组来描述的。例如，如果X被描述成选自溴、氯和碘，则完全描述了X为溴和X为氯和碘的权利要求。此外，在本发明的特征和方面通过马库什基团的形式描述的情况下，本领域的普通的技术人员将认识到本发明也因此是通过马库什基团的任意单个成员的组合或成员的亚组来描述的。因此，例如，如果X被描述成选自溴、氯和碘和Y被描述成选自甲基、乙基和丙基，则完全描述了X为溴和Y为甲基的权利要求。
组合物和联合治疗
本发明的S1P1化合物、它们的药学上可接受的盐或可水解的酯可以与药学上可接受的载体结合以提供用于治疗哺乳动物物种(且更优选人)的在本文中提及的生物疾病或病症的药物组合物。在这些药物组合物中使用的特定载体可以根据所需的施用类型(例如，静脉、经口、局部、栓剂或肠胃外)而变化。
在制备口服液体剂型(例如，悬浮、酏剂或溶液)的组合物中，可以采用典型的药用介质，例如水、二醇类、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等。类似地，当制备口服固体剂型(例如，粉末、片或胶囊)时，可以采用载体如淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。
本发明的实施方式的另一方面提供了本发明的化合物单独地或与另一S1P1抑制剂或另一种治疗剂或这二者结合的组合物。如在本文中所述，本发明的化合物包括立体异构体、互变异构体、溶剂合物、水合物、盐(包括药学上可接受的盐)及其混合物。包含本发明的化合物的组合物可以通过常规的技术制备，例如，如在如下文献中所述：Remington，The Science and Practice ofPharmacy，19th Ed.，1995，其以引用的方式并入本文。该组合物可以以常规的形式呈现，例如，胶囊、片剂、气雾剂、溶液、悬浮液或局部应用形式。
典型的组合物包括本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂，该赋形剂可以为载体或稀释剂。例如，活性化合物通常与载体混合，或者被载体稀释，或者被封装在载体(其可以为安瓿、胶囊、扁囊、纸或其它包装物)中。当活性化合物与载体混合时，或者当载体起到稀释剂的作用时，其可以为起到活性化合物的媒介、赋形剂或介质的作用的固态、半固态或液态物质。活性化合物可以被吸附到粒状的固态载体上，例如，包含在扁囊中。合适的载体的一些实例为水、盐溶液、醇、聚乙二醇、多羟基乙氧基化的蓖麻油(polyhydroxyethoxylated castor oil)、花生油、橄榄油、明胶、乳糖、石膏粉、蔗糖、糊精、碳酸镁、糖、环糊精、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、白明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸或纤维素的低级烷基醚、硅酸、脂肪酸、脂肪酸胺(fatty acid amine)、脂肪酸单甘油酯、脂肪酸二甘油酯、脂肪酸季戊四醇酯、聚氧化乙烯、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。类似地，载体或稀释剂可以包括本领域中已知的任何缓释材料，例如，单独的或与蜡混合的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
制剂可以与不会不利地与活性化合物反应的助剂混合。这样的添加剂可以包括润湿剂、乳化剂和悬浮剂、影响渗透压的盐、缓冲剂和/或着色物质、防腐剂、甜味剂或调味剂。如果需要，所述组合物还可以进行灭菌。
给药的途径可以为有效地将抑制粘着斑激酶的酶活性的本发明活性化合物输送到适当的或所需的作用位点的任何途径，例如，经口、经鼻、肺部、口含、皮下、皮内、经皮或肠胃外，如直肠、储库、皮下、静脉内、尿道内、肌内、鼻内、眼用溶液或软膏，优选经口途径。
至于肠胃外给药，载体通常包括无菌水，尽管也可以包含助溶的或起到防腐剂作用的其它成分。此外，还可以制备可注射的悬浮液，在该情况下，可以采用合适的液体载体、悬浮剂等。
至于局部给药，可以使用温和的、保湿的基质(例如软膏或乳膏)配制本发明的化合物。
如果固态载体被用于经口给药，制剂可以被制成片状，以粉末形或小药丸形式置入硬明胶胶囊中，或者其可以为锭剂或糖锭剂的形式。如果使用液态载体，制剂可以为糖浆、乳液、软明胶胶囊或无菌注射液(例如，水性或非水性液体悬浮液或溶液)的形式。
可注射剂型一般包括水性悬浮液或油悬浮液，其可以使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂制备。可注射剂型可以为使用溶剂或稀释剂制备的溶液相或悬浮液的形式。可接受的溶剂或媒介包括无菌水、林格氏液或等渗的盐水溶液。或者，可以使用无菌油作为溶剂或悬浮剂。优选地，油或脂肪酸为非挥发性的，包括天然的或合成的油、脂肪酸、单-、双-或三-甘油酯。
对于注射剂，制剂还可以为适合用如上所述的适当溶液重构的粉末。它们的实例包括，但不限于，冷冻干燥的、旋转干燥的或喷雾干燥的粉末、无定形粉末、颗粒、沉淀物或微粒物。对于注射剂，制剂可以任选地包含稳定剂、pH调节剂、表面活性剂、生物利用率调节剂及其组合。这些化合物可以被配制用于通过注射(例如通过快速推注或连续输注)的肠胃外给药。用于注射的单元剂型可以在安瓿瓶中或在多剂量容器中。
通过利用本领域公知的方法可以将本发明的制剂设计成在施用给患者后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。因此，所述制剂还可以配制成用于控制释放或用于缓慢释放。
本发明包括的组合物可以包括，例如，胶束或脂质体，或者某些其它包封形式，或者可以以延长释放剂型施用以提供长期储存和/或递送效果。因此，所述制剂可以被压制成小粒或圆柱，并作为储库注射剂肌肉内或皮下植入。这样的植入物可以采用已知的惰性材料如聚硅氧烷和生物可降解的聚合物，例如，聚丙交酯-聚乙交酯。其它生物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。
对于经鼻给药，制剂可以包含抑制粘着斑激酶的酶活性的本发明的化合物，其溶解或悬浮在液体载体(优选水性载体)中用于气溶胶应用。载体可以包含添加剂，例如增溶剂(如丙二醇)、表面活性剂、吸收促进剂(如卵磷脂(磷脂酰胆碱)或环糊精)或防腐剂(如对羟基苯甲酸酯类)。
对于肠胃外应用，特别适合的是注射溶液或悬浮液，优选具有溶解在多羟基化蓖麻油中的活性化合物的水性溶液。
可以按天或一日多次(例如每天两次或三次)施用剂型。或者，如果是处方医师给出的建议，可以以少于每天一次的更低的频率施用剂型，例如，每两天一次，或每周一次。
本发明的实施方式还包括本发明化合物的前药，其在给药后在变为药理活性物质之前通过代谢或其它生理过程经历化学转化。通过代谢或其它生理过程的转化包括，但不限于，将前药转化为药理活性物质的酶学(例如，特定的酶催化)和非酶学的(例如，一般或特定的酸或碱诱导的)化学转化。一般而言，这样的前药为本发明的化合物的功能性衍生物，其在体内容易地转化为本发明的化合物。选择和制备合适的前药衍生物的常规方法记载在如下文献中：例如，Design of Prodrugs(前药的设计)，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985。
在另一实施方式中，提供了制备本文所述的化合物的组合物的方法，包括将本发明的化合物与药学上可接受的载体或稀释剂一起配制。在某些实施方式中，药学上可接受的载体或稀释剂适合于经口给药。在某些实施方式中，所述方法还可以包括将所述组合物配制成片剂或胶囊的步骤。在其它实施方式中，所述药学上可接受的载体或稀释剂适合于肠胃外给药。在某些实施方式中，所述方法进一步包括将所述组合物冻干以形成冻干制剂的步骤。
本发明的化合物可以与如下物质一起用于治疗目的：i)一种或多种其它S1P1抑制剂和/或ii)一种或多种其它类型的蛋白激酶抑制剂和/或一种或多种其它类型的治疗剂，其可以以相同的剂型经口施用、以单独的口服剂型施用(例如，顺序地或非顺序地)或通过单独或一起注射施用(例如，顺序或非顺序地)。
因此，本发明在另一实施方式中提供了组合，其包含：
a)如在本文中所述的本发明的化合物；和
b)一种或多种化合物，其包括：
i)本发明的其它化合物；
ii)适合治疗医疗上需要S1P1激活的病症(例如，多发性硬化症、移植排斥或成人呼吸窘迫综合征)的其它药物。
本发明的组合包括以单一制剂的(a)和(b)的化合物的混合物和作为分离制剂的(a)和(b)的化合物。本发明的一些组合可以作为分离的制剂包装在试剂盒中。在某些实施方式中，将(b)中的两种或多种化合物一起配制，而本发明的化合物单独地配制。
在合适的情况下，可以如最新版本的Physicians′Desk Reference(医生用药指南)所述的那样使用的其它药物的剂量和制剂，该文献以引用的方式并入本文。
治疗方法
在某些实施方式中，本发明包括特异性地激动S1P1而不结合其它EDG受体(S1P2、S1P3和S1P4)或者对其它EDG受体具有显著的特异性(S1P5)的可口服生物利用(orally bioavailable)的化合物。可以使用选择性的S1P1激动剂来治疗具有自身免疫、过度免疫响应、血管发生或炎症成分的疾病，但是并不限于这些疾患。与通过提高治疗窗的目前疗法相比，选择性的S1P1激动剂具有优势，因为降低了由于牵涉其它EDG受体导致的毒性。
在某些实施方式中，本发明包括与以激动剂的主式高亲和力和高特异性地结合S1P1受体的化合物。在S1P1受体与激动剂接合时，信号传导通过Gαi进行，从而抑制腺苷酸环化酶的cAMP产生。
在某些实施方式中，本发明提供了使用本发明的化合物激活或激动(即，具有激动效果(agonic effect)、起到激动剂的作用)1-磷酸鞘氨醇受体亚型(例如S1P1)的方法。所述方法包括使受体与合适浓度的本发明的化合物接触以引起受体的激活。所述接触可以发生在体外，例如，在分析实验中进行以测定本发明的化合物的S1P受体激活活性从而完成提交注册申请相关的实验。
在某些实施方式中，激活S1P受体(例如S1P1)的方法也可以在体内实施，即，在哺乳动物的活体内，例如人类患者或测试的动物。本发明的化合物可以通过如上所述的途径之一(例如经口)提供给活生物体，或者可以局部地在身体组织中提供，例如，通过在生物体内的肿瘤的注射。在本发明化合物的存在下，发生受体的激活，并因此可以研究其效应。
本发明的实施方式提供了治疗患者的医疗上需要S1P受体(S1P1)激活的病症的方法，其中以对患者产生有益效果的剂量、频率和持续时间向患者施用本发明的化合物。本发明的化合物可以通过任何合适的方式施用，其实例如上所述。
某些制备实施方式
试剂：(i)Zn(CN)2、Pd(PPh3)4、NMP；(ii)RuCl(对异丙基甲苯)[(R，R)-Ts-DPEN]，HCO2H-TEA复合物；(iii)NH2OH*HCl、Na2CO3或TEA、EtOH；(iv)HOBt、EDC、苯甲酸、DMF。
步骤(ii)中使用RuCl(对异丙基甲苯)[(S，S)-Ts-DPEN]以与路线1所示出的相同方式制备(S)-对映体。步骤(ii)中使用NaBH4以与路线1所示出的相同方式制备外消旋物质。
Figure BPA00001577340400421
试剂：(i)DPPA、DBU、甲苯；(ii)PG＝保护基团，例如，Boc：Pd/C，H2，Boc2O，TEA，MeOH；(iii)NH2OH*HCl，NaHCO3，EtOH；(iv)HOBt，EDC，苯甲酸，DMF(v)脱保护，例如，4M HCl的二噁烷溶液；(vi)(a)R’-LG或R”-LG，其中LG表示离去基团，K2CO3，CH3CN；(b)R1-CO2H或R2-CO2H，HOBt，EDC，DMF或R1-COCl或R2-COCl，TEA，DCM；(c)R1-SO2Cl或R3-SO2Cl，TEA，DCM(d)R2-CHO，HOAc，NaBH4或NaCNBH3或Na(OAc)3BH，MeOH；(e)R1-OCOCl或R2-OCOCl，DIEA，DMF；(f)HN(R5R5)，CDI，TEA，DCM；(g)H2NSO2NH2，Δ，二噁烷；(h)二甲基环氧乙烷，Δ，EtOH；(vii)(a)如果R’或R”＝H，则可以进行反应(vi)(a-d)；(b)如果R’或R”包含酯，则可以进行(i)水解NaOH，EtOH或可以进行(ii)还原NaBH4，MeOH；(c)如果R’或R”包含酸，则可以进行偶联HN(R5R5)，HOBt，EDC，DMF；(d)如果R’或R”包含合适的活化的链烯，则可以进行迈克尔加成HN(R5R5)，DMF。
以与路线2所概述的相同方式，从(S)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈开始制备(R)-对映体。
试剂：(i)硼氢化钠、乙醇、硅胶；(ii)PG＝保护基团，例如，叔丁基二甲基氯甲硅烷(TBDMS chloride)，咪唑；(iii)(4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷))(4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-octamethyl-2，2′-bi(1，3，2-dioxaborolane))，PdCl2(dppf).CH2Cl2，乙酸钾，二噁烷。
Figure BPA00001577340400431
试剂：(i)Zn(CN)2，Pd(PPh3)4，NMP；(ii)对于外消旋物质：硼氢化钠，乙醇，硅胶；对于(R)-茚满醇：(S)-(-)-2-甲基-CBS-氧杂硼啶(oxazaborolidine)，BH3-DMS，甲苯；对于(S)-茚满醇：(R)-(+)-2-甲基-CBS-氧杂硼啶，BH3-DMS，甲苯；(iii)NH2OH*HCl，Na2CO3或TEA，EtOH。
Figure BPA00001577340400432
试剂：(i)草酰氯，DCM；(ii)乙醇胺，Et3N，DCM；(iii)SOCl2，DCM，KOH，MeOH(iv)N-溴代丁二酰亚胺，偶氮异丁腈，DCM；(v)保护的(例如，TBDMS)4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇，K2CO3，Pd(PPh3)4，DME，H2O；(vi)脱保护，例如，TBAF，THF；(vii)SOCl2，DCM；(viii)R’-NH2或R”-NH2，DIPEA，DMA。
试剂：(i)(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，Ti(OEt)4，甲苯；(ii)NaBH4，THF；(iii)4N HCl的二噁烷溶液，MeOH；(iv)Boc2O，TEA，DCM；(v)(4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷))，PdCl2(dppf).CH2Cl2，乙酸钾、二噁烷；(vi)5-(5-溴代噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈，K2CO3，Pd(PPh3)4，DME，H2O；(vii)4N HCl的二噁烷溶液；(viii)(a)R’-LG或R”-LG，其中LG表示离去基团，K2CO3，CH3CN；(b)R1-CO2H或R2-CO2H，HOBt，EDC，DMF或R1-COCl或R2-COCl，TEA，DCM；(c)R1-SO2Cl或R3-SO2Cl，TEA，DCM(d)R2-CHO，HOAc，NaBH4或NaCNBH3或Na(OAc)3BH，MeOH；(e)R1-OCOCl或R2-OCOCl，DIEA，DMF；(f)HN(R5R5)，CDI，TEA，DCM；(g)H2NSO2NH2，Δ，二噁烷；(h)二甲基环氧乙烷，Δ，EtOH；(ix)(a)如果R’或R”＝H，则可以进行反应(viii)(a-d)；(b)如果R’或R”包含酯，则可以进行(i)水解，NaOH，EtOH，或可进行(ii)还原NaBH4，MeOH；(c)如果R’或R”包含酸，则可以进行偶联HN(R5R5)，HOBt，EDC，DMF；(d)如果R’或R”包含合适的活化链烯，则可以进行迈克尔加成HN(R5R5)，DMF。
在步骤(i)中可以使用(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺制备(S)-对映体。
Figure BPA00001577340400451
试剂：(i)HOBt，EDC，2-(3，4-二乙氧基苯基)乙酸，DMF；(ii)SOCl2，DCM；(iii)R’-NH2，DIPEA，DMA。
试剂：(i)Zn(CN)2，Pd(PPh3)4，NMP；(ii)(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，Ti(OEt)4，甲苯；(iii)NaBH4，THF；(iv)4M HCl的二噁烷溶液，MeOH；(v)PG＝保护基团，例如，Boc2O，TEA，DCM；(vi)NH2OH*HCl，TEA，EtOH；(vii)R’-卤化物，NaH，DMF。
Figure BPA00001577340400461
试剂：(i)(a)HOBt，EDC，2-(3，4-二乙氧基苯基)乙酸，DMF(b)脱保护，例如，4N HCl的二噁烷溶液；(ii)(a)R’-LG，其中，LG表示离去基团，K2CO3，CH3CN；(b)如果R’包含酯，则(a)之后用NaOH，EtOH；(c)R’-CO2H，HOBt，EDC，DMF或R’-COCl，TEA，DCM；(d)R’-SO2Cl，TEA，DCM(e)R’-CHO，HOAc，NaBH4或NaCNBH3或Na(OAc)3BH，MeOH。
在步骤(i)中可以使用保护的(R)-1-氨基-N-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-甲脒制备(S)-对映体。
Figure BPA00001577340400462
试剂：(i)HOBt，EDC，4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-羧酸，DMF；(ii)2N HCL的醚溶液，DCM。
路线11：
Figure BPA00001577340400471
试剂：(i)PG＝保护基团，例如，Boc2O，DMAP，ACN；(ii)NH2OH*HCl，Na2CO3，EtOH；(iii)HOBt，EDC，苯甲酸，DMF；(iv)脱保护，例如，4N HCl的二噁烷溶液。
Figure BPA00001577340400472
试剂：(i)NH2OH*HCl，Na2CO3，EtOH；(ii)HOBt，EDC，苯甲酸，DMF。
试剂：(i)NH2OH*HCl，Na2CO3，EtOH；(ii)HOBt，EDC，3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸，DMF。
路线14：
Figure BPA00001577340400481
试剂：(i)PG＝保护基团，例如，叔丁基二甲基氯甲硅烷，TEA，DCM；(ii)Zn(CN)2，Pd(PPh3)4，NMP；(iii)NH2OH*HCl，Na2CO3，EtOH；(iv)HOBt，EDC，苯甲酸，DMF。
实施例
通用方法
1H NMR(400MHz)和13C NMR(100MHz)是在氘氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)或二甲亚砜-D6(DMSO)的溶液中得到的。使用Mestrec 5.3.0和6.0.1处理NMR谱。括号内的13C NMR峰是相同碳的两种旋转异构体(rotomer)。质谱(LCMS)是使用Agilent 1100/6110 HPLC系统得到的，所述系统配备有Thompson ODS-A，100A，5μ(50X4.6mm)柱，使用含有0.1％甲酸的水作为流动相A，和使用含有0.1％甲酸的乙腈作为流动相B。梯度是使用20-100％的流动相B 2.5min，然后保持在100％2.5mins。流速为1mL/min。除非另外指出，LCMS数据是利用该方法得到的。对于疏水性更强的化合物，使用下述的梯度，如方法1所示：40-95％0.5min，保持在95％8.5min，流速为1mL/min。最终的化合物使用方法2检验纯度：5％9min，5-95％ 9min，然后保持在95％ 5min，流速为1mL/min。通过以1mL/min的流速和等强度流动相在Chiralpak AD-H，250x4.6mm柱上分离的峰的积分确定对映体过量。除非另外指出，手性数据是利用该方法得到的。或者，在下面的条件下进行手性分离，如在手性方法1中所示：Chiralpak AY-H，250x4.6mm柱，流速：1mL/min；和等强度流动相。手性方法2：Chiralcel OZ-3，150x4.6mm柱，流速：0.75mL/min；和等强度流动相。在该过程中使用的吡啶、二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃(THF)和甲苯都是来自保持在氮气(N2)下的AldrichSure-Seal瓶。所有的反应都在磁力搅拌下，且温度为外部反应温度。使用配备有Redisep(Teledyne Isco)硅胶的(SiO2)柱的Combiflash Rf快速纯化系统(Teledyne Isco)进行层析。制备型HPLC纯化是在Varian ProStar/PrepStar系统上进行的，使用包含0.05％的三氟乙酸的水作为流动相A，和包含0.05％的三氟乙酸的乙腈作为流动相B。梯度为10-80％的流动相B 12min，保持在80％2min，然后返回至10％2min，流速为22mL/min。可以使用其它与此类似的方法。使用Varian Prostar级分收集器收集级分，并使用SavantSpeedVac Plus真空泵进行蒸发。具有可成盐中心(salt-able center)的化合物假定为三氟乙酸(TFA)盐。使用配备有Biotage微波容器的Biotage Initiator微波反应器进行微波加热。本文中使用了如下缩写：乙酸乙酯(EA)、三乙胺(TEA)、二乙胺(DEA)、二异丙基乙胺(DIEA)、羟基苯并三唑(HOBt)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、异丙醇(IPA)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)。Norit为活性炭。
实验过程
5-氧代-5，6，7，8-四氢萘-1-腈(INT-1)
向搅拌的5-溴-3，4-二氢萘-1(2H)-酮(9.95g，44.2mmol)的NMP(50mL)溶液中加入Zn(CN)2(10.38g，88.4mmol)。通过向溶液中鼓入N230min使混合物脱气两次，然后抽真空。加入Pd(Ph3)4(0.5g，0.44mmol)，并在N2下将混合物加热至110℃。在5h后，将混合物冷却至室温，并倒在冰(600mL)上，使用水(300mL)完成转移。在冰融化后，过滤溶液，并收集所得的固体，悬浮在DCM中，并再次过滤。收集固体，用水洗涤，并用柱色谱纯化(EA/hex)以得到6.9g(91％)的白色固体5-氧代-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-1。LCMS-ESI(m/z)C11H9NO的计算值：171.2；实测值：172.1[M+H]+，tR＝2.95min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.26(dd，J＝7.9，1.4Hz，1H)，7.82(dd，J＝7.6，1.4Hz，1H)，7.44(t，J＝7.8Hz，1H)，3.20(t，J＝6.1Hz，2H)，2.72(dd，J＝7.2，6.1Hz，2H)，2.30-2.17(m，2H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ196.22，147.39，137.18，133.39，131.59，127.19，116.93，112.94，38.48，28.05，22.28。
(R)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈(INT-2)
向搅拌的5-氧代-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-1(3.0g，17.5mmol)的5∶1HCO2∶NEt3(24mL)溶液中加入RuCl(对异丙基甲苯)[(R，R)-Ts-DPEN](0.13g，0.26mmol)。在30℃下搅拌混合物15小时，然后在EA和H2O中分配。合并的有机层用Na2SO4干燥，并层析(EA/hex)以得到2.99g(99％)的白色固体的(R)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-2。LCMS-ESI(m/z)C11H11NO的计算值：173.2；实测值：174.1[M+H]+，156.1[M-NH4]+，tR＝2.60min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(d，J＝7.8Hz，1H)，7.54(dt，J＝8.7，4.4Hz，1H)，7.34-7.26(m，1H)，4.85-4.71(m，2H)，3.48(s，1H)，3.13-2.96(m，1H)，2.90(ddd，J＝17.7，7.8，5.6Hz，1H)，2.15-1.95(m，2H)，1.97-1.76(m，2H)。手性HPLC：(R)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈用5％IPA/己烷洗脱。99.1％ee，tR＝15.3min。
