CN109085349A - 一种多项联合检测的免疫层析试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，包括盒体及设置于盒体内部的联检试纸条，盒体包括上壳体、下壳体、保护盖，联检试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、玻璃纤维素膜，玻璃纤维素膜上设有荧光素包被的多种单克隆抗体，硝酸纤维素膜上设有多条检测线和质控线；本发明将多项检测项目集中到一个试剂盒中，并根据所检项目的不同选用不同的抗体和荧光素，实现了产品检测的多样化，保证了检测结果的准确性及一致性，此外设置保护盖，可长期储存试纸条，避免试纸条受到污染，本发明减少了临床标本用量，缩短了检测时间，提高了检测效率，具有快捷、准确、方便、价廉的优点。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种多项联合检测的免疫层析试剂盒。
背景技术
免疫层析法是九十年代兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术，其原理是将特异性的抗体先固定于反应膜上，当试纸的样本垫浸入待检样本后，由于毛细管作用，待检样本将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，待检样本中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。
现有的免疫层析检测方法及试纸，无论是何种免疫层析试纸，其所采取的检测模式均为：对一份样品进行一次实验操作，获得一种目标被检物存在与否的检测结果，即“一对一”检测模式。这种模式在对可疑样品进行多种目标被检物筛查时，操作繁琐，且历时较长。因此急需开发出一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，可实现对待检样本中不同的待检目标物的检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，具有灵敏度高、操作方便，检测效率高等优点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，包括盒体及设置于盒体内部的联检试纸条，所述盒体包括上壳体、下壳体，上壳体与下壳体通过卡接相连，上壳体上设有加样孔、结果观察孔，结果观察孔的一侧设有若干标识，所述盒体还包括保护盖，保护盖与上壳体通过铰接相连，所述上壳体一侧设有第一连接件，第一连接件为圆柱形中空结构，第一连接件与上壳体为一体设计，保护盖包括第二连接件、第三连接件、盖板，所述第二连接件为圆柱形结构，第二连接件位于第一连接件中，第二连接件与第一连接件为间隙配合，第二连接件的首尾端分别与两个第三连接件固定连接，第三连接件与第二连接件相垂直，第三连接件的另一端与盖板固定连接，第三连接件与盖板相垂直，所述第二连接件与盖板相平行，盖板的截面为L形结构，所述盖板的另一端与上壳体通过扣接相连；
所述联检试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜贴覆在底板中部，玻璃纤维素膜贴覆在硝酸纤维素膜的一端，吸水垫贴覆在硝酸纤维素膜的另一端，样品垫部分贴覆在玻璃纤维素膜上，所述玻璃纤维素膜上设有荧光素包被的多种单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上设有多条检测线和质控线，多条检测线上包被多种单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述盒体为 PVC材质。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述保护盖的宽度为d1,上壳体的宽度为d2,d1＞d2。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述第二连接件、第三连接件、盖板为一体设计。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述荧光素为 2-甲氧基荧光素、异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸、藻红蛋白、多甲藻叶绿素蛋白中的一种。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述底板为 PVC板。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述吸水垫为吸水滤纸。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述样品垫为玻璃纤维或无纺布。
