CN102633863A

CN102633863A - 抗分泌因子对于治疗高眼压的应用

Info

Publication number: CN102633863A
Application number: CN201210058790XA
Authority: CN
Inventors: 汉斯阿尔内·汉松; 斯特凡·朗厄; 埃娃·延尼斯歇
Original assignee: LANTMAANNEN AS FAKTOR AB
Current assignee: LANTMAANNEN AS FAKTOR AB
Priority date: 2006-04-27
Filing date: 2007-04-27
Publication date: 2012-08-15
Anticipated expiration: 2027-04-27
Also published as: DK2015767T3; WO2007126364A8; ES2773945T3; JP2012153695A; PL2468292T3; RU2458703C2; BRPI0710959A2; NZ598426A; CA2771087C; WO2007126364A3; US9000125B2; DK2468292T3; KR20090040404A; US20090162296A1; US20120283191A1; IL194773A; ZA200809115B; ES2561945T3; CN102633863B; PL2015767T3

Abstract

本发明涉及抗分泌因子(如抗分泌蛋白，其具有抗分泌活性的同系物、衍生物和/或片断)对于制造用于治疗和/或防止高眼压的药物合成物的应用。因此，本发明涉及包含抗分泌因子的药物合成物对于治疗和/或防止高眼压的应用，这种应用的优选特征是，导致眼内压升高的体液外流受到抑制。本发明提供了用于治疗和/或防止这种病症、调节眼内压至可接受水平(任选等于或小于21毫米汞柱)的新颖途径。

Description

抗分泌因子对于治疗高眼压的应用

本申请是申请日为2007年4月27日的国际申请PCT/SE2007/000414的国际申请进入中国，申请号为：200780014996.X、发明名称为“抗分泌因子对于治疗高眼压的应用”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及包含抗分泌因子的药物合成物对于治疗和/或防止高眼压的应用，这种应用的优选特征是，使导致眼内压升高的体液外流受到抑制。本发明提供用于治疗和/或防止这种病症、调节眼内压至可接受水平(任选等于或小于21毫米汞柱)的新颖途径。本发明还涉及通过给予包含抗分泌因子的药物合成物从而治疗和/或防止高眼压的方法。

背景技术

眼内压水平升高是由于眼内体液产生增多或外流受到抑制、或者这两种因素的组合导致的。多物种哺乳动物的眼内压(IOP)类似，都为11-21毫米汞柱左右，如10-20毫米汞柱、12-18毫米汞柱。对于人类，正常范围约为11-21毫米汞柱。如果较长时期地超过20毫米汞柱，如21毫米汞柱、21-24毫米汞柱、或22-30毫米汞柱，则认为是高眼压。通过形成体液(房水，AH)可以调节IOP水平，房水来源于血液并经由睫状突传递至眼后房中。AH通过眼后房中的玻璃体和晶状体，然后通过瞳孔进入眼前房中。大部分AH最终流至虹膜-角膜角并经由Schlemm管、房水静脉、巩膜和巩膜上静脉通过小梁网流出眼外。在AH和例如眼后房中的晶状体与眼前房中的角膜之间存在体液和代谢物的交换。一小部分AH进入葡萄膜巩膜途径，即虹膜、睫状肌和巩膜，最终与局部产生的组织液混合，然后流出眼外(Jerndal，Hansson& Bill，1990；Oyster，1999)。IOP主要通过体液外流调节，而人们认为成人AH的形成不怎么变化。IOP的主要调节因素是小梁网的内皮、管旁内皮网(the juxtacanalicular endothelial meshwork)、和Schlemm管的内壁内皮(Lutjen-Drecoll 1998；Sacca等，2005)。后者对于调整和调节由眼前房至血管系统的流动非常重要。在内皮细胞中形成有内陷(称为“细胞膜穴样内陷”)，其中充满AH，然后主要作为巨液泡传递通过内皮细胞，最终清空它们的内含物至Schlemm管中。IOP升高导致形成大量这样的巨液泡，如果IOP降低则反之(Jerndal，Hansson & Bill，1990；Lutjen-Drecoll 1998)。另外，这些细胞可以暂时地具有调节它们的细胞容积的能力，从而进一步影响AH的细胞外泄(the paracellular leakage)(Starner等，2001)。图1a显示人眼的示意图，图1b是成人眼虹膜-角膜角的扫描电子显微照片。

在医疗实践中，使用术语“高眼压”作为IOP超过20毫米汞柱(如21-24毫米汞柱、22-30毫米汞柱)的慢性病的诊断。高眼压病人可能患有该病症而不产生任何后发病(如视野丧失)信号或其他视网膜信号和视神经异常。IOP急剧升高会在例如咳嗽、高工作负荷、眼球外伤和咽鼓管充气检查(Valsalva’s manoeuvre)之后瞬时发作。IOP通常具有日夜变化，对于人类，每日早间的IOP最高。成人每分钟形成约2-3微升AH，所以眼中AH约每1.5小时更新一次。这意味着必须在很窄的时间限度内对AH的形成和外流进行调节，从而将IOP保持在正常范围内。IOP必须既不太高也不太低。AH的主要功能是为例如晶状体和角膜提供营养素、氧气、离子和体液，并且排出代谢物和废物。而且，IOP和AH相互作用从而保持眼的光学性质和形状。可以通过几种方法揭示AH的产生，例如通过确定AH的周转量及其外流。通过例如压力测量法可以精确确定眼内压。

可以证明一些青光眼病人存在不正常的IOP。不过并非所有青光眼病人都显出高眼压信号。因此，必须不要将术语“高眼压”与青光眼的医疗诊断混淆起来。与高眼压不同，确定青光眼作为一种疾病的特征是，随着时间的流逝，因为视网膜神经细胞的持续损失和视神经的退化，导致恶化并且最终失明。术语“青光眼”包括多种病症，它们的共同特点是最终都会导致视力恶化(Ritch等，1996)。因此，青光眼的诊断与视觉损失相关，与IOP不正常无关。

IOP主要通过AH从眼前房外流至通过虹膜角膜角的静脉到达Schlemm管进行调节。如果AH从眼流出受到抑制或甚至受到阻碍，IOP就会升高。对外流的阻力(正常情况下导致IOP为10-20毫米汞柱，如12-18毫米汞柱)主要位于小梁网和Schlemm管的内皮衬中。小梁网和Schlemm管中的内皮细胞相互作用，调节AH的外流(Alvarado等，2005；Jerndal等，1991)。在眼前房和Schlemm管(包括巩膜和巩膜上静脉)之间没有直接联系。对于高眼压，小梁网的特征是：退化至不同程度，积聚源自鞘膜的斑样物质，以及增大对AH外流的阻力(Rohen等，1993)。而且，在某些情况下，色素和脱落物质以及血细胞和凝块的积聚也会增加阻力并进一步抑制外流，使IOP升高。分泌过多(即AH形成过多)是高眼压的唯一原因。因此，对AH的周转量进行改善的持续控制，特别是控制AH通过虹膜角膜角的外流，对于降低IOP使其趋于正常从而控制高眼压是非常重要的。