使用INT-1和RuCl(对异丙基甲苯)[(S，S)-Ts-DPEN]以类似的方式制备(S)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-3。手性HPLC：99.4％ee，(S)-对映体的tR＝17.99min。
通用程序1.酰胺肟(amide oxime)的制备
向(R)-或(S)-氰化物(1当量)的EtOH溶液(0.56M)中加入羟胺盐酸盐(3当量)以及NaHCO3或TEA(3当量)，在85℃下加热反应混合1-2h。通过溶剂的去除并在水和DCM之间分配分离有机可溶性酰胺肟。水溶性酰胺肟进行层析或者直接用在环化中。通过在醇溶剂中重结晶可以得到纯的酰胺肟。
(R)-N，5-二羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-甲脒(INT-4)
Figure BPA00001577340400502
使用通用程序1制备。向搅拌的(R)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-2(79.1mg，0.46mmol)的EtOH(2mL)溶液加入羟胺盐酸盐(34.9mg，0.50mmol)和碳酸氢钠(42.2mg，0.50mmol)。在70℃下加热混合物18h。产物通过色谱法(MeOH/DCM)纯化以得到27.3mg(29％)的白色固体(R)-N，5-二羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-甲脒INT-4。LCMS-ESI(m/z)C11H11NO的计算值：173.2；实测值：174.1[M+H]+，156.1[M-NH4]+，tR＝2.60min。以类似的方式由(S)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-3制备(S)-N，5-二羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-甲脒INT-5。
通用程序2.环化为噁二唑胺
在室温下，N2氮气下搅拌合适的酸(1当量)、HOBt(1.3当量)和EDC(1.3当量)的DMF溶液(0.08M，以酸计)。在完全形成HOBt-酸复合物(1-3h)后，将(R)-或(S)-酰胺肟(1.1eq)加入到混合物中。在完全形成偶联的中间体(约0.5-2h)后，加热混合物至75-95℃直至环化完成(8-12h)。用饱和的NaHCO3稀释反应混合物，并用EA萃取。干燥合并的有机提取物，浓缩，并可以通过色谱法(EA/己烷)、制备型HPLC或重结晶纯化。
(R)-5-(3-(5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物1)。
Figure BPA00001577340400511
使用通用过程2制备。向搅拌的3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(16.7mg，0.08mmol)的DMF(1mL)溶液加入HOBt(14.3mg，0.11mmol)和EDCI(20.3mg，0.11mmol)。在搅拌30分钟后，加入(R)-N，5-二羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-甲脒INT-4(27.3mg，0.09mmol)的DMF(1.5mL)溶液。在室温下再搅拌60min后，将混合物加热到90℃保持15h。混合物用EA稀释，并用NaHCO3洗涤。干燥合并的有机层、浓缩、层析(EA/己烷)以得到12.72mg(42.4％)的白色固体的(R)-5-(3-(5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈。LCMS-ESI(m/z)C22H21N3O3的计算值：375.4；实测值：376.1[M+H]+，tR＝3.73min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.42(d，J＝2.2Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.97(dd，J＝7.7，1.3Hz，1H)，7.66(d，J＝7.2Hz，1H)，7.38(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，4.91-4.83(m，1H)，4.79(dq，J＝12.0，6.0Hz，1H)，3.20(dt，J＝17.8，5.4Hz，1H)，3.01(dt，J＝13.3，6.4Hz，1H)，2.13-1.81(m，4H)，1.79(d，J＝7.2Hz，1H)，1.47(d，J＝5.6Hz，6H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ172.70，169.48，162.75，140.10，137.4，134.13，133.88，131.68，129.96，126.18，125.97，116.82，115.26，113.54，103.95，72.73，68.47，31.62，28.50，21.73，18.57。手性HPLC：(R)-5-(3-(5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈用10％IPA/己烷洗脱：99.4％ee，tR＝40.85min。
以类似的方式由(S)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-5制备(S)-5-(3-(5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈2。手性HPLC：99.1％ee，(S)-对映体的tR＝38.19min。
(S)-5-叠氮基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈(INT-6)
Figure BPA00001577340400521
将在N2气氛下搅拌的(R)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-2(3.00g，17.32mmol)的甲苯(16mL)溶液冷却至0℃。加入DPPA(9.53g，34.64mmol)，接着在20min内逐滴加入DBU(3.16mL，20.78mmol)。在0℃下搅拌混合物4h，然后在2h内缓慢升温到室温，然后浓缩。所得的粗制混合物用EA稀释，并用NaHCO3洗涤。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，和层析(EA/己烷)以得到2.49g(72.6％)的白色固体(S)-5-叠氮基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-6。LCMS-ESI(m/z)C11H10N4的计算值：198.2；实测值：156.1[M-N3]+，tR＝3.65min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(dd，J＝7.6，1.2Hz，1H)，7.56(dd，J＝7.8，0.6Hz，1H)，7.33(t，J＝7.7Hz，1H)，4.59(t，J＝4.4Hz，1H)，3.08(dt，J＝18.0，5.1Hz，1H)，2.99-2.83(m，1H)，2.15-1.96(m，3H)，2.00-1.81(m，1H)。13CNMR(101MHz，DMSO)δ141.05，135.58，133.47，132.66，126.58，117.43，113.21，58.74，28.28，27.54，18.27。
以类似的方式由(S)-5-羟基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-3制备(R)-5-叠氮基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈 INT-7。
(S)-(5-氰基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-8)
Figure BPA00001577340400531
向搅拌的(S)-5-叠氮基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-6(3.1g，15.63mmol)的MeOH(50mL)溶液加入10％Pd/C(500mg)、(Boc)2O(6.83g，31.27mmol)和Et3N(3.16g，31.27mmol)。用H2(3x)吹扫和冲洗反应混合物，并在H2下搅拌。在3h后，用硅藻土过滤混合物，用MeOH清洗。浓缩MeOH滤液，溶解在EA中，并用NaHCO3和盐水洗涤。干燥有机层(MgSO4)，浓缩并层析(EA/己烷)。将所得的物质在己烷中结晶以得到3.45g(81％)的白色固体(S)-(5-氰基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-8。LCMS-ESI(m/z)C16H20N2O2的计算值：272.34；实测值：156.1[M-NHBoc]+，tR＝3.77min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(d，J＝7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝7.5Hz，1H)，7.31-7.20(m，1H)，4.86(s，1H)，4.75(d，J＝8.9Hz，1H)，3.06-2.85(m，2H)，2.07(dt，J＝11.3，5.1Hz，1H)，1.91(s，2H)，1.86-1.71(m，1H)，1.48(s，9H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ155.38，140.70，139.12，133.03，131.63，126.41，117.62，112.42，79.62，48.25，29.75，28.28，27.77，19.36。手性HPLC：用2.5％EtOH/己烷洗脱(S)-(5-氰基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯：92.4％ee，tR＝14.22min。
以类似的方式由(R)-5-叠氮基-5，6，7，8-四氢萘-1-腈INT-7制备(R)-(5-氰基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-9。手性HPLC：99.6％ee，(R)-对映体的tR＝11.60min。
(S)-(5-(N-羟基甲脒基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-10)
Figure BPA00001577340400532
使用通用程序1制备。向搅拌的(S)-(5-氰基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-8(3.10g，11.38mmol)的EtOH(25mL)溶液中加入羟胺盐酸盐(2.77g，39.84mmol)和NEt3(3.17mL，22.77mmol)。在85℃后加热15h后，浓缩混合物，重溶解在DCM中，并用NaHCO3洗涤。干燥合并的有机层、浓缩并层析(MeOH/DCM)以得到3.56g粗制的(S)-(5-(N-羟基甲脒基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-10(58％产物，按UV面积)，其被用于下一反应中而无需进一步纯化。LCMS-ESI(m/z)C16H23N3O3的计算值：305.37；实测值：306.2[M+H]+，tR＝2.00min。
以类似的方式由(R)-(5-氰基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-9制备(R)-(5-(N-羟基甲脒基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-11。
(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-12)
Figure BPA00001577340400541
使用通用程序2制备。向搅拌的3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(556mg，2.72mmol)的DMF(10mL)溶液中加入HOBt(476.6mg，3.53mmol)和EDCI(677.9mg，3.53mmol)。在搅拌30min分钟后，加入(S)-(5-(N-羟基甲脒基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-10(3.56g粗品，约2.99mmol)。在室温下再搅拌90min后，将混合物加热到90℃15h。混合物用EA稀释，并用NaHCO3洗涤。干燥合并的有机层、浓缩层析(EA/己烷)以得到1.89g(46％)的白色固体的(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-12。LCMS-ESI(m/z)C27H30N4O4的计算值：474.6；没有观察到M/Z，tR＝4.23min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.42(d，J＝2.1Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.92(dd，J＝7.7，1.1Hz，1H)，7.56(d，J＝7.6Hz，1H)，7.32(dd，J＝20.3，12.6Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，4.94(d，J＝6.0Hz，1H)，4.88-4.72(m，1H)，3.23-3.08(m，1H)，3.07-2.94(m，1H)，2.06(d，J＝12.6Hz，1H)，1.97-1.78(m，3H)，1.53-1.43(m，15H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ172.64，169.40，162.69，155.43，138.65，137.55，134.04，133.83，131.68，129.55，126.08，125.97，116.74，115.20，113.53，103.87，79.44，72.69，48.97，29.73，28.40，21.68，19.71，14.14。
以类似的方式由(R)-(5-(N-羟基甲脒基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-11制备(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-13。
(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物4)
Figure BPA00001577340400551
向搅拌的(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-12(0.90g，1.9mmol)的二噁烷(10mL)溶液中加入4N HCl/二噁烷(2.5mL)。在60℃下搅拌5.5h后，浓缩混合物以得到0.8g(100％)的白色固体的(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈4的盐酸盐。通过制备型HPLC纯化分析纯的样品，且通过在NaHCO3和EA之间分配制备游离胺。LCMS-ESI(m/z)C22H22N4O2的计算值：374.4；实测值：358.1[M-NH2]+，tR＝2.45min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.63(s，2H)，8.50(d，J＝2.2Hz，1H)，8.39(dd，J＝9.0，2.3Hz，1H)，7.95(dd，J＝7.7，1.0Hz，1H)，7.85(d，J＝7.5Hz，1H)，7.56(d，J＝9.2Hz，1H)，7.49(t，J＝7.7Hz，1H)，4.98(hept，J＝6.0Hz，1H)，4.55(t，J＝5.3Hz，1H)，3.11(dt，J＝17.9，5.5Hz，1H)，2.94(dt，J＝13.9，6.1Hz，1H)，2.18-1.88(m，3H)，1.88-1.71(m，1H)，1.38(d，J＝6.0Hz，6H)。13C NMR(101MHz，DMSO)δ172.91，168.60，162.52，137.73，134.60，134.09，133.80，132.08，130.30，126.29，126.06，115.92，115.24，114.93，102.49，72.54，66.34，48.02，27.57，26.54，21.47，17.68。手性HPLC：用8％EtOH/己烷，用0.3％DEA洗脱(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈(手性方法1)：94.2％ee，tR＝42.7min。
以类似的方法由(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-13制备(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈3。手性HPLC(手性方法1)：99.9％ee，(R)-对映体的tR＝39.72min。
通用程序3.四氢萘脲的制备
向搅拌的CDI(1.2当量)的DCM(0.16M)溶液中加入(R)-或(S)-四氢萘胺(1当量)和Et3N(3当量)的DCM溶液(0.01M)。在搅拌15h之后，在室温下将该溶液加入到包含合适的胺(3当量)和Et3N(3当量)在DCM中的第二溶液(0.4M)中。在室温下搅拌所得的混合物直至所有的起始原料被消耗。蒸发溶剂，并在制备型HPLC后分离纯产物。
使用通用程序3制备化合物5-20。
(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(化合物8)
Figure BPA00001577340400561
使用通用程序3制备：LCMS-ESI(m/z)C26H27N5O4的计算值：473.5；实测值：474.2[M+H]+，tR＝3.21min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(d，J＝2.2Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.91(dd，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.53(t，J＝6.1Hz，1H)，7.32(dd，J＝20.1，12.4Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，5.13(d，J＝8.0Hz，1H)，4.79(dt，J＝12.2，6.1Hz，1H)，4.68(tt，J＝6.7，4.4Hz，1H)，4.35(d，J＝8.7Hz，1H)，4.25-4.14(m，2H)，3.85(dd，J＝8.8，4.1Hz，2H)，3.14(t，J＝12.1Hz，1H)，3.10-2.92(m，1H)，2.16-1.96(m，1H)，1.99-1.64(m，4H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。手性HPLC：用15％的水/MeOH洗脱(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(手性方法2)：91.4％ee，tR＝15.52min。
以类似的方式制备(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺7。手性HPLC：99.94％ee，tR＝17.17min(手性方法2)。
(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)吡咯烷-1-甲酰胺(化合物12)。
Figure BPA00001577340400562
使用通用程序3制备：LCMS-ESI(m/z)C27H29N5O3的计算值：471.55；实测值：472.2[M+H]+，tR＝3.78min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(d，J＝2.1Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.90(dd，J＝7.6，1.1Hz，1H)，7.59(d，J＝7.6Hz，1H)，7.33(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，5.25-5.12(m，1H)，4.79(hept，J＝6.0Hz，1H)，4.45(t，J＝21.8Hz，1H)，3.36(t，J＝6.4Hz，4H)，3.23-3.09(m，1H)，3.02(dt，J＝18.0，6.0Hz，1H)，2.16-1.99(m，1H)，2.01-1.79(m，7H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。
(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)吗啉-4-甲酰胺(化合物15)
Figure BPA00001577340400571
使用通用程序3制备：LCMS-ESI(m/z)C27H29N5O4的计算值：487.5；实测值：488.2[M+H]+，tR＝3.58min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(d，J＝2.2Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.91(dd，J＝7.7，1.1Hz，1H)，7.55(t，J＝10.0Hz，1H)，7.33(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，5.19(dd，J＝12.9，5.3Hz，1H)，4.86-4.75(m，1H)，4.72(d，J＝8.1Hz，1H)，3.76-3.63(m，4H)，3.36(dd，J＝11.6，7.1Hz，4H)，3.16(dt，J＝16.7，5.4Hz，1H)，3.02(dt，J＝12.6，5.9Hz，1H)，2.14-1.98(m，2H)，1.94-1.81(m，2H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。
(R)-N-((R)-5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-甲酰胺(化合物20)
Figure BPA00001577340400572
使用通用程序3制备：向搅拌的CDI((9.5mg，0.06mmol)的DCM(1mL)溶液中逐滴加入(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(20mg，0.05mmol)和Et3N(20.3μL，0.15mmol)的DCM(1mL)溶液。在室温下搅拌15h后，在室温下将该溶液逐滴加入到包含DCM(1mL)中的(R)-3-二甲基氨基吡咯烷(18.6mg，0.15mmol)的另一溶液中。在室温下搅拌反应物6.5h。蒸发溶剂，并通过制备型HPLC分离纯产物以得到17.5mg(70％)的(R)-N-((R)-5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-甲酰胺20。LCMS-ESI(m/z)C29H34N6O3的计算值：514.6；实测值：515.3[M+H]+，tR＝2.56min.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，8.31(dt，J＝8.7，4.3Hz，1H)，7.91(d，J＝7.6Hz，1H)，7.52(d，J＝7.6Hz，1H)，7.34(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.2Hz，1H)，5.13(d，J＝6.9Hz，1H)，4.86-4.73(m，1H)，4.64(d，J＝8.2Hz，1H)，3.91(dd，J＝10.4，7.3Hz，1H)，3.80-3.56(m，3H)，3.41(dd，J＝17.5，8.3Hz，1H)，3.15(d，J＝18.0Hz，1H)，3.10-2.93(m，1H)，2.85(s，6H)，2.46(m，2H)，2.05(dd，J＝9.2，4.8Hz，1H)，1.88(m，3H)，1.45(dd，J＝13.9，6.1Hz，6H)。