本发明具有有益效果：本发明将多项检测项目集中到一个试剂盒中，并根据所检项目的不同选用不同的抗体和荧光素，实现了产品检测的多样化，有利于检测人员的操作，同时保证了检测结果的准确性及一致性，不需要多次抽取被测人员的血液，有利于人的健康以及减少感染，可以满足临床套餐式检验项目，此外将免疫层析试纸条置于试剂盒中，在加样孔、结果观察孔上设置保护盖，可长期储存试纸条，防止试纸条受到污染，需要检测时，将保护盖从上壳体侧面打开，直接从加样孔加样，待反应结束后，将试剂盒放入与荧光检测仪中，检测均可，本发明减少了临床标本用量，降低成本，节省资源，缩短了检测时间，提高了检测效率，具有快捷、准确、方便、价廉的优点。
附图说明
图1为本试剂盒结构示意图；
图2为保护盖关闭示意图；
图3为图1的仰视图；
图4为图2的仰视图；
图5为联检试纸条示意图；
图中：1-上壳体，2-下壳体，3-加样孔，4-结果观察孔，5-标识， 6-保护盖，7-第一连接件，8-第二连接件，9-第三连接件，10-盖板， 11-底板，12-硝酸纤维素膜，13-样品垫，14-吸水垫，15-玻璃纤维素膜，16-检测线T1，17-检测线T2，18-检测线Tn,19-质控线C。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
如图1-5所示，一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，包括盒体及设置于盒体内部的联检试纸条，所述盒体包括上壳体1、下壳体2，上壳体与下壳体通过卡接相连，上壳体上设有加样孔3、结果观察孔 4，结果观察孔的一侧设有若干标识5，所述盒体还包括保护盖6，保护盖与上壳体通过铰接相连，所述上壳体一侧设有第一连接件7，第一连接件为圆柱形中空结构，第一连接件与上壳体为一体设计，保护盖包括第二连接件8、第三连接件9、盖板10，所述第二连接件为圆柱形结构，第二连接件位于第一连接件中，第二连接件与第一连接件为间隙配合，第二连接件的首尾端分别与两个第三连接件固定连接，第三连接件与第二连接件相垂直，第三连接件的另一端与盖板固定连接，第三连接件与盖板相垂直，所述第二连接件与盖板相平行，盖板的截面为L形结构，所述盖板的另一端与上壳体通过扣接相连；
所述联检试纸条包括底板11、硝酸纤维素膜12、样品垫13、吸水垫14、玻璃纤维素膜15，所述硝酸纤维素膜贴覆在底板中部，玻璃纤维素膜贴覆在硝酸纤维素膜的一端，吸水垫贴覆在硝酸纤维素膜的另一端，样品垫部分贴覆在玻璃纤维素膜上，所述玻璃纤维素膜上设有荧光素包被的多种单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上设有多条检测线(T1、T2…Tn)和质控线(C)，多条检测线上包被多种单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述盒体为 PVC材质。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述保护盖的宽度为d1,上壳体的宽度为d2,d1＞d2。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述第二连接件、第三连接件、盖板为一体设计。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述荧光素为 2-甲氧基荧光素、异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸、藻红蛋白、多甲藻叶绿素蛋白中的一种。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述底板为 PVC板。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述吸水垫为吸水滤纸。
上述一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其中，所述样品垫为玻璃纤维或无纺布。
实施例2
制备和检测PLGF(胎盘生长因子)和sFLT-1(可溶性fms样酪氨酸激酶-1)两项联合检测试剂盒。
一种PLGF和sFLT-1试剂盒的制备和检测方法如下：
(1)硝酸纤维素膜包被抗体：将PLGF抗体用PBS缓冲液(50mM, pH＝7.2)调整浓度为2mg/mL，设定划膜仪涂覆参数2μL/cm，分别用微量进样器取1ml的PLGF抗体、sFLT-1抗体、羊抗鼠IgG抗体，按顺序接到划膜仪的A、B、C管道接口，将贴有硝酸纤维素膜的底板置于划膜仪的往复运动平台上，开启划膜仪，在硝酸纤维素膜上涂覆 PLGF抗体(T1线)、sFLT-1抗体(T2线)、羊抗鼠IgG抗体(C线),划线后将硝酸纤维素膜置于烘箱中，温度37℃，干燥24小时，备用；
(2)玻璃纤维素膜包被FITC标记的抗体：首先将玻璃纤维素膜置于含有5ml 10％BSA，2.5ml 10％Tween-20的的PBS缓冲液(0.01M、 pH＝7.4)中60min，于37℃烘干，置4℃备用；