在临床实践中，治疗高眼压的现有疗法的目的是优先增加AH的外流，但是一些药物(例如杜塞酰胺和布林佐胺)会减少AH产生。一些目前使用的药物同时影响形成和外流途径。需要强调的是，AH的组成和周转量都很重要，因为AH为例如晶状体和角膜提供营养素、体液和氧气，并且处理形成的多种产物。目前使用的药物很多都有副作用，经常会抑制治疗的充分性。另外，现有药物还不能充分治疗高眼压。因此，需要提出降低IOP至正常水平的治疗方法。

抗分泌蛋白是41kDa蛋白，最初描述为能防止腹泻和肠炎(综述参见Lange和Lonnroth，2001)。已知抗分泌蛋白的序列，并且克隆了其eDNA。抗分泌活性似乎主要由位于1-163之间(或者更具体地说，是位于抗分泌蛋白氨基酸序列上35和50点位之间)的肽行使。免疫化学和免疫组织化学研究显示，抗分泌蛋白由体内大部分组织和器官呈现，并且也可以由它们合成。已经表征了包含抗腹泻序列的合成肽(WO 97/08202；WO 05/030246)。已经揭示抗分泌因子能够使病态的体液传输和/或炎性反应正常化，例如用霍乱菌毒素激发之后在肠管和中枢神经系统的脉络丛中的情况(WO 97/08202)。因此，在WO 97/08202中建议可以在食物和饲料中添加抗分泌因子来治疗水肿、腹泻、脱水和炎症。WO 98/21978揭示具有酶活性的产物用于制造诱导抗分泌蛋白形成的食物的应用。WO 00/038535进一步揭示富含这种抗分泌蛋白的食品。

还显示，在治疗细胞损失和/或增益相关病症时，抗分泌蛋白及其片断能够改善神经组织的修复以及干细胞和祖细胞及其衍生细胞的增殖、凋亡、分化和/或迁移(WO 05/030246)。

本发明的发明人惊异地发现，抗分泌因子蛋白及其同系物和肽片断能够降低对AH通过眼的虹膜角膜角外流至静脉系统的阻力。这种发现提供了抗分泌蛋白及其同系物和片断的新的治疗应用，即，这种蛋白和片断在制备用于治疗和/或防止高眼压的药剂中的应用。

发明内容

本发明涉及包含抗分泌因子的药物合成物对于治疗和/或防止高眼压的应用。本发明基于以下发现：抗分泌因子(即抗分泌蛋白及其具有抗分泌活性的肽、衍生物、同系物和片断)能够增加眼内体液的外流，从而降低眼内压。

在第一方面，本发明涉及抗分泌蛋白，或其具有抗分泌活性的同系物、衍生物或片断，或其药物学可接受盐，对于制造用于防止和/或治疗高眼压的药物合成物的应用。

在第二方面，本发明涉及治疗和/或防止哺乳动物高眼压的方法，其中，该方法包括给予需要的哺乳动物有效量的药物合成物，该合成物包含抗分泌蛋白，或其具有抗分泌活性的同系物、衍生物或片断，或其药物学可接受盐。

附图简要说明

图1a显示人眼(1-1)的示意图。在较高放大倍数下能看到Schwann管(Sch)，通过小梁网(T)(1-2)与眼前房(AC)分开。还显示出，各小梁(Tr)被内皮细胞(EC)(1-3)包围。房水在睫状突形成，参见图1-1中加框区域右侧。L＝晶状体；C＝角膜；I＝虹膜；S＝巩膜；由R.V.Krstic，1991修改。

图1b是55岁老年男性的眼的虹膜-角膜角的扫描电子显微照片，该男性的眼因为眼球后肿瘤而摘除。可以看到，小梁网(标注为U)通过相当致密的组织与Schlemm管分开。C＝角膜；Sp＝巩膜突；I＝虹膜；Cp＝睫状突；S＝Schwalbe线。空气位于右上方。来自Jerndal等，1991。

图2分别显示根据实施例7用AF-16(倒三角形)、药物Timolol

(三角形)和PBS载体(正方形)对兔眼进行局部治疗时的眼内压。

图3分别显示根据实施例7用AF-16(倒三角形)、药物Timolol

(三角形)和PBS载体(正方形)对兔眼进行5天局部治疗后的眼内压。

图4显示根据本发明SEQ ID NO 6的抗分泌蛋白氨基酸序列。该序列对应于US 6344440的SEQ ID NO 2。

定义

在本申请中，“眼前房”定义为虹膜前表面和角膜内皮表面之间的空间，在虹膜角膜角处连接。

“眼后房”定义为玻璃体与晶状体的前表面和虹膜后表面之间的空间。眼后房和眼前房通过瞳孔连接。

本申请文本中的“抗分泌蛋白”指具有WO 97/08202和WO 00/38535中所定义抗分泌性质的蛋白。

在本申请文本中，“抗分泌因子(AF)”指抗分泌蛋白或其具有抗分泌活性的肽、同系物、衍生物和/或片断。在本申请文本中，这种肽、同系物、衍生物或片断在治疗和/或防止高眼压时具有相似的生物活性。在例如WO97/08202和WO 05/030246中揭示了抗分泌因子。在本申请文本中，术语“抗分泌因子”、“抗分泌因子蛋白”、“抗分泌蛋白”、“抗分泌肽”、“抗分泌衍生物”和“抗分泌片断”可以交换使用。术语“抗分泌因子”还意指SE 900028-2和WO 00/38535中揭示的富含抗分泌因子的蛋黄，以下将进一步描述。

“房水，AH”指由血液在睫状突形成、流过眼后房和瞳孔进入眼前房、然后主要经由小梁网和Schlemm管以及最终的静脉血管离开眼前房的水样体液。

CNS是中枢神经系统，包括大脑和脊髓。

“水肿”指细胞、组织或浆膜腔中积聚过多量的水样体液(参见例如Stedman′s Medical Dictionary，第五版，Lippincott，Williams & Wilkins，Philadelphia，2005)。

