KR20090040404A

KR20090040404A - 고안압증 치료를 위한 항분비 인자의 용도

Info

Publication number: KR20090040404A
Application number: KR1020087029053A
Authority: KR
Inventors: 한스-아르네 한슨; 스테판 랑게; 에바 제니쉐
Original assignee: 란트만넨 아스-팍토르 아베
Priority date: 2006-04-27
Filing date: 2007-04-27
Publication date: 2009-04-24
Also published as: DK2015767T3; WO2007126364A8; ES2773945T3; JP2012153695A; PL2468292T3; RU2458703C2; BRPI0710959A2; NZ598426A; CA2771087C; WO2007126364A3; US9000125B2; DK2468292T3; US20090162296A1; US20120283191A1; IL194773A; ZA200809115B; ES2561945T3; CN102633863B; PL2015767T3; NZ572255A

Abstract

본 발명은 고안압증의 치료 및/또는 예방용 약학 조성물의 제조를 위한, 항분비 인자, 예컨대 항분비 단백질, 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편의 용도에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 바람직하게는 안압 상승을 초래하는 방해된 체액 유출을 특징으로 하는 고안압증의 치료 및/또는 예방에서의 항분비 인자를 포함하는 약학 조성물의 용도에 대한 것이다. 본 발명은 안압을 허용가능한 수준, 21 mmHg 이하로 변화시키는 단계를 포함하는, 그러한 증상을 치료 및/또는 예방하기 위한 신규한 방법을 제공한다.

항분비 단백질, 항분비 인자, 고안압증, 항분비 활성

Description

고안압증 치료를 위한 항분비 인자의 용도{USE OF ANTISECRETORY FACTORS FOR TREATING INTRAOCULAR HYPERTENSION}

본 발명은 바람직하게는 안압 상승을 초래하는 체액의 방해된 유출을 특징으로 하는 고안압증의 치료 및/또는 예방에서의 항분비 인자를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 안압을 허용가능한 수준, 21 mmHg 이하로 변화시키는 단계를 포함하는, 이러한 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 신규한 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 항분비 인자를 포함하는 약학 조성물의 투여에 의한 고안압증의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.

상승된 안압 수치는 눈에서 체액의 생성 증가 또는 체액 유출의 방해에 의해 야기되거나, 대안으로 이들의 조합에 의해 나타난다. 포유류 눈에서의 안압(intraocular pressure, IOP)은 여러 동물종에 있어서 유사하여 11-21 mmHg 정도, 예컨대 10-20 mmHg, 특히 12-18 mmHg이다. 인간에 있어서, 통상적인 안압 범위는 대략 1-21 mmHg이다. 장시간 동안 20 mmHg를 초과하는 경우, 예컨대 21 mmHg, 특히 21-24 mmHg, 또는 22-30 mmHg인 경우에는 안압이 상승된 것으로 간주된다. IOP 수치는, 혈액으로부터 유래하며 모양체 돌기를 통해 눈의 후방으로 전달되는 안방수(aqueous humour, AH)라는 체액의 생성에 의해 조절된다. AH는 후방의 초자 체와 수정체를 통과한 후 동공을 통해 전방으로 전달된다. 거기에서, 대부분의 AH는 결국 홍채각막각으로 흐르고 쉴렘관(Schlemm's canal), 방수정맥(aqueous vein)과 공막(scleral) 및 상공막 정맥(episcleral vein)을 매개로 하여 섬유주(trabecular meshwork)를 통해 눈에서 유출된다. AH와, 예컨대 후방의 수정체와 전방의 각막 사이에 체액 및 대사물질의 교환이 이루어진다. 소량의 AH는 포도막-공막 사이의 배출 경로(uveoscleral route), 즉 홍채, 모양체근 및 공막으로 흘러들어가 결국에는 국소적으로 생성된 조직액과 혼합되어 눈으로부터 유출된다(Jerndal, Hansson & Bill, 1990; Oyster, 1999). IOP는 대개 유출에 의해 모니터링되는 반면, 성인에 있어서 AH의 생성은 그 변화가 덜하다. IOP의 주된 조절자는 섬유주의 내피, 세관연접 내피망(juxtacanalicular endothelial meshwork) 및 쉴렘관의 내벽 내피이다(Luetjen-Drecoll 1998; Sacca et al 2005). 후자는 전방으로부터 혈관계로의 흐름을 교정하고 모니터링하는데 있어 특히 중요하다. 내피 세포에서는, 카베올라(caveolae)라고 명명된 함입부(invaginations)가 형성되어 AH로 채워진 후, 주로 거대 액포로서 내피 세포를 통해 이동하여 결국에는 그 안에 내용물을 비워 쉴렘관으로 밀어넣게 된다. 증가된 IOP는 다수의 이러한 거대 액포의 형성을 유도하고 IOP가 감소되는 경우에는 그 반대이다(Jerndal, Hansson & Bill, 1990; Luetjen-Drecoll 1998). 또한, 이러한 세포들은 자신들의 체적을 모니터링하여 AH의 세포간 누수를 추가로 방지하는 능력을 지닌 것으로 보인다(Starner et al., 2001). 도 1a는 인간의 눈을 개략적으로 나타낸 것이고, 도 1b는 성인의 눈의 홍채각막각을 주사 전자 현미경으로 관찰한 것이다.

