CN203405464U - 定量检测胃蛋白酶原ii的时间分辨免疫层析试纸条及使用其的试纸卡 - Google Patents
定量检测胃蛋白酶原ii的时间分辨免疫层析试纸条及使用其的试纸卡 Download PDFInfo
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Abstract
本实用新型提供了一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条及使用其的试纸卡,试纸条包括底板、吸水纸、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫;其中,所述硝酸纤维素膜粘覆于底板的中间部位,且其上间隔设置有由胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅱ涂层形成的检测线和由兔抗鼠IgG抗体涂层形成的质控线,所述检测线靠近所述结合垫,所述质控线靠近所述吸水纸;所述结合垫处喷涂有标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层;所述吸水纸、所述硝酸纤维素膜、所述结合垫以及所述样品垫之间,依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。本实用新型所述试纸条可用于单人次定量检测,解决了现有技术中试剂盒无法单人次少批量检测的问题。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种定量检测胃蛋白酶原Ⅱ含量的试纸条,尤其涉及一种定量检测胃蛋白酶原Ⅱ含量的时间分辨荧光免疫层析试纸条,属于体外试剂诊断技术领域。
背景技术
胃蛋白酶原(Pesinogen,PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体。血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能,胃蛋白酶原II(简称PGII)来源于全胃腺和远端十二指肠Brunner氏腺,胃粘膜合成的PGII约为总量的25%。PGII大部分进入消化道,少量进入血液循环,因此被称为“反映胃部状态和功能的指针”,其水平的变化可以直接反映胃粘膜和十二指肠状态和细胞数量的改变。国内外临床研究指出,PGII与胃底粘膜病变的相关性较大,其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异性增生有关。测定PGII含量有助检测出十二指肠溃疡、萎缩性胃炎,胃炎,胃癌等其他消化道疾病,供临床检测和体检筛查需要,GII检测作为非侵入性方法,降低患者痛苦,简便、经济、具有普查价值。
对于胃蛋白酶原II的检测,目前临床常用的方法包括:乳胶增强免疫比浊法,酶联免疫法(ELISA),化学发光法,时间分辨免疫法,但是这些方法都有各自的特点及不足。乳胶增强免疫比浊法,操作简单,可以全自动化,但是,其灵敏度不高,无法实现精确定量;ELISA法和时间分辨免疫法定量准确,但手工操作,过程复杂,中国专利文献CN202854148U公开了一种胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫检测试剂盒,该试剂盒内组成包括:抗PGⅠ单克隆抗体包被板,PGⅠ标准品,Eu标抗PGⅠ单克隆抗体, 缓冲液,增强液,浓缩洗板液。其利用标记物的荧光和高效的单克隆抗体,达到血清不需要稀释直接反应检测,减轻工作量的目的。但该试剂盒的试剂不适合单人份和较小批量检测用。
中国专利文献CN101762705A公开了一种检测锗瘟病毒的胶体金免疫层析试纸条,由吸水纸、硝酸纤维素膜、胶体金垫、样品垫和支持物组成,所述的硝酸纤维素膜含有一条由抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体HQQ6包被而成的检测线和由兔抗鼠IgG抗体包被而成的质控线,所述的胶体金垫结合由胶体金标记的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体6E10。该胶体金免疫层析技术利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细层析作用,使抗原抗体在固相膜上反应,然后用胶体金标记的抗体显色,阳性反应在膜上呈现红色,阴性反应则不出现红色。该采用胶体金免疫层析技术的试纸条虽然使用方便、可用于单份小批量检测,但其只适用于定性测量,并不适用于定量测量,因此其不适用于测定胃蛋白酶原Ⅱ。
实用新型内容
为解决现有技术中胃蛋白酶原II时间分辨荧光免疫检测试剂盒,无法实现单人次少批量检测的问题,及胶体金免疫层析法只能定性不能定量检测的问题,进而提供一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条。
为此,本实用新型采取的技术方案为:
一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,包括,
底板以及沿所述底板的长度方向顺次粘覆于所述底板上的吸水纸、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫;其中,所述硝酸纤维素膜粘覆于所述底板的中间部位,且其上设置有相间隔的由胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅱ涂层形成的检测线和由兔抗鼠IgG抗体涂层形成的质控线,所述检测线靠近所述结合垫,所述质控线靠近所述吸水纸;