通用程序4：通过酰基氯制备四氢萘酰胺
向搅拌的(R)-或(S)-四氢萘胺盐酸盐(1当量)的DCM溶液中加入酰基氯(2当量)和NEt3(2当量)。在室温下搅拌反应物1h。蒸发溶剂，并通过制备型HPLC纯化混合物。
使用通用程序4制备化合物21-25。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙酰胺(化合物21)
Figure BPA00001577340400581
使用通用程序4制备：向搅拌的(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(20mg，0.05mmol)的DCM(0.5mL)溶液中加入乙酰氯(7μL，0.10mmol)和NEt3(14μL，0.10mmol)。在搅拌1h后，蒸发溶剂，并通过制备型HPLC纯化残留物以得到11.3mg(56％)的(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙酰胺(化合物21)。LCMS-ESI(m/z)C24H24N4O3的计算值：416.5；实测值：417.2[M+H]+，tR＝3.56min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(d，J＝2.2Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.92(dd，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.48(d，J＝7.6Hz，1H)，7.33(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，5.83(d，J＝8.6Hz，1H)，5.36-5.21(m，1H)，4.79(hept，J＝6.0Hz，1H)，3.16(dt，J＝17.9，6.0Hz，1H)，3.03(dt，J＝18.2，6.3Hz，1H)，2.10-1.99(m，4H)，1.97-1.79(m，3H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐4制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙酰胺22。
通用程序5：四氢萘氨磺酰胺的制备
向搅拌的(R)-或(S)-四氢萘胺盐酸盐(1当量)的二噁烷溶液中加入硫酰胺(5当量)和DIEA(3当量)。在110℃下搅拌反应物18h。蒸发溶剂，并通过制备型HPLC纯化混合物。
使用通用程序5制备化合物26和27。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰胺(化合物26)
Figure BPA00001577340400591
使用通用程序5制备：向搅拌的(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(50mg，0.12mmol)的二噁烷(3mL)溶液中加入硫酰胺(58mg，0.61mmol)和DIEA(47.2μL，0.37mmol)，并将混合物加热至110℃ 14h。蒸发溶剂，并通过制备型HPLC纯化残留物以得到22.8mg(42％)的(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰胺26。LCMS-ESI(m/z)C22H23N5O4S的计算值：453.5；实测值：454.1[M+H]+，tR＝3.47min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(d，J＝2.2Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.97(dd，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.72(d，J＝7.7Hz，1H)，7.38(t，J＝7.8Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，4.78(ddd，J＝13.4，11.7，5.7Hz，2H)，4.59(d，J＝19.8Hz，2H)，4.55(d，J＝8.2Hz，1H)，3.19(dt，J＝18.0，5.6Hz，1H)，3.02(dt，J＝18.2，7.2Hz，1H)，2.23-2.03(m，2H)，1.92(dt，J＝12.4，6.3Hz，2H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐4制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰胺27。
通用程序6：通过磺酰氯制备四氢萘磺酰胺
在室温下向(R)-或(S)-四氢萘胺盐酸盐(1当量)的DCM溶液(0.05M)加入TEA(2当量)和合适的磺酰氯(1-2当量)。在室温下搅拌反应混合物18h。蒸发溶剂，并在制备型HPLC纯化后分离产物。
使用通用程序6制备化合物28-33。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)甲磺酰胺(化合物28)
Figure BPA00001577340400601
使用通用程序6制备：在0℃下向搅拌的(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(20mg，0.05mmol)的DCM(1mL)溶液加入TEA(20μL，0.15mmol)和甲磺酰氯(4.5μL，0.06mmol)。在2h内使混合物升温至室温，蒸发溶剂，并通过制备型HPLC纯化粗混合物以得到12.8mg(58％)的(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)甲磺酰胺(化合物28)。LCMS-ESI(m/z)C23H24N4O4S的计算值：452.5；实测值：453.1[M+H]+，tR＝3.68min.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(t，J＝3.5Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.96(dd，J＝7.7，1.1Hz，1H)，7.67(d，J＝7.7Hz，1H)，7.38(t，J＝7.7Hz，1H)，7.16-7.07(m，1H)，4.88-4.70(m，1H)，4.54(d，J＝8.4Hz，1H)，3.19(dt，J＝18.0，5.9Hz，1H)，3.10(d，J＝5.0Hz，3H)，3.09-2.95(m，1H)，2.14(qt，J＝14.5，7.3Hz，1H)，2.06-1.83(m，3H)，1.47(t，J＝5.5Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐4制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)甲磺酰胺29。
(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-甲氧基乙磺酰胺(化合物31)
Figure BPA00001577340400602
使用环丙烷磺酰氯通过通用程序6制备。LCMS-ESI(m/z)C25H26N4O4S的计算值：478.6；实测值：479.1[M+H]+，tR＝3.84min。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-甲氧基乙磺酰胺(化合物32)
使用2-甲氧基乙磺酰氯通过通用程序6制备。LCMS-ESI(m/z)C25H28N4O5S的计算值：496.58；实测值：519.1[M+Na]+，tR＝3.83min.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(d，J＝2.2Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.99-7.92(m，1H)，7.74(d，J＝7.6Hz，1H)，7.37(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，4.85-4.71(m，2H)，4.68-4.60(m，1H)，3.93-3.76(m，2H)，3.47-3.31(m，5H)，3.17(dt，J＝18.0，6.0Hz，1H)，3.02(dt，J＝18.1，6.7Hz，1H)，2.20-1.82(m，4H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。手性HPLC：(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-甲氧基乙磺酰胺32用10％的水/MeOH洗脱(手性方法2)：99.98％ee，tR＝21.07min。
以类似的方式由4制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-甲氧基乙磺酰胺33。手性HPLC：99.04％ee，tR＝18.57min(手性方法2)。
(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯(INT-14)。
Figure BPA00001577340400612
使用通用程序6制备：向搅拌的(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(0.15g，0.37mmol)的DCM(5mL)的溶液中加入TEA(76μL，0.55mmol)和2-(氯磺酰基)乙酸甲酯(76mg，0.44mmol)。加入额外的TEA和2-(氯磺酰基)乙酸甲酯以驱动反应在24小时内完成。使粗制的反应混合物在DCM和饱和的NaHCO3之间分配。有机层用Na2SO4干燥，浓缩，并通过柱色谱(EA/己烷)纯化以得到0.11g(57％)的(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯INT-14。LCMS-ESI(m/z)C25H26N4O6S的计算值：510.6；实测值：511.1[M+H]+，tR＝3.73min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.42(d，J＝2.2Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，8.01-7.93(m，1H)，7.74(d，J＝7.8Hz，1H)，7.39(t，J＝7.8Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，5.00(d，J＝8.4Hz，1H)，4.81(dq，J＝18.3，5.9Hz，2H)，4.25-4.00(m，2H)，3.83(s，3H)，3.20(dt，J＝18.1，5.9Hz，1H)，3.12-2.97(m，1H)，2.22-2.01(m，2H)，2.02-1.83(m，2H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐4制备(S)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯INT-15。
通用程序7：四氢萘磺酰胺酸的制备
在室温下，向搅拌的(R)-或(S)-四氢萘磺酰胺酯(1当量)的MeOH溶液(0.2M)中加入6N NaOH(2当量)。在室温下搅拌反应物6h。粗制反应物用水稀释，用1N HCl酸化，并用DCM和EA萃取。有机层用Na2SO4干燥，浓缩，并在制备型HPLC纯化后分离。
使用通用程序7制备化合物34和35。
(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸(化合物34)
Figure BPA00001577340400621
使用通用程序7制备：向搅拌的(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯INT-14(0.082g，0.16mmol)的MeOH(1.5mL)溶液中加入6N NaOH(0.08mL)。在室温下搅拌反应物6h。粗制反应物用水稀释，用1N HCl酸化，并用DCM和EA萃取。有机层用Na2SO4干燥，浓缩，并在制备型HPLC纯化后分离以得到0.057g(72％)的(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸34。通过制备型HPLC纯化制备分析纯的样品。LCMS-ESI(m/z)C24H26N4O6S的计算值：496.5；实测值：520.1[M+Na]+，tR＝3.47min。
以类似的方式由(S)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯INT-15制备(S)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸35。
通用程序8：四氢萘磺酰胺醇的制备
在室温下，向搅拌的(R)-或(S)-四氢萘磺酰胺酯(1当量)的THF溶液(0.06M)中加入硼氢化钠(2.5当量)。将反应混合物加热至75℃，并逐滴加入甲醇(1当量)。在1h后，使反应物冷却，浓缩，并通过制备型HPLC纯化。
使用通用程序8制备化合物36和37。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-羟基乙磺酰胺(化合物37)
Figure BPA00001577340400631
使用通用程序8制备：在室温下，向搅拌的(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯INT-14(0.025g，0.05mmol)的THF(25mL)的溶液中加入硼氢化钠(0.05g，0.12mmol)。将反应物加热至75℃，并加入甲醇(0.02mL，0.05mmol)。在1h后，冷却反应物并浓缩和通过制备型HPLC纯化以得到16.0mg(66％)的(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-羟基乙磺酰胺37。LCMS-ESI(m/z)C24H26N4O5S的计算值：482.6；实测值：505.1[M+Na]+，tR＝3.46min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.39(dd，J＝5.4，2.4Hz，1H)，8.35-8.25(m，1H)，7.95(dt，J＝7.7，3.9Hz，1H)，7.67(d，J＝7.5Hz，1H)，7.43-7.32(m，1H)，7.12(t，J＝7.5Hz，1H)，4.80(m，3H)，4.12(t，J＝5.2Hz，2H)，3.46-3.28(m，2H)，3.17(dt，J＝18.0，5.9Hz，1H)，3.02(dt，J＝18.1，6.8Hz，1H)，2.68(s，1H)，2.12(m，1H)，2.07-1.82(m，3H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ172.82，169.22，162.81，137.73，136.90，134.12，133.89，132.15，130.28，126.46，126.33，116.65，115.22，113.57，103.93，72.78，57.32，56.17，52.54，30.60，28.06，21.72，19.04。手性HPLC：(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-羟基乙磺酰胺37用15％的水/甲醇洗脱(手性方法2)：99.82％ee，tR＝22.23min。
以相同的方式由(S)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸甲酯INT-15制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-羟基乙磺酰胺36。手性HPLC：91.7％ee，tR＝19.83min(手性方法2)。
通用程序9：四萘磺酰胺酰胺的制备
向搅拌的(R)-或(S)-四氢萘磺酰胺酸(1当量)的DMF溶液(0.25M)中加入EDC和N-羟基苯并三唑。在5min后，加入胺，并在室温下搅拌反应混合物18h。用NaHCO3稀释粗制反应物，并用EA萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，并通过制备型HPLC纯化。
使用通用程序9制备化合物38-43。
(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)-N，N-二甲基乙酰胺(化合物40)
Figure BPA00001577340400641
使用通用程序9制备：向搅拌的(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸34(15mg，0.05mmol)的DMF(0.5mL)溶液中加入N-羟基苯并三唑(6.1mg，0.05mmol)和EDC(8.7mg，0.05mmol)。在5min后，加入二甲胺(40wt％的THF溶液，50μL，0.09mmol)，在室温下搅拌反应混合物18h。用饱和的NaHCO3稀释粗制反应物，并用EA萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，并通过制备型HPLC纯化以得到4.41mg(28％)的(R)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)-N，N-二甲基乙酰胺40。LCMS-ESI(m/z)C26H29N5O5S的计算值：523.6；实测值：546.2[M+Na]+，tR＝3.58min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(d，J＝2.1Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.96(dd，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H)，7.38(t，J＝7.8Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，5.36(t，J＝17.3Hz，1H)，4.88-4.73(m，2H)，4.27(d，J＝14.6Hz，1H)，4.07(d，J＝14.6Hz，1H)，3.24-3.09(m，4H)，3.09-2.97(m，4H)，2.23-2.08(m，2H)，2.10-1.84(m，2H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ172.75，169.37，163.15，162.77，137.79，136.92，134.13，133.90，132.50，130.18，126.36，126.17，116.79，115.25，113.55，103.96，72.74，55.46，53.05，38.22，35.98，29.84，28.10，21.73，19.10。
以类似的方式由(S)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)乙酸35制备((S)-2-(N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨磺酰基)-N，N-二甲基乙酰胺41。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙烯磺酰胺INT-16
Figure BPA00001577340400651
在0℃下向搅拌的(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(100mg，0.24mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TEA(170μL，1.2mmol)和2-氯乙磺酰氯(76μL，0.73mmol)。将反应混合物升温至室温，并搅拌30分钟。除去溶剂，并通过色谱法(EA/己烷)纯化产物以得到83.0mg(75％)的白色固体的(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙烯磺酰胺INT-16。LCMS-ESI(m/z)C24H24N4O4S的计算值：464.5；实测值：465.1[M+H]+，tR＝3.83min.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(d，J＝2.2Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.96(dd，J＝7.7，1.2Hz，1H)，7.62(t，J＝11.0Hz，1H)，7.38(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H)，6.66(dt，J＝26.0，13.0Hz，1H)，6.38(d，J＝16.5Hz，1H)，6.03(dd，J＝10.1，5.2Hz，1H)，4.86-4.73(m，1H)，4.68-4.57(m，1H)，4.50(d，J＝8.3Hz，1H)，3.18(dt，J＝18.1，5.8Hz，1H)，3.02(dt，J＝18.1，6.8Hz，1H)，2.15-1.96(m，2H)，1.97-1.79(m，2H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐4制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙烯磺酰胺INT-17。
通用程序10：通过迈克尔加成制备四氢萘磺酰胺
向(R)-或(S)-四氢萘乙烯基磺酰胺(1当量)的DCM溶液(0.1M)中加入TEA(5当量)和合适的胺(5当量)。在室温下搅拌反应混合物18h。通过制备型HPLC纯化产物。
使用通用程序10制备化合物44-47。
(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-(二甲氨基)乙磺酰胺(化合物44)
Figure BPA00001577340400661
使用通用程序10制备。向((R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙烯磺酰胺INT-16(40mg，0.09mmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入2N甲胺的THF溶液(0.22mL，0.43mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18h。通过制备型HPLC纯化粗制产物以得到24.6mg(54％)的白色固体的(R)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-(二甲氨基)乙磺酰胺的TFA盐44。LCMS-ESI(m/z)C26H31N5O4S的计算值：509.6；实测值：510.2[M+H]+，tR＝2.61min.1H NMR(400MHz，CDCl3)8.41-8.32(m，1H)，8.33-8.26(m，1H)，7.92(t，J＝6.9Hz，1H)，7.61(t，J＝7.2Hz，1H)，7.35(dd，J＝14.5，7.1Hz，1H)，7.11(d，J＝9.1Hz，1H)，4.86-4.64(m，2H)，3.61(ddt，J＝27.2，13.7，7.8Hz，4H)，3.23-3.06(m，1H)，3.10-2.91(m，1H)，2.93(d，J＝30.3Hz，6H)，2.09(ddd，J＝28.4，16.5，12.3Hz，1H)，1.95(ddd，J＝15.1，8.3，3.5Hz，3H)，1.46(t，J＝6.0Hz，6H)。
