CN106885899A - 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法 - Google Patents

定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106885899A
CN106885899A CN201710171792.2A CN201710171792A CN106885899A CN 106885899 A CN106885899 A CN 106885899A CN 201710171792 A CN201710171792 A CN 201710171792A CN 106885899 A CN106885899 A CN 106885899A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pla2
microballoon
rare earth
test strips
pad
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710171792.2A
Other languages
English (en)
Inventor
陶剑
周颖
兰成杰
高玉兰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Ouerke Medical Technology Co Ltd
Original Assignee
Tianjin Ouerke Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Ouerke Medical Technology Co Ltd filed Critical Tianjin Ouerke Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201710171792.2A priority Critical patent/CN106885899A/zh
Publication of CN106885899A publication Critical patent/CN106885899A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种定量检测Lp‑PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括底板以及依次粘覆在底板上相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，结合垫上包被有稀土离子微球标记的Lp‑PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，包被膜上包被有检测带和质控带，检测带固定有识别不同抗原表位的Lp‑PLA2单克隆抗体II，质控带固定有羊抗鸡IgY抗体。本发明的试纸条具有操作简便，适合大规模生产，能够快速精确的测定Lp‑PLA2的含量。

Description

定量检测Lp-PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备 方法
技术领域
本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种可定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法。
背景技术
脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是磷脂酶A2超家族的一个亚类，又称血小板活化因子乙酰水解酶，分子量45kDa,是一种Ca2+依赖性蛋白质。血液中的Lp-PLA2主要由单核/巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞分泌，在动脉粥样斑块内的巨噬细胞也能产生Lp-PLA2。血液循环中的约80％的Lp-PLA2黏附在低密度脂蛋白(LDL)上，并且和低密度脂蛋白一起转运到血管内膜。一小部分Lp-PLA2与高密度脂蛋白(HDL)、超低密度脂蛋白(VLDL)和脂蛋白a[Lp(a)]结合。
Lp-PLA2能够水解氧化低密度脂蛋白，导致动脉粥样硬化部分产生大量的溶血卵磷脂和游离的氧化脂肪酸等水解产物，后两者在动脉粥样硬化斑块病变发展和坏死核心形成中起到重要作用。引起单核细胞趋化，内皮功能障碍，诱导内皮细胞表达白细胞黏附因子、血小板源性生长因子和表皮生长因子，这些物质可通过趋化炎症细胞进一步产生自我强化的循环，生成更多促炎物质。
冠状动脉粥样硬化是最常见的狭窄性冠脉疾病，随着疾病进展，可能发展为冠心病心绞痛，甚至心肌梗死。血脂异常、炎症和氧化应激都是动脉粥样硬化发生和发展的重要机制。近年来多项研究表明，人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2通过参与炎症反应而促进动脉粥样硬化的发展，是具有血管特异性的炎症标志物，是动脉粥样硬化事件发生的危险因子和预测因子。Lp-PLA2是独立的心血管疾病预测指标，与心脑血管疾病呈线性相关，而且不受其他风险因子的影响，并且Lp-PLA2还可用于对患者发生不良心血管事件的风险进行分层，进而辅助制定治疗方案，现有技术对Lp-PLA2进行检测是通过免疫增强比浊的方法进行，但该方法是通过测量在546nm波长下反应液OD值的变化对Lp-PLA2进行定量，检测不够灵敏，且在检测过程中，当一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，溶液受到光散射和光吸收两个因素影响可使光的强度减弱，减弱的程度与溶液中微小粒子的含量成正比，从而导致线性范围较窄，同时该方法中使用的鼠抗人脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆抗体被标记在致敏乳胶颗粒上，保存于磷酸盐缓冲液中，液态保存的标记抗体必须长期保存于2-8℃，才能保证其稳定性和检测结果的准确性，导致存储不方便；同时校准周期频繁，操作不便。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的时间分辨免疫分析试纸条及其制备方法，采用该免疫分析试纸条具有操作简单、方便快捷、结果准确等优点，适合单人份和较小批量检测用。
本发明提供的一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括底板以及依次粘覆在所述底板上相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，所述包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有识别不同抗原表位的Lp-PLA2单克隆抗体II，所述质控带固定有羊抗鸡IgY抗体。
优选的，所述结合垫为聚酯膜。
优选的，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
优选的，所述检测带和所述质控带相互平行，所述检测带靠近所述结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸。
优选的，所述试纸条还包括一壳体，所述试纸条装入壳体内，露出样品垫、结合垫、包被膜上的检测带和质控带、以及吸水垫。