所述结合垫处喷涂有标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层;
所述吸水纸、所述硝酸纤维素膜、所述结合垫以及所述样品垫之间,依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述含有镧系元素的高分子纳米微球的直径为10-500nm。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述含有镧系元素的高分子纳米微球的直径为100-300nm。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述结合垫上喷涂的标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层为标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有铕离子的高分子纳米微球涂层。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述质控线与所述检测线平行设置,且所述质控线与所述检测线之间的距离为0.5cm-1.0cm。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述吸水纸位于所述硝酸纤维素膜的上方,且所述吸水纸与所述硝酸纤维素膜相重叠的部分沿所述底板长度方向的长度为2mm。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述结合垫位于所述硝酸纤维素膜的上方,且所述结合垫与所述硝酸纤维素膜相重叠的部分沿所述底板长度方向的长度为2mm。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述样品垫位于所述结合垫的上方,且所述样品垫与所述结合垫相重叠的部分沿所述底板长度方向的长度为2mm;
所述结合垫沿所述底板长度方向的长度大于4mm。
本实用新型还提供了一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试剂卡,包括上述的试纸条以及包覆所述试纸条的外壳;所述外壳包括底座和卡盖,所述卡盖上设置有观察口和加样口,以露出试纸条的局部区域;所述加样口开口于所述样品垫上部,以露出部分或全部所述样品垫区域;所述观察口开口于所述硝酸纤维素膜上部,以露出全部所述检测线和所述质控线。
上述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试剂卡中,所述外壳为塑料外壳。
与现有技术相比,本实用新型具有如下优点:
(1)本实用新型所述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条将时间分辨荧光免疫技术、双抗体夹心测抗原与具体试纸结构相结合,形成了一种可用于单人次定量检测胃蛋白酶原II的试纸条,解决了现有技术中胃蛋白酶原II试剂盒无法单人次少批量检测的问题。采用本实用新型所述试纸条检测胃蛋白酶原II时灵敏度高,批内、批间误差小,为临床使用提供了极大便利。
(2)本实用新型所述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条中,所述结合垫上喷涂有标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的镧系元素微球涂层,解决了将胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的直接标记于荧光元素进行检测时,荧光信号微弱,造成检测不准确的问题,含有镧系元素的高分子纳米微球减少了镧系元素在样品溶液中的猝灭,提高了镧系元素发出的荧光强度,进而提高了检测的精确度。
(3)本实用新型所述定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸,由定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条和塑料卡壳组成,不仅利于检测操作更利于试纸条的存放和携带。
附图说明
为了使本实用新型的内容更容易被清楚的理解,下面根据本实用新型的具体实施例并结合附图,对本实用新型作进一步详细的说明,其中
图1为本实用新型所述试纸条的沿其长度方向的剖面图;
图2为本实用新型所述试纸条的平面图;
图3为本实用新型所述试纸卡的平面图。
其中,附图标记为
1-底板,2-硝酸纤维素膜,3-吸水纸,4-样品垫,5-结合垫,6-质控线,7-检测线,8-卡盖,9-加样口,10-观察口。
具体实施方式
图1为本实用新型一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条沿其长度方向的剖面图,图2为所述试纸条的平面图,由图1和图2可以看出所述试纸条包括底板1以及沿所述底板1的长度方向顺次粘覆于所述底板1上的吸水纸3、硝酸纤维素膜2、结合垫5和样品垫4;其中,所述硝酸纤维素膜2粘覆于所述底板1的中间部位,且其上设置有相间隔的由胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅱ涂层形成的检测线7和由兔抗鼠IgG抗体涂层形成的质控线6,所述质控线6靠近所述吸水纸3,所述检测线7靠近所述结合垫5;所述结合垫5处喷涂有标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层;所述吸水纸3、所述硝酸纤维素膜2、所述结合垫5以及所述样品垫4之间,依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