以类似方式由((S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)乙烯磺酰胺INT-17制备(S)-N-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)-2-(二甲氨基)乙磺酰胺45。
(R)-2-异丙氧基-5-(3-(5-((2-(甲基磺酰基)乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈(化合物48)
Figure BPA00001577340400671
向(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐3(20mg，0.05mmol)的DMA(0.5mL)溶液中加入TEA(136μL，0.97mmol)和甲基乙烯基砜(52mg，0.5mmol)。将反应物加热至80℃24h。通过制备型HPLC纯化粗制反应混合物以得到(R)-2-异丙氧基-5-(3-(5-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈48。LCMS-ESI(m/z)C25H28N4O4S的计算值：480.6；实测值：481.2[M+H]+，tR＝2.58min.1H NMR(400MHz，CDCl3)68.37(t，J＝9.1Hz，1H)，8.31(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，8.08(d，J＝7.1Hz，1H)，7.60(d，J＝7.6Hz，1H)，7.42(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.1Hz，1H)，4.85-4.73(m，1H)，4.53(t，J＝5.0Hz，1H)，3.63(dd，J＝15.3，4.0Hz，2H)，3.61-3.50(m，2H)，3.33-3.17(m，1H)，3.18-3.04(m，1H)，3.04(d，J＝8.6Hz，3H)，2.16(ddd，J＝29.6，18.8，12.2Hz，2H)，2.00(dd，J＝36.4，18.4Hz，2H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐4制备(S)-2-异丙氧基-5-(3-(5-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈，化合物49。
(R)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯(INT-18)
向搅拌的(R)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈3(119mg，0.32mmol)的CH3CN(5.0mL)溶液中加入溴乙酸甲酯(53.5μL，0.35mmol)和K2CO3(138mg，1.27mmol)。在搅拌18h后，混合物用盐水稀释，并用NaHCO3洗涤。有机层用Na2SO4干燥，并浓缩。将所得的粗制固体通过色谱法(MeOH/DCM)纯化以得到113.1mg(79％)的(R)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-18。LCMS-ESI(m/z)C25H26N4O4的计算值：446.5；实测值：447.2[M+H]+，tR＝2.52min。
以类似的方式由(S)-5-(3-(5-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈4制备(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-19。
(S)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯(INT-20)
Figure BPA00001577340400681
向搅拌的(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-19(128.0mg，0.29mmol)的DCM(6.0mL)溶液中加入Boc酸酐(125.1mg，0.57mmol)和TEA(120μL，0.86mmol)。在搅拌18h后，浓缩混合物。将所得的粗制固体通过色谱法(EA/己烷)纯化以得到119mg(76％)的(S)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-20。LCMS-ESI(m/z)C30H34N4O6的计算值：546.61；没有观察到M/Z，tR＝4.32min。
以类似的方式由(R)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-18制备(R)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-21。
(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(INT-22)
Figure BPA00001577340400682
在75℃下向搅拌的(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-20(35mg，0.06mmol)的THF(6.0mL)溶液中加入硼氢化钠(6mg，0.16mmol)。在搅拌0.5h后，加入MeOH(7.7μL，0.19mmol)，并且混合物再加热1.5h。浓缩混合物，并通过色谱法(EA/己烷)纯化所得的固体以得到16mg(48％)的(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-22。LCMS-ESI(m/z)C29H34N4O5的计算值：518.6；实测值：419.2[M-Boc+H]+，tR＝4.10min 。
以类似的方式由(R)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-21制备(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-23。
通用程序11：四氢萘胺的Boc脱保护
向搅拌的Boc保护的(R)-或(S)-四氢萘胺的二噁烷溶液中加入4N HCl/二噁烷(4-10当量)。在50℃下加热反应混合物18h。浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化所得的固体。
使用通用程序11制备化合物50-53。
(R)-5-(3-(5-((2-羟基乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物50)
Figure BPA00001577340400691
使用通用程序11制备。向搅拌的(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-23(15mg，0.03mmol)的二噁烷(1mL)溶液中加入4N HCl/二噁烷(116μL，0.116mmol)。在50℃下加热18h后，浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化所得固体以得到9.53mg(79％)的(R)-5-(3-(5-((2-羟基乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈50。LCMS-ESI(m/z)C24H26N4O3的计算值：418.5；实测值：419.2[M+H]+，tR＝2.52min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，8.04(d，J＝7.7Hz，1H)，7.60(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39(t，J＝7.7Hz，1H)，7.12(d，J＝9.1Hz，1H)，4.88-4.70(m，1H)，4.54(s，1H)，3.78(d，J＝12.1Hz，2H)，3.62(s，2H)，3.24(dt，J＝18.0，5.6Hz，1H)，3.18-2.89(m，3H)，2.16(d，J＝5.2Hz，2H)，2.10-1.75(m，2H)，1.47(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-22制备(S)-5-(3-(5-((2-羟基乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈51。
(S)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸(INT-24)
向搅拌的(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-20(93.2mg，0.17mmol)的MeOH(2ml)溶液中加入10滴1N NaOH。在50℃下搅拌混合物2小时，然后用H2O稀释，并用1N HCl中和。水溶液用DCM和EA萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，并浓缩以得到61mg(67％)的白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸INT-24。LCMS-ESI(m/z)C29H32N4O6的计算值：532.6；实测值：358.1[M-2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸]+，tR＝3.97min。
以类似的方式由(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸甲酯INT-21制备(R)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸INT-25。
(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸(化合物53)
使用通用程序11制备。在室温下搅拌(S)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸INT-24(30mg，0.06mmol)在4N HCl/二噁烷(200μl，50mmol)中的溶液18h。浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残留物以得到21mg(67％)的(S)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸53的TFA盐。LCMS-ESI(m/z)C24H24N4O4的计算值：432.5；实测值：358.1[M-2-氨基乙酸]+，tR＝2.65min。
以类似的方式由(R)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸INT-25制备(R)-2-((5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸52。
通用程序12：四萘氨基酰胺的制备
向Boc保护的(R)-或(S)-四氢萘氨基酸DMF加入N-羟基苯并三唑(2当量)和EDC(2当量)。在10min后，加入合适的胺(10当量)，并在室温下搅拌反应混合物18h。用NaHCO3稀释粗制反应混合物，并用EA萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，并通过制备型HPLC纯化。
使用通用程序12制备化合物54和55。
(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(INT-26)
使用通用程序12制备。向搅拌的(S)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸INT-24(30mg，0.06mmol)的DMF(0.5mL)溶液中加入N-羟基苯并三唑(15.21mg，0.11mmol)和EDC(21.63mg，0.11mmol)。在10min后，加入吡咯烷(46μL，0.56mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18h。用饱和的NaHCO3稀释所述粗制反应物，并用EA萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，并通过制备型HPLC纯化以得到26.9mg(82％)的(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。LCMS-ESI(m/z)C33H39N5O5的计算值：585.7；实测值：358.1[M-(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯]+，tR＝4.18min。
以类似的方式由(R)-2-((叔丁氧基羰基)(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)氨基)乙酸INT-25制备(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-27。
(R)-2-异丙氧基-5-(3-(5-((2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢奈-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈(化合物54)
使用通用程序11制备。在室温下搅拌(R)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-氧代-2-(吡咯烷1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-27(18mg，0.03mmol)在4N HCl/二噁烷(1mL)中的溶液18h。浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化以得到12mg(68％)的(R)-2-异丙氧基-5-(3-(5-((2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈54的TFA盐。LCMS-ESI(m/z)C28H31N5O3的计算值：485.6；实测值：486.2[M+H]+，tR＝2.60min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(d，J＝2.2Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，8.07(d，J＝7.6Hz，1H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，7.44(t，J＝7.7Hz，1H)，7.13(d，J＝9.1Hz，1H)，4.87-4.68(m，2H)，3.98-3.80(m，2H)，3.53-3.03(m，7H)，2.17(ddd，J＝17.7，10.4，5.5Hz，3H)，2.04-1.79(m，5H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。
以类似的方式由(S)-(5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，2，3，4-四氢萘-1-基)(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-26制备(S)-2-异丙氧基-5-(3-(5-((2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)氨基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈55。
4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-醇(INT-28)
Figure BPA00001577340400722
在0℃下向搅拌的4-溴茚满酮(3g，14.2mmol)的无水EtOH(30mL)溶液中加入硼氢化钠(0.36g，9.5mmol)和硅胶(2g)。在0℃下搅拌反应物20min，并使其在室温下搅拌2h。反应混合物用饱和的NaHCO3淬灭，并浓缩以除去EtOH。水层用EA萃取，有机相用MgSO4干燥。在浓缩后，通过色谱法(EA/己烷)纯化粗制产物以得到白色固体的4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-醇INT-28(2.56g，85％)。LCMS-ESI(m/z)C9H9BrO的计算值：213.1；实测值：195.0[M-H2O]+，tR＝3.07min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35(d，J＝7.9，1H)，7.27(d，J＝7.4，1H)，7.05(t，J＝7.7，1H)，5.23(t，J＝6.2，1H)，3.00(ddd，J＝16.6，8.8，4.6，1H)，2.84-2.66(m，1H)，2.45(dddd，J＝13.2，8.4，7.0，4.6，1H)，1.96-1.70(m，2H)。
(4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷(INT-29)
Figure BPA00001577340400731
向4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-醇INT-28(2.56g，12.0mm)的DMF(5mL)溶液中加入TBDMSCl(2.17g，14.4mmol)和咪唑(2g，30.0mmol)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。用水稀释反应混合物，并用EA萃取。用水和盐水洗涤有机层，并用MgSO4干燥。通过色谱法(EA/己烷)纯化粗制产物以得到清澈油状的(4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷INT-29(3.3g，84％)。LCMS-ESI(m/z)C15H23BrOSi的计算值：327.3；实测值：195.0[M-OTBS]+，tR＝3.07min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(d，J＝7.8Hz，1H)，7.06(d，J＝7.4Hz，1H)，6.92(t，J＝7.7Hz，1H)，5.13(t，J＝7.0Hz，1H)，2.85(ddd，J＝16.4，9.1，2.9Hz，1H)，2.57(dt，J＝16.5，8.3Hz，1H)，2.36-2.17(m，1H)，1.76(dtd，J＝12.8，8.8，7.1Hz，1H)，0.83-0.72(m，9H)，0.05--0.06(m，6H)。
叔丁基二甲基(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氧基)甲硅烷(INT-30)
Figure BPA00001577340400732
通过将N2通入到(4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷INT-29(50mg，0.15mmol)、(4，4，4’，4’，5，5，5’，5’-八甲基-2，2’-双(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷))(42mg，0.16mmol)和乙酸钾(45mg，0.45mmol)的无水1，4-二噁烷(2mL)溶液中5min脱气。然后加入PdCl2(dppf).CH2Cl2，且在85℃下加热反应混合物过夜。在真空下除去溶剂，残留物用EA(10mL)稀释，并通过硅藻土过滤以除去固体。用水和盐水洗涤滤液，并用MgSO4干燥。通过色谱法(EA/己烷)纯化粗制产物以得到白色半固态的叔丁基二甲基(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基-氧基)甲硅烷INT-30(26mg，45％)。LCMS-ESI(m/z)C21H35BO3Si的计算值：374.4；实测值：245.0[M-OTBS]+，tR＝3.07min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.57-7.43(m，1H)，7.21(dd，J＝11.0，4.2Hz，1H)，7.08-7.01(m，1H)，5.06(t，J＝7.0Hz，1H)，3.11(ddd，J＝16.8，8.9，3.0Hz，1H)，2.72(dt，J＝16.8，8.3Hz，1H)，2.22(dddd，J＝12.6，7.9，7.1，3.1Hz，1H)，1.71(dtd，J＝12.6，8.8，7.0Hz，1H)，1.21-1.10(m，12H)，0.81-0.71(m，9H)，0.03--0.07(m，6H)。
5-(4，5-二氢噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈(INT-31)
Figure BPA00001577340400741
向搅拌的3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(1.0g，4.8mmol)的DCM(20mL)悬浮液中加入草酰氯(3.7g，29.2mmol)，接着加入两滴DMF。在50℃下搅拌反应混合物2h。浓缩混合物，并将残余物再溶解在DCM(10mL)中。加入乙醇胺(0.6g，9.7mmol)和TEA(1.45g，14.4mmol)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。过滤所得的固体，用水洗涤，并干燥以得到1.0g(83％)的3-氰基-N-(2-羟基乙基)-4-异丙氧苯甲酰胺，其用于下一步骤而无需纯化。LCMS-ESI(m/z)C13H16N2O3的计算值：248.3；实测值：249.0[M+H]+，tR＝2.41min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.02-7.79(m，2H)，6.97-6.87(m，1H)，6.71(s，1H)，4.65(dt，J＝12.1，6.1Hz，1H)，3.82-3.70(m，2H)，3.56(dd，J＝10.2，5.5Hz，2H)，1.96(d，J＝10.0Hz，1H)，1.40-1.29(m，6H)。
将3-氰基-N-(2-羟基乙基)-4-异丙氧基苯甲酰胺溶解在DCM(30mL)中，并在0℃下加入亚硫酰氯(1.43g，12mmol)。在室温下搅拌反应混合物1h，然后在0℃下用水(200L)和6N NaOH溶液(1mL)淬灭。搅拌混合物30min。水层用DCM萃取，用盐水洗涤合并的有机层，并用MgSO4干燥以得到570mg(61％，两步骤)的5-(4，5-二氢噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-31。LCMS-ESI(m/z)C13H14N2O2的计算值：230.3；实测值：231.0[M+H]+，tR＝2.50min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.17-7.86(m，2H)，6.91(d，J＝8.9Hz，1H)，4.65(dt，J＝12.2，6.1Hz，1H)，4.37(dd，J＝14.3，4.9Hz，2H)，3.98(t，J＝9.5Hz，2H)，1.36(t，J＝5.5Hz，6H)。
5-(5-溴噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈(INT-32)
Figure BPA00001577340400751
在N2下，在80℃下加热搅拌的5-(4，5-二氢噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-31(420mg，1.82mmol)、N-溴丁二酰胺(990mg，5.56mmol)和偶氮异丁腈(14.9mg，0.09mmol)的四氯化碳(20mL)溶液18h。使反应混合物冷却至室温，并通过过滤除去固体。用硫代硫酸钠(20mL)和盐水(20mL)洗涤滤液，并用MgSO4干燥。通过色谱法(EA/己烷)纯化产物以得到300mg(55％)的黄色固体的5-(5-溴噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-32。LCMS-ESI(m/z)C13H11BrN2O2的计算值：307.1；实测值：309.0[M+2]+，tR＝3.79min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.19-7.93(m，2H)，7.08-6.85(m，2H)，4.81-4.47(m，1H)，1.38(dd，J＝6.6，3.0Hz，6H)。