优选的，所述稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球。
优选的，所述稀土离子微球表面带有活性基团，且所述稀土离子微球的直径为100-300nm。
本发明提供定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)在包被膜的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带和质控带；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫上；
(3)在底板上依次相互交错的黏贴上样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，然后装入壳体。
优选的，步骤(1)中，所述包被膜的制备方法为：使用含有1％-10％蔗糖的0.01-0.02mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1mg/mL-1.5mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1μL/cm-2μL/cm的量将二者以0.5cm-1.0cm的间隔喷于包被膜上，35-38℃烘干1-2h，加入干燥剂封存备用。
优选的，步骤(2)中，所述稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法包括为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.01mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸缓冲液在2℃-4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L-1.5mol/L；使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为10mmol/L-20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应1-2小时，加入含有1％-10％BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20-35分钟，洗涤微球，用含有0.05％-1％BSA，0.05％-0.1％Tween-20，0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm-5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1-2小时，加入干燥剂封存备用；所述稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.01mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸缓冲液在2℃-4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L-1.5mol/L；使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为10mmol/L-20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应1-2小时，加入含有1％-10％BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20-35分钟，洗涤微球，用含有0.05％-1％BSA，0.05％-0.1％Tween-20，0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm-5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1-2小时，加入干燥剂封存备用。
与现有的免疫增强比浊法相比，时间分辨荧光免疫分析利用了具有独特荧光特性的稀土离子，提高了检测的线性范围；镧系离子螯合物体积小，标记后不会影响被标记物的空间立体结构，对蛋白质活性影响小，保证了被检测物质的稳定性，同时标记物稳定，可以对标记物进行反复激发，通过对每次激发的荧光信号累加后取平均值的方法，减少了误差的产生，提高了检测准确度；结合垫上同时包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，同时质控带选用羊抗鸡IgY抗体，质控带上的羊抗鸡IgY抗体直接与结合垫中标记的鸡IgY反应，形成固定剂量的复合物，避免了结合垫上只结合稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I时，而样本中抗原浓度很高，结合垫中稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I大部分与样本中的抗原结合形成复合物并与检测带上的Lp-PLA2单克隆抗体II结合，使得游离的稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I含量较少，导致质控带可能不显色而使准确度下降的问题。
附图说明
图1是根据本发明实施例的一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的结构示意图；
图2是根据本发明实施例的一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的结构示意图。
其中，1、底板，2、样品垫，3、结合垫，4、包被膜，5、吸水纸，6、检测带，7、质控带，8、壳体。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，但并不用于限定本发明。
如图1、图2所示，一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括底板1以及依次粘覆在所述底板1上相互交错排列的样品垫2、结合垫3、包被膜4和吸水纸5，结合垫3上包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，包被膜4上包被有检测带6和质控带7，检测带6固定有识别不同抗原表位的Lp-PLA2单克隆抗体II，质控带7固定有羊抗鸡IgY抗体。该试纸条利用了具有独特荧光特性的稀土离子，提高了检测的线性范围；镧系离子螯合物体积小，标记后不会影响被标记物的空间立体结构，对蛋白质活性影响小，保证了被检测物质的稳定性，同时标记物稳定，可以对标记物进行反复激发，通过对每次激发的荧光信号累加后取平均值的方法，减少了误差的产生，提高了检测准确度；结合垫3上同时包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，同时质控带7选用羊抗鸡IgY抗体，质控带7上的羊抗鸡IgY抗体直接与结合垫3中标记的鸡IgY反应，形成固定剂量的复合物，避免了结合垫3上只结合稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I时，而样本中抗原浓度很高，结合垫3中稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I大部分与样本中的抗原结合形成复合物并与检测带6上的Lp-PLA2单克隆抗体II结合，使得游离的稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I含量较少，导致质控带7可能不显色而使准确度下降的问题。
