CN102680703B - 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 - Google Patents
一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102680703B CN102680703B CN201210133570.9A CN201210133570A CN102680703B CN 102680703 B CN102680703 B CN 102680703B CN 201210133570 A CN201210133570 A CN 201210133570A CN 102680703 B CN102680703 B CN 102680703B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- coated
- myoglobins
- antibody
- detection
- rabbit igg
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 126
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 title abstract description 9
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 title abstract description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 40
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 90
- NPRDEIDCAUHOJU-UHFFFAOYSA-N [Pt].N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 Chemical class [Pt].N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 NPRDEIDCAUHOJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 28
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 28
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 28
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 23
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 23
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 18
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 18
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 17
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 16
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 14
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 14
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 13
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 11
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 238000007639 printing Methods 0.000 claims description 10
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 10
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 9
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 9
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 claims description 9
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 claims description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 claims description 8
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 claims description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 239000005030 aluminium foil Substances 0.000 claims description 6
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 6
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 6
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- -1 soak Substances 0.000 claims description 6
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WFCSWCVEJLETKA-UHFFFAOYSA-N 2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound OCCN1CCNCC1 WFCSWCVEJLETKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 3
- 230000000712 assembly Effects 0.000 claims 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 claims 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 abstract 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 abstract 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 2
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 2
- 102100026893 Troponin T, cardiac muscle Human genes 0.000 description 2