“青光眼”指一类疾病，其特征是，对视网膜和视神经的渐进性损伤导致视野损失和变窄并最终丧失视力。

“眼内压(IOP)”是由眼球内的房水产生的压力。

“高眼压”是清醒对象眼球内压力超过20毫米汞柱(如21毫米汞柱、22-30毫米汞柱)的病症。因此，在本申请文本中，“高眼压”和“眼内压不正常”可以交换使用。

“低眼压”指清醒对象眼球内压力小于11毫米汞柱，如10毫米汞柱。

“虹膜角膜角”是眼前房中、虹膜和角膜后部之间的连接处。

PBS是磷酸盐缓冲盐水。

在本申请文本中，术语“治疗”或“处理”涉及为了治愈或减轻高眼压病症的医疗治疗。在本申请文本中，还意指“防止”高眼压，其与为了避免发生高眼压的预防性治疗相关。

“小梁网”指衬有内皮细胞的小梁的网络和胶原结缔组织的片层，该片层在位于眼前房和Schlemm管之间的虹膜角膜角处插入。

“Schlemm管”指位于眼的异组织边缘区域处内巩膜沟外部的环形静脉管，其经由房水管连接至眼的静脉排出系统。Schlemm管是房水从眼前房外流的主要系统。

蛋白(质)是由氨基酸残基通过肽键连接在一起构成的生物大分子。蛋白(质)(作为氨基酸的线形聚合物)也称为多肽。蛋白(质)通常具有50-800个氨基酸残基，因此分子量约为6000至几十万道尔顿或以上。小型的蛋白(质)称为肽或寡肽。在本申请文本中，术语“蛋白(质)”和“肽”可以交换使用。

在本申请文本中，“药物合成物”指包含治疗活性量的抗分泌蛋白、任选组合有药物学活性赋形剂(例如载剂或载体)的合成物。所述药物合成物为适当的给药途径配制，给药途径根据病人情况以及其他因素(如年龄或优选选项)变化。包含抗分泌蛋白的药物合成物作为药物递送系统发挥作用。给予的药物合成物为病人或动物体提供活性物质。以下进一步描述适用于本发明的药物合成物。

发明详细说明

本发明基于以下惊异的发现，抗分泌因子(AF)(例如抗分泌蛋白及其同系物、衍生物或片断)能降低对房水通过眼的虹膜角膜角外流至静脉系统的阻力，这种降低作用增加了眼内异常积聚的体液的外流。从而增加房水外流，导致眼内压降低。这种发现为抗分泌蛋白及其片断提供了一种新的治疗应用，即，这种蛋白和片断对于制备用于治疗和/或防止高眼压的药物合成物的应用。根据本发明的药物合成物的应用非常适合可能发生或已患有高眼压的病人。

如上所述，房水外流主要通过虹膜角发生，通过形成小梁网的细胞调节。大部分房水经由Schlemm管传输离开眼部。房水封闭在通过小梁网细胞的小泡中传输至Schlemm管，从某种程度上说，这种传输是跨细胞的。另外，一小部分AH通过虹膜和巩膜的角结构离开眼。眼房水外流时，其中“一小部分”液体是一次传输的，这与例如肠管中离子和水的传输有根本性的不同，在肠管中，肠管上皮细胞的离子泵和水泵一次传输一个分子。因此，虽然以前建议将抗分泌因子用于治疗水肿、腹泻、脱水、青光眼和炎症之类的病症(WO 97/08202)，但是抗分泌因子在治疗这些疾病中的作用机理不同于其根据本发明的作用机理，在本发明中，抗分泌因子降低了房水通过眼的虹膜角膜角外流至静脉系统的阻力。不过，需要指出的是，高眼压在后期可能导致青光眼，也可能不导致青光眼。

因此，在第一方面，本发明涉及抗分泌因子(即，抗分泌蛋白和/或其具有抗分泌活性的同系物、衍生物或片段)和/或其药物学可接受盐对于制造用于防止和/或治疗高眼压的药物合成物的应用。

抗分泌因子是体内自然产生的蛋白质。人抗分泌因子是41kDa蛋白，从脑垂体分离时包含382个氨基酸。关于根据本发明的眼内压降低效应的活性位点似乎位于接近蛋白质N端的区域中，定位于SEQ ID NO 6的氨基酸1-163，或者定位于该区域片段。

本发明的发明人已经指出，抗分泌因子在某种程度上类似于蛋白S5a，也称为Rpn 10，其构成所有脊椎细胞中占主要成分的亚单位，26S蛋白酶体，更具体地说是位于19S/PA 700cap中。在本发明中，抗分泌蛋白定义为一类具有相同功能性质的类似蛋白。蛋白酶体具有多种与剩余蛋白以及短寿蛋白、无用蛋白、变性蛋白、错误折叠蛋白和异常蛋白的降解相关的功能。而且，抗分泌因子/S5a/Rpn10参与细胞成分(最明显的是指蛋白质)的细胞分布和传输，常见教科书中有进一步的说明。

根据本发明的抗分泌蛋白的同系物、衍生物和片段和/或肽都具有类似的、能够降低眼内压的生物活性。在本申请文本中，抗分泌同系物、衍生物和片段包含天然产生的抗分泌蛋白的至少4个氨基酸，通过改变一个或多个氨基酸可以进一步改性，从而优化治疗和/或防止高眼压的抗分泌因子的生物活性。

抗分泌蛋白的片段一般包含制备的肽/氨基酸序列或其片段，其中，该制备中超过90％(如95％、96％、97％、98％或99％)的蛋白是本发明的蛋白、肽和/或其片段。

而且，对于与根据本发明的抗分泌蛋白、肽、同系物、衍生物和/或片段的氨基酸序列有至少70％(如至少72％、75％、77％、80％、82％、85％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)相同的任何氨基酸序列，也认为落在本发明范围之内。在本申请文本中，术语“类似”和“相同”可以交换使用，即，与另一种氨基酸序列具有指定程度相同性的氨基酸序列相对于指定的氨基酸序列具有相同程度的类似性。

本申请文本中的“衍生物”意指这样一种蛋白，其具有本文所定义的抗分泌活性，直接或通过改性或部分取代衍生自另一种物质，其中一种或多种氨基酸被另一种氨基酸取代，所述另一种氨基酸可以是改性的氨基酸或非天然的氨基酸。这种改性的氨基酸和/或非天然的氨基酸是本领域技术人员众所周知的。例如，根据本发明的抗分泌因子衍生物可以包含N端和/或C端保护基团。N端保护基团的一个例子包括乙酰基。C端保护基团的一个例子包括酰胺。

“相对于参比氨基酸序列具有至少例如95％相同性的氨基酸序列的蛋白、同系物、衍生物、肽和/或其片段”意指例如这种肽的氨基酸序列与参比序列类似，区别在于，该氨基酸序列在参比氨基酸序列的每100个氨基酸中可以包括最多5个点突变。换言之，要获得相对于参比氨基酸序列具有至少95％相同性的氨基酸序列的多肽，可以删除参比序列中最多5％的氨基酸或者用另一种氨基酸取代，或者可以在参比序列中插入占参比序列中氨基酸总数最多5％的氨基酸。