通用程序13：杂环溴化物与茚满醇硼酸酯的偶联
向20mL微波管中依次加入杂环溴化物(1当量)、(R)-、(S)-或外消旋的茚满醇二氧杂硼杂环戊烷(1当量)、DME/H2O(3∶1，0.05M)和碳酸钾(3当量)。通过将N2气鼓入到搅拌的溶液中10min给混合物脱气。加入Pd(PPh3)4(0.07eq)，并再使混合物除气2min。该管加盖，并在100℃下进行微波辐射直至反应完成(40-60min)。如果需要，加入额外的溴化物。将该管冷却至室温，用EA(10x体积)稀释，并用水合盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩。通过硅胶柱色谱(EA/己烷)纯化粗制产物。
5-(5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈(INT-33)
Figure BPA00001577340400761
使用通用程序13制备。向20mL的微波管中加入5-(5-溴噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-32(200mg，0.65mmol)、叔丁基二甲基(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氧基)甲硅烷INT-30(243mg，0.65mmol)、碳酸钾(269mg，1.95mmol)和3∶1的二甲基乙二醇/H2O(10mL)的混合物。通过将N2鼓入到搅拌的溶液中10min给反应混合物除气。加入Pd(PPh3)4，并再给溶液除气2min。该管在100℃下进行微波辐射40min。将该管冷却至0℃，并通过过滤收集所得的固体，用冰水洗涤，并干燥以得到290mg(94％)的浅黄色固体的5-(5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-33。LCMS-ESI(m/z)C28H34N2O3Si的计算值：474.7；实测值：475.2[M+H]+，tR＝5.90min(方法1)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.16-7.96(m，2H)，7.57-7.42(m，1H)，7.24-7.12(m，3H)，6.90(t，J＝10.4Hz，1H)，5.14(t，J＝7.0Hz，1H)，4.57(dt，J＝12.3，6.1Hz，1H)，3.04(ddd，J＝16.1，9.1，3.1Hz，1H)，2.78(dt，J＝16.1，8.1Hz，1H)，2.43-2.24(m，1H)，1.84(ddd，J＝15.8，12.8，8.9Hz，1H)，1.27(t，J＝5.8Hz，6H)，0.86-0.61(m，9H)，0.06--0.14(m，6H)。
5-(5-(1-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物56)
Figure BPA00001577340400762
在0℃下向5-(5-(1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-33(350mg，0.737mmol)的无水THF(2mL)溶液中加入1M的叔丁基氟化铵的THF(3.6mL，3.6mmol)溶液。使反应混合物在室温下搅拌16小时，然后用盐水(5mL)淬灭。在真空下除去THF，残留物用水(5mL)稀释，并用EA萃取水层。合并的提取物用盐水萃取，并用MgSO4干燥，通过色谱法纯化以得到220mg(63％)的浅黄色固体的5-(5-(1-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈56。LCMS-ESI(m/z)C22H20N2O3的计算值：360.4；实测值：343.0[M-OH]+，tR＝2.30min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30(d，J＝2.2Hz，1H)，8.26(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.75(d，J＝7.6Hz，1H)，7.48(d，J＝7.3Hz，1H)，7.42(t，J＝7.6Hz，1H)，7.10(d，J＝8.9Hz，1H)，5.35(d，J＝4.8Hz，1H)，4.78(dt，J＝12.2，6.1Hz，1H)，3.30(ddd，J＝16.4，8.7，4.8Hz，1H)，3.13-2.94(m，1H)，2.64(dddd，J＝13.3，8.4，7.1，4.8Hz，1H)，2.17-2.08(m，1H)，1.86(s，1H)，1.60(s，1H)，1.46(dd，J＝13.9，6.0Hz，6H)。
通用程序14：通过氯置换制备茚满胺
在0℃下向搅拌的茚满醇(1当量)的DCM(1mL)溶液中加入亚硫酰氯(2当量)。在室温下搅拌反应混合物3h。蒸发溶剂，并将粗制的氯化物再溶解在二甲基乙酰胺(1mL)中。加入二异丙基乙胺(3当量)和适当的胺(3当量)，并在70℃下搅拌反应混合物过夜。用水(200μL)淬灭反应混合物，并通过制备型HPLC纯化。
使用通用程序14制备化合物57、58和61-64。
5-(5-(1-(2-羟乙基氨基)-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物57)
Figure BPA00001577340400771
使用通用程序14制备。在0℃下向搅拌的5-(5-(1-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈56(50mg，0.1mmol)的DCM(3mL)溶液中加入亚硫酰氯(25mg，0.21mmol)。在室温下搅拌反应混合物3h。蒸发溶剂，并将粗制的氯化物再溶解在二甲基乙酰胺(3mL)中。加入异丙基乙胺(40.8mg，0.316mmol)和乙醇胺(19.3mg，0.31mmol)，并在70℃下加热反应混合物过夜。用NaHCO3淬灭反应混合物，并用EA萃取。用盐水洗涤合并的提取物，然后用MgSO4干燥。产物通过色谱法(10％MeOH/DCM)纯化以得到25mg(60％)的5-(5-(1-(2-羟基乙基氨基)-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈57。LCMS-ESI(m/z)C24H25N3O3的计算值：403.5；实测值：404.1[M+H]+，tR＝2.41min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.18(t，J＝2.3Hz，1H)，8.08(dd，J＝9.0，2.3Hz，1H)，7.70(d，J＝7.7Hz，1H)，7.44(d，J＝17.4Hz，1H)，7.42-7.32(m，1H)，7.30-7.11(m，2H)，4.70(dt，J＝12.2，6.1Hz，2H)，4.39(s，1H)，3.40(t，J＝5.0Hz，2H)，3.18-2.95(m，2H)，2.93-2.75(m，1H)，2.73-2.54(m，2H)，2.38-2.16(m，1H)，1.98-1.78(m，1H)，1.15(d，J＝6.0Hz，6H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ161.35，159.17，151.04，146.60，139.78，132.16，127.43，125.59，125.07，123.99，120.49，116.10，113.90，103.77，72.60，62.95，61.51，48.70，33.27，31.29，29.91，22.02。
5-(5-(1-((R)-1-羟基丙烷-2-基氨基)-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物58)
Figure BPA00001577340400781
使用通用程序14制备。LCMS-ESI(m/z)C25H27N3O3的计算值：417.5；实测值：418.4[M+H]+，tR＝2.49min。
(R)-N-((R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(INT-34)
Figure BPA00001577340400782
向搅拌的4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-酮(5.0g，23.6mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.15g，26.0mmol)的甲苯(40mL)溶液中加入四乙氧基钛(8.1g，35.5mmol)，以及在N2下在60℃下加热反应混合物18h。向该混合物中加入THF(40mL)，并将所得的溶液冷却至-78℃。一次性加入硼氢化钠(3.5g，94.7mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物15min，然后升温至室温，并在该温度下搅拌2h。在用盐水和酒石酸钾钠淬灭之前将反应混合物冷却至0℃。加入EA，并在室温下搅拌混合物过夜，在此期间Ti盐沉淀。倾析有机层，并依次用饱和NH4Cl、水和盐水洗涤。有机层用MgSO4干燥，通过MgSO4垫过滤，并浓缩以产生固态的(R)-N-((R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-34(3.14g，42％)，其用于下一步骤而无需纯化。LCMS-ESI(m/z)，C13H18BrNOS的计算值：317.3；实测值：318.0[M+H]+，tR＝3.59min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46(d，J＝7.5，1H)，7.34(d，J＝7.9，1H)，7.05(t，J＝7.7，1H)，4.96-4.77(m，1H)，3.39(d，J＝6.8，1H)，3.06-2.86(m，1H)，2.82-2.60(m，1H)，2.50-2.29(m，1H)，2.05-1.81(m，1H)，1.16(s，9H)。
以类似的方式使用(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺制备(S)-N-((S)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-35。
(R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-胺(INT-36)
Figure BPA00001577340400791
向粗制的(R)-N-((R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-34(3.14g，9.9mol)的MeOH(10mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷(7.5mL，30mmol)溶液，并在室温下搅拌所得的黄色悬浮液2h。用MeOH(5mL)稀释粗制反应混合物，冷却至0℃，并过滤除去Ti副产物。浓缩滤液，并将所得的固体在乙腈(60mL)中回流30min，然后冷却至0℃。收集所得的白色固体以产生(R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-胺INT-36(1.55g，63％)的盐酸盐，其用于下一步骤而无需纯化。LCMS-ESI(m/z)C9H10BrN的计算值：212.1；实测值：197.0[M-NH]+，tR＝0.75min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.60(s，1H)，7.67(d，J＝7.5Hz，1H)，7.57(d，J＝7.9Hz，1H)，7.39-7.07(m，1H)，4.81(dd，J＝7.9，5.6Hz，1H)，3.25-2.64(m，3H)，2.59-2.32(m，1H)，2.21-1.69(m，1H)。
可以以类似的方式由(S)-N-((S)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-35制备(S)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-胺INT-37。
(R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯(INT-38)
Figure BPA00001577340400792
在0℃下向粗制的(R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-胺盐酸盐INT-36(1.55g，6.2mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TEA(1.38g，13.7mmol)，接着加入Boc酸酐(1.49g，6.8mmol)，并在室温下搅拌反应混合物过夜。反应混合物用盐水洗涤，有机层用MgSO4干燥并过滤。通过色谱法(EA/己烷)纯化产物以得到灰白色固态的(R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-38(1.63g，84％)。LCMS-ESI(m/z)C14H18BrNO2的计算值：312.20；实测值：197.0[M-NHBoc]+，tR＝3.97min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.31(d，J＝7.9Hz，1H)，7.23-7.13(m，1H)，7.02(t，J＝7.7Hz，1H)，5.30-5.07(m，1H)，4.69(d，J＝7.5Hz，1H)，2.93(ddd，J＝16.5，9.0，3.4Hz，1H)，2.75(dt，J＝16.5，8.2Hz，1H)，2.60-2.43(m，1H)，1.73(dq，J＝13.1，8.4Hz，1H)，1.41(s，9H)。
可以以类似的方式由(S)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-胺INT-37制备(S)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-39。
(R)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯(INT-40)
Figure BPA00001577340400801
通过向溶液中通入N25min使(R)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-38(300mg，0.96mmol)和(4，4，4’，4’，5，5，5’，5’-八甲基-2，2’-双(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷))(268mg，1.0mmol)、乙酸钾(283mg，2.88mmol)的无水1，4-二噁烷(5mL)溶液除气。加入PdCl2(dppf).DCM(157mg，0.19mmol)，并在85℃下加热反应混合物过夜。在真空下除去溶剂，残留物溶解在EA(10mL)中，并通过硅藻土过滤以除去固体。用水和盐水洗涤滤液，用MgSO4干燥，并通过色谱法(EA/己烷)纯化以得到白色半固态的(R)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-40(265mg，77％)。LCMS-ESI(m/z)C20H30BNO4的计算值：359.3；实测值：383.0[M+Na]+，tR＝4.26min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(d，J＝7.3Hz，1H)，7.42(t，J＝7.9Hz，1H)，7.24(dd，J＝9.7，5.2Hz，1H)，5.19(dd，J＝15.9，7.9Hz，1H)，4.72(d，J＝8.5Hz，1H)，3.28(ddd，J＝17.0，8.8，3.6Hz，1H)，2.99(dt，J＝16.8，8.4Hz，1H)，2.69-2.44(m，1H)，1.77(ddd，J＝16.4，12.8，8.6Hz，1H)，1.51(s，9H)，1.39-1.31(m，12H)。
可以以类似的方式由(S)-4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-39制备(S)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-41。
(R)-4-(2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噁唑-5-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯(INT-42)
Figure BPA00001577340400802
使用通用程序13制备。向20mL的微波管中加入(R)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-32(58.4mg，0.16mmol)、5-(5-溴噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈INT-40(50mg，0.16mmol)、碳酸钾(68mg，0.5mmol)和3∶1的二甲基乙二醇/H2O(2mL)的混合物。通过鼓入N2气通过搅拌的溶液10min使反应混合物脱气。加入Pd(PPh3)4((3.9mg，0.004mmol)，并再使溶液除气2min。在100℃下使该管进行微波辐射30min。除去溶剂，并将残留物溶解在EA(10mL)中，用盐水洗涤，然后用MgSO4干燥。通过色谱法(EA/己烷)纯化产物以得到50mg(67％)的灰白色固体的(R)-4-(2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噁唑-5-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-42。LCMS-ESI(m/z)C27H29N3O4的计算值：459.5；实测值：460.2[M+H]+，tR＝4.1min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32-8.03(m，2H)，7.60(dd，J＝8.6，4.1Hz，1H)，7.32-7.22(m，3H)，7.00(d，J＝8.9Hz，1H)，5.19(dd，J＝15.5，7.5Hz，1H)，4.82-4.56(m，2H)，3.12(ddd，J＝16.3，9.0，3.5Hz，1H)，2.95(dt，J＝16.3，8.1Hz，1H)，2.70-2.51(m，1H)，1.83(dq，J＝13.1，8.2Hz，1H)，1.43(s，9H)，1.41-1.35(m，6H)。
可以以类似的方式由(S)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-41制备(S)-4-(2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噁唑-5-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-43。
(R)-5-(5-(1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基-苄腈盐酸盐(化合物59)
Figure BPA00001577340400811
向搅拌的(R)-4-(2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噁唑-5-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-42(48mg，0.1mmol)的1，4-二噁烷(1mL)溶液中加入4N HCl的1，4-二噁烷(1mL)溶液。在55-65℃下搅拌反应混合物48h。将冷却的反应混合物用Et2O(10mL)稀释。收集所得的固体，并在高真空下干燥以得到32mg(78％)的白色固体的(R)-5-(5-(1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐59。LCMS-ESI(m/z)C22H21N3O2的计算值：359.4；实测值：343.1[M-NH2]+，tR＝2.40min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.55(br s，2H)，8.43(dd，J＝6.5，2.4Hz，1H)，8.32(ddd，J＝6.7，6.1，2.9Hz，1H)，8.00(t，J＝13.5Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.66(d，J＝7.5Hz，1H)，7.49(dd，J＝8.5，6.3Hz，2H)，4.93(dt，J＝12.1，6.0Hz，1H)，4.81(s，1H)，3.43-3.25(m，1H)，3.23-3.04(m，1H)，2.67-2.55(m，1H)，2.11(ddd，J＝14.2，9.0，5.9Hz，1H)，1.36(dd，J＝13.8，7.0Hz，6H)。
可以以类似的方式由(S)-4-(2-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)噁唑-5-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-43制备(S)-5-(5-(1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-4-基)噁唑-2-基)-2-异丙氧基苄腈盐酸盐INT-44。
1-氧代-2，3-二氢-1H-茚-4-腈(INT-45)
Figure BPA00001577340400821
向搅拌的4-溴-2，3-二氢-1H-茚-1-酮(100.0g，0.48mol)的150mL的1-甲基-2-吡咯烷(NMP)溶液中加入氰化锌(111.8g，0.95mol)和四(三苯基膦)钯[Pd(PPh3)4](2.75g，0.024mol)。用N2使溶液除气，并在95℃下加热反应混合物7h。在冷却后，将反应混合物倒入冰水(3.5L)上。化合物和无机锌盐沉淀。收集固体，并在DCM和水之间分配。过滤有机层以除去Zn盐，并浓缩滤液和在4∶1的EtOH和MeOH(400mL)的混合物中结晶以得到浅黄色固态的1-氧代-2，3-二氢-1H-茚-4-腈INT-45。LCMS-ESI(m/z)C10H7NO的计算值：157.2；实测值：158.1[M+H]+，tR＝2.67min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.00-7.90(m，1H)，7.86(dd，J＝7.5，1.1，1H)，7.50(t，J＝7.6，1H)，3.40-3.19(m，2H)，2.90-2.61(m，2H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ204.70，157.90，138.38，137.88，128.44，128.28，116.31，111.70，36.01，25.49。
(±)-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-腈(INT-46)
Figure BPA00001577340400822
在0℃下向搅拌的1-氧代-2，3-二氢-1H-茚-4-腈INT-45(1.2g，7.64mmol)和硅胶(催化的)的EtOH悬浮液中加入NaBH4(237.2mg，7.64mmol)。使反应物升温至室温，并搅拌2h。在减压下除去溶剂，通过色谱法(EA/己烷)纯化产物以得到1.02g(82％)白色固态的1-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-腈INT-46。LCMS-ESI(m/z)C10H9NO的计算值：159.2；实测值：160.1[M+H]+，tR＝2.39min。
N，1-二羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-甲脒(INT-47)