结合垫3为聚酯膜，能够负载足量的稀土离子微球，并且在遇到样品时能够迅速释放微球。
包被膜4为硝酸纤维素膜。
检测带6和质控带7相互平行设置，检测带6靠近结合垫3，质控带7靠近吸水纸5，当检测样品中含有Lp-PLA2抗原时，使得检测带6和质控带7上包被的抗体分别结合稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I、稀土离子微球标记的鸡IgY抗体的量较为均一，最终显色均匀，使得检测结果更加精确。
试纸条还包括一壳体8，试纸条装于壳体8内，露出样品垫2、结合垫3、包被膜4上的检测带6和质控带7、以及吸水纸5，壳体8对试纸条起到保护作用，同时也便于试纸条的携带与存放。
稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球，稀土离子微球表面带有活性基团，可以连接蛋白、糖类等生物物质，且稀土离子微球的直径为100-300nm。
实施例1
定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)在包被膜4的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带6和质控带7；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫3上；
(3)在底板1上依次相互交错的黏贴上样品垫2、结合垫3、包被膜4和吸水纸5，然后装入壳体8。
步骤(1)中，包被膜4的制备方法为：使用含有1％蔗糖的0.01mol/L的pH为7.6的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1μL/cm的量将二者以0.5cm的间隔喷于包被膜4上，35℃烘干1-2h，加入干燥剂封存备用。
步骤(2)中，稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.01mol/L的pH为7.6的磷酸缓冲液在2℃下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L；使用0.02mol/L的pH为7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为10mmol/L，室温反应10分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L的pH为7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为1:50，室温反应1小时，加入含有1％BSA的0.01mol/L的pH7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20分钟，洗涤微球，用含有0.05％BSA，0.05％Tween-20，0.01mol/L的pH 7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35℃烘干2小时，加入干燥剂封存备用；
稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.01mol/L的pH为7.6的磷酸缓冲液在2℃下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L；使用0.02mol/L的pH为7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为10mmol/L，室温反应10分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L的pH为7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为1:50，室温反应1小时，加入含有1％BSA的0.01mol/L的pH7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20分钟，洗涤微球，用含有0.05％BSA，0.05％Tween-20，0.01mol/L的pH 7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35℃烘干2小时，加入干燥剂封存备用。
实施例2
定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)在包被膜4的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带6和质控带7；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫3上；
(3)在底板1上依次相互交错的黏贴上样品垫2、结合垫3、包被膜4和吸水纸5，然后装入壳体8。
步骤(1)中，包被膜4的制备方法为：使用含有5％蔗糖的0.015mol/L的pH为7.4的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1.25mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1.5μL/cm的量将二者以0.75cm的间隔喷于包被膜4上，36℃烘干1.5h，加入干燥剂封存备用。
步骤(2)中，稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法包括为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.03mol/L的pH为7.4的磷酸缓冲液在3℃下透析过夜，之后调整浓度为1.25mol/L；使用0.035mol/L的pH为7.4的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为15mmol/L，室温反应15分钟，充分洗涤微球，用0.035mol/L的pH为7.4的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为2.5:50，室温反应1.5小时，加入含有5％BSA的0.03mol/L的pH7.4的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤微球，用含有0.525％BSA，0.075％Tween-20，0.03mol/L的pH 7.4的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在36℃烘干1.5小时，加入干燥剂封存备用；
稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.03mol/L的pH为7.4的磷酸缓冲液在3℃下透析过夜，之后调整浓度为1.25mol/L；使用0.035mol/L的pH为7.4的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为15mmol/L，室温反应15分钟，充分洗涤微球，用0.035mol/L的pH为7.4的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为2.5:50，室温反应1.5小时，加入含有5％BSA的0.03mol/L的pH7.4的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤微球，用含有0.525％BSA，0.075％Tween-20，0.03mol/L的pH 7.4的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在36℃烘干1.5小时，加入干燥剂封存备用。
实施例3
定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)在包被膜4的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带6和质控带7；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫3上；
(3)在底板1上依次相互交错的黏贴上样品垫2、结合垫3、包被膜4和吸水纸5，然后装入壳体8。
步骤(1)中，包被膜4的制备方法为：使用含有10％蔗糖的0.02mol/L的pH为7.2的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1.5mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以2μL/cm的量将二者以1cm的间隔喷于包被膜4上，38℃烘干1h，加入干燥剂封存备用。
步骤(2)中，稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法包括为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.05mol/L的pH为7.2的磷酸缓冲液在4℃下透析过夜，之后调整浓度为1.5mol/L；使用0.05mol/L的pH为7.2的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为20mmol/L，室温反应20分钟，充分洗涤微球，用0.05mol/L的pH为7.2的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为4:50，室温反应2小时，加入含有10％BSA的0.05mol/L的pH7.2的磷酸盐缓冲液，室温反应35分钟，洗涤微球，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.05mol/L的pH 7.2的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用；
稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.05mol/L的pH为7.2的磷酸缓冲液在4℃下透析过夜，之后调整浓度为1.5mol/L；使用0.05mol/L的pH为7.2的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为20mmol/L，室温反应20分钟，充分洗涤微球，用0.05mol/L的pH为7.2的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为4:50，室温反应2小时，加入含有10％BSA的0.05mol/L的pH7.2的磷酸盐缓冲液，室温反应35分钟，洗涤微球，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.05mol/L的pH 7.2的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用。
实施例4
定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)、在包被膜4的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带6和质控带7；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫3上；
(3)在底板1上依次相互交错的黏贴上样品垫2、结合垫3、包被膜4和吸水纸5，然后装入壳体8。
步骤(1)中，包被膜4的制备方法为：使用含有8％蔗糖的0.016mol/L的pH为7.3的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1.3mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1.6μL/cm的量将二者以0.8cm的间隔喷于包被膜4上，37℃烘干1.4h，加入干燥剂封存备用。
步骤(2)中，稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法包括为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.04mol/L的pH为7.3的磷酸缓冲液在3℃下透析过夜，之后调整浓度为1.3mol/L；使用0.04mol/L的pH为7.3的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为18mmol/L，室温反应16分钟，充分洗涤微球，用0.04mol/L的pH为7.3的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为3:50，室温反应1.6小时，加入含有7％BSA的0.04mol/L的pH7.3的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤微球，用含有0.7％BSA，0.08％Tween-20，0.04mol/L的pH 7.3的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用；
稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.04mol/L的pH为7.3的磷酸缓冲液在3℃下透析过夜，之后调整浓度为1.3mol/L；使用0.04mol/L的pH为7.3的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为18mmol/L，室温反应16分钟，充分洗涤微球，用0.04mol/L的pH为7.3的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为3:50，室温反应1.6小时，加入含有7％BSA的0.04mol/L的pH7.3的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤微球，用含有0.7％BSA，0.08％Tween-20，0.04mol/L的pH7.3的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用。
实施例5