这些参比序列的突变可以在参比氨基酸序列的氨基或羧基端位置或者这些端位之间的任何位置发生，独立地插入参比序列中的氨基酸之间或者作为一个或多个邻接的基团插入参比序列中。

在本发明中，最适宜使用一种局部算法程序来确定类似性。局部算法程序(例如Smith-Waterman)对一个序列中的子序列与另一个序列中的子序列进行比较，找出子序列的组合以及那些子序列的队列，产生最高整体类似性评分。允许时对内部空隙进行罚分。局部算法在比较具有共同的单个域或仅只一个结合位点的两个多域蛋白时能很好地工作。

确定相同性和类似性的方法编码成公开可用的程序。确定两个序列之间的相同性和类似性的优选计算机程序方法包括但并不限于GCG程序包(Devereux，J等(1994))BLASTP，BLASTN和FASTA(Altschul，S.F.等(1990))。BLASTX程序由NCBI和其他来源公开(BLAST Manual，Altschul，S.F.等，Altschul，S.F.等(1990))。各序列分析程序具有默认的评分矩阵和默认的空隙罚分。一般来说，分子学生物学家期望使用所选软件程序建立的默认设置。

根据本发明的抗分泌蛋白、肽、或其具有抗分泌活性的同系物、衍生物或片段可以具有4个或更多个氨基酸，例如具有5-16个氨基酸，6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸或更多。在其他优选实施方式中，抗分泌因子由42、43、45、46、51、80、128、129或163个氨基酸组成。在优选实施方式中，抗分泌因子由5、6、7、8或16个氨基酸组成。

在另一个优选实施方式中，根据本发明的抗分泌蛋白、肽和/或其具有抗分泌活性的同系物、衍生物或片段由根据下式的序列组成：

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

其中X1是I、SEQ ID NO 6的氨基酸1-35、或缺省，X2是H、R或K，X3是S或L，X4是T或A，X5是SEQ ID NO 6的氨基酸43-46、43-51、43-80或43-163、或缺省。

根据本发明的抗分泌因子可以体内产生或体外产生，例如通过重组产生、化学合成、和/或从抗分泌因子的天然产生来源(如猪脑垂体或鸟卵)分离。形成之后，可以对抗分泌因子作进一步处理，例如通过化学或酶解成较小的抗分泌活性片断、或通过氨基酸改性作进一步处理。目前无法通过纯化获得纯净形式的抗分泌因子。不过可以如WO 97/08202和WO 05/030246中所述通过重组产生生物活性的抗分泌因子蛋白。WO 05/030246和WO97/08202还揭示了这种蛋白的生物活性片断的产生。

根据本发明的抗分泌因子可以进一步包含N端和/或C端保护基团。N端保护基团的一个例子包括乙酰基。C端保护基团的一个例子包括酰胺。

术语“药物学活性盐”指抗分泌蛋白的盐，其可以为基于所谓Hofmeiser系列的、由抗分泌蛋白衍生的任何盐。由于蛋白质和肽是两性的，因此，术语“药物学可接受盐”作为例如三氟乙酸盐或乙酸盐进行贮存，该术语还指根据本发明的抗分泌因子的更稳定形式，这并非是对本发明范围的限制。

本发明的药物合成物或药剂可以另外包含一种或多种药物学可接受载体、接受体(recipient)或稀释剂，如本领域中已知的那些。

所述合成物或药剂可以为例如流体、半流体、半固体或固体合成物的形式，例如但并不限于溶解的输液，例如灭菌盐水、各种盐溶液、葡萄糖溶液、磷酸盐缓冲盐水、血液、血浆或水、粉末、微囊、微球体、纳米颗粒、喷雾剂、气溶胶、吸入装置、溶液、分散体、悬浮体、乳剂、和它们的混合物。所述合成物可以考虑肽或蛋白质的稳定性和反应性。

本发明的药物合成物可以根据传统制药实践进行配制，例如根据“Remington：The science and practice of pharmacy”，第21版，ISBN0-7817-4673-6或“Encyclopedia of pharmaceutical technology”，第2版，Swarbrick J.编，ISBN：0-8247-2152-7。

在本发明的一个优选实施方式中，抗分泌因子是具有如SEQ ID NO 6所示氨基酸序列的抗分泌蛋白或其包含SEQ ID NO 6的氨基酸38-42的同系物、衍生物和/或片断。

在本发明的一个优选实施方式中，抗分泌因子选自SEQ ID NO 6或是根据SEQ ID NO 6的抗分泌蛋白的氨基酸序列(同样显示在图4中)，即：VCHSKTRSNPENNVGL(SEQ ID NO 1，在本申请文本中也称为AF-16)、IVCHSKTR(SEQ ID NO 2)、VCHSKTR(SEQ ID NO 3)、CHSKTR(SEQ ID NO 4)、HSKTR(SEQ ID NO 5)，这些序列中使用共同的单字母缩写表示氨基酸。在例如WO05/030246中已经揭示了SEQ ID NO 1、2和3，在US 6344440中揭示了SEQID NO 6。如所附序列表中指出的，可以用其他氨基酸代替以上列出的序列中的一些氨基酸。在本段落的以下部分中，对特定氨基酸序列中的特定氨基酸的位置进行计算，从左开始，将该特定序列中最靠近N端的氨基酸表示为位置1。对于该序列中的任何其他氨基酸取代都可以独立地进行如下所示的任何氨基酸取代。在SEQ ID NO 1中，位置2的C可以被S取代，位置3的H可以被R或K取代，位置4的S可以被L取代，并且/或者位置6的T可以被A取代。在SEQ ID NO 2中，位置3的C可以被S取代，位置4的H可以被R或K取代，位置5的S可以被L取代，并且/或者位置7的T可以被A取代。在SEQ ID NO 3中，位置2的C可以被S取代，位置3的H可以被R或K取代，位置4的S可以被L取代，并且/或者位置6的T可以被A取代。在SEQ ID NO 4中，位置1的C可以被S取代，位置2的H可以被R或K取代，位置3的S可以被L取代，并且/或者位置5的T可以被A取代。在SEQID NO 5中，位置1的H可以被R或K取代，位置2的S可以被L取代，并且/或者位置4的T可以被A取代。