在本实施例中,所述质控线6与所述检测线7平行设置,且所述质控线6与所述检测线7之间的距离为0.5cm;
所述吸水纸3位于所述硝酸纤维素膜2的靠近所述质控线6的一端, 且所述吸水纸3与所述硝酸纤维素膜2部分重叠,其重叠部分沿所述底板1长度方向的长度为2mm。
所述结合垫5位于所述硝酸纤维素膜2的靠近所述检测线7的一端;且所述结合垫5的一端与所述硝酸纤维素膜2部分重叠,其重叠部分沿所述底板1长度方向的长度为2mm。
所述样品垫4位于所述结合垫5的另一端,并与所述结合垫5部分重叠,其重叠部分沿所述底板1长度方向的长度为2mm。为了保证试纸条的顺利使用,所述结合垫5沿所述底板1长度方向的长度大于4mm。也就是说,结合垫5的长度要大于样品垫与结合垫重叠部分沿所述底板1长度方向的长度和结合垫与硝酸纤维素膜重叠部分沿所述底板1长度方向的长度之和。
所述质控线6为喷涂于所述所述硝酸纤维素膜上的兔抗鼠IgG抗体涂层,所述检测线7为喷涂于所述硝酸纤维素膜上的胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅱ涂层,所述结合垫5上喷涂有标记着胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层。
本实施例中,所述试纸条宽0.5cm,所述含有镧系元素的高分子纳米微球是直径200nm的含有铕离子的高分子纳米微球。在其它实施例中所述含有镧系元素的高分子纳米微球的直径可以是10、50、100、150、200、300或500nm等各种尺寸,优选为100-300nm之间的尺寸。所述含有镧系元素的高分子纳米微球可是是含有铕离子、钐离子、铽离子等各种镧系元素的高分子纳米微球。相应重叠部分沿所述底板长度方向的长度可以是1mm、2mm、3mm、4mm、5mm等只要满足使用要求即可。
使用上述试纸条进行定量检测时,在样品垫4上加入样品液,在毛细作用下,样品液向吸水纸3泳动,当样品液中含有胃蛋白酶原II时,胃蛋白酶原II与含有镧系元素的高分子纳米微球上的胃蛋白酶原II单克隆抗体 Ⅰ形成抗原-抗体复合物,随着层析作用,复合物向前移动,到达识别不同抗原表位的胃蛋白酶原II单克隆抗体II形成的检测线7(T线)处,形成抗体-抗原-抗体夹心复合物,聚集在检测线上。未结合胃蛋白酶原II单克隆抗体II的含有镧系元素的高分子纳米微球继续前移,到达质控线(C线)时,兔抗鼠IgG抗体与镧系元素微球上的鼠源性单抗结合,在C线处出现镧系元素微球的聚集,整个反应在15分钟内完成,T线和C线都会产生相应的荧光信号,使用相应的荧光检测仪对上述荧光信号进行检测,并计算胃蛋白酶原II的含量。
鉴于上述试纸条结构不牢固,不利于直接进行定量检测操作、且存放携带不方便的问题,将上述结构的试纸条装入塑料外壳内部以利于各组成结构的固定,从而便于存放和检测。其中所述外壳包括底座和卡盖8,所述卡盖8上设置有观察口10和加样口9,以露出试纸条的局部区域;所述加样口9开口于所述样品垫4上部,以露出部分或全部所述样品垫4区域;所述观察口10开口于所述硝酸纤维素膜2上部,以露出全部所述检测线7和所述质控线6,使所述硝酸纤维素膜上的质控线6和检测线7裸露于外,便于荧光信号的检测。
本实用新型定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法如下:
(1)抗体的预处理:选用商品化的胃蛋白酶原II单克隆抗体I用0.05mol/L,pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液4℃透析过夜。
(2)标记着胃蛋白酶原II单克隆抗体I的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层的制备:选用直径为200nm的微球,用0.05mol/L,pH7.2-7.6的MES缓冲液洗涤微球2次,同时调节微球浓度为1%,加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),终浓度为20mmol,室温反应10-20分钟,充分洗涤微球,用0.05mol/L,pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析过的胃蛋白酶原II单克隆抗体I,使胃蛋白酶原II单克隆抗体I与微球的质 量比为1-4:50,室温反应2小时,加入终止液(含有1%-10%BSA的0.01-0.05mol/L,pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液),室温反应30分钟,洗涤微球,加入复溶液(含有0.05%-1%BSA,0.05%-0.1%Tween-20,0.01M-0.05mol/L,pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液)复溶至原体积。使用定量喷膜仪以3ul/cm-5ul/cm量将制备好的微球喷涂于聚酯膜形成的结合垫上,避光35-38℃烘干1小时,加入干燥剂封存备用。
(3)硝酸纤维素膜的制备:使用含1%蔗糖的0.02mol/L,pH7.4的磷酸盐缓冲液,分别将透析过的识别不同抗原表位的胃蛋白酶原II单克隆抗体II和兔抗鼠IgG抗体稀释到1mg/ml的浓度,使用定量喷膜仪以1ul/cm的量将二者以0.5cm的间隔喷于硝酸纤维素膜上,35-38℃烘干1h,加入干燥剂封存备用。
(4)样品垫的处理:使用含1%BSA、0.1%Triton100的0.02mol/L,pH7.4的磷酸盐缓冲液浸泡样品垫1小时后,35-38℃烘干3小时,备用。