고안압증이라는 용어는 20 mmHg를 초과하는 IOP, 예컨대 21-24 mmHg, 특히 22-30 mmHg의 IOP를 갖는 만성 질환에 대한 진단으로서 의료분야에서 사용되는 용어이다. 고안압증이 있는 환자들은 시야결손과 같은 후유증의 임의 징후 또는 각막 및 시신경 이상의 기타 징후을 나타내지 않는 질환을 앓을 수 있다. IOP의 급격한 상승은 예를 들어 기침, 과로, 안구의 외상과 발살바법(Valsalva's manoeuvre) 후에 일시적으로 나타날 수 있다. 통상 IOP의 일중 변동(diurnal variation)이 존재하여, 인간에 있어서는 오전에 최대가 된다. 성인에 있어서는, 분당 약 2-3 ㎕의 AH가 생성되어, 눈에서 AH는 약 1 ½시간마다 갱생되는 결과를 유도한다. 이러한 사실은 IOP를 통상의 범위 내로 유지하기 위해서는 협소한 제한 범위 내에서 생성과 유출이 모니터링되어야 한다는 것을 의미한다. IOP는 너무 높거나 너무 낮아서도 안된다. AH의 주된 기능은 예를 들어 수정체와 각막에 영양분, 산소, 이온 및 체액을 공급하고, 대사물질과 잔해물을 유출시키는 것이다. 또한, IOP와 AH는 서로 상호작용하여 눈의 광학 특성 및 형상을 유지시킨다. AH의 생성은 여러 방법들에 의해 나타낼 수 있는데, 예컨대 AH의 턴오버(turnover)과 그 유출을 측정함으로써 나타낼 수 있다. 안압은 예를 들어 안압측정법으로 정확하게 측정될 수 있다.

비정상적인 IOP의 존재는 일부 녹내장 환자들에 있어서 설명 가능하다. 모든 녹내장 환자들이 고안압증의 징후를 나타내는 것은 아니다. 따라서 고안압증이라는 용어가 녹내장이라는 의학적 진단과 혼동되어서는 안된다. 고안압증에 비해, 녹내장은 각막 신경 세포의 점진적인 손상과 시신경의 퇴화로 인해 시간이 지남에 따라 시력이 저하되고 결국에는 실명에 이르게 되는 것을 특징으로 하는 질환으로 정의 된다. 폭 넓은 다양한 증상들이 녹내장이라는 용어에 포함되며, 이러한 증상들은 모두 결국에는 시력의 저하를 초래하게 된다는 것을 공통점으로 가진다(Ritch et al., 1996). 따라서, 녹내장 진단은 시력 상실에 관계되는 것이지 비정상적인 IOP의 존재에 대한 것은 아니다.