Figure BPA00001577340400831
使用通用程序1制备。向羟胺盐酸盐(0.87g，12.5mmol)和碳酸钠(1.32g，12.5mmol)的EtOH(20mL)溶液中一次性加入1-羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-腈INT-46(1.80g，11.3mmol)，并加热溶液至回流。在16h后，使反应物冷却，并过滤以除去固体。除去EtOH，并通过色谱法(MeOH/DCM)纯化化合物以得到1.74g(90％)的白色泡沫状的N，1-二羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-甲脒INT-47。LCMS-ESI(m/z)C10H12N2O2的计算值：192.1；实测值：193.1[M+H]+，tR＝0.56min.1H NMR(400MHz，MeOD)δ10.30(s，1H)，9.97(s，1H)，7.72-7.58(m，1H)，7.46-7.37(m，2H)，5.22(t，J＝6.5，1H)，3.17-3.03(m，1H)，2.99-2.83(m，1H)，2.49(dddd，J＝11.4，8.0，7.0，4.4，1H)，2.02-1.88(m，1H)。
4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇(化合物60)
Figure BPA00001577340400832
使用通用程序2制备。在室温下用HOBt(197.8mg，1.46mmol)和EDC(207.3mg，1.08mmol)处理2-(3，4-二乙氧基苯基)乙酸(180.0mg，0.80mmol)的DMF(3mL)溶液。搅拌反应物2h直至完全形成HOBt-酸复合物。加入N-1-二羟基-2，3-二氢-1H-茚-4-甲脒INT-47(185.1mg，0.96mmol)，并在室温下搅拌混合物2h，然后加热至80℃16h。用NaHCO3稀释反应混合物，并用EA萃取。有机相用MgSO4干燥，并通过色谱法(EA/己烷)纯化粗制产物以得到灰白色固态的4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇60(190mg，62％)。LCMS-ESI(m/z)C22H24N2O4的计算值：380.1；实测值：381.1[M+H]+，tR＝3.45min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.02-7.86(m，1H)，7.46(d，J＝7.5Hz，1H)，7.29(t，J＝7.6Hz，1H)，6.81(ddd，J＝21.0，13.6，5.1Hz，3H)，5.21(t，J＝5.6Hz，1H)，4.13(s，2H)，4.01(dq，J＝14.1，7.0Hz，4H)，3.34(ddd，J＝17.5，8.7，4.6Hz，1H)，3.16-2.92(m，1H)，2.53-2.38(m，1H)，1.91(qdd，J＝8.7，6.6，5.5Hz，2H)，1.36(td，J＝7.0，4.6Hz，6H)。
2-((4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)乙醇(化合物61)
Figure BPA00001577340400841
使用通用程序14使用4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇60和2-氨基乙醇制备。
(2R)-2-((4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)丙-1-醇(化合物62)
Figure BPA00001577340400842
使用通用程序14由4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇60和(R)-2-氨基丙-1-醇制备。
4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-N-(2-(甲基磺酰基)乙基)-2，3-二氢-1H-茚-1-胺(化合物63)
Figure BPA00001577340400843
使用通用程序14由4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇60和2-(甲基磺酰基)乙胺制备。
2-((4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)-N-甲基乙磺酰胺(化合物64)
Figure BPA00001577340400844
使用通用程序14由4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-醇60和2-氨基-N，N-二甲基乙磺酰胺制备。
(R)-N-(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(INT-48)
Figure BPA00001577340400851
向1-氧代-2，3-二氢-1H-茚-4-腈INT-45(42.5g，0.27mol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(36.0g，0.30mol)的甲苯(530mL)溶液中加入四乙氧基钛(84.1mL，92.5g，0.40mol)，且在N2下在60℃下加热反应混合物12h。粗制的(R)-N-(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-48在下一实验中直接使用。LCMS-ESI(m/z)C14H16N2OS的计算值：260.3；实测值：261.1[M+H]+，tR＝3.19min。
(R)-N-((R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(INT-49)
Figure BPA00001577340400852
在N2下向包含粗制(R)-N-(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-48的悬浮液的烧瓶中加入THF(1.0L)，并将反应混合物冷却至-78℃。在30min内分批加入硼氢化钠(40.9g，1.08mol)。(在加入过程中内部温度没有上升)。在-78℃下搅拌反应混合物30min，一半在浴槽外30min，然后在1h内升温至0℃。将0℃的反应混合物置于冰浴中，并用盐水(100mL)和接着用饱和酒石酸钾钠(420mL)淬灭，且Ti盐沉淀。用EA(1.5L)稀释反应混合物，并在室温下搅拌过夜。倾析有机层，并依次用饱和NH4Cl、水和盐水洗涤。有机层用MgSO4干燥，并通过MgSO4垫过滤。浓缩滤液以得到52.9g的棕色油状的粗制(R)-N-((R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-49，其直接用于下一步骤中。LCMS-ESI(m/z)C14H18N2OS的计算值：262.3；实测值：263.1[M+H]+，tR＝2.99min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.89(d，J＝7.7，1H)，7.56(t，J＝6.8，1H)，7.36(t，J＝7.7，1H)，4.97(q，J＝7.5，1H)，3.50(d，J＝7.6，1H)，3.22(ddd，J＝16.9，8.8，3.9，1H)，3.01(dt，J＝22.4，6.9，1H)，2.70-2.53(m，1H)，2.15-1.95(m，1H)，1.33-1.20(m，9H)。
(R)-1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-4-腈(INT-50)
Figure BPA00001577340400861
向粗制的((R)-N-((R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺INT-49(52.9g，0.20mol)的MeOH(200mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷(152.0mL，30mmol)溶液，并在室温下搅拌所得的黄色悬浮液1.5h。用MeOH(500mL)稀释粗反应混合物，并过滤除去一些Ti副产物。浓缩滤液，并在乙腈(500mL)中回流所得的固体。收集所得的白色固体以产生13.0g的(31％，3步)的(R)-1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-4-腈盐酸盐INT-50。LCMS-ESI(m/z)C10H10N2的计算值：158.2；实测值：142.0[M-NH2]+，tR＝0.84min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.61(s，3H)，7.96(d，J＝7.7，1H)，7.83(d，J＝7.5，1H)，7.52(t，J＝7.7，1H)，4.80(s，1H)，3.23(ddd，J＝16.6，8.7，5.2，1H)，3.05(ddd，J＝16.6，8.6，6.3，1H)，2.62-2.51(m，1H)，2.15-2.01(m，1H)。13C NMR(101MHz，DMSO)δ148.09，141.15，132.48，130.32，127.89，117.27，108.05，54.36，39.08，29.64。通过用1N NaHCO3和DCM萃取可以制备游离碱。LCMS-ESI(m/z)C10H10N2的计算值：158.2；实测值：142.0[M-NH2]+，tR＝0.83min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.52-7.38(m，2H)，7.23(dd，J＝17.4，9.8，1H)，4.35(t，J＝7.6，1H)，3.11(ddd，J＝16.8，8.7，3.2，1H)，2.89(dt，J＝16.9，8.5，1H)，2.53(dddd，J＝12.8，8.1，7.3，3.2，1H)，1.70(dtd，J＝12.8，8.8，8.0，1H)。13C NMR(101MHz，DMSO)δ150.16，146.67，130.19，128.74，127.38，117.77，107.42，56.86，38.86，29.14。手性HPLC：(R)-1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-4-腈使用己烷中的5％EtOH加上0.05％TEA洗脱：95％ee，tR＝23.02min。
以类似的次序(INT-48、INT-49和INT-50)在第一步中使用(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺制备(S)-对映体INT-51。(S)-对映体的tR＝20.17min。
(R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯(INT-52)
Figure BPA00001577340400871
在0℃下，向(R)-1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-4-腈盐酸盐INT-50(11.6g，59.6mmol)的DCM(100mL)溶液中加入TEA(12.0mL，131.0mmol)。向所得的溶液中加入到Boc酸酐(14.3g，65.6mmol)的DCM(30mL)溶液，并在室温下搅拌反应混合物1.5h。反应混合物用盐水洗涤，以及有机层用MgSO4干燥并过滤。加入额外的DCM至总体积为250mL，并加入Norit(4.5g)。使产物回流15min，并使热混合物通过硅藻土/二氧化硅垫过滤。浓缩滤液，并在EA(50mL)和己烷(150mL)中再结晶以得到12.93g(84％)的灰白色固态的(R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-52。LCMS-ESI(m/z)C15H18N2O2的计算值：258.3；实测值：281.1[M+Na]+，tR＝3.45min.C15H18N2O2的元素分析测定：C计算值＝69.74％；实测值＝69.98％。H计算值＝7.02％；实测值＝7.14％。N计算值＝10.84％；实测值＝10.89％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.64-7.49(m，2H)，7.34(dt，J＝7.7，3.8，1H)，5.36-5.20(m，1H)，4.78(d，J＝6.8，1H)，3.20(ddd，J＝16.9，8.9，3.3，1H)，3.02(dt，J＝25.4，8.4，1H)，2.82-2.53(m，1H)，1.88(dq，J＝13.2，8.6，1H)，1.55-1.44(m，9H)。13C NMR(101MHz，DMSO)δ155.52，146.68，146.32，130.89，128.70，127.63，117.51，107.76，77.98，55.09，31.88，29.11，28.19。手性HPLC：(R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯使用2.5％EtOH的己烷溶液洗脱：＞99.9％ee，tR＝19.36min。
以类似的方式使用(S)-1-氨基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)-4-腈盐酸盐INT-51制备(S)-对映体INT-53。(S)-对映体的tR＝28.98min。
(R)-4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯(INT-54)
Figure BPA00001577340400872
使用通用程序1制备。向(R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-52(15.0g，58.2mmol)的EtOH(100mL)溶液中加入羟胺盐酸盐(12.1g，174.2mmol)和TEA(17.6mL，174.2mmol)，并在85℃下加热反应混合物2h。除去溶剂，并将所得的白色固体在水和DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，浓缩，并在异丙醇(50mL)中重结晶以得到14.4g(85％)的白色结晶固体的(R)-4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-54。LCMS-ESI(m/z)C15H21N3O3的计算值：291.4；实测值：292.1[M+H]+，tR＝2.04min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ9.53(s，1H)，7.38-7.32(m，1H)，7.32-7.12(m，3H)，5.68(s，2H)，4.97(q，J＝8.5，1H)，3.07(ddd，J＝16.6，8.7，2.6，1H)，2.86(dt，J＝16.8，8.4，1H)，2.30(ddd，J＝12.6，7.6，3.6，1H)，1.75(dq，J＝12.3，9.0，1H)，1.44(s，9H)。
以类似的方式由(R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-53制备(S)-4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-55。
(R)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯(INT-56)
Figure BPA00001577340400881
使用通用程序2制备。在室温下用HOBt(164.8mg，1.22mmol)和EDC(172.7mg，0.9mmol)处理2-(3，4-二乙氧基苯基)乙酸(150.0mg，0.67mmol)的DMF(3mL)溶液。搅拌反应物2h直至完全形成HOBt-酸复合物。加入(R)-4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-54(233.8mg，0.8mmol)，并在室温下搅拌2h，然后混合物加热至80℃16h。用NaHCO3(10mL)稀释反应物，并用EA萃取(3X10ml)。有机相用MgSO4干燥，并通过色谱法(EA/己烷)纯化粗制产物以得到灰白色固态的(R)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-56(187mg，58％)，并直接用于下一步骤。LCMS-ESI(m/z)C27H33N3O5的计算值：479.2；实测值：502.2[M+Na]+，tR＝4.11min.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.91(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39(d，J＝7.5Hz，1H)，7.27(t，J＝7.7Hz，1H)，6.81(ddd，J＝20.2，12.8，5.1Hz，3H)，5.18(d，J＝8.4Hz，1H)，4.69(d，J＝8.3Hz，1H)，4.15(d，J＝6.1Hz，2H)，4.06-3.93(m，4H)，3.32(ddd，J＝17.4，8.8，3.4Hz，1H)，3.14-2.91(m，1H)，2.65-2.40(m，1H)，1.75(dq，J＝12.9，8.4Hz，1H)，1.36(ddd，J＝40.2，26.9，22.6Hz，15H)。
以类似的方式由(R)-4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-55制备(S)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-57。
(R)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-胺盐酸盐(化合物65)
Figure BPA00001577340400891
向(R)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-56(150mg，0.312mmol)的二噁烷(1mL)溶液中加入4NHCl的二噁烷(1mL)溶液。在室温下搅拌混合物6h，并且产物沉淀。反应混合物用Et2O稀释，通过过滤收集固体以得到灰白色固态的(R)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-胺盐酸盐65(125mg，96％)。LCMS-ESI(m/z)：C22H25N3O3的计算值：379.2；实测值：402.1[M+Na]+，tR＝2.38min.1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.40(s，1H)，8.01(d，J＝7.6Hz，1H)，7.78(d，J＝7.2Hz，1H)，7.53(t，J＝7.7Hz，1H)，7.02(d，J＝2.0Hz，1H)，6.90(dt，J＝8.2，5.1Hz，2H)，4.81(s，1H)，4.35(s，2H)，4.01(p，J＝6.9Hz，4H)，3.36(s，2H)，3.22-3.04(m，1H)，2.55-2.43(m，2H)，2.05(dd，J＝14.0，8.4Hz，1H)，1.32(td，J＝7.0，4.0Hz，6H)。
可以以类似的方式由(S)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-57制备(S)-4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-胺盐酸盐INT-58。
(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-59)
Figure BPA00001577340400901
向(R)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-52(0.700g，2.7mmol)中加入无水DMF(10mL)，并在N2下在0℃的冰浴中搅拌反应混合物。加入硼氢化钠(0.541g，13.5mmol)，并在0℃下搅拌混合物2h。在2h后，加入(2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基甲硅烷(1.43g，5.9mmol)，使反应混合物升温至室温1h。使反应物冷却至0℃，并用MeOH接着用饱和NaHCO3淬灭。混合物用EA和盐水萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，并浓缩以得到棕色油状物。通过硅胶快速色谱(20％EA/己烷)纯化粗制产物以得到0.868g(77％)的黄色油状物的(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-59。LCMS-ESI(m/z)C23H36N2O3Si的计算值：416.6；实测值：317.1[M+H-Boc]+，tR＝4.05min.1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ7.50(m，1H)，7.37(m，1H)，7.26(m，1H)，5.78(m，1H)，4.02(m，2H)，3.51(m，2H)，3.29(m，1H)，2.97(m，1H)，2.26(m，2H)，1.40(s，9H)，0.83(s，9H)，0.09(s，6H)。
(S)-(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(INT-60)
Figure BPA00001577340400902
以与INT-59类似的方式由(S)-4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸叔丁酯INT-53和2-氯-N，N-二甲基乙酰胺制备(S)-(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-60。
(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(N-羟基-甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-61)
Figure BPA00001577340400903
使用通用程序1制备。向(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-59(0.800g，1.9mmol)的EtOH(8mL)溶液中加入羟胺盐酸盐(0.400g，5.8mmol)和Na2CO3(0.610g，5.8)，且在85℃下加热反应混合物12h。一旦冷却至室温，过滤反应混合物以用EtOH冲洗滤饼。在减压下浓缩滤液，并用EA和盐水洗涤。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，并浓缩以得到0.860g(100％)的浅黄色油状的(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-61。LCMS-ESI(m/z)C23H39N3O4Si的计算值：449.7；实测值：350.2[M+H-Boc]+，tR＝1.97min。
(S)-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)(4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-62)。
Figure BPA00001577340400911
使用通用程序1并且以与INT-61类似的方式由(S)-(4-氰基-2，3-二氢-1H-茚-1-基)(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-60制备(S)-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)(4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-62。
(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(5-(4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(INT-63)
Figure BPA00001577340400912