(5)试纸条的组装:组装操作必须在湿度小于35%,稳定20-25℃的房间进行,在PVC底板中间先铺设硝酸纤维素膜,然后在硝酸纤维素膜的与质控线相临近的一端铺吸水纸,使吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠,然后在硝酸纤维素膜的与检测线相临近的一端铺结合垫,使硝酸纤维素膜与结合垫的一端部分重叠,随后在结合垫的另一端再部分重叠的铺设样品垫,最后切割成0.5cm宽即得试纸条。
试纸条的定量检测
(1)绘制标准曲线
在制备好的胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条的加样区加入不同浓度的胃蛋白酶原II标准品(取6个不同的浓度,分别为0ug/L、5ug/L、10ug/L、20ug/L、30ug/L、50ug/L,每个浓度做5个平行样)。膜层析反应15分钟后,仪器读取T、C线信号,以检测的样品荧光值信号为纵坐标, 胃蛋白酶原II标准品浓度为横坐标,建立方程并拟合得到标准曲线y=17.546x+12.799(R2=0.999),然后通过该标准曲线得到标准卡,作为对样品中所含胃蛋白酶原II浓度进行定量分析的基础。
(2)样品检测
在本实用新型所述试纸条的加样垫加入待测样品,膜层析反应15分钟。开启荧光检测设备,并将检测条及上述标准卡插入荧光检测设备的插卡口,运行仪器,仪器通过相应的分析软件自动计算出待测样本中的胃蛋白酶原II浓度。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本实用新型创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,包括,
底板(1)以及沿所述底板(1)的长度方向顺次粘覆于所述底板(1)上的吸水纸(3)、硝酸纤维素膜(2)、结合垫(5)和样品垫(4);其中,
所述硝酸纤维素膜(2)粘覆于所述底板(1)的中间部位,且其上设置有相间隔的由胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅱ涂层形成的检测线(7)和由兔抗鼠IgG抗体涂层形成的质控线(6),所述检测线(7)靠近所述结合垫(5),所述质控线(6)靠近所述吸水纸(3);
所述结合垫(5)处喷涂有标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层;
所述吸水纸(3)、所述硝酸纤维素膜(2)、所述结合垫(5)以及所述样品垫(4)之间,依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠。
2.根据权利要求1所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,所述含有镧系元素的高分子纳米微球的直径为10-500nm。
3.根据权利要求2所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,所述含有镧系元素的高分子纳米微球的直径为100-300nm。
4.根据权利要求3所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,所述结合垫(5)上喷涂的标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有镧系元素的高分子纳米微球涂层为标记有胃蛋白酶原II单克隆抗体Ⅰ的含有铕离子的高分子纳米微球涂层。
5.根据权利要求1-4任一所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,所述质控线(6)与所述检测线(7)平行设 置,且所述质控线(6)与所述检测线(7)之间的距离为0.5cm-1.0cm。
6.根据权利要求5所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,
所述吸水纸(3)位于所述硝酸纤维素膜(2)的上方,且所述吸水纸(3)与所述硝酸纤维素膜(2)相重叠的部分沿所述底板(1)长度方向的长度为2mm。
7.根据权利要求6所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,
所述结合垫(5)位于所述硝酸纤维素膜(2)的上方,且所述结合垫(5)与所述硝酸纤维素膜(2)相重叠的部分沿所述底板(1)长度方向的长度为2mm。
8.根据权利要求7所述的定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试纸条,其特征在于,
所述样品垫(4)位于所述结合垫(5)的上方,且所述样品垫(4)与所述结合垫(5)相重叠的部分沿所述底板(1)长度方向的长度为2mm;
所述结合垫(5)沿所述底板(1)长度方向的长度大于4mm。
9.一种定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试剂卡,其特征在于,包括权利要求1-8任一所述的试纸条以及包覆所述试纸条的外壳;所述外壳包括底座和卡盖(8),所述卡盖(8)上设置有观察口(10)和加样口(9),以露出试纸条的局部区域;所述加样口(9)开口于所述样品垫(4)上部,以露出部分或全部所述样品垫(4)区域;所述观察口(10)开口于所述硝酸纤维素膜(2)上部,以露出全部所述检测线(7)和所述质控线(6)。
10.根据权利要求9定量检测胃蛋白酶原II的时间分辨免疫层析试剂卡,其特征在于,
所述外壳为塑料外壳。
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