IOP는 눈의 전방으로부터 홍채각막각을 통해 정맥을 거쳐 쉴렘관으로 AH가 유출됨으로써 주로 조절된다. 눈으로부터 AH의 유출이 방해되거나 봉쇄되면, IOP가 상승될 것이다. 보통 10-20 mmHg 범위의 IOP, 예컨대 12-18 mmHg의 IOP를 초래하게 되는 유출에 대한 저항은 주로 섬유주 및 쉴렘관의 내피 내막에 집중된다. 섬유주와 쉴렘관의 내피 세포들은 AH 유출의 조절에 있어서 상호작용한다(Alvarado et al., 2005; Jerndal et al., 1991). 한편으로는 안구 전방과, 다른 한편으로는 공막 및 상공막 정맥을 포함하는 쉴렘관과의 직접적인 소통관계는 없다. 고안압증이 있는 개체에서 섬유주는 어느 정도의 퇴화, 신경초 유래의 플라크 물질의 축적(sheath-derived plaque material) 및 AH 유출에 대한 저항의 증가를 그 특징으로 한다(Rohen et al, 1993). 또한, 특정 경우에 있어서, 색소 및 박리된 물질 뿐만 아니라 혈구 세포와 혈전의 축적이 더해질 수 있어서, 유출이 추가로 제한되어 IOP를 상승시키게 된다. AH의 분비과다, 즉 과량 생성은 고안압증의 보기 드문 유일한 원인이다. 따라서, 고안압증을 모니터링하기 위해서는, AH 턴오버의 향상된 지속적인 제어, 특히 홍채각막각을 통한 AH 유출의 제어가 IOP를 낮추고 정상화하는 데 있어서 매우 중요하다.

임상 실시에서 고안압증 치료에 이용가능한 치료법은 바람직하게는 AH의 유 출을 증가시키는데 초점을 맞추고 있으나, 일부 약물, 예를 들어 도르졸라미드(dorzolamide)와 브린졸라미드(brinzolamide)는 AH 생성을 감소시킨다. 일부 현재 사용되는 약물은 생성과 유출 경로 모두에게 영향을 준다. AH가 예를 들어 수정체와 각막에 영양분, 체액 및 산소를 제공하고, 형성된 광범위한 생성물들을 처리하기 때문에, AH의 조성과 턴오버가 중요하다는 것이 강조될 필요가 있다. 부작용은 현재 사용되고 있는 약물에 있어서 우세하여 흔히 적절한 치료를 방해한다. 또한, 시판되는 약물로는 적절히 치료하기가 어려운 고안압증이 있는 환자들이 있다. 따라서, IOP를 통상의 수준으로 낮추기 위한 치료법에 대한 필요성이 대두되고 있다.

항분비 단백질(antisecretory protein)이란 41 kDa의 단백질로서, 원래 설사병과 장염에 대한 보호를 제공하기 위해 기술된 것이다[참고를 위해, 문헌{Lange 및 Loennroth, 2001} 참조]. 항분비 단백질은 시퀀싱되었고 그의 cDNA도 클로닝되었다. 항분비 활성은 항분비 단백질 아미노산 서열 중에서 1-163 사이에, 또는 보다 구체적으로는, 35-50 사이에 위치한 펩타이드에 의해 주로 발생되는 것으로 보인다. 면역화학적 및 면역조직화학적 연구개발에 의하면, 항분비 단백질은 존재하며, 이것은 또한 체내 대부분의 조직과 기관에서 합성될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 항설사 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 합성 펩타이드가 기술되어 있다(WO 97/08202; WO 05/030246). 항분비 인자는 예컨대 콜레라 독소로 항원 투여한 후, 장 및 중추 신경계의 맥락막총에서와 같은 병리학적 체액 수송 및/또는 염증성 반응을 표준화하기 위해 이미 개시되었다(WO 97/08202). 따라서, WO 97/08202에서는 식료품 및 사료에 항분비 인자를 첨가하면 부종, 설사, 탈수 및 염증의 치료에 있어 유용하다는 점이 시사되어 있다. WO 98/21978은 항분비 단백질의 생성을 유도하는 식료품의 제조를 위해 효소 활성을 갖는 제품을 사용하는 것을 개시하고 있다. WO 00/038535는 그 자체로 항분비 단백질이 풍부한 식료품을 추가로 개시하고 있다.