在本发明的一个优选实施方式中，所述片断包含如SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列。

在本发明的一个优选实施方式中，所述片断包含如SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列。

在本发明的一个优选实施方式中，所述片断包含如SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列。

在本发明的一个优选实施方式中，所述片断包含如SEQ ID NO 4中所示的氨基酸序列。

在本发明的一个优选实施方式中，所述片断包含如SEQ ID NO 5中所示的氨基酸序列。

本发明还预期了根据本发明的任何抗分泌因子中的两种或更多种的组合，任选还组合有富含有抗分泌因子的蛋黄。

在本发明的一个优选实施方式中，抗分泌因子用于制造一种药物合成物，该合成物用于治疗和/或防止高眼压、或者该合成物用于治疗和/或防止高眼压的方法中，其中，眼内压等于或大于21毫米汞柱，例如等于或大于22毫米汞柱。在本发明的另一个优选实施方式中，眼内压为正常或甚至较低，即小于21-24毫米汞柱，优选小于10-12毫米汞柱，例如为11-21毫米汞柱。人们认为小于11毫米汞柱(如小于10毫米汞柱、小于10-12毫米汞柱)的IOP低于正常值，即IOP较低。对于眼内压正常或甚至低于正常值的哺乳动物，如果其眼内压在一天内具有峰值，则也可以给予根据本发明的药物合成物，该合成物的有益效果是可以治疗和/或防止这种出现峰值的病症。在另一个优选实施方式中，眼内压超过21毫米汞柱，例如为21-24毫米汞柱、22-30毫米汞柱。

本发明还预期了使用富含抗分泌因子的蛋黄来治疗和/或防止高眼压、和/或来制备药物合成物的可能性。SE 9000028-2揭示了可以刺激在鸟的体内形成抗分泌因子，然后通过蛋黄的消化回收或浓缩抗分泌因子。WO00/38535进一步揭示了通过食物或饲料、或者作为配制成药品的或多或少的独立产品的形式给予动物或人这种回收或浓缩的抗分泌因子。因此，本发明还预期了富含抗分泌因子的蛋黄对于制备产品(例如药物合成物)、对于治疗和/或防止高眼压的应用，或者这种蛋黄在治疗方法中的应用。在一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白以所述蛋黄中的至少1000FIL单位/毫升的浓缩剂形式提供。在本申请文本中，FIL单位等于(相较于不提供抗分泌因子的对照)肠液流的50％减少量，如WO 00/38535和SE 9000028-2中所揭示的。因此，根据本发明的抗分泌因子也可以以“医疗食品”的形式给予。在本申请文本中，“医疗食品”指用含有抗分泌蛋白的合成物制造的食品。所述食品可以是任何合适的食品，为流体或固体形式，例如液体或粉末，或者为任何其他合适的食品。这些物质的例子参见WO 00/38535。

在本发明的一个优选实施方式中，要治疗和/或防止的高眼压是由来自眼前房的房水外流受到阻力引起的。

在另一个优选实施方式中，根据本发明使用的药物合成物，降低了来自眼前房的房水通过小梁网和Schlemm管外流时的阻力。

在本发明的一个实施方式中，根据本发明的药物合成物进一步包含药物学可接受赋形剂。本领域技术人员通过试验可以轻易地确定药物学可接受赋形剂的选择及其根据本发明使用的最佳浓度。根据本发明使用的药物学可接受赋形剂包括溶剂、缓冲剂、防腐剂、螯合剂、抗氧化剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂和/或稀释剂。

药物学可接受赋形剂是对给予该合成物的个体基本无害的物质。这种赋形剂通常满足国家药品管理署的要求。官方药典如美国药典和欧洲药典为众所周知的药物学可接受赋形剂制定的标准。

以下是根据本发明使用的相关药物合成物的回顾。回顾的内容以特定给药途径为基准。但是，应当理解，对于其中的药物学可接受赋形剂以不同剂型或不同合成物的情况中，特定药物学可接受赋形剂的应用并不限于特定剂型，也不限于特定的赋形剂功能。

肠外合成物：

对于全身性应用，根据本发明的合成物可以包含传统的非毒性药物学可接受载体和赋形剂，包括微球体和脂质体。

根据本发明使用的合成物可以包括所有种类的固体、半固体和流体合成物。

药物学可接受赋形剂可以包括溶剂、缓冲剂、防腐剂、螯合剂、抗氧化剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂和/或稀释剂。以下给出具体试剂的例子。

各种试剂的例子：

溶剂的例子包括但并不限于水、醇类、血液、血浆、脊髓液、腹水和淋巴液。

缓冲剂的例子包括但并不限于柠檬酸、乙酸、酒石酸、乳酸、磷酸氢盐(hydrogenphosphoric acid)、碳酸氢盐、磷酸盐、二乙胺等。

螯合剂的例子包括但并不限于EDTA钠和柠檬酸。

抗氧化剂的例子包括但并不限于丁基化的羟基苯甲醚(BHA)、抗坏血酸及其衍生物、维生素E及其衍生物、半胱氨酸、以及它们的混合物。

稀释剂和崩解剂的例子包括但并不限于乳糖、蔗糖、EMDEX聚合糖、磷酸钙、碳酸钙、硫酸钙、甘露醇、淀粉和微晶纤维素。

粘结剂的例子包括但并不限于蔗糖、山梨糖醇、金合欢胶、藻酸钠、明胶、淀粉、纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮和聚乙二醇。

根据本发明使用的药物合成物或物质优选经由静脉内末梢注射或经由肌肉内或皮下注射给药至病人体内，或者经由口腔、肺部、鼻、皮肤或口服途径。而且，还可以通过外科插入病人脑室中的分流器给予药物合成物或药物学活性物质。

在一个实施方式中，根据本发明的药物合成物是为眼内、鼻内、口服、皮下和/或全身性给药而配制的。药物合成物可以每天给予一次或多次。在本发明的一个优选实施方式中，针对作为喷雾剂、气溶胶通过喷雾器或吸入器给药的目的配制药物合成物。在另一个优选实施方式中，本发明的合成物作为悬浮体、或甚至更优选作为喷雾吸入粉末、气溶胶或鼻腔喷雾剂和/或通过呼吸道给予。喷雾器是以气雾形式向气道递送液体药剂的医疗装置。喷雾压缩器迫使空气通过管道进入充满液体药剂的药剂杯。空气的压力使液体分散成微小的气雾样颗粒，可以深深吸入气道中。在本申请文本中，术语“气溶胶”指细小固体或液体颗粒的气相悬浮体。包含抗分泌因子的粉末形式药物合成物在稳定性和剂型方面具有额外优势，并且干粉末可以用吸入器给予。药物合成物还可以局部施用于眼、眼内、鼻内、口服、皮下和/或经由血管全身性施用。在一个优选实施方式中，针对局部施用于眼的目的配制药物组合物。通常，将本发明合成物局部施用于眼时，每天的施用浓度为每次1微克至10毫克，例如每次1微克至1毫克，优选每天50-1000微克，例如每天50-500微克、50-250微克、100-250微克、500-250微克、500-750微克、或50-100微克，每天每只眼睛施用单剂量或重复多次施用。对血液进行全身性给药时，其剂量通常为每次每千克体重每天0.1微克至10毫克，例如每次每千克体重每天0.1微克至1毫克，优选每千克体重1-1000微克，较优选每千克体重1-100微克，每天施用单剂量或重复多次施用。根据本发明使用富含抗分泌因子的蛋黄时，优选口服给药。AF蛋白、肽、其片断和/或衍生物的重要特征是，即使在高剂量情况下，也不会发生局部或全身性副作用，能够在不产生已知风险的情况下进行强效治疗。