将PLGF抗体置于含有0.15mol/L氯化钠的碳酸盐缓冲液(0. 5mol/L、pH＝9.0)中稀释，使PLGF抗体的浓度为20mg/mL，缓降温至4℃，搅拌5-10min，按每毫克PLGF抗体加0.01mg荧光素的比例称取FITC粉末，边搅拌边将称取的FITC粉末缓慢加入PLGF抗体溶液中，加毕后，继续搅拌12-18h，期间保持PLGF抗体溶液的温度为4℃；搅拌完毕后，将PLGF抗体溶液以2500rpm/min的速度离心20min，除去其中少量的沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用PBS缓冲液(0.05M,pH＝7.2)透析(4℃)过夜，取透析过夜的FITC荧光溶液，过葡萄糖凝胶G-25柱，去除游离FITC，分装、4℃避光保存备用；
将SFLT-1抗体置于含有0.15mol/L氯化钠的碳酸盐缓冲液(0. 5mol/L、pH＝9.0)中稀释，使SFLT-1抗体的浓度为10mg/mL，缓降温至4℃，搅拌5-10min，按每毫克SFLT-1抗体加0.005mg荧光素的比例称取FITC粉末，边搅拌边将称取的FITC粉末缓慢加入SFLT-1 抗体溶液中，加毕后，继续搅拌12-18h，期间保持SFLT-1抗体溶液的温度为4℃；搅拌完毕后，将SFLT-1抗体溶液以2500rpm/min的速度离心20min，除去其中少量的沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用PBS缓冲液(50mM,pH＝7.2)透析(4℃)过夜，取透析过夜的FITC荧光溶液，过葡萄糖凝胶G-25柱，去除游离FITC，分装、 4℃避光保存备用；
将FITC标记的PLGF抗体用PBS缓冲液(50mM,pH＝7.2)调整浓度为3mg/mL，将FITC标记的SFLT-1抗体用PBS缓冲液(50mM,pH＝7.2) 调整浓度为3mg/mL，设定划膜仪涂覆参数2uL/cm，分别用微量进样器取1ml的FITC标记的PLGF抗体、FITC标记的sFLT-1抗体，按顺序接到划膜仪的A、B管道接口，将贴有硝酸纤维素膜的底板置于划膜仪的往复运动平台上，开启划膜仪，将FITC标记的PLGF抗体和 sFLT-1抗体分别喷涂于玻璃纤维素膜上的不同位置，37℃干燥过夜，加入干燥剂封存备用。
(3)样品垫的处理：将样品垫浸泡于含有1％BSA，0.5％NaCL的 Tris-HCL缓冲液(0.01M、Ph＝7.4)中30min，于37℃烘干，真空封装，置4℃备用。
(4)组装：首先将底板平放在操作台上，将包被后的硝酸纤维素膜贴在底板上的中间位置，将吸水垫部分贴在硝酸纤维素膜的末端，剩下的部分贴在底板上，将玻璃纤维素膜贴于硝酸纤维素膜上的首端，最后将样品垫贴于玻璃纤维素膜上。
(5)检测：将待测样本加入到加样孔中，反应15分钟后，荧光检测仪读取质控线C、检测线T1、T2信号。
实施例3
制备和检测PLGF(胎盘生长因子)和sFLT-1(可溶性fms样酪氨酸激酶-1)两项联合检测试剂盒，
一种PLGF和sFLT-1试剂盒的制备和检测方法如下：
(1)硝酸纤维素膜包被抗体：将PLGF抗体用PBS缓冲液(0.05M, pH＝7.2)调整浓度为2mg/mL，设定划膜仪涂覆参数2uL/cm，分别用微量进样器取1ml的PLGF抗体、sFLT-1抗体、羊抗鼠IgM抗体，按顺序接到划膜仪的A、B、C管道接口，将贴有硝酸纤维素膜的底板置于划膜仪的往复运动平台上，开启划膜仪，在硝酸纤维素膜上涂覆PLGF抗体(T1线)、sFLT-1抗体(T2线)、羊抗鼠IgM抗体(C线),划线后将硝酸纤维素膜置于烘箱中，温度37℃，干燥24小时，备用；
(2)玻璃纤维素膜包被FITC标记的抗体：首先将玻璃纤维素膜置于含有5％BSA，7％Tween-20的的PBS缓冲液(0.01M、pH＝7.4) 中60min，于37℃烘干，置4℃备用；
将PLGF抗体置于含有0.15mol/L氯化钠的碳酸盐缓冲液(0.5M、 pH＝9.0)中稀释，使PLGF抗体的浓度为20mg/mL，缓降温至4℃，搅拌5-10min，按每毫克PLGF抗体加0.01mg荧光素的比例称取FITC 粉末，边搅拌边将称取的FITC粉末缓慢加入PLGF抗体溶液中，加毕后，继续搅拌12-18h，期间保持PLGF抗体溶液的温度为4℃；搅拌完毕后，将PLGF抗体溶液以2000rpm/min的速度离心20min，除去其中少量的沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用PBS缓冲液 (0.05M,pH＝7.2)透析(4℃)过夜，取透析过夜的FITC荧光溶液，过葡萄糖凝胶G-25柱，去除游离FITC，分装、4℃避光保存备用；