또한 항분비 단백질 및 이의 단편은, 세포의 손상 및/또는 획득과 관련된 질환의 치료에 있어서, 신경 조직의 복구, 그리고 줄기 세포 및 전구 세포와 이로부터 유도된 세포의 증식, 아폽토시스, 분화, 및/또는 이동을 개선시켜 주는 것으로 밝혀졌다(WO 05/030246).

본 발명자들은 놀랍게도 항분비 인자 단백질, 이의 유도된 동족체 및 펩타이드 단편이 눈의 홍채각막각을 통한 정맥계 혈관으로의 AH 유출에 대한 저항을 감소시킨다는 사실을 밝혀냈다. 이는 항분비 인자 단백질, 이의 동족체 및 펩타이드 단편에 대한 새로운 치료적 용도, 즉 고안압증의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에서의 이러한 단백질 및 단편의 용도를 제공한다.

발명의 개요

본 발명은 고안압증의 치료 및/또는 예방에 있어서 항분비 인자를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 항분비 인자, 즉 항분비 단백질, 및 항분비 활성을 갖는 이의 펩타이드, 유도체, 동족체 및 단편이 눈의 체액 유출을 증가시켜 안압을 감소시킨다는 발견을 토대로 한다.

제1 양태에서, 본 발명은 고안압증의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물의 제조를 위한, 항분비 단백질, 또는 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 또는 단편, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다.

제2 양태에서, 본 발명은 포유동물에 있어서 고안압증의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 항분비 단백질, 또는 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 또는 단편, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물의 유효량을 고안압증의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다.

도면의 간단한 설명

도 1a는 인간의 눈을 개략적으로 나타낸 것이다(1-1). 섬유주(T)에 의해 전방(AC)으로부터 분리된 슈반관(Schwann's canal, Sch)을 보다 확대하여 나타낸다(1-2). 각 섬유주(Tr)가 내피 세포(EC)에 의해 둘러싸여 있음도 보인다(1-3). 안방수는 도 1-1의 프레임 영역의 우측에 보이는 모양체 돌기에서 생성된다. L = 수정체; C = 각막; I = 홍채; S = 공막; 문헌[R.V. Krstic, 1991]에서 발췌하여 수정됨.

도 1b는 안구후(retrobulbar) 종양으로 인해 적출된 55세 남자 눈의 홍채각막각의 주사 전자 현미경 사진이다. U로 표시된 섬유주가 꽤 밀집된 조직에 의해 쉴렘관으로부터 분리되어있는 것으로 나타난다. C = 각막; Sp = 공막 돌기; I = 홍채; Cp = 모양체 돌기; S = 슈발베 선(line of Schwalbe). 공기는 우측 상부에 있다. 문헌[Jerndal et al., 1991]에서 발췌됨.

도 2는 실시예 7에 따라, AF-16(역삼각형), 약물인 티몰롤®(삼각형) 및 PBS 비히클(사각형)로 각각 토끼의 눈을 국소적으로 처리했을 때의 안압을 나타낸 것이다.

도 3은 실시예 7에 따라, AF-16(역삼각형), 약물인 티몰롤®(삼각형) 및 PBS 비히클(사각형)로 각각 토끼의 눈을 국소적으로 처리한 후 5일 뒤의 안압을 나타낸 것이다.