本发明还涉及抗分泌蛋白、或其具有抗分泌活性的同系物、衍生物和/或片断、和/或其药物学可接受盐对于制造用于眼内给药的药物合成物的应用。

本发明还涉及如SEQ ID NO 4中所示肽、其同系物、衍生物和/或片断本身。本发明进一步涉及根据SEQ ID NO 4的肽的医疗应用。

本发明还涉及如SEQ ID NO 5中所示肽、其同系物、衍生物和/或片断本身。本发明进一步涉及根据SEQ ID NO 5的肽的医疗应用。在相同申请人的共同待审查申请中还揭示了这种肽对于制备用于治疗和/或防止间室综合症的药物合成物的应用。

本发明还涉及用于治疗和/或防止哺乳动物高眼压的方法，所述方法包括给予有效量的药物合成物，该合成物包含抗分泌蛋白、其具有抗分泌活性的同系物、衍生物和/或片断、和/或其药物学可接受盐。用于这种方法的药物合成物如上所述。

因此，本发明涉及用于治疗和/或防止哺乳动物高眼压的方法，所述方法包括给予有效量的药物合成物，该合成物包含抗分泌蛋白、其具有抗分泌活性的同系物、衍生物和/或片断、和/或其药物学可接受盐。

在一个优选实施方式中，根据本发明的方法包括眼内给予所述药物合成物。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述药物合成物包含一种或多种片断，该片断包含如SEQ ID NO 1-6中所示的氨基酸序列。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白由根据下式的序列组成：

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，抗分泌蛋白是具有如SEQ IDNO 6中所示氨基酸序列的蛋白、或其包含SEQ ID NO 6的氨基酸38-42的同系物、衍生物和/或片断。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白的片断包含如SEQ ID NO 1中所示的氨基酸序列。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白的片断包含如SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白的片断包含如SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白的片断包含如SEQ ID NO 4中所示的氨基酸序列。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述抗分泌蛋白的片断包含如SEQ ID NO 5中所示的氨基酸序列。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，所述药物合成物包含任何根据本发明的抗分泌因子中的两种或更多种，任选还组合有富含抗分泌因子的蛋黄。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，哺乳动物的眼内压等于或大于21毫米汞柱。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，眼内压为正常或低于正常值。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，抗分泌蛋白以富含这种抗分泌蛋白的蛋黄提供，所述蛋黄中提供的所述抗分泌蛋白的浓度优选至少为1000FIL单位/毫升。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，高眼压由来自眼前房的房水外流受到阻力引起。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，药物合成物降低了来自眼前房的房水通过小梁网和Schlemm管外流的阻力。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，药物合成物进一步包含药物学可接受赋形剂。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，药物合成物针对眼内、鼻内、口服、皮下和/或全身性给药的目的配制。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，药物合成物针对喷雾剂、气溶胶，和/或通过喷雾器或吸入器给药的目的配制。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，药物合成物向血液全身性给予的剂量为每次每千克体重每天0.1微克至10毫克，优选为每次每千克体重1-1000微克。AF蛋白、肽、其片断和/或衍生物的重要特征是，甚至在大剂量情况下也不会产生局部或全身性副作用，能够在没有已知风险的情况下进行强效治疗。

在根据本发明方法的一个同样优选的实施方式中，药物合成物向血液全身性给予的剂量为每次每千克体重每天0.1微克至10毫克，例如每次每千克体重每天0.1微克至1毫克，优选为每次每千克体重1-100微克。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，药物合成物针对眼的局部给药目的配制。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，局部性给予药物合成物的剂量为每次每天1微克至10毫克，优选为50-1000微克。

在根据本发明方法的一个同样优选的实施方式中，给予药物合成物的剂量为每次每千克体重每天0.1微克至10毫克，例如剂量为每次每天1微克至1毫克，优选为50-250微克。

在根据本发明方法的一个优选实施方式中，每天给予药物合成物一次或多次。

具体实施方式

本发明优选实施方式

实施例1

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年兔(New Zealand White，NZW)的昼夜节律进行调节。从而了解IOP动态，正常兔的IOP在黑暗期开始时增大。在眼球和Tenon囊之间单侧沉积10-50微克AF-16(SEQ ID NO 1)(溶解在PBS中，添加10％或50％乙醇)，导致麻醉兔的IOP在2小时内瞬时降低2.5毫米汞柱，该值借助TonoPen

(Medtronic Inc.，Minneapolis MN，USA)测得。静脉内注射染料荧光素(Sigma-Aldrich，Inc.，St.Louis，MO，USA；钠盐，溶解在PBS中)，用手术显微镜(配备有裂隙灯装置)确定示踪剂的出现。在经过AF-16处理的眼和只用载剂处理的对照眼之间，对于染料荧光素出现的时间没有差别。重复所述过程，证明了相同的结果。用更高剂量(100微克)的AF-16获得类似的IOP降低效果。因此得出以下结论：AF-16处理显然不能明显影响AH的产生，事实是，对于分别经过AF-16处理和载剂处理的眼，证明所用示踪剂荧光素几乎同时出现。

实施例2

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。从而了解IOP动态。在两只麻醉兔的眼球和Tenon囊之间临时性地通过注射单侧沉积10-50微克AF-16(溶解在50或100微升PBS中，添加10％或50％乙醇)，导致IOP在2小时内降低约2.5毫米汞柱，该值借助TonoPen测得。然后通过睫状体扁平部在两兔眼中注射20或50微升含有3％Evans蓝(Merck，Sigma)和2％牛血清蛋白(Sigma)的PBS溶液，注射位置在眼后房和玻璃体之间的边界处。用眼科缝线封闭注射位置以防止回流和漏出。观察到蓝色染料进入眼前房并通过巩膜上静脉离开眼，在经过AF-16预先处理的眼中的速度大于在只经过载剂预先处理的对照眼中的速度。第二天再次重复该试验，得到相同结果。因此，由通过虹膜角膜角进入Schlemm管及其连接静脉的白蛋白-染料-络合物发现，施用肽AF-16似乎促进了AH的外流。

实施例3

根据角膜缘周的(perilimbal)吸杯技术(一种确立和再三公开的方法)确定麻醉成年兔的AH流动和外流阻力。可以采用其他方法确定这些参数。从而获得关于AF-16对AH动态、以及正常动物和试验性升高了IOP的动物的IOP动态的影响的定量值和定性值。对于患有先天性高眼压的动物，也获得这些定量值和定性值。