- 101710165323 Troponin T, cardiac muscle Proteins 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQRLYSGCPHSLJI-UHFFFAOYSA-N [Fe].N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 Chemical compound [Fe].N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 JQRLYSGCPHSLJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002558 medical inspection Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical group 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 150000003233 pyrroles Chemical class 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical group O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Abstract
本发明公开了一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法，该免疫荧光试纸条组件包括了试纸条和独立包装的铂卟啉标记特异抗体，试纸条包括了由底衬上依次接合的吸水垫、包被分析膜及样品垫而组成的条形物，包被分析膜上设置有检测线和质控线，所述包被分析膜上的检测线包被特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体，质控线包被兔IgG抗体，独立包装的荧光素标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，检测卡则将一卡盒和试纸条组件结合即可，应用本发明所提供的试纸条检测人血液、血清或血浆中肌红蛋白，操作简单、快速、灵敏和特异性好等特点，具有良好的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明属于医学检验领域，具体涉及一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条及其制备方法与应用。
背景技术
肌红蛋白(Myoglobin，MYO)是一种氧结合血红素蛋白，分子量17.8kD，主要分布于心肌和骨骼肌组织，心肌中含量特别丰富。MYO由一条多肽链和一个辅基组成。多肽链由153个氨基酸残基组成；辅基为血红素；在肌肉中有运输氧和储氧功能。肌红蛋白三级结构的形状呈紧密球形，多肽链中氨基酸残基上的疏水侧链大都在分子内部，疏水侧链多位于分子表面，因此其水溶性较好。三级结构有8段α-螺旋区，每个α-螺旋区含7～24个氨基酸残基，分别称为A、B、C…G及H肽段。有1～8个螺旋间区，肽链拐角处为非螺旋区(亦称螺旋间区)，包括N端有2个氨基酸残基，C端有5个氨基酸残基的非螺旋区。内部存在一口袋形空穴，血红素居于此空穴中。血红素是铁卟啉化合物，它由4个吡咯通过4个甲炔基相连成一个大环，Fe2+居于环中。铁与卟啉环及多肽链氨基酸残基的连接：铁卟啉上的两个丙酸侧链以离子键形式与肽链中的两个碱性氨基酸侧链上的正电荷相连。血红素的Fe2+与4个吡咯环的氮原子形成配位键，另2个配位键1个与F8组氨酸结合，1个与O2结合，故血红素在此空穴中保持稳定位置。这种构象非常有利于运氧和储氧功能，同时也使血红素在多肽链中保持稳定。
肌红蛋白在心肌损伤后，能快速释放入血。它占细胞浆蛋白的5％～10％以上。就骨骼肌而言，肌红蛋白主要见于慢开关的“红”纤维(慢纤维)；心肌有多种肌红蛋白的同型，有无心脏特异性肌红蛋白同型尚未证实。目前检测到的肌红蛋白不能区分源于骨骼肌或心肌，因此说，肌红蛋白是非心脏特异性的。尽管如此，肌红蛋白在胸痛发作后头几个小时，比CK和CKMB活性敏感性更高，它常于胸痛发作后2～4h开始升高，急性心肌梗塞(AMI)发作后6～10h，仍可检测到。肌红蛋白对于因胸痛入院需除外AMI的患者是一种非常好的标志物。如果胸痛发作后8h肌红蛋白仍在正常范嗣，则可排除AMI之诊断。在非创伤性胸痛患者，肌红蛋白诊断特异性与CKMB相当。肌红蛋白检测不应当用于复苏后或肾功能衰竭并怀疑AMI患者。在无并发症的患者，肌红蛋白的快速清除特性可用于再梗死的诊断。目前认为，肌红蛋白是判断AMI患者有无再灌注的最好的无创指标之一。在溶栓治疗开始后9Omin，如肌红蛋白升高近4倍则可比较准确地判定梗死相关冠脉已完全再通，因此，可用于评估溶栓治疗后梗死相关血管再通情况。肌红蛋白也是外科冠状动脉旁路术后判断围手术期AMI的早期指标，当主动脉松开钳夹后3h肌红蛋白浓度明显变化即可判断AMI。因为肌红蛋白在循环中的半衰期短，用于极早发现梗死比其他指标更敏感。若与cTnl联合应用可提高其特异性，披认为是当前早期诊断急性心肌梗死的最佳搭配之一
MYO的测定多采用双抗体竞争放射免疫法和竞争性ELISA测定法。有研究者将金标记或硒标记单克隆抗体与免疫层析技术相结合，用纸条法半定量床边检测MYO浓度，最低检测值为20μg/L。目前cTnT的检测多采用化学发光法，用化学发光物质标记后作为检测抗体，大大提高了测定的精确性和敏感性，但需要昂贵的检测设备。目前的床旁检测方法(胶体金试纸法)，不能满足临床诊断准确定量的要求，无法对AMI的病程起到很好的疗效监测作用。
因此，建立一种检测时间尽量缩短，并且检测除了能在实验室进行外，还要求能够进行床旁检测，同时能定量测定cTnT的检测方法，从而为临床提供准确的诊断依据，是十分必要的。
发明内容
为克服现有肌红蛋白(MYO)检测技术的不足，本发明的主要目的在于提供一种快速检测MYO的试纸条及其制备方法与应用。本发明根据免疫荧光技术特点和MYO抗原抗体系统特点，设计新的原材料、试剂和工艺流程，应用本发明提供的试纸条检测MYO水平，具有简单、快速、灵敏和特异性好等特点，本发明可同时定量检测高值和低值样品，并且性价比高，适用于临床快速检测。
本发明的又一目的在于提供种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条，本发明采用免疫荧光快速检测技术，利用荧光的高灵敏特点，且样品与荧光标记抗体在试剂瓶内反应后再加入检测卡。由于样品与荧光标记抗体在液相中全面接触，反应充分，因此可大幅度提高反应灵敏度，同时增加了样品的稀释倍数，去除了样品的基质效应，使定量结果有很好的可重复性，而且此方法省略了直接加样步骤，提高了定量结果的精密度和准确度，可满足同时检测高值和低值的临床诊断要求。
本发明采用的技术方案为：
一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，包括试纸条和与试纸条配合使用且独立包装的铂卟啉标记特异抗体，试纸条包括底衬、依次接合在底衬上的吸水垫、包被分析膜及样品垫，该包被分析膜上设有检测线和质控线，检测线包被的特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体，质控线包被的特异抗体为兔IgG抗体；铂卟啉标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体。
优选地，所述底衬一面涂覆黏胶或双面胶，用于固定所述的吸水垫、包被分析膜及样品垫，其中，包被分析膜粘附在所述底衬的中间，两侧分别与所述吸水垫和样品垫连接。
优选地，所述吸水垫为一种滤纸，为吸水纸或滤油纸；所述吸水垫粘附在所述底衬上，同时吸水垫与包被分析膜重叠1-2mm连接。
优选地，所述包被分析膜为硝酸纤维膜，且在包被分析膜上喷涂抗肌红蛋白单克隆抗体和兔IgG抗体。所述样品垫为玻璃纤维膜，用含0.01％-0.5％PEG、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液缓冲液浸泡，缓冲液PH为7.2，浸泡处理后，37℃干燥过夜；样品垫(6)位于所述包被分析膜上。
优选地，所述铂卟啉标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，并分别用含有如下组分的0.01M磷酸盐缓冲液稀释后用塑料瓶密封而得：0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、5％-20％甘油、0.01％-0.05％表面活性剂。