도 4는 본 발명의 서열번호 6에 따른 항분비 단백질의 아미노산 서열을 나타낸 것이다. 이 서열번호는 US 6344440의 서열번호 2에 상응한다.

용어의 정의

본 출원에서, 전방(anterior [eye] chamber)은 홍채각막각에서 연결되는, 홍채의 전방 표면과 각막의 내피 표면과의 사이의 공간으로 정의된다.

후방(posterior [eye] chamber)은 초자체의 전방 표면과 수정체 그리고 홍채의 후방 표면 사이의 공간으로 정의된다. 후방과 전방은 동공을 통해 연결된다.

본원에서, 항분비 단백질은 WO 97/08202와 WO 00/38535에 이미 정의된 바와 같이 항분비 특성을 갖는 단백질을 지칭한다.

본원에서, 항분비 인자(AF)는 항분비 단백질, 또는 항분비 활성을 갖는 이의 펩타이드, 유도체, 동족체 및 단편을 지칭한다. 본원에서, 이러한 펩타이드, 유도체, 동족체 및 단편은 고안압증의 치료 및/또는 예방에 있어서 유사한 생물학적 활성을 지닌다. 항분비 인자는 예를 들어 WO 97/08202와 WO 05/030246에 이미 개시되어 있다. 본원에서, 항분비 인자, 항분비 인자 단백질, 항분비 단백질, 항분비 펩타이드, 항분비 유도체 및 항분비 단편이라는 용어는 상호 교환하여 사용된다. 또한, 하기에 추가로 기술되는 바와 같은 SE 900028-2 및 WO 00/38535에 개시된 항분비 인자가 풍부한 난황도 항분비 인자로서 포함된다.

안방수인 AH는, 모양체 돌기에서 혈액으로부터 생성된 수액을 의미하며, 이는 후방과 동공을 통해 흘러서 전방으로 들어간 후, 주로 섬유주와 쉴렘관을 통해 전방을 떠나 결국에는 정맥 혈관계에 다다른다.

CNS는 대뇌와 척수를 포함하는 중추 신경계이다.

부종은 세포, 조직 또는 장막강 내에 초과량의 수액이 축적된 것을 의미한다 [예를 들어, 문헌{Stedman's Medical Dictionary, 5th ed., Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, 2005}을 참조할 수 있다].

녹내장은 각막과 시신경에 점진적인 손상으로 시야가 결손되거나 좁아져 결국에는 실명에 이르는 것을 특징으로 하는 일군의 질환을 의미한다.

안압 (IOP)은 안구 내의 안방수에 의해 발생되는 압력이다.

고안압증은 깨어있는 개체에 있어서 안구 내의 압력이 20mmHg를 초과하는 경우, 예컨대 21mmHg, 특히 22-30 mmHg인 경우의 증상이다. 따라서, 본원에서, 고안압증이라는 단어는 비정상적인 안압과 상호 교환되어 사용된다.

저안압증이란 깨어있는 개체에 있어서 안구 내의 압력이 11 mmHg 이하, 예컨대 10 mmHg인 경우를 의미한다.

홍채각막각은 홍채와 각막의 후부 사이의 전방 내의 연접을 의미한다.

PBS는 인산염 완충된 식염수(phosphate buffered saline)이다.

본원에서, "치료" 또는 "처치"는 고안압증의 질환을 치료 또는 완화시키기 위한 치료적 처치에 대한 것이다. 또한, 본 발명에서 고안압증의 "예방"은 고안압증의 발병을 피하기 위한 예방학적 치료에 관한 것이다.

섬유주는 전방과 쉴렘관 사이의 홍채각막각에 위치한, 내피 세포들에 의해 정렬된 콜라겐성 결합 조직의 소주 및 시트의 그물세공을 의미한다.

쉴렘관은 눈 가장자리의 내부 공막 홈 외부의 원형 정맥 채널을 의미하며, 이는 눈의 안방수 정맥을 통해 눈의 정맥 유출계로 연결되어 있다. 쉴렘관은 안구의 전방으로부터 안방수를 유출하는 주된 시스템이다.