将SFLT-1抗体置于含有0.15mol/L氯化钠的碳酸盐缓冲液(0. 5mol/L、pH＝9.0)中稀释，使SFLT-1抗体的浓度为10mg/mL，缓降温至4℃，搅拌5-10min，按每毫克SFLT-1抗体加0.005mg荧光素的比例称取FITC粉末，边搅拌边将称取的FITC粉末缓慢加入SFLT-1 抗体溶液中，加毕后，继续搅拌12-18h，期间保持SFLT-1抗体溶液的温度为4℃；搅拌完毕后，将SFLT-1抗体溶液以2000rpm/min的速度离心20min，除去其中少量的沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用PBS缓冲液(50mM,pH＝7.2)透析(4℃)过夜，取透析过夜的FITC荧光溶液，过葡萄糖凝胶G-25柱，去除游离FITC，分装、 4℃避光保存备用；
将FITC标记的PLGF抗体用PBS缓冲液(50mM,pH＝7.2)调整浓度为2.5mg/mL，将FITC标记的SFLT-1抗体用PBS缓冲液(50mM, pH＝7.2)调整浓度为2mg/mL，设定划膜仪涂覆参数2uL/cm，分别用微量进样器取1ml的FITC标记的PLGF抗体、FITC标记的sFLT-1抗体，按顺序接到划膜仪的A、B管道接口，将贴有硝酸纤维素膜的底板置于划膜仪的往复运动平台上，开启划膜仪，将FITC标记的PLGF 抗体和sFLT-1抗体分别喷涂于玻璃纤维素膜上的不同位置，37℃干燥过夜，加入干燥剂封存备用。
(3)样品垫的处理：将样品垫浸泡于含有1％BSA，0.5％NaCL,0.5％叠氮钠的Tris-HCL缓冲液(0.01M、Ph＝7.4)中30min，于37℃烘干，真空封装，置4℃备用。
(4)组装：首先将底板平放在操作台上，将包被后的硝酸纤维素膜贴在底板上的中间位置，将吸水垫部分贴在硝酸纤维素膜的末端，剩下的部分贴在底板上，将玻璃纤维素膜贴于硝酸纤维素膜上的首端，最后将样品垫贴于玻璃纤维素膜上。
(5)检测：将待测样本加入到加样孔中，反应15分钟后，荧光检测仪读取质控线C、检测线T1、T2信号。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，包括盒体及设置于盒体内部的联检试纸条，所述盒体包括上壳体、下壳体，上壳体与下壳体通过卡接相连，上壳体上设有加样孔、结果观察孔，结果观察孔的一侧设有若干标识，所述盒体还包括保护盖，保护盖与上壳体通过铰接相连，所述上壳体一侧设有第一连接件，第一连接件为圆柱形中空结构，第一连接件与上壳体为一体设计，保护盖包括第二连接件、第三连接件、盖板，所述第二连接件为圆柱形结构，第二连接件位于第一连接件中，第二连接件与第一连接件为间隙配合，第二连接件的首尾端分别与两个第三连接件固定连接，第三连接件与第二连接件相垂直，第三连接件的另一端与盖板固定连接，第三连接件与盖板相垂直，所述第二连接件与盖板相平行，盖板的截面为L形结构，所述盖板的另一端与上壳体通过扣接相连；
所述联检试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜贴覆在底板中部，玻璃纤维素膜贴覆在硝酸纤维素膜的一端，吸水垫贴覆在硝酸纤维素膜的另一端，样品垫部分贴覆在玻璃纤维素膜上，所述玻璃纤维素膜上设有荧光素包被的多种单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上设有多条检测线和质控线，多条检测线上包被多种单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG。
2.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述盒体为PVC材质。
3.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述保护盖的宽度为d1,上壳体的宽度为d2,d1＞d2。
4.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述第二连接件、第三连接件、盖板为一体设计。
5.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光素为2-甲氧基荧光素、异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸、藻红蛋白、多甲藻叶绿素蛋白中的一种。
6.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述底板为PVC板。
7.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述吸水垫为吸水滤纸。
8.如权利要求1所述的一种多项联合检测的免疫层析试剂盒，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维或无纺布。
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