优选地，所述独立包装的铂卟啉标记的激发光波长范围为390-420nm，发射光波长范围为600nm-700nm。
一种制备上述的定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的方法，包括以下步骤：
第一步，抗体的制备，
选用纯化的基因工程表达的抗肌红蛋白单克隆抗体、抗兔IgG抗体和纯化的兔IgG；
第二步，包被分析膜的制备，
采用喷膜机分别在一硝酸纤维膜上划检测线和质控线，划线细致均匀，检测线与质控线间隔5mm；
用检测线包被缓冲液稀释抗肌红蛋白单克隆抗体至浓度为10-20ug/ml，采用喷膜机将抗肌红蛋白单克隆抗体喷印在硝酸纤维膜的检测线上；
用质控线包被缓冲液稀释纯化的兔IgG至浓度为10-20ug/ml，采用喷膜机将纯化的兔IgG喷印在硝酸纤维膜的质控线上；
将喷膜后的硝酸纤维膜放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
第三步，样品垫的制备，
将玻璃纤维膜用含0.01％-0.5％PEG、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液浸泡，放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
第四步，铂卟啉标记特异抗体的制备：
将抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，分别加入30-50mg的荧光素溶解液，搅匀，室温孵育1小时，每隔15分钟混匀一次，最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的荧光素标记抗体，用0.01M磷酸盐缓冲液稀释混匀后于4℃保存；
第五步，形成免疫荧光试纸条，
先将包被分析膜粘附在底衬中间位置上，在包被分析膜一端粘附吸水垫，二者重叠1-2mm；在包被分析膜另一端粘附样品垫，二者重叠1-2mm；再将黏贴好包被分析膜、吸水垫和样品垫的底衬裁切成细条，即成一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸。
优选地，所述检测线包被缓冲液为含有0.8-1％的甲醇、0.8-1％的蔗糖、0.2％-0.6％的牛血清白蛋白、抗肌红蛋白单克隆抗体1mg/ml的20mM pH值为7.2的磷酸盐缓冲液。
或，所述检测线包被缓冲液为含有0.8-1％的甲醇、0.8-1％的海藻糖蔗糖、0.2％-0.6％的牛血清白蛋白、抗肌红蛋白单克隆抗体1mg/ml的20mM pH值为7.6的羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液。
优选地，所述质控线包被缓冲液为含0.7-1％的甲醇、0.5-0.8％的牛血清白蛋白、兔IgG抗体0.5mg/ml的50mM pH值为7.6磷酸盐缓冲液。
一种应用上述定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的检测卡组件，包括试纸条组件和用聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的盖板和用聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的背板组成的卡盒，所述背板包括放置所述试纸条的卡槽和用于与所述盖板结合的卡齿，所述盖板包括可观测检测结果的检测窗、可滴加样品的加样孔和用于与所述背板的卡齿结合的固定孔，所述试纸条通过所述卡齿与所述固定孔结合而嵌合在所述背板和所述盖板之间，其中，所述包被分析膜正对所述检测窗，所述样品垫正对所述加样孔；另外，独立包装的铂卟啉标记特异抗体分装在塑料试剂瓶中并密封瓶盖。
一种制备上述定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的检测卡组件的方法，包括以下步骤：
1)制成背板和盖板：
用聚苯乙烯或聚氯乙烯等塑料材质制成背板和盖板，所述背板包括放置上述试纸条的卡槽和用于与所述盖板结合的卡齿，所述盖板包括可测结果的检测窗、可滴加样品的加样孔以及用于与所述背板的卡齿结合的固定孔；
2)组装：
将试纸条放在所述背板的所述卡槽内，通过所述背板的卡齿与所述盖板的固定孔(10)结合，将试纸条嵌合在背板和盖板之间，其中，包被分析膜正对所述检测窗，样品垫(6)正对所述加样孔；另外，独立包装的铂卟啉标记特异抗体分装在塑料试剂瓶中并密封瓶盖。
3)包装：
将1人份的检测卡组件与一包干燥剂封装在铝箔塑料袋内，并配备1瓶独立包装的铂卟啉标记特异抗体，将多组所述铝箔塑料袋和所述独立包装的铂卟啉标记特异抗体装入一个包装盒，在2℃-8℃环境下避光不冻存的进行保存。
本发明的有益效果：应用本发明提供的试纸条检测人体内MYO水平，成本低廉，操作简单、快速、灵敏，且特异性好，只需要配套专用荧光检测仪，因此可广泛应用于各级医疗检验场所，尤其是基层医疗机构，包括乡镇卫生院等均可开展。本发明可定量测定MYO，其对于心脑血管事件发生的预防有极为重要的意义。
附图说明
图1为本发明的试纸条的结构示意图；
图2为本发明的检测卡结构示意图；
图3是铂卟啉发光材料的发射光谱曲线；
图4为本发明的反应方式示意图；
图5为本发明的检测结果示意图；
图6为本发明的肌红蛋白检测标准工作曲线。
附图标记：1：底衬；2：吸水垫；3：包被分析膜；4：检测线；5：质控线；6：样品垫；7：加样孔；8：检测窗；9：项目名称；10：固定孔；11：盖板；12：卡槽；13：背板；14：卡齿；15：铂卟啉标记抗体；16：肌红蛋白；17：检测线抗肌红蛋白单克隆抗体；18：质控线兔IgG抗体。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明，凡依照本发明公开内容所作出的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。
如附图1所示，一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，包括试纸条和与试纸条配合使用且独立包装的铂卟啉标记特异抗体，试纸条包括底衬1、依次接合在底衬1上的吸水垫2、包被分析膜3及样品垫6，该包被分析膜上3设有检测线4和质控线5，检测线4包被的特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体，质控线5包被的特异抗体为兔IgG抗体；铂卟啉标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体。
底衬1一面涂覆黏胶或双面胶，用于固定所述的吸水垫2、包被分析膜3及样品垫6，其中，包被分析膜3粘附在所述底衬1的中间，两侧分别与吸水垫2和样品垫6连接。
吸水垫2为一种滤纸，为吸水纸或滤油纸；吸水垫2粘附在所述底衬1上，同时吸水垫2与包被分析膜3重叠1-2mm连接。
包被分析膜3为硝酸纤维膜，且在包被分析膜3上喷涂抗肌红蛋白单克隆抗体和兔IgG抗体。
样品垫6为玻璃纤维膜，用含0.01％-0.5％PEG、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液缓冲液浸泡，缓冲液PH为7.2，浸泡处理后，37℃干燥过夜；样品垫6位于所述包被分析膜3上。
铂卟啉标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，并分别用含有如下组分的0.01M磷酸盐缓冲液稀释后用塑料瓶密封而得：0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、5％-20％甘油、0.01％-0.05％表面活性剂。
制备上述定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的方法，包括以下步骤：
第一步，抗体的制备，
选用纯化的基因工程表达的抗肌红蛋白单克隆抗体、抗兔IgG抗体和纯化的兔IgG。