使用通用程序2制备。在室温下向4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-羧酸(0.109g，0.4mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入HOBt(0.088g，0.57mmol)和EDC(0.109g，0.57mmol)。搅拌反应混合物0.5h直至完全形成HOBt-酸复合物。加入(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-61(0.200g，0.44mmol)，并在室温下搅拌混合物0.5h直至观察到形成中间体(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(N-(4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-羰基氧基)甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯。在85℃下加热反应混合物4h。在冷却后，混合物用DCM和盐水萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到棕色油状物。粗制产物通过硅胶快速色谱(MeOH/DCM)纯化以得到0.108g(40％)的浅黄色油状物的(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(5-(4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-63。LCMS-ESI(m/z)C35H42F3N3O4SSi的计算值：685.9；实测值：411.0[M+H-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基氨基甲酸叔丁基酯]+，tR＝4.01min。
(S)-(4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(INT-64)
Figure BPA00001577340400921
使用通用程序2，以类似于INT-63的方式由(S)-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)(4-(N-羟基甲脒基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-62和2-(3，4-二乙氧基苯基)乙酸制备(S)-(4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-64。
(R)-2-(4-(5-(4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基)乙醇(化合物67)
Figure BPA00001577340400922
向溶解在DCM(1.5mL)中的(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基(4-(5-(4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯INT-63(0.108g，0.16mmol)中加入2N HCl的醚溶液(1.45mL，2.9mmol)。在室温下搅拌溶液12h。在氮气流下除去溶剂，并在真空下干燥产物以得到0.052g(65％)的(R)-2-(4-(5-(4-苯基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基氨基)乙醇67的盐酸盐。LCMS-ESI(m/z)：C24H20F3N3O2S的计算值：471.5；实测值：472.1[M+H]+，tR＝7.43min(方法2)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.62(s，1H)，8.19(d，J＝7.6，1H)，8.03(d，J＝7.5，1H)，7.87(t，J＝1.5，1H)，7.53-7.40(m，6H)，4.86(d，J＝4.8，1H)，3.88(s，2H)，3.74-3.50(m，1H)，3.41(ddd，J＝13.3，9.4，4.4，1H)，3.06(m，1H)，2.98(m，1H)，2.67-2.42(m，2H)。13C NMR(100MHz，DMSO)δ169.22，168.07，145.68，144.75，139.39，135.43，132.42，129.42，129.37，129.25，128.69，128.27，127.62，126.41，123.16，122.37，120.47，61.10，56.63，46.54，31.66，27.80。
(S)-2-((4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)-N，N-二甲基乙酰胺(化合物66)
Figure BPA00001577340400931
以与化合物67类似的方式由(S)-(4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯INT-64制备(S)-2-((4-(5-(3，4-二乙氧基苄基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-2，3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)-N，N-二甲基乙酰胺66。
5-氰基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(INT-65)
Figure BPA00001577340400932
向包含5-氰基吲哚(500mg，3.52mmol)的CH3CN(5mL)溶液中加入Boc2O(920mg，4.22mmol)和DMAP(42mg，0.35mmol)，并在室温下搅拌混合物0.5h。浓缩混合物，使其再溶解在DCM中，并通过层析(EtOAc/己烷)以得到766mg(90％)的白色固态的5-氰基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯INT-65。LCMS-ESI(m/z)C14H14N2O2的计算值：242.27；实测值：243.1[M+H]+，tR＝3.93min。
5-(N-羟基甲脒基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(INT-66)
Figure BPA00001577340400933
使用通用程序1制备。向包含5-氰基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯INT-65(200mg，0.73mmol)的烧瓶中加入EtOH(6mL)、羟胺盐酸盐(177mg，2.54mmol)和Na2CO3(154mg，1.45mmol)。在75℃下搅拌混合物过夜，然后浓缩，使其再溶解在DCM中，并用NaHCO3洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，并浓缩以得到222mg的粗制的白色固体5-(N-羟基甲脒基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯INT-66，其直接用于下一实验。LCMS-ESI(m/z)C14H17N3O3的计算值：275.3；实测值：276.1[M+H]+，tR＝2.25min。
5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(INT-67)
使用通用程序2制备。在室温下、N2气氛下搅拌包含3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(135mg，0.66mmol)、HOBt(130mg，0.85mmol)和EDC(164mg，0.85mmol)的DMF(2.5mL)溶液的烧瓶1.5h。将粗制的5-(N-羟基甲脒基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯INT-66(199mg，0.72mmol)的DMF(2.5mL)溶液加入到混合物中。在室温下1h后，将混合物加热至75℃，并搅拌过夜。用NaHCO3稀释反应混合物，并用EtOAc萃取。合并的有机萃取液用Na2SO4干燥，并浓缩。所得的粗制物质通过层析(EtOAc/己烷)以得到174mg(59％)白色固态的5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯INT-67。LCMS-ESI(m/z)C25H24N4O4的计算值：444.5；实测值：445.1[M+H]+，tR＝3.67min(方法1)。
5-(3-(1H-吲哚-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物68)
向包含5-(5-(3-氰基-4-异丙氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯INT-67(75mg，0.17mmol)的烧瓶中加入二噁烷(2mL)，接着加入4N HCl的二噁烷(0.5mL，2mmol)溶液。在室温下搅拌反应混合物过夜，然后在50℃下加热过夜。加入额外的4N HCl/二噁烷(0.5mL，2mmol)，在50℃下再加热混合物2h以完成脱保护。反应混合物用EtOAc稀释，并用NaHCO3洗涤。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩。所述物质通过色谱法(EtOAc/己烷)纯化以得到17mg(30％)的白色固态的5-(3-(1H-吲哚-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈68。LCMS-ESI(m/z)C20H16N4O2的计算值：344.5；实测值：345.1[M+H]+，tR＝2.34min(方法1)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.51-8.47(m，1H)，8.45(d，J＝2.2Hz，1H)，8.38(d，J＝7.2Hz，1H)，8.35(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，7.99(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，7.51(d，J＝8.5Hz，1H)，7.33-7.28(m，1H)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H)，6.72-6.64(m，1H)，4.79(dt，J＝12.2，6.1Hz，1H)，1.47(t，J＝5.8Hz，6H)。
N-羟基苯并呋喃-5-甲脒(INT-68)
Figure BPA00001577340400951
使用通用程序1制备。向包含苯并呋喃-5-苄腈(200mg，0.73mmol)的烧瓶中加入EtOH(6mL)、羟胺盐酸盐(176.7mg，2.54mmol)和Na2CO3(154mg，1.42mmol)。在75℃下搅拌混合物过夜，然后浓缩，使其再溶解在DCM中，并用NaHCO3洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，并浓缩以得到222mg的粗制白色固体N-羟基苯并呋喃-5-甲脒INT-68，其直接用于下一步骤中而无需纯化。LCMS-ESI(m/z)C9H8N2O2的计算值：176.2；实测值：177.1[M+H]+，tR＝0.83min。
5-(3-(苯并呋喃-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈(化合物69)
Figure BPA00001577340400952
使用通用程序2制备。在室温下、N2气氛下搅拌包含3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(147.7mg，0.72mmol)、HOBt(143mg，0.94mmol)和EDC(180mg，0.94mmol)的DMF(2.0mL)溶液的烧瓶0.5h。将N-羟基苯并呋喃-5-甲脒INT-68(218mg，0.79mmol)的DMF(2.0mL)溶液加入到混合物中。在室温下1h后，在85℃下搅拌混合物过夜。用NaHCO3稀释反应混合物，并用EA萃取。合并的有机萃取液用Na2SO4干燥，并浓缩。所得的粗制物质进行层析(EA/己烷)以得到110mg(44％)的白色固态的5-(3-(苯并呋喃-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈69。LCMS-ESI(m/z)C20H15N3O3的计算值：345.4；实测值：346.1[M+H]+，tR＝2.77min(方法1)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.45(dd，J＝4.5，1.9Hz，2H)，8.35(dd，J＝8.9，2.2Hz，1H)，8.12(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，7.71(d，J＝2.2Hz，1H)，7.63(d，J＝8.6Hz，1H)，7.13(d，J＝9.0Hz，1H)，6.88(dd，J＝2.2，0.8Hz，1H)，4.80(s，1H)，1.48(d，J＝6.1Hz，6H)。
N-羟基-3-甲基异烟甲脒(isonicotinimidamide)(INT-69)
Figure BPA00001577340400961
使用通用程序1制备。向3-甲基异烟腈(0.500g，4.2mmol)的EtOH(7mL)溶液中加入羟胺盐酸盐(0.588g，8.5mmol)和Na2CO3(1.34g，12.7mmol)，在85℃下加热反应混合物4h。一旦冷却至室温，过滤反应混合物，用EtOH冲洗滤饼。在减压下浓缩滤液。所得的浅黄色固体用冰水(50mL)研磨，过滤，且固体用冰水(5mL)洗涤。在减压下干燥固体以得到0.47g(74％)白色粉末状的N-羟基-3-甲基异烟甲脒INT-69。LCMS-ESI(m/z)C7H9N3O的计算值：151.2；实测值：152.1[M+H]+，tR＝0.56min.1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.43-8.32(m，2H)，7.34(d，J＝5.0，1H)，2.39(s，3H)。
2-异丙氧基-5-(3-(3-甲基吡啶-4-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈(化合物70)
Figure BPA00001577340400962
使用通用程序2制备。在室温下向3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(0.122g，0.60mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入HOBt(0.132g，0.86mmol)和EDC(0.165g，0.86mmol)。搅拌反应物0.5h直至完全形成HOBt-酸复合物。加入N-羟基-3-甲基异烟甲脒INT-69(0.100g，0.66mmol)，并在室温下搅拌混合物0.5h直至观察到中间体N-(3-氰基-4-异丙氧基苯甲酰氧基)-3-甲基异烟甲脒的形成。然后，在80℃下加热反应混合物4h。在冷却后，混合物用DCM和盐水萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到棕色油状物。粗制产物在MeOH(3mL)中重结晶，并过滤所得的晶体和用冷MeOH洗涤以得到白色晶体固态的产物。向产物中加入Et2O(0.5mL)，接着加入2N HCl的Et2O(0.6mL)溶液。在室温下搅拌混合物10分钟，然后在N2下干燥，接着在真空下干燥以得到0.087g(45％)的2-异丙氧基-5-(3-(3-甲基吡啶-4-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)苄腈70的盐酸盐。LCMS-ESI(m/z)C18H16N4O2的计算值：320.3；实测值：321.1[M+H]+，tR＝8.82min(方法2)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(d，J＝17.5，2H)，8.70(d，J＝5.7，1H)，8.44(d，J＝2.2，1H)，8.36(dd，J＝8.9，2.2，1H)，7.18(d，J＝9.1，1H)，4.83(dt，J＝12.2，6.1，1H)，2.95(s，3H)，1.49(d，J＝6.1，6H)。13C NMR(101MHz，DMSO)δ173.90，166.58，162.81，147.11，142.99，137.55，135.01，134.79，134.06，125.00，115.42，115.17，115.00，102.57，72.66，21.48，18.69。
4-溴-2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)吡啶(INT-70)
向搅拌的(4-溴吡啶-2-基)甲醇(1.50g，8.0mmol)的DCM(4mL)溶液加入叔丁基氯二甲基甲硅烷(1.20g，8.0mmol)，接着加入TEA(1.60g，12.0mmol)。使反应混合物在室温下搅拌12小时，然后用盐水和EA洗涤。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并浓缩以得到琥珀色的液体。粗制产物通过色谱法(EA/己烷)纯化以得到1.67g(70％)的浅黄色液体的4-溴-2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)吡啶INT-70。LCMS-ESI(m/z)C12H20BrNOSi的计算值：302.3；实测值：303.0[M+H]+，tR＝4.87min(方法1)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30(d，J＝5.3，1H)，7.68(dd，J＝1.9，0.7，1H)，7.35-7.24(m，1H)，4.80(s，2H)，0.99-0.86(m，9H)，0.16-0.06(m，6H)。
2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)异烟腈(INT-71)
Figure BPA00001577340400972
向搅拌的4-溴-2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)吡啶INT-70(0.800g，2.6mmol)的3mL 1-甲基-2-吡咯烷(NMP)溶液中加入氰化锌(0.610g，5.2mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.060g，0.052mmol)。用N2使溶液除气，并在95℃下加热反应混合物12h。在冷却后，将反应混合物用饱和NaHCO3稀释，并用DCM萃取。合并的有机层用Na4SO4干燥，过滤并浓缩。粗制产物通过色谱法(MeOH/DCM)纯化以得到0.170g(26％)的浅黄色固态的2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)异烟腈INT-71。LCMS-ESI(m/z)C13H20N2OSi的计算值：248.4；实测值：249.1[M+H]+，tR＝4.21min(方法1)。
2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-N-羟基异烟甲脒(INT-72)。
使用通用程序1制备。向2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)异烟腈INT-71(0.169g，0.68mmol)的EtOH(8mL)溶液中加入羟胺盐酸盐(0.142g，2.0mmol)和Na2CO3(0.216g，2.0mmol)，并在85℃下加热反应混合物12h。一旦冷却至室温，过滤反应混合物，用EtOH冲洗滤饼。在减压下浓缩滤液，并用EA和盐水洗涤。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，并浓缩以得到0.191g(100％)的浅黄色油状的2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-N-羟基异烟甲脒INT-72。LCMS-ESI(m/z)C13H23N3O2Si的计算值：281.4；实测值：282.1[M+H]+，tR＝2.76min(方法1)。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.50(dd，J＝5.2，0.7，1H)，7.74(dd，J＝1.6，0.7，1H)，7.51(dd，J＝5.2，1.7，1H)，5.98(s，2H)，0.96-0.89(m，9H)，0.14-0.07(m，6H)。
5-(3-(2-(羟基甲基)吡定-4-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基-苄腈(化合物71)
Figure BPA00001577340400982
使用通用程序2制备。在室温下向3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸(0.033g，0.16mmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入HOBt(0.036g，0.23mmol)和EDC(0.045g，0.23mmol)。搅拌反应物0.5h直至完全形成HOBt-酸复合物。加入2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-N-羟基异烟甲脒INT-72(0.050g，0.18mmol)，并在室温下搅拌混合物0.5h直至观察到中间体2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-N-(3-氰基-4-异丙氧基苯甲酰氧基)异烟甲脒的形成。在85℃下加热反应混合物4h。向冷却的反应混合物中加入MeOH (1.0mL)，并过滤溶液。所得滤液通过制备型HPLC纯化以得到5.6mg(8％)的5-(3-(2-(羟基甲基)吡啶-4-基)-1，2，4-噁二唑-5-基)-2-异丙氧基苄腈的TFA盐71。LCMS-ESI(m/z)C18H16N4O3的计算值：336.3；实测值：337.1[M+H]+，tR＝7.45min(方法2)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.78(d，J＝5.5，1H)，8.48(dd，J＝10.6，8.3，1.4，3H)，8.23(dd，J＝5.5，1.6，1H)，7.48(d，J＝9.0，1H)，4.93(s，2H)，4.89(m，1H)，1.48(d，J＝6.1，6H)。
选择的化合物和它们相应的分析数据示于表1中，其中LCMS数据使用方法2(参见通用方法)采集。测定关键中间体和所选择的最终化合物的对映体纯度，以及对于其它化合物从合成推定对映体纯度。
表1
Figure BPA00001577340400991
Figure BPA00001577340401001
Figure BPA00001577340401011
Figure BPA00001577340401021
Figure BPA00001577340401031
Figure BPA00001577340401041
Figure BPA00001577340401051
Figure BPA00001577340401081
Figure BPA00001577340401091
Figure BPA00001577340401101
Figure BPA00001577340401111
Figure BPA00001577340401121
Figure BPA00001577340401131
生物测定
测定程序
S1P1-介导的cAMP报告体抑制作用产生的分析
包含克隆到pcDNA3.1中的S1P1/EDG1的哺乳动物表达质粒购自密苏里S&T cDNA资源中心(Missouri S&T cDNA Resource Centre)。人类S1P1/EDG1的核苷酸和氨基酸序列在Hla和Maciag(J Biol Chem，265(1990)，9308-9313)中公开。用标准技术将S1P1/pcDNA3.1转染至CRE-bla CHO K1(Invitrogen)细胞系中，并选择稳定的单细胞克隆。通过S1P1抗体的细胞表面FACS(R&D系统，克隆号218713)和S1P介导的福斯高林诱导cAMP的抑制确认功能性S1P1/EDG1受体的表达。