定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)在包被膜4的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带6和质控带7；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫3上；
(3)在底板1上依次相互交错的黏贴上样品垫2、结合垫3、包被膜4和吸水纸5，然后装入壳体8。
步骤(1)中，包被膜4的制备方法为：使用含有6％蔗糖的0.012mol/L的pH为7.5的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1.2mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1.2μL/cm的量将二者以0.6cm的间隔喷于包被膜4上，36℃烘干1.6h，加入干燥剂封存备用。
步骤(2)中，稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法包括为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.03mol/L的pH为7.5的磷酸缓冲液在4℃下透析过夜，之后调整浓度为1.2mol/L；使用0.03mol/L的pH为7.5的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为14mmol/L，室温反应20分钟，充分洗涤微球，用0.03mol/L的pH为7.5的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为2:50，室温反应2小时，加入含有4％BSA的0.02mol/L的pH7.5的磷酸盐缓冲液，室温反应25分钟，洗涤微球，用含有0.5％BSA，0.06％Tween-20，0.02mol/L的pH 7.5的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4.5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在36℃烘干1.5小时，加入干燥剂封存备用；
稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.03mol/L的pH为7.5的磷酸缓冲液在4℃下透析过夜，之后调整浓度为1.2mol/L；使用0.03mol/L的pH为7.5的MES活化缓冲液洗涤微球，加入EDC和NHS，终浓度为14mmol/L，室温反应20分钟，充分洗涤微球，用0.03mol/L的pH为7.5的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为2:50，室温反应2小时，加入含有4％BSA的0.02mol/L的pH7.5的磷酸盐缓冲液，室温反应25分钟，洗涤微球，用含有0.5％BSA，0.06％Tween-20，0.02mol/L的pH 7.5的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4.5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在36℃烘干1.5小时，加入干燥剂封存备用。
本发明的定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的使用方法为：使用本发明提供的Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，在样品垫2上加入样品液，在毛细作用下，样品液向吸水纸5一端泳动，至结合垫3时，如果带测样品中含有Lp-PLA2，样品液中的Lp-PLA2与结合垫3上的稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I结合形成抗原-抗体复合物，随着层析作用，抗原-抗体复合物向前移动，同时结合垫3中稀土离子微球标记的鸡IgY抗体也随着层析作用向前移动，到达包被膜4的检测带6时，抗原-抗体复合物与检测带6上的能够识别抗原表位的Lp-PLA2单克隆抗体II形成抗体-抗原-抗体复合物，并聚集在检测带6处，而稀土离子微球标记的鸡IgY抗体继续前行，到达质控带7时，质控带7上的羊抗鸡IgY抗体与稀土离子微球标记的鸡IgY抗体结合，在质控带7处出现稀土离子微球的聚集，进行上机读卡。检测带6和质控带7都会产生相应的荧光信号，荧光检测仪会根据定标卡上的信息将实际检测值带入预设的标准曲线中算出定量的结果；样品液中不含有Lp-PLA2时，则只在质控线处产生荧光信号。同时，结合垫3上同时喷涂稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，且质控带7上固定的羊抗鸡IgY抗体，羊抗鸡IgY抗体不与结合垫3中的Lp-PLA2单克隆抗体I结合，只与结合垫3中稀土离子微球标记的鸡IgY抗体结合；解决了质控带7选择羊抗鼠IgG，当样品液中含有大量Lp-PLA2时，会与结合垫3中的大部分的稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I结合并在到达检测带6时与Lp-PLA2单克隆抗体II结合形成复合物，羊抗鼠IgG只能结合剩余的微量的稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I，导致检测准确度较低的问题；同时结合垫3上的Lp-PLA2单克隆抗体I和鸡IgY抗体采用喷涂的形式，使其以固态的形式保存，保证标记抗体的均一度，加样后固定剂量的样本与固定剂量的标记抗体充分反应，保证了测量结果的准确性。与现有技术相比，本发明可利用时间分辨荧光免疫分析仪进行测定，无需全自动生化分析仪这种大型检测仪器即可实现检测，可应用于急诊、中小型医院检验科室；灵敏度、特异性、一致性高、线性范围宽。
样本精密度和准确度试验：
以Diadexus PLACTM试剂盒为参比试剂盒，分别以175ng/ml为Cut-off值，计算时间分辨荧光免疫层析法和免疫增强比浊法的各项特异性指标，包括相对灵敏度、相对特异性、相对总体符合率，对202例样本的测定值以175ng/ml为Cut-off值进行定性统计分析，统计结果如下表1所示。
表1时间分辨荧光免疫层析法与免疫增强比浊法对比
时间分辨荧光免疫层析法的相对灵敏度为87.2％，相对特异性为100.0％，与diaDexus PLACTM试剂盒测定结果的相对总体符合率为96.0％，Kappa值为0.877。线性范围达到1000ng/ml。免疫增强比浊法的相对灵敏度为82.2％，相对特异性为99.2％，与diaDexus PLACTM试剂盒测定结果的相对总体符合率为94.6％，Kappa值为0.828，线性范围只能达到800ng/ml。
上述试验证明本发明时间分辨荧光免疫层析法与免疫增强比浊法生产的脂蛋白相关磷脂酶A2相比有更好的灵敏度、特异性、一致性，进一步表明Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条具有更好的灵敏度。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括底板以及依次粘覆在所述底板上相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，其特征在于，所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，所述包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有识别不同抗原表位的Lp-PLA2单克隆抗体II，所述质控带固定有羊抗鸡IgY抗体。