第二步，包被分析膜3的制备，
用检测线包被缓冲液稀释抗肌红蛋白单克隆抗体至浓度为10-20ug/ml，采用BIO-DOT喷膜机将抗肌红蛋白单克隆抗体喷印在硝酸纤维膜的检测线上；
用质控线包被缓冲液稀释纯化的兔IgG至浓度为10-20ug/ml，采用BIO-DOT喷膜机将纯化的兔IgG喷印在硝酸纤维膜的质控线上；
将喷膜后的硝酸纤维膜放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
其中，检测线包被缓冲液的制备：20mM pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)，含甲醇1％、蔗糖0.8％、牛血清白蛋白0.2％、4E2抗体1mg/ml。
质控线包被缓冲液的制备：50mM pH7.6磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)，含甲醇1％、牛血清白蛋白0.8％、兔IgG0.5mg/ml。
第三步，样品垫6的制备，
用含0.2％聚乙二醇、2.5％牛血清白蛋白、0.03％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液，采用BIO-DOT喷膜机分别喷印在样品垫上，将喷印后的样品垫放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥3小时后取出密封备用。
第四步，铂卟啉标记特异抗体的制备：
将抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，分别加入30-50mg的铂卟啉溶解液，搅匀，室温孵育1小时，每隔15分钟混匀一次，最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的荧光素标记抗体，用0.01M磷酸盐缓冲液稀释混匀后于4℃保存；
第五步，形成免疫荧光试纸条，
先将包被分析膜粘附在底衬1中间位置上，在包被分析膜3一端粘附吸水垫2，二者重叠1-2mm；在包被分析膜3另一端粘附样品垫6，二者重叠1-2mm；再将黏贴好包被分析膜(3)、吸水垫2和样品垫6的底衬1裁切成细条；即成一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸。
如附图2所示，一种应用上述定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的检测卡组件，包括试纸条组件和用聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的盖板11和用聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的背板13组成的卡盒，背板13包括放置所述试纸条的卡槽12和用于与盖板11结合的卡齿14，盖板11包括可观测检测结果的检测窗8、可滴加样品的加样孔7和用于与背板的卡齿14结合的固定孔10，试纸条通过卡齿14与所述固定孔10结合而嵌合在背板13和盖板11之间，其中，包被分析膜3正对检测窗8，样品垫6正对加样孔7；另外，独立包装的铂卟啉标记特异抗体分装在塑料试剂瓶中并密封瓶盖。
一种制备上述定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的检测卡组件的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制成背板13和盖板11：
用聚苯乙烯或聚氯乙烯等塑料材质制成背板13和盖板11，背板13包括放置试纸条的卡槽12和用于与盖板11结合的卡齿14，盖板11包括可测结果的检测窗8、可滴加样品的加样孔7以及用于与背板的卡齿14结合的固定孔10；
2)组装：
将试纸条放在背板13的卡槽12内，通过背板13的卡齿14与盖板11的固定孔10结合，将试纸条嵌合在背板13和盖板11之间，其中，包被分析膜3正对所述检测窗8，样品垫6正对所述加样孔7；另外，独立包装的铂卟啉标记特异抗体分装在塑料试剂瓶中并密封瓶盖。
3)包装：
将1人份的检测卡组件与一包干燥剂封装在铝箔塑料袋内，并配备1瓶独立包装的铂卟啉标记特异抗体，将多组所述铝箔塑料袋和所述独立包装的铂卟啉标记特异抗体装入一个包装盒，在2℃-8℃环境下避光不冻存的进行保存。
本发明的检测原理：
参照附图3，对铂卟啉发光材料的发射光谱曲线进行分析，发现铂卟啉所具有的特征光谱的激发光光源范围为390-420nm，发射光波长范围为600-700nm。由于铂卟啉发光标记物的特点，使得以其作为标记物的免疫荧光试纸条可与仪器结合，使得基于铂卟啉发光技术的免疫层析试纸条可进行灵敏度极高的多重分析、且对目标被检测物进行灵敏度极高的精确定量检测。
另外，本发明的快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条及检测卡，利用荧光的高灵敏特点，使待测样品与铂卟啉标记先在试剂瓶内反应，由于待测样品与铂卟啉标记在液相中全面接触，反应充分，因此可大幅度提高反应灵敏度，同时增加了待测样品的稀释倍数，去除了待测样品的基质效应，使定量结果有很好的可重复性；而且铂卟啉标记上的特异抗体与待测样品充分结合形成一复合物，然后将复合物转加到检测卡的加样孔7的样品垫6上，实现铂卟啉发光材料与免疫层析技术相结合从而检测人体内肌红蛋白水平。如图4所示，当复合物加到检测卡的加样孔7的样品垫6上后，在吸水垫2的吸力下铂卟啉标记抗体15流经到检测卡中的包被分析膜3上，如果该复合物具有肌红蛋白，其能被检测线4上的肌红蛋白单克隆抗体17捕获，在绿色光照射下以红外光光信号的形式表现出来，所发出的荧光可用专用仪器定量测定，荧光强度与样品中肌红蛋白的浓度成正比。如果复合物中肌红蛋白低于最低检测标准，则检测线4不会发出荧光。另外，参阅图5的a、b、c所示，试纸条有效的情况下，检测线4上的抗肌红蛋白单克隆抗体17与质控线5上的兔IgG抗体18均会与复合物反应发出荧光，即检测线4与质控线5均发光，试纸条检测结果呈阳性；只有质控线5发光，试纸条检测结果呈阴性；两条线均未发光，试纸条检测结果无效。
本发明的标准工作曲线的绘制：
首先，将提纯的肌红蛋白标准品用1∶10稀释的正常人血清(采用pH7.20.02M PB缓冲液稀释)作为稀释液配制系列浓度标准品，浓度为：0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml的6份样品。其次，每个样品分别用10个肌红蛋白试纸条检测10次，10次检测仪器判读的样品检测T值和对照C值分别取平均值，最终根据二者的比值得出每个浓度对应的T/C结果，列于表1。
表1、不同浓度下的T/C值
以T/C值作为X坐标，以肌红蛋白浓度作为Y坐标绘制标准工作曲线，经统计拟合标准工作曲线的表达式为：Y＝1.4812X-2.0741，拟合系数的平方为R2＝0.9984。结果见附图6：肌红蛋白检测标准工作曲线。
本发明的第二种较佳的具体实施例子与第一种实施例的不同点在于，
第二步中的检测线包被缓冲液制备方法是：20mM pH7.6羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES缓冲液)，含甲醇0.8％、海藻糖1％、牛血清白蛋白0.6％、4E2抗体1mg/ml。质控线包被缓冲液的制备：50mM pH7.6CB缓冲液，含甲醇0.7％、牛血清白蛋白0.5％、兔IgG0.5mg/ml。包被膜的制备：调试BIO-DOT喷膜机，膜液量为20ul/40cm，机器划线，检测线与质控线间隔5mm，划线细致均匀，放置25℃-37℃真空干燥箱处理1.5小时，装袋密封备用。
本发明的第三种较佳的具体实施例子与第一种实施例的不同点在于，