S1P1 CRE-bla CHOK1报告体分析-S1P1激动剂的表征
以104个细胞/孔/19.5μl分析培养基(DMEM-无酚，0.5％的活性炭/葡聚糖处理的血清，2mM谷氨酰胺，0.1mM NEAA，1mM丙酮酸钠，25mMHepes)将细胞接种到384孔黑色壁/透明底板中，并在37℃下5％CO2中孵育18小时。在10mM Hepes，0.1％普卢兰尼克F127，在福斯高林的存在下产生剂量效应曲线(10点)。在37℃下在2μM福斯高林的存在下，用0.5μl的化合物处理细胞4小时。根据厂家的说明制备基于FRET的β-内酰胺酶荧光底物(LiveBLAzerTM-FRET B/G Loading Kit CC4-AM；Invitrogen)，并在室温下孵育细胞2小时。在Ex:410/Em:458和Ex:410/Em:522上读板，并测定响应率(response ratio)。通过非线性回归分析数据以确定福斯高林诱导的cAMP的抑制的EC50。
相对其它S1P受体的特异性
为测定化合物对其它S1P受体的特异性，使用如下的细胞系：S1P2CRE-bla CHOK1、S1P3-Gα15 NFAT-bla HEK293T(Invitrogen)、S1P4-blaTANGO U2OS(Invitrogen)、S1P5-bla TANGO U2OS(Invitrogen)。用对于S1P1相同的测定设置，但其不含福斯高林。S1P4和S1P5分析在FreeStyle表达培养基(Invitrogen)中进行。将S1P5细胞孵育48小时，之后用化合物处理该细胞。
报告的S1P1活性
选择的S1P1激动剂的活性数据示于表2中。活性范围表示如下：++++表示激动剂活性＜0.05nM，+++表示激动剂活性在0.05至0.50nM之间，以及++表示激动剂活性在0.50至5.00nM之间，以及+表示激动剂活性＞5.00nM。N/A表示未提供。
表2
Figure BPA00001577340401141
Figure BPA00001577340401151
具体化合物的S1P1-S1P5数据示于表3中。激动剂值(EC50)以nM表示。
表3
  化合物编号   S1P1  S1P2  S1P3  S1P4   S1P5
  8   0.143  ＞10000  ＞10000  ＞10000   108.9
  13   0.100  ＞10000  ＞10000  ＞10000   77.0
  29   0.065  ＞10000  ＞10000  ＞10000   37.8
  33   0.192  ＞10000  ＞10000  616.7   260.1
  37   0.024  1437  ＞10000  879.4   3.5
  49   0.104  ＞10000  ＞10000  ＞10000   94.6
体内测定
大鼠中绝对口服生物利用度的测定
药代动力学研究是在非禁食的雌性Sprague-Dawely大鼠(SimonsenLaboratories或Harlan Laboratories)中进行的。大鼠饲养在ALAAC认可的机构中且该研究得到了实验动物管理与使用委员会(IACUC)批准。实验开始以前动物在实验室中至少适应48小时。
化合物用5％DMSO/5％吐温20和90％纯化水(静脉输注)或5％DMSO/5％吐温20和90％0.1N HCL(经口强饲)配制。给药溶液的浓度通过HPLC-UV来确认。对于静脉内给药，将化合物通过输注泵在一分钟以内向人工限制动物的颈静脉中给药(n＝4大鼠/化合物)。经口给药是用标准的不锈钢灌胃针通过强饲进行(n＝2-4大鼠/化合物)。对于这两种给药途径，给药之后采集八个时间点的血液，最后一个样本在给药后24小时采集。将血液样本中的等分试样转移到聚丙烯96孔板中并在-20℃下冷冻直到分析。
将血液样本在室温下解冻后，在每个孔中加入5μL DMSO。通过加入包含200nM内标(4-羟基-3-(α-亚胺苯甲基)-1-甲基-6-苯基吡啶-2-(1H)-酮)和0.1％甲酸的150μL乙腈沉淀蛋白质。在平板振荡器上将板混合1分钟以促进蛋白质沉淀，然后以3,000rpm离心10分钟使蛋白质成团。在LC/MS/MS分析之前，将上清液转移至清洁的平板中并以3,000rpm离心10分钟以使任何剩余的固体物质成团。通过将存在于DMSO中5μL化合物掺入新鲜采集的EDTA大鼠血液中制成校正曲线标准。各轮生物-分析包括跨越5nM至10000nM范围的八点标准曲线。标准品与大鼠药代动力学样本同样地处理。
大鼠药代动力学样本中的浓度是使用相对八点标准曲线的标准化的HPLC-LC/MS/MS法来测定的。所述系统由Leap CTC Pal注射器、具有与Applied Biosystems 3200 QTrap偶联的二元泵的Agilent 1200 HPLC组成。化合物在具有安全保护的Phenomenex Synergy Fusion RP 20x2mm 2um MercuryCartridge上层析。梯度方法使用由含0.1％甲酸的水组成的流动相A和由含0.1％甲酸的乙腈组成的流动相B，0.7至0.8mL/min变化的流速。使用电喷雾电离(ESI)接口以正离子模式产生离子。开发针对各化合物的多反应监测(MRM)方法。加热型雾化器设置在325℃，具有4.8μA的雾化器电流。用于产生子离子的碰撞能量范围在29至39V之间。从各种化合物特定的质量转变的MRM得到的峰面积比被用来定量。本方法的定量极限通常为5nM。用Analyst软件版本1.4.2来采集和分析数据。
用非房室法(WinNonlin版本5.2；用于口服给药的模型200以及用于静脉输注的模型202)来分析血液和/或血浆浓度对时间的数据。使用如下表达式计算绝对口服生物利用度(％)：(口服AUC×IV剂量)/(IV AUC×口服剂量)×100。
淋巴细胞减少
在小鼠中：雌性C57BL6小鼠(Simonsen Laboratories，Gilroy CA)被饲养在ALAAC认可的机构中并且该研究得到了实验动物管理与使用委员会(IACUC)批准。实验开始以前动物在实验室中至少适应5天。通过用由5％DMSO/5％吐温20和90％0.1N HCl组成的媒介中配制的1mg/kg化合物经口强饲来给小鼠给药(n＝3/化合物/时间点)。对照小鼠用媒介PO给药。从异氟烷麻醉的小鼠上通过心脏穿刺采集末梢全血样本至EDTA中。用大鼠抗小鼠CD16/CD32(Mouse BD Fc Block，#553141)、PE-大鼠抗小鼠CD45R/B220(BD #553089)、APC-Cy7-大鼠抗小鼠CD8a(BD#557654)以及Alexa Fluor647-大鼠抗小鼠CD4(BD #557681)在冰上来孵育全血30min。用BD Pharm Lyse Lysing缓冲液(#555899)溶解红细胞并通过FACS分析白细胞。淋巴细胞减少表示为CD4或CD8阳性T细胞的白细胞的百分比。通过用线性梯形法则计算效应曲线(AUEC)下面积来评价24小时内的整体淋巴细胞减少响应。
在大鼠中：雌性大鼠(Simonsen Laboratories，Gilroy CA)被饲养在ALAAC认可的机构中并且该研究得到了实验动物管理与使用委员会(IACUC)批准。实验开始以前动物在实验室中至少适应5天。通过用由5％DMSO/5％吐温20和90％0.1N HCl组成的媒介配制的1mg/kg化合物经口强饲来对大鼠给药(n＝3/化合物/时间点)。对照大鼠用媒介PO给药。从异氟烷麻醉的小鼠通过眼后窦采取全血和通过心脏穿刺采集末端样本至EDTA中。用小鼠抗大鼠CD32(BD #550271)、PE-小鼠抗大鼠CD45R/B220(BD #554881)、PECy5-小鼠抗大鼠CD4(BD#554839)和APC-小鼠抗大鼠CD8a(eBioscience #17-0084)在冰上孵育全血30分钟。使用BD Pharm Lyse Lysing缓冲液(#555899)溶解红细胞并通过BD FACSArray分析白细胞。淋巴细胞减少表示为CD4或CD8阳性T细胞的白细胞的百分比。通过用线性梯形法则计算效应曲线(AUEC)下面积来评价24小时内的整体淋巴细胞减少响应。在某些实验中，使用标准的基于阻抗的动物血液分析仪(IDEXX Preclinical Research Services，Sacramento，CA)测定总淋巴细胞记数。
大鼠的治疗指数的评估
可以在非禁食的雄性和雌性的Sprague-Dawely大鼠(SimonsenLaboratories)中进行研究。大鼠可以饲养在AAALAC认可的机构中且该研究可以得到实验动物管理与使用委员会(IACUC)批准。实验开始以前动物应该在实验室中至少适应5天。
化合物可以配制成在由纯化水中的0.5％羧甲基纤维素(Acros Organics)(用盐酸将pH调节至～2.2)组成的媒介中的悬浮液。相同的制剂用在大鼠的淋巴细胞减少和如下描述的毒理学研究中。悬浮液中各化合物的浓度应通过HPLC-UV证实在目标浓度的±10％的范围内。
在进行毒理学研究之前，可以测定各种化合物的3-5天日剂量对雌性大鼠的外周T细胞计数的效应(参照上述大鼠中淋巴细胞减少的测量方法)。在这些淋巴细胞减少的研究中，在最终研究剂量后按一定的间隔将血液样本采集到EDTA上。每一次研究的采集时间不一定必须相同，然而所有的研究可以包括最后给药后24小时采集的样本。淋巴细胞减少的数据被用作生物标志物以为后续的毒理学研究选择相等药理学活性的剂量。毒理学研究的低剂量为在最终的给药后24h相对于媒介处理的大鼠导致T-细胞计数下降50％的各化合物的剂量。
在毒理学研究中，使用基于体重的随机化分配三个雄性和三个雌性大鼠到给药组中。在各研究中的对照组接受媒介。所有动物以5mL/kg/天的剂量体积通过经口强饲连续5或14天给药。每天观察动物的任何不良反应的表现。在最终研究给药后24小时后，用异氟烷麻醉大鼠并通过心内穿刺获取末梢血液样本用于血液学和临床化学评估(IDEXX Laboratories，Sacramento，CA)。采集、称重带气管的肺和然后用于以10％中性缓冲的福尔马林经气管灌注准备组织学分析。然后将从内部固定的肺保存在10％中性缓冲的福尔马林中并胙组织学检验(IDEXX)。
可以通过线性插值法评估各化合物的导致肺与最终体重比率增加10％的各化合物的剂量。然后治疗指数可以评估为产生10％肺重量增加的剂量和产生50％T细胞耗竭的剂量的比值。
大鼠中TNBS克罗恩氏结肠炎模型的描述
将雄性Sprague-Dawley(180-200克)适应7天，然后指定每组8只大鼠以便每组具有大约相同的平均体重。在疾病开始之前的24小时，大鼠禁食。麻醉大鼠并秤重，然后经插入肛门的20克喂食针向结肠内灌输80mg/kgTNBS溶液(50％TNBS：50％200标准乙醇(proof ethanol))。大鼠保持头低位直至从麻醉中复原。TBBS-灌输两小时后开始每日口服给药，持续六天。泼尼松龙作为阳性对照且以10mg/kg每天经口给药。每天监测体重且在最后给药后24小时，处死所有组动物。取出结肠，冲洗粪便物，然后检查包括狭窄、粘连和溃疡的总体改变。记录结肠的长度、远端2厘米的重量和肠壁的厚度。
小鼠中甲型流感H1N1模型的描述
可以将雄性C57Bl/6(6-8周龄)适应7天，然后分配每组5-8只小鼠以便每组具有大约相同的平均体重。可以用104PFUs小鼠适应性甲型流感病毒(A/WSN/33)经气管内途径感染小鼠。感染后1小时后，可以用0.2-1.5mg/kg化合物经口处理小鼠。感染后48小时后，小鼠可以通过颈脱位法实施无痛致死术，并可以采集支气管肺泡灌洗液。通过ELISA可以进行定量细胞因子分析。在一些实验中，可以进行整个身体灌注法，以及可以收集肺用于炎性细胞的细胞计数。通过用3-10×104PFU小鼠适应性甲型流感病毒感染14天以上来进行寿命研究。

Claims (60)

1.一种具有式I-R或I-S的结构的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物：
Figure FPA00001577340300011
其中，
X为-NR′R″或-OR″′；
Y为-CN、-Cl、-CF3、I、-COOH或-COOR1；
R′为H、C1-4烷基，伯羟基C1-4烷基、-SO2-R1或-CO-R1；
R″为H、-SO2-R3、任选地被一个或多个R2取代的C1-4烷基，或者任选地被R4取代的环部分，其中这种环部分为哌啶基、环己基、吗啉基、噻唑基、吡唑基、吡咯烷基、咪唑基或苯基；
或者，R′和R″与它们连接的氮原子一起形成含有0或1个额外的杂原子的4、5或6元饱和杂环，其中这种额外的杂原子为O或N，其中这种杂环任选地被独立地选自下面的取代基单取代或多取代：-OH、氧代、-NH2、伯羟基-C1-4烷基、-COOH、-(CH2)m-COOH、-(CH2)m-COOR1、-N(R1R1)和-(CH2)m-CO-N(R5R5)；
R″′为H、C1-4烷基或-CO-R1；
各R1独立地为C1-4烷基或H；
各R2独立地为H、卤素、OH、氧代、＝NH、NH2、-COOH、F、-NHR1-N(R5R5)、-SO2-R1、-SO2-N(R5R5)、-N(R1)-SO2-R1、-COOR1、-OCO-R1、-CO-N(R5R5)、-N(R1)-COR1、C1-3烷基、C1-3烷氧基和任选地被R4取代的环部分；其中，这种环部分为哌嗪基、哌啶基、吗啉基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、氮杂环丁烷基、cyclobutinyl或苯基；
各R3独立地为R2、C1-4烷基、C3-6环烷基或任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基；
各R4独立地为卤素、OH、-NH2、-NHR1、-N(R1R1)、-COOH、-COOR1、-NHCO-R1；各R5独立地为C1-4烷基或H，或者两个R5与它们连接的氮原子一起形成含有0或1个额外的杂原子的4、5或6元饱和杂环，其中，这种额外的杂原子为O或N，其中这种杂环任选地被-OH、-NH2、-N(R1R1)、伯羟基C1-4烷基、-(CH2)m-COOH、-(CH2)m-COOR1取代；以及
各个m独立地为0、1、2或3。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物具有通式I-R，或其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物的结构。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物具有通式I-S，或其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物的结构。
4.根据权利要求1-3所述的化合物，其中，所述化合物为基本光学纯的。
5.根据权利要求1-4所述的化合物，其中，如在用所述化合物5或14天的给药后在大鼠体内测量的，所述化合物具有至少为5的治疗指数，其中所述治疗指数为在所述5或14天结束时实现肺与终末体重比增加小于或等于10％的剂量与实现50％的淋巴细胞减少的剂量的比率。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中，所述治疗指数为至少10。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中，所述治疗指数为至少20。
8.根据权利要求5-7所述的化合物，其中，所述化合物的治疗指数大于所述化合物的对映体的治疗指数。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中，所述化合物的治疗指数为所述化合物的对映体的治疗指数的至少150％。
10.根据权利要求1-9所述的化合物，其中，Y为Cl。
11.根据权利要求1-9所述的化合物，其中，Y为CF3。
12.根据权利要求1-9所述的化合物，其中，Y为CN。
13.根据权利要求1-12所述的化合物，其中，X为-NR′R″。
14.根据权利要求1-12所述的化合物，其中X为-OR″′。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中X为-OH。
16.根据权利要求14所述的化合物，其中X为-OCO-R1。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中，R1为C1-3烷基。
18.根据权利要求13所述的化合物，其中R′为H。
19.根据权利要求13所述的化合物，其中R′为-COR1。
20.根据权利要求13所述的化合物，其中，R′为-SO2-R1。
21.根据权利要求13所述的化合物，其中R″为H。
22.根据权利要求13所述的化合物，其中R″为-SO2-R3。
23.根据权利要求13所述的化合物，其中，R″为任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基。
24.根据权利要求13所述的化合物，其中，R″为-(CRaRb)n-R2；各Ra和各Rb独立地选自H、羟基和甲基，或者连接到相同碳原子上的Ra和Rb一起形成氧代；以及n为0、1、2或3。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中n为2。
26.根据权利要求25所述的化合物，其中，R2为-OH、-NH2、-NHR1、-N(R5R5)或-COOH。
27.根据权利要求22所述的化合物，其中，R3为任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基。
28.根据权利要求22所述的化合物，其中Y为CN。
29.根据权利要求27所述的化合物，其中，R3为-C2H5-N(R5R5)或-CH2-CO-N(R5R5)。
30.根据权利要求28所述的化合物，其中，R3为C2H5-O-R1。
31.根据权利要求12所述的化合物，其中，X为-NH-CO-N(R5R5)。
32.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物选自化合物1-55：
Figure FPA00001577340300041
Figure FPA00001577340300051
Figure FPA00001577340300061
Figure FPA00001577340300071
Figure FPA00001577340300081
或者其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物。
33.根据权利要求32所述的化合物，其选自化合物8、13、29、33、37和49：
Figure FPA00001577340300092
或者其药学上可接受的盐、酯、前药、同系物、水合物或溶剂合物。
34.一种药物组合物，其包含权利要求1-33中所述的化合物和合适的赋形剂。
35.一种药物组合，其包含权利要求1-33中所述的化合物和第二药物。
36.根据权利要求35所述的药物组合，其中，所述第二药物的医用适应症为治疗多发性硬化症、移植排斥或急性呼吸窘迫综合征。
37.权利要求1-33中任一项所述的化合物用于制备药物的用途。
38.一种激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的方法，其包括使所述受体亚型1与有效量的权利要求1-33所述的化合物或权利要求34-35所述的组合物接触的步骤。
39.根据权利要求38所述的方法，其中，所述的化合物激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型1达到高于所述化合物激活或激动1-磷酸鞘氨醇受体亚型3的程度。
40.根据权利要求38所述的方法，其中，所述1-磷酸鞘氨醇受体亚型1在活的哺乳动物体内处理。
41.一种治疗患者的医疗上需要1-磷酸鞘氨醇受体亚型1的激活或激动的病症的方法，该方法包括以足以为患者提供有益效果的频率和持续时间向患者施用有效量的权利要求1-33所述的化合物。
42.根据权利要求41所述的方法，其中，相对于S1P受体的其它亚型选择性激活或激动S1P亚型1受体是医疗上需要的。
43.根据权利要求41或42所述的方法，其中，所述病症包括多发性硬化症、移植排斥、急性呼吸窘迫综合征、溃疡性结肠炎、流感、克罗恩氏病或成人呼吸窘迫综合征。
44.一种用于合成包含在四氢萘部分六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物的方法，其中，所述化合物是关于所述手性碳对映体富集的，所述方法包括如下步骤：
(i)提供包含四氢萘部分的化合物，其中所述四氢萘部分的六元饱和环中需要手性取代的环碳在该碳上被氧代取代；
(ii)使这一化合物与手性试剂反应以在之前连接氧代基团的四氢萘部分的碳处形成手性中心。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述手性试剂为RuCl(对异丙基甲苯)[(R，R)-Ts-DPEN]或RuCl(对异丙基甲苯)[(S，S)-Ts-DPEN]。
46.根据权利要求44-45所述的方法，其中，在步骤(i)中提供的所述包含四氢萘部分的化合物与手性试剂接触以在步骤(ii)中形成式VI-R或VI-S的化合物：
Figure FPA00001577340300111
其中，Z为-CN、-Cl或-CF3。
47.根据权利要求46所述的方法，其中Z为-CN。
48.根据权利要求46和47所述的方法，其中，所述方法进一步包括通过用叠氮磷酸二苯酯(DPPA)处理式VI-R或VI-S化合物使之前连接氧代基团的位于四氢萘部分六元饱和环中的手性碳的手性构型翻转而形成式VII-S或VII-R的叠氮基四氢萘的步骤：
Figure FPA00001577340300112
其中，所述四氢萘部分六元饱和环中的叠氮基取代基取代羟基取代基，以及连接叠氮基取代基的手性碳具有与当所述手性碳之前连接羟基取代基时相反的构型。
49.根据权利要求48所述的方法，其中Z为-CN，且所述方法进一步包括以下步骤：通过(a)使VII-R或VII-S的中间体与保护剂反应并然后使所得保护形式的式VII-R或VII-S中间体与羟胺或盐酸羟胺反应以在已经连接Z的苯基碳上形成羟基脒，该反应所得的化合物具有式VIII-R或VIII-S：
Figure FPA00001577340300113
(b)使式VIII-R或VIII-S的中间体与取代的苯甲酸和偶联剂接触以形成式IX-R或XI-S的化合物：
Figure FPA00001577340300114
其中，X为OH、N3、NH-PG、NH2或NR′R″；PG为保护基团；R′为H、C1-4烷基、伯羟基C1-4烷基、-SO2-R1或-CO-R1；R″为H、-SO2-R3、任选地被1个或多个R2取代的C1-4烷基，或者任选地被R4取代的环部分，其中这种环部分为哌啶基、环己基、吗啉基、噻唑基、吡唑基、吡咯烷基、咪唑基或苯基；Ra为低级烷基，以及R1、R2、R3和R4与权利要求1中的定义相同，
形成在四氢萘部分上的取代的1，2，4-噁二唑。
50.根据权利要求49所述的方法，式IX-R或IX-S的化合物具有如下结构：
Figure FPA00001577340300121
51.根据权利要求49-50所述的方法，其中，所述偶联剂为包含羟基苯并三唑(HOBt)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)的混合物。
52.根据权利要求44-51所述的方法，其中，在步骤(i)中提供的化合物为：
Figure FPA00001577340300122
53.根据权利要求42-52所述的方法，其中所得的包含在四氢萘部分六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物的对映体富集为至少90％。
54.根据权利要求53所述的方法，其中，所得的化合物对映体富集为至少95％。
55.根据权利要求54所述的方法，其中，所得的化合物对映体富集为至少98％。
56.根据权利要求55所述的方法，其中，所得的化合物对映体富集为至少99％。
57.一种选自如下化合物中的化合物：
Figure FPA00001577340300131
58.一种用于合成包含在四氢萘部分六元饱和环中具有手性碳的四氢萘部分的化合物的方法，其中所述化合物相对于所述手性碳是对映体富集的，所述方法包括提供权利要求57所述的化合物的步骤。
59.根据权利要求58所述的方法，其中，所述包含在茚满部分的五元环中具有手性碳的茚满部分的化合物为式IX-R或XI-S的化合物：
Figure FPA00001577340300141
其中，X与在权利要求1中的定义相同。
60.根据权利要求59所述的方法，其中，所述式IX-R或XI-S的化合物为权利要求1-33所述的化合物。
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