实施例4

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。因此，在黑暗期的前几个小时内，IOP升高若干毫米汞柱。在麻醉兔Tenon囊下方单侧注射50-250微升最高为100微克的AF-16(溶解在PBS中，添加10％乙醇)，导致IOP在1小时内显著降低，降低值最多为5毫米汞柱(相较于对照眼的IOP，对照眼只沉积了载剂(PBS和10％乙醇))。用AF-16处理之后，IOP的降低持续了至少4个小时，然后与第二天测得的对照眼的值相等。连续三天对三只兔子进行重复试验，都获得这些结果。得出以下结论：AF-16能使正常眼的IOP有效降低几个毫米汞柱，这种效果与目的，对于能够降低IOP的其他所报道过的药物获得的效果相当。

实施例5

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。在麻醉兔的结膜下穹(cul-de-sac)以2分钟间隔两次单侧沉积25微克AF-16(共50微克，溶解在25微升磷酸盐缓冲盐水(PBS)中)，导致IOP在1小时后降低1.5-2.5毫米汞柱(相较于对照眼的IOP，对照眼只沉积了载剂PBS)。用AF-16处理之后，IOP的降低持续了至少4个小时，然后与第二天测得的对照眼的值相等。连续两天对两只兔子进行重复试验，都获得这些结果。得出以下结论：在盲管(cul-de-sac)局部沉积AF-16能使正常兔的IOP瞬时降低。

实施例6

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。在麻醉兔的下部盲管(cul-de-sac)(结膜下穹)以2分钟间隔两次单侧沉积50微克AF-16(共100微克，溶解在50微升PBS中)，导致IOP在1小时后降低2-4毫米汞柱(相较于对照眼的IOP，对照眼只沉积了载剂)。用AF-16处理之后，IOP的降低持续了至少4个小时，然后与第二天测得的对照眼的值相等。连续三天对两只兔子进行重复试验，都获得这些结果。得出以下结论：用为实施例5中所述剂量两倍的AF-16局部处理正常眼同样能瞬时降低IOP，不会产生明显的局部或全身性副作用。

实施例7

由Visionar AB，Uppsala，Sweden代表本申请人进行的本实验的目标是研究：用AF-16局部处理之后，兔眼IOP的动态，并将获得的效果与使用药物Timolol

(2.5毫克/毫升；Alcon Sweden AB，Stockholm，Sweden，已知其能降低高眼压)的效果、使用载剂PBS的效果进行比较。购买20只白化(Albino)雌性NZW兔(体重2.1-2.4千克)，单笼喂养，随意进食(K1，Lactamin，Stockholm，Sweden)和饮水。通过从9AM至9PM期间进行光照，调节日间循环。在长达3周的适应期间，每天都在对兔子角膜施行局部麻醉之后测量IOP的试验条件下对兔子进行训练。

将兔子随机分成两组：

组1(n＝10)。这些兔子的一只眼中施用两滴AF-16(共50微克，在50微升PBS中)，在对照眼中施用相同体积、2×25微升的载剂PBS。

组2(n＝10)。这些兔子的一只眼中施用一滴Timolol

(50微升；125微克)，在另一只眼中施用相同体积的PBS。已知Timolol

能降低兔的眼内压，从而作为参比用来校验模型。对各角膜施用一滴Tetrakain Chauvin

(Novartis Ophthalmics，Taby，Sweden)施行局部麻醉之后利用TonoPenXL

(Medtronic)测量IOP。在最终确定的程序中，安排计划了这样的两个系列测量。一个系列是用AF-16和载剂进行局部处理5天之后，另一个系列是用Timolol

或载剂进行局部处理之后。

在第一天的测量中，预计在第五次和第六次测量时能观察到Timolol

的IOP降低效果，因为估计IOP会因为昼夜循环而升高。在延长期内(兔笼开始黑暗期之后1、2、3.25、4.25、5.5、6.5、7.75、9和10小时)进行最后一天的IOP测量，以确定能够在延长期内获得数据。结果列于附图3中。5天处理时期开始时的IOP如图2中所示。在用AF-16进行处理时，没有观察到局部或全身性的副作用或并发症。

由数据可知，AF-16对IOP有降低效果，与只用载剂PBS处理之后测得的IOP明显不同。AF-16产生的明显效果与Timolol

产生的效果相当(图3)。得出以下结论：这些数据显示AF-16在降低兔的IOP方面与已知具有这种效果的常用药(Timolol)同样有效。因此，AF-16可能适用于治疗人高眼压。

实施例8

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对两只年轻正常成年NZW兔(2.4-2.9千克，雌性)的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。在麻醉兔的盲管下部(结膜下穹)以2分钟间隔两次单侧沉积50或100微克合成六肽CHSKTR(共100-200微克，每次都在50微升PBS中)，导致IOP在1小时后降低2-3毫米汞柱(相较于对照眼的IOP，对照眼只沉积了载剂)。用六肽处理之后，IOP的降低持续了至少2个小时，然后与第二天测得的对照眼的值相等。对两只兔子进行的试验都获得这些结果。得出以下结论：用合成肽(沉积在下部泪囊，具有SEQ ID NO 6的抗分泌蛋白的部分活性序列CHSKTR(SEQ ID NO 4))局部处理正常眼能降低IOP。

实施例9

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对两只正常年轻成年NZW兔(2.4-2.9千克，雌性)的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。在麻醉兔Tenon囊下的颞区位置单侧注射50或100微克合成六肽CHSKTR(溶解在100微升PBS中，含有10％乙醇)，导致IOP在30分钟后降低2-4毫米汞柱(相较于对照眼的IOP，对照眼只类似地沉积了载剂)。用六肽处理之后，IOP的降低持续了至少2个小时。两只兔的IOP与第二天测得的对照眼的值相等。在之后的两天进行的试验都获得这些结果。得出以下结论：在眼球外部注射试验物质(合成肽，具有SEQ ID NO 6的抗分泌蛋白的部分活性序列CHSKTR(SEQ ID NO 4))局部处理正常眼能降低IOP，而不会引发任何局部或全身性的副作用。

实施例10

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。对麻醉兔静脉内注射AF-16(剂量水平为每千克体重50或100或1000微克，溶解在PBS中，添加有10％乙醇)，导致任一眼的IOP在1小时后降低2-3毫米汞柱(相较于注射AF-16之前测得的IOP)。用AF-16处理之后，IOP的降低持续了至少2个小时。这些兔子的左眼和右眼的IOP之间没有明显区别。第二天对任一眼再次测量IOP，测得的值回到接近于前一天进行AF-16处理之前的值的水平。没有观察到明显的副作用。得出以下结论：经过验证，以每千克体重50、100或(更有效的)1000微克的剂量静脉内注射AF-16导致1个小时后IOP降低，并且持续几个小时，一天时间后IOP回到先前水平。经过处理的兔子的两只眼睛都显示了相同的AF降低IOP的动态效果。结论是：静脉内(即全身性地)给予肽AF-16能够以可接受的程度有效降低IOP，而不至于引起异常的低IOP。