2.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述结合垫为聚酯膜。
3.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
4.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述检测带和所述质控带相互平行，所述检测带靠近所述结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸。
5.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括一壳体，所述试纸条装入壳体内，露出样品垫、结合垫、包被膜上的检测带和质控带、以及吸水垫。
6.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球。
7.根据权利要求6所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述稀土离子微球表面带有活性基团，且所述稀土离子微球的直径为100-300nm。
8.一种根据权利要求1-7中任一项所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)、在包被膜的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带和质控带；
(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫上；
(3)在底板上依次相互交错的黏贴上样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，然后装入壳体。
9.根据权利要求8所述定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述包被膜的制备方法为：使用含有1％-10％蔗糖的0.01-0.02mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1mg/mL-1.5mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1μL/cm-2μL/cm的量将二者以0.5cm-1.0cm的间隔喷于包被膜上，35-38℃烘干1-2h，加入干燥剂封存备用。
10.根据权利要求8所述定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.01mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸缓冲液在2℃-4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L-1.5mol/L；使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为10mmol/L-20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应1-2小时，加入含有1％-10％BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20-35分钟，洗涤微球，用含有0.05％-1％BSA，0.05％-0.1％Tween-20，0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm-5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1-2小时，加入干燥剂封存备用；所述稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.01mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸缓冲液在2℃-4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L-1.5mol/L；使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为10mmol/L-20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应1-2小时，加入含有1％-10％BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20-35分钟，洗涤微球，用含有0.05％-1％BSA，0.05％-0.1％Tween-20，0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm-5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1-2小时，加入干燥剂封存备用。
CN201710171792.2A 2017-03-22 2017-03-22 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法 Pending CN106885899A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710171792.2A CN106885899A (zh) 2017-03-22 2017-03-22 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710171792.2A CN106885899A (zh) 2017-03-22 2017-03-22 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106885899A true CN106885899A (zh) 2017-06-23

Family

ID=59182283

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710171792.2A Pending CN106885899A (zh) 2017-03-22 2017-03-22 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106885899A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107515300A (zh) * 2017-07-17 2017-12-26 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 叶酸荧光免疫层析检测试纸及其制备方法