第三步中，将抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，各取5ml抗体溶液，分别加入40mg荧光素铂卟啉溶解液，搅匀，室温孵育1.5小时，每隔15分钟混匀一次。最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的荧光素标记抗体，用含0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、5％-20％甘油、0.01％-0.05％表面活性剂的0.01M磷酸盐缓冲液稀释，用塑料瓶密封包装，于4℃保存。
本发明的第四种较佳的具体实施例子与第一种实施例的不同点在于，第三步中，将抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，各取5ml抗体溶液，分别加入50mg荧光素铂卟啉溶解液，搅匀，室温孵育2小时，每隔15分钟混匀一次。最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的铂卟啉标记抗体，用含0.01％-0.5％PEG、1％-5％牛血清白蛋白、5％-20％甘油、0.01％-0.05％表面活性剂的0.01M磷酸盐缓冲液稀释，用塑料瓶密封包装，于4℃保存。
本发明的第五种较佳的具体实施例子与第一种实施例的不同点在于步骤4中，用用含0.4％聚乙二醇、1.5％牛血清白蛋白、0.02％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液，将浸泡后的样品垫放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥40-60分钟后取出密封备用。
对实施例1-5的试纸条进行性能方面的测定，最低检测限为0.01ng/ml。同时对临床样品进行检测。将58例收集自医院的C-反应蛋白临床样品(其中阳性37份，阴性21份)同时用胶体金免疫层析试纸与本系统进行双盲法检测：
胶体金免疫层析试纸法——31份阳性，27份阴性(即6份阳性漏检)；
铂卟啉试纸与仪器法——37份阳性，21份阴性，与实际结果完全吻合。同时，与胶体金免疫层析试纸的定性检测相比，铂卟啉试纸与仪器法给出了每份样品的最终准确浓度。
将此58例收集自医院的肌红蛋白临床样品，同时与某公司肌红蛋白化学发光法试剂检测进行相关性分析，以化学发光检测结果作为X坐标，铂卟啉试纸与仪器法结果作为Y坐标绘制相关性分析曲线，表达式为Y＝0.9993X-2.6157，相关性系数为r＝0.9988。
在批内精密度方面，利用实施例1-5的试纸条，对含量分别为高值、中值和低值的样品，连续进行至少10次检测，计算变异系数(CV)。对于肌红蛋白含量高值(200ng/ml)、中值(90ng/ml)、低值(15ng/ml)样品各一份分别测定10次，根据其测定的数据，采用SPSS统计方法分析，以测定结果均值±标准差表示，高值201.8±2.7ng/ml，CV2.3％；中值89.6±1.3ng/ml，CV5.2％；低值15.1±1.2ng/ml，CV7.9％；检测结果CV值均小于15％。
在批间精密度方面，利用实施例1-5的试纸条，对一份肌红蛋白临床阳性样品用pH7.20.02M PB缓冲液稀释10倍，连续进行至少10次检测，结果列于表2。计算该份样品重复检测的变异系数(CV)为1.83％。
表2为本发明的实施例的检测值
由上述检测可见，本发明检测方法具有更高的灵敏度，且在实现批内、批间精确定量检测的同时具有很好地重复性。
本发明的实施例以及附图只是为了展示本发明的设计构思，本发明的保护范围不应当局限于这一实施例。
通过上面的叙述可以看出本发明的设计目的是可以有效实施的。实施例的部分展示了本发明的目的以及实施功能和结构主题，并且包括其他的等同替换。
因此，本发明的权利构成包括其他的等效实施，具体权利范围参考权利要求。
Claims (13)
1.一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：包括试纸条和与试纸条配合使用且独立包装的铂卟啉标记特异抗体，试纸条包括底衬(1)、依次接合在底衬(1)上的吸水垫(2)、包被分析膜(3)及样品垫(6)，该包被分析膜上(3)设有检测线(4)和质控线(5)，检测线(4)包被的特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体，质控线(5)包被的特异抗体为兔IgG抗体；铂卟啉标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体；
其中所述定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的制备方法包括以下步骤：
第一步，抗体的制备，
选用纯化的基因工程表达的抗肌红蛋白单克隆抗体、抗兔IgG抗体和纯化的兔IgG；
第二步，包被分析膜(3)的制备，
采用喷膜机分别在一硝酸纤维膜上划检测线和质控线，划线细致均匀，检测线与质控线间隔5mm；
用检测线包被缓冲液稀释抗肌红蛋白单克隆抗体至浓度为10-20μg/ml，采用喷膜机将抗肌红蛋白单克隆抗体喷印在硝酸纤维膜的检测线上；
用质控线包被缓冲液稀释纯化的兔IgG至浓度为10-20μg/ml，采用喷膜机将纯化的兔IgG喷印在硝酸纤维膜的质控线上；
将喷膜后的硝酸纤维膜放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
第三步，样品垫的制备，
将玻璃纤维膜用含0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液浸泡，放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
第四步，铂卟啉标记特异抗体的制备：
将抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，分别加入30-50mg铂卟啉标记溶解液，搅匀，室温孵育1小时，每隔15分钟混匀一次，最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的荧光素标记抗体，用0.01M磷酸盐缓冲液稀释混匀后于4℃保存；
第五步，形成免疫荧光试纸条，
先将包被分析膜粘附在底衬(1)中间位置上，在包被分析膜(3)一端粘附吸水垫(2)，二者重叠1-2mm；在包被分析膜(3)另一端粘附样品垫(6)，二者重叠1-2mm；再将黏贴好包被分析膜(3)、吸水垫(2)和样品垫(6)的底衬(1)裁切成细条。
2.根据权利要求1所述的一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：所述底衬(1)一面涂覆黏胶或双面胶，用于固定所述的吸水垫(2)、包被分析膜(3)及样品垫(6)，其中，包被分析膜(3)粘附在所述底衬(1)的中间，两侧分别与所述吸水垫(2)和样品垫(6)连接。
3.根据权利要求1或2所述的一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：所述吸水垫(2)为一种滤纸，为吸水纸或滤油纸；所述吸水垫(2)粘附在所述底衬(1)上，同时吸水垫(2)与包被分析膜(3)重叠1-2mm连接。
4.根据权利要求1或2所述的一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：包被分析膜(3)为硝酸纤维膜，且在包被分析膜(3)上喷涂抗肌红蛋白单克隆抗体和兔IgG抗体。
5.根据权利要求1或2所述的一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：所述样品垫(6)为玻璃纤维膜，用含0.01％-0.5％PEG、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液浸泡，缓冲液PH为7.2，浸泡处理后，37℃干燥；样品垫(6)位于所述包被分析膜(3)上。
6.根据权利要求1所述的快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：所述铂卟啉标记特异抗体为抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，并分别用含有如下组分的0.01M磷酸盐缓冲液稀释后用塑料瓶密封而得：0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、5％-20％甘油、0.01％-0.05％表面活性剂。