实施例11

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。对三只麻醉兔鼻内沉积AF-16(剂量水平为每千克体重50或100或1000微克，溶解在PBS中)，导致任一眼的IOP在1小时后降低至少2毫米汞柱(相较于在鼻孔中沉积AF-16之前测得的IOP)。用高剂量AF-16处理之后，IOP的降低持续了2和3个小时(进行研究的期间)。同一兔子的左眼和右眼的IOP之间没有明显区别。第二天对任一眼再次测量IOP，证明测得的值回到接近于前一天进行AF-16处理之前的值的水平。没有观察到明显的副作用。得出以下结论：经过验证，以每千克体重高达1000微克的剂量鼻内注射AF-16导致1个小时后IOP降低，并且持续至少3个小时，一天时间后IOP回到先前水平。每只兔子的每只眼睛都显示了相同的眼内压动态效果。没有观察到局部或全身性的副作用。

实施例12

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。从而了解IOP的昼夜动态。在一般麻醉的兔的胃中沉积10克富含AF-蛋白的冻干蛋黄(Salovum^TM，溶解在稀释的市售橘汁中)。这样胃内沉积AF蛋白导致任一眼的IOP在1小时后发生降低(相较于沉积Salovum^TM之前测得的IOP)。兔子的左眼和右眼的IOP之间没有区别。第二天对任一眼再次测量IOP，测得的值回到接近于前一天进行AF-16处理之前的值的水平。没有明显观察到可能存在的副作用。得出以下结论：经过验证，口服摄入富含抗分泌蛋白的蛋黄(例如Salovum^TM)导致约1个小时后IOP降低，并且持续几个小时，一天时间后IOP回到先前水平。两只眼睛都显示了相同的IOP动态效果。

实施例13

麻醉一只单侧轻微牛眼病(左眼球肿大)的年轻成年NZW兔，借助TonoPen

眼压计测量IOP。重复测得，患有牛眼病的眼的IOP为30-32毫米汞柱，而正常对照眼为11-12毫米汞柱。在麻醉兔的Tenon囊下部临时性地单侧注射50微克AF-16(在100微升PBS中，含有10％乙醇)，导致IOP在1小时内降低14-16毫米汞柱。向对照眼注射相同量AF-16导致仅降低约2毫米汞柱(用TonoPen

测得)。左侧患有牛眼病的眼的IOP在第二天增加到略高于30毫米汞柱，即回到其初始水平。再次注射AF-16导致2小时后IOP再次降至15-16毫米汞柱，而相同剂量的AF-16仅使右眼IOP降低1-2毫米汞柱。没有观察到负面反应。因此得出以下结论：在患有牛眼病的眼中通过在眼球处注射进行局部沉积能够瞬时降低高眼内压值至正常水平。

实施例14

通过从9AM至9PM期间暴露于黑暗中、从9PM至9AM期间进行光照，对年轻成年NZW兔的昼夜节律进行调节。使IOP的动态与IOP的昼夜变化同步。如科学医疗国际期刊的近期出版物中所述(Krave U，Hojer S & HanssonH.A.，European J Neuroscience，21，2867-2882，2005)，目前的研究已经揭示，使这些兔子接触弧矢光旋转加速脉冲会伤害眼睛还会导致弥漫性脑损伤。使麻醉兔的头部接触强度高达200krad/s²的、从眼前房到眼后房或从眼后房到眼前房的弧矢光旋转加速脉冲导致对眼睛施加机械变形和作用力负荷。在以后的30分钟期间，麻醉兔的IOP增大至35-40毫米汞柱(用TonoPen

眼压计测得)并保持该升高水平长达几个小时。在Tenon囊和眼颞区巩膜之间通过注射AF-16溶液(100微升PBS，含有10％乙醇)以每千克体重100微克的剂量沉积AF-16，在进行弧矢光旋转加速冲击10-30分钟之后，1个小时之内，IOP大致回到正常水平。对照眼(没有接受任何AF-16处理)的IOP保持升高的水平。

使兔子接触这种弧矢光旋转加速脉冲导致例如神经细胞和血管细胞发生广泛的细胞骨架变化(Hamberger等，2003)。以前使猪脑接触高能负荷的试验也证明了相同的情况(Suneson等，1990)。因此得出以下结论：旋转加速伤害引起小梁网和Schlemm管中细胞的膜和细胞骨架发生变化，导致对来自眼前房的AH的外流产生瞬时削弱影响，使IOP瞬时升高。用肽AF-16进行局部处理似乎能改善这种升高的IOP。

实施例15

单侧切除鼠的4条巩膜上静脉中的3条。这样，来自手术眼前房部分的静脉血只能通过一条静脉流出。这种处理会在几周内导致手术眼的IOP升高。用AF-16的PBS溶液对IOP升高的眼进行局部处理和/或全身性处理，确定这种用AF-16进行的处理是否能使IOP正常化。由这些结果可以计算AH形成速率以及外流性质，从而可以使AF-16的作用位置定位于AH流过眼睛的路径中。

实施例16

在其他鼠的颞区巩膜上静脉中注射高渗盐水，瞬时切断其他3条巩膜上静脉中的血流。这种处理会在几周内导致经过处理的眼的IOP升高，依据Morrison等人在文献中已经描述了的情况。用AF-16的PBS溶液对IOP升高的眼进行局部和/或全身性处理，以确定这种用AF-16进行的处理是否使IOP正常化。由这些结果可以计算AH的形成速率和外流性质，从而可以使AF-16的作用位置定位于AH流过眼睛的路径中。

实施例17

培养一些高眼压发病率较高的啮齿类动物，其中一些是转基因的。评价局部和/或全身性施用AF-16对IOP的效果。由这些结果可以计算AH的形成速率和外流性质，从而可以使AF-16的作用位置定位于AH流过眼睛的路径中。通过使用这些动物进行的试验建立评价以治疗高眼压为目的的药物的标准方法。

总结和结论

所述实验以不同程度揭示：用抗分泌因子进行处理可以使哺乳动物眼睛的升高的眼内压降低并且甚至正常化。这显示了包含抗分泌因子、蛋白、肽、同系物和片段的实用药物在控制高眼压病人的升高的IOP的医疗实践中的应用。通过实验揭示：抗分泌因子AF-16能有效地使IOP升高的眼的眼压正常化。AF-16的主要效果通过其促进房水外流的能力而产生。因此得出以下结论：已经揭示AF-16能够通过促进AH流过小梁网和Schlemm管中的细胞而使高眼压降低并正常化。

参考文献

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