CN107656076A (zh) * 2017-08-11 2018-02-02 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 一种高灵敏检测25羟基维生素d的时间分辨荧光免疫层析检测试剂及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104422772A (zh) * 2013-09-10 2015-03-18 江苏省原子医学研究所 一种定量检测胃蛋白酶原i的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法
CN105652008A (zh) * 2016-03-31 2016-06-08 广州市微米生物科技有限公司 人Lp-PLA2生物素-链霉亲和素荧光免疫层析检测卡及其制备方法
CN205333645U (zh) * 2015-12-30 2016-06-22 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 一种人血清中Lp-PLA2快速定量检测试纸条
CN105785038A (zh) * 2016-03-31 2016-07-20 广州市微米生物科技有限公司 双检测线saa免疫荧光层析定量检测试剂及其制备方法
CN205879955U (zh) * 2016-07-14 2017-01-11 深圳市金准生物医学工程有限公司 检测试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104422772A (zh) * 2013-09-10 2015-03-18 江苏省原子医学研究所 一种定量检测胃蛋白酶原i的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法
CN205333645U (zh) * 2015-12-30 2016-06-22 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 一种人血清中Lp-PLA2快速定量检测试纸条
CN105652008A (zh) * 2016-03-31 2016-06-08 广州市微米生物科技有限公司 人Lp-PLA2生物素-链霉亲和素荧光免疫层析检测卡及其制备方法
CN105785038A (zh) * 2016-03-31 2016-07-20 广州市微米生物科技有限公司 双检测线saa免疫荧光层析定量检测试剂及其制备方法
CN205879955U (zh) * 2016-07-14 2017-01-11 深圳市金准生物医学工程有限公司 检测试剂盒

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107515300A (zh) * 2017-07-17 2017-12-26 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 叶酸荧光免疫层析检测试纸及其制备方法
CN107656076A (zh) * 2017-08-11 2018-02-02 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 一种高灵敏检测25羟基维生素d的时间分辨荧光免疫层析检测试剂及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104714025B (zh) NT‑proBNP检测试剂盒及检测方法
CN104422772B (zh) 一种定量检测胃蛋白酶原i的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法
CN104714015B (zh) 心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及检测方法
CN102662055B (zh) 一种快速定量检测肌钙蛋白i的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法
CN108254562A (zh) 检测myo的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法
WO2018120856A1 (zh) 检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法
CN106153927A (zh) 一种快速定量同时检测cTnI、CKMB、Myo的时间分辨荧光免疫层析试剂及制备方法
CN103954778A (zh) 心肌梗塞三联快速检测试剂盒及其制备方法
CN106248958A (zh) 一种定量检测cTnI的荧光免疫层析试剂及制备方法
CN102087293A (zh) 一种全程定量检测肌钙蛋白i的免疫层析试纸条及其制备方法
KR101950561B1 (ko) 트로포닌 및 ｂｎｐ 토대의 뇌졸중의 위험 환자 및 원인 진단
CN102116770A (zh) 一种免疫层析快速试剂盒及其生产制备
CN102680703B (zh) 一种快速定量检测肌红蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法
Dati et al. Proposals from the IFCC Committee on Standardization of Markers of Cardiac Damage (C-SMCD): strategies and concepts on standardization of cardiac marker assays
CN107918022A (zh) 一种cTnI检测试剂盒及其使用方法
CN107677808A (zh) 一种甲状腺球蛋白的定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法
US20210172946A1 (en) Kit for measuring anti-cyclic citrullinated peptide antibody, application thereof, and test method
CN106885899A (zh) 定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法
Katoh et al. A novel immunoassay of smooth muscle myosin heavy chain in serum
CN109917138A (zh) 一种肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒
CN105445471A (zh) 心血管疾病标记物palm及利用其的心血管疾病诊断方法
CN107490693A (zh) 一种定量检测心肌肌钙蛋白i和心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫层析方法
CN102943066A (zh) 一种人载脂蛋白b100单克隆抗体及其化学发光免疫分析测定试剂盒
CN106366199A (zh) 一种肌钙蛋白i单克隆抗体磁微粒及其制备方法和检测试剂盒
CN105911274A (zh) 一种同步定量检测不同分子形式人中性粒细胞脂质运载蛋白免疫层析装置及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170623