7.根据权利要求1所述的定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件，其特征在于：所述独立包装的铂卟啉标记的激发光波长范围为390-420nm，发射光波长范围为600nm-700nm。
8.一种制备权利要求1所述的定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步，抗体的制备，
选用纯化的基因工程表达的抗肌红蛋白单克隆抗体、抗兔IgG抗体和纯化的兔IgG；
第二步，包被分析膜(3)的制备，
采用喷膜机分别在一硝酸纤维膜上划检测线和质控线，划线细致均匀，检测线与质控线间隔5mm；
用检测线包被缓冲液稀释抗肌红蛋白单克隆抗体至浓度为10-20μg/ml，采用喷膜机将抗肌红蛋白单克隆抗体喷印在硝酸纤维膜的检测线上；
用质控线包被缓冲液稀释纯化的兔IgG至浓度为10-20μg/ml，采用喷膜机将纯化的兔IgG喷印在硝酸纤维膜的质控线上；
将喷膜后的硝酸纤维膜放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
第三步，样品垫的制备，
将玻璃纤维膜用含0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性剂的0.02M磷酸盐缓冲液浸泡，放入30-50℃的真空干燥箱内，干燥后取出密封备用；
第四步，铂卟啉标记特异抗体的制备：
将抗肌红蛋白单克隆抗体和抗兔IgG抗体，分别用0.1M碳酸氢钠溶液稀释至1mg/ml，分别加入30-50mg铂卟啉标记溶解液，搅匀，室温孵育1小时，每隔15分钟混匀一次，最后用G25凝胶柱过柱分离纯化，收集标记好的荧光素标记抗体，用0.01M磷酸盐缓冲液稀释混匀后于4℃保存；
第五步，形成免疫荧光试纸条，
先将包被分析膜粘附在底衬(1)中间位置上，在包被分析膜(3)一端粘附吸水垫(2)，二者重叠1-2mm；在包被分析膜(3)另一端粘附样品垫(6)，二者重叠1-2mm；再将黏贴好包被分析膜(3)、吸水垫(2)和样品垫(6)的底衬(1)裁切成细条。
9.根据权利要求8所述的一种制备权利要求1所述的定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的方法，其特征在于，所述检测线包被缓冲液为含有0.8-1％的甲醇、0.8-1％的蔗糖、0.2％-0.6％的牛血清白蛋白、抗肌红蛋白单克隆抗体1mg/ml的20mM pH值为7.2的磷酸盐缓冲液。
10.根据权利要求8所述的一种制备权利要求1所述的定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的方法，其特征在于，所述检测线包被缓冲液为含有0.8-1％的甲醇、0.8-1％的海藻糖蔗糖、0.2％-0.6％的牛血清白蛋白、抗肌红蛋白单克隆抗体1mg/ml的20mM pH值为7.6的羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液。
11.根据权利要求8所述的一种制备权利要求1所述的定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的方法，其特征在于，所述质控线包被缓冲液为含0.7-1％的甲醇、0.5-0.8％的牛血清白蛋白、兔IgG抗体0.5mg/ml的50mM pH值为7.6磷酸盐缓冲液。
12.一种应用权利要求1所述的定量检测检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的检测卡组件，其特征在于：所述检测卡组件包括试纸条组件和用聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的盖板(11)和用聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的背板(13)组成的卡盒，所述背板(13)包括放置所述试纸条的卡槽(12)和用于与所述盖板(11)结合的卡齿(14)，所述盖板(11)包括可观测检测结果的检测窗(8)、可滴加样品的加样孔(7)和用于与所述背板的卡齿(14)结合的固定孔(10)，所述试纸条通过所述卡齿(14)与所述固定孔(10)结合而嵌合在所述背板(13)和所述盖板(11)之间，其中，所述包被分析膜(3)正对所述检测窗(8)，所述样品垫(6)正对所述加样孔(7)；另外，独立包装的铂卟啉标记特异抗体分装在塑料试剂瓶中并密封瓶盖。
13.一种制备权利要求12所述的定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件的检测卡组件的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制成背板(13)和盖板(11)：
用聚苯乙烯或聚氯乙烯等塑料材质制成背板(13)和盖板(11)，所述背板(13)包括放置所述试纸条的卡槽(12)和用于与所述盖板(11)结合的卡齿(14)，所述盖板(11)包括可测结果的检测窗(8)、可滴加样品的加样孔(7)以及用于与所述背板的卡齿(14)结合的固定孔(10)；
2)组装：
将试纸条放在所述背板(13)的所述卡槽(12)内，通过所述背板(13)的卡齿(14)与所述盖板(11)的固定孔(10)结合，将试纸条嵌合在背板(13)和盖板(11)之间，其中，包被分析膜(3)正对所述检测窗(8)，样品垫(6)正对所述加样孔(7)；另外，独立包装的铂卟啉标记特异抗体分装在塑料试剂瓶中并密封瓶盖；
3)包装：
将1人份的检测卡组件与一包干燥剂封装在铝箔塑料袋内，并配备1瓶独立包装的铂卟啉标记特异抗体，将多组所述铝箔塑料袋和所述独立包装的铂卟啉标记特异抗体装入一个包装盒，在2℃-8℃环境下避光不冻存的进行保存。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210133570.9A CN102680703B (zh) | 2012-04-28 | 2012-04-28 | 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210133570.9A CN102680703B (zh) | 2012-04-28 | 2012-04-28 | 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102680703A CN102680703A (zh) | 2012-09-19 |
| CN102680703B true CN102680703B (zh) | 2014-12-17 |
Family
ID=46812946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210133570.9A Active CN102680703B (zh) | 2012-04-28 | 2012-04-28 | 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102680703B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108254562B (zh) * | 2016-12-28 | 2019-11-08 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 检测myo的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 |
| CN109142719A (zh) * | 2018-07-10 | 2019-01-04 | 广州佰芮慷生物科技有限公司 | 一种检测方法 |
| CN109725154A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-05-07 | 杭州康知生物科技有限公司 | 一种IgG4荧光免疫层析测定试剂盒及测定方法 |
| CN109725151B (zh) * | 2018-12-28 | 2021-08-27 | 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 | 人肌红蛋白检测试纸卡及其临床应用 |
| CN112305228B (zh) * | 2019-07-31 | 2023-05-09 | 上海奥普生物医药股份有限公司 | 一种肌红蛋白直接化学发光检测试剂盒、制备方法及用途 |
| CN113929777A (zh) * | 2020-07-13 | 2022-01-14 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 抗肌红蛋白的抗体、检测肌红蛋白的试剂盒和方法 |
| CN112698036A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-04-23 | 上海理工大学 | 细菌单克隆抗体交叉反应快速测定免疫试纸条及测定方法 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1092424A (zh) * | 1992-10-30 | 1994-09-21 | 夸德拉逻辑技术股份有限公司 | 对特定波长光敏的卟菲花青和扩增的类卟啉化合物及其制备和使用方法 |
| EP0978568A2 (en) * | 1998-08-03 | 2000-02-09 | Bayer Corporation | Method for the prevention of hemoglobin interference in reagent systems for measuring peroxidase activity |
| CN101710066A (zh) * | 2009-12-23 | 2010-05-19 | 重庆大学 | 检测有机磷农药残留量的方法及液态卟啉光学检测装置 |
| CN101776601A (zh) * | 2010-01-25 | 2010-07-14 | 泸州老窖集团有限责任公司 | 一种快速检测农药残留的方法 |
| CN102023211A (zh) * | 2010-11-19 | 2011-04-20 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种全程定量检测c反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN102087293A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-06-08 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种全程定量检测肌钙蛋白i的免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN102183647A (zh) * | 2011-01-24 | 2011-09-14 | 杭州师范大学 | 一种乙型肝炎病毒表面抗原的检测试剂及检测方法 |
| CN202049158U (zh) * | 2010-12-09 | 2011-11-23 | 苏州生物医学工程技术研究所 | 一种免疫荧光试纸条 |
| CN102393463A (zh) * | 2011-10-21 | 2012-03-28 | 广州万孚生物技术有限公司 | 荧光定量检测沙丁胺醇的试剂盒和荧光标记液的制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7459314B2 (en) * | 2003-02-13 | 2008-12-02 | Inverness Medical Switzerland Gmbh | Lateral flow immunoassay controls |
| US20050112703A1 (en) * | 2003-11-21 | 2005-05-26 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Membrane-based lateral flow assay devices that utilize phosphorescent detection |
-
2012
- 2012-04-28 CN CN201210133570.9A patent/CN102680703B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1092424A (zh) * | 1992-10-30 | 1994-09-21 | 夸德拉逻辑技术股份有限公司 | 对特定波长光敏的卟菲花青和扩增的类卟啉化合物及其制备和使用方法 |
| EP0978568A2 (en) * | 1998-08-03 | 2000-02-09 | Bayer Corporation | Method for the prevention of hemoglobin interference in reagent systems for measuring peroxidase activity |
| CN101710066A (zh) * | 2009-12-23 | 2010-05-19 | 重庆大学 | 检测有机磷农药残留量的方法及液态卟啉光学检测装置 |
| CN101776601A (zh) * | 2010-01-25 | 2010-07-14 | 泸州老窖集团有限责任公司 | 一种快速检测农药残留的方法 |
| CN102023211A (zh) * | 2010-11-19 | 2011-04-20 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种全程定量检测c反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN202049158U (zh) * | 2010-12-09 | 2011-11-23 | 苏州生物医学工程技术研究所 | 一种免疫荧光试纸条 |
| CN102087293A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-06-08 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种全程定量检测肌钙蛋白i的免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN102183647A (zh) * | 2011-01-24 | 2011-09-14 | 杭州师范大学 | 一种乙型肝炎病毒表面抗原的检测试剂及检测方法 |
| CN102393463A (zh) * | 2011-10-21 | 2012-03-28 | 广州万孚生物技术有限公司 | 荧光定量检测沙丁胺醇的试剂盒和荧光标记液的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 金属钯/铂卟啉室温磷光探针在生物医学领域的应用研究;李改茹等;《分析化学评述与进展》;20021231;第30卷(第12期);第2节第2段，第3节第1-2段，第4.1节第2段 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102680703A (zh) | 2012-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102680703B (zh) | 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN102662055B (zh) | 一种快速定量检测肌钙蛋白i的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN108254562B (zh) | 检测myo的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
| CN102662065B (zh) | 一种快速定量检测多种蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN108254550B (zh) | 检测ck-mb的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
| CN102680702B (zh) | 一种快速定量检测c-反应蛋白的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN108254563B (zh) | 检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
| CN102539785B (zh) | 一种全程定量检测c-反应蛋白的荧光免疫层析方法及其试剂盒 | |
| CN102680704B (zh) | 一种快速定量检测微量白蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN102207507A (zh) | 心肌肌钙蛋白半定量检测试纸及制备方法 | |
| CN102707056B (zh) | 快速定量检测心肌肌酸激酶同工酶的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN101368969A (zh) | Ⅳ型胶原蛋白化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN101566634A (zh) | 肌钙蛋白ⅰ血清快速检测试剂盒(胶体金法) | |
| CN205484371U (zh) | 一种肿瘤标志物检测试剂盒 | |
| CN102692508B (zh) | 一种快速定量检测肌钙蛋白t的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法 | |
| CN110133258A (zh) | 一种快速检测环孢霉素的时间分辨荧光免疫层析试剂条 | |
| CN107490693A (zh) | 一种定量检测心肌肌钙蛋白i和心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫层析方法 | |
| CN106885899A (zh) | 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法 | |
| CN103995116B (zh) | 用于特异性头孢菌素类抗生素过敏原IgE筛查的试纸条及其制备方法 | |
| CN208721685U (zh) | 一种多项联合检测的免疫层析试剂盒 | |
| CN106018818A (zh) | 一种时间分辨免疫荧光定量检测方法及其所用的试剂盒 | |
| CN109085349A (zh) | 一种多项联合检测的免疫层析试剂盒 | |
| CN103995113B (zh) | 用于特异性破伤风抗毒素过敏原IgE筛查的试纸条及其制备方法 | |
| CN106771126A (zh) | 一种定量检测sST2的时间分辨荧光免疫试纸条及其制备方法 | |
| CN115575645A (zh) | 一种三联免疫荧光定量检测卡及试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Immunofluorescence test strip component for quickly and quantitatively testing myoglobin, test card component using immunofluorescence test strip component, and preparation method for immunofluorescence test strip component Effective date of registration: 20180202 Granted publication date: 20141217 Pledgee: Bank of Guangzhou branch of the Bank of Guangzhou Science City Branch Pledgor: GUANGZHOU HONGQI OPTICAL INSTRUMENT TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: 2018440000032 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20190225 Granted publication date: 20141217 Pledgee: Bank of Guangzhou branch of the Bank of Guangzhou Science City Branch Pledgor: GUANGZHOU HONGQI OPTICAL INSTRUMENT TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: 2018440000032 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Immunofluorescence test strip component for quickly and quantitatively testing myoglobin, test card component using immunofluorescence test strip component, and preparation method for immunofluorescence test strip component Effective date of registration: 20190304 Granted publication date: 20141217 Pledgee: Guangzhou Branch of Guangzhou Bank Co.,Ltd. Pledgor: GUANGZHOU HONGQI OPTICAL INSTRUMENT TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: 2019440000084 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PP01 | Preservation of patent right |
Effective date of registration: 20190729 Granted publication date: 20141217 |
|
| PP01 | Preservation of patent right | ||
| PD01 | Discharge of preservation of patent |
Date of cancellation: 20220729 Granted publication date: 20141217 |
|
| PD01 | Discharge of preservation of patent | ||
| PP01 | Preservation of patent right |
Effective date of registration: 20220729 Granted publication date: 20141217 |
|
| PP01 | Preservation of patent right |