단백질은 펩타이드 결합에 의해 함께 결합된 아미노산 잔기들로 구성되는 생물학적 거대분자이다. 아미노산들의 선형 중합체인 단백질은 폴리펩타이드로도 불린다. 통상, 단백질은 50-800개의 아미노산 잔기들을 가지기 때문에, 약 6,000 내지 약 수십만 달톤 범위 이상의 분자량을 갖게 된다. 작은 단백질들은 펩타이드 또는 올리고펩타이드로 불린다. "단백질"과 "펩타이드"라는 용어는 본원에서 상호 교환되어 사용될 수 있다.

본원에서 "약학 조성물"은 치료적 유효량의 항분비 단백질, 선택적으로는 약학적 활성 부형제, 예컨대 담체 또는 비히클을 포함하는 조성물을 지칭한다. 상기 약학 조성물은 적절한 투여 경로를 위해 제형화되는데, 이는 환자의 질환 및 기타 인자들, 예컨대 나이 또는 바람직한 선택에 따라 다를 수 있다. 항분비 단백질을 포함하는 약학 조성물은 약물 전달 시스템으로서 기능한다. 상기 약학 조성물은 투여시 인간 또는 동물의 체내에 활성 물질을 제공하게 된다. 본 발명을 위해 적절한 약학 조성물은 하기에 추가로 기술된다.

본 발명은 항분비 인자(AF), 예컨대 항분비 단백질 및 이의 동족체, 유도체 및 단편이 눈의 홍채각막각을 통한 안방수의 정맥계로의 유출에 대한 저항을 감소시켜, 눈에서 비이상적으로 축적된 체액의 유출을 증가시킨다는 놀라운 발견을 토대로 한다. 이로써 안방수 유출이 증가되어, 눈의 안압이 감소되는 결과를 가져오게 되는 것이다. 이는 항분비 단백질과 이의 단편에 있어서 새로운 치료적 용도, 즉 고안압증의 치료 및/또는 예방용 약학 조성물의 제조에 있어서 이러한 단백질과 단편의 용도를 제공한다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 고안압증으로 고생하거나 이러한 증상을 나타낼 위험이 있는 환자들에게 있어 가장 유용할 것이다.

상기 기술된 바와 같이, 안방수의 유출은 주로 홍채각막각을 통해 일어나며 섬유주를 형성하는 세포들에 의해 조절된다. 대부분의 안방수는 쉴렘관을 통해 눈의 외부로 이송된다. 안방수는 작은 비히클에 갇힌 채로 섬유주의 세포를 통해 쉴렘관으로 이송될 뿐만 아니라, 세포간 수송도 어느 정도는 이루어진다. 추가적으로 소수의 경우이지만, AH는 홍채의 각 구조 및 공막을 통해 눈으로부터 나오기도 한다. 안방수의 눈으로부터의 유출은, "소량"의 액체가 한번에 이동되는 것으로, 예를 들어 장의 내피 세포의 이온 및 물 펌프가 한번에 한 분자를 이동시키는 것과 같이, 장에서의 이온 및 물의 수송과는 근본적으로 다르다. 따라서, 항분비 인자가 부종, 설사, 탈수 및 염증과 같은 질환의 치료 용도로서 이미 제안되었지만(WO 97/08202), 이러한 질환들의 치료에 있어서 항분비 인자의 작용 기작은, 눈의 홍채각막각을 통한 정맥계로의 안방수의 유출에 대한 저항이 항분비 인자에 의해 감소된다는 본 발명에 따른 작용 기작과는 다르다. 그러나, 주지해야 할 것은, 이후 단계에서 고안압증이 녹내장을 초래할 수도 있거나 그렇지 않을 수도 있다는 데 있다.

따라서, 제1 양태에서, 본 발명은 고안압증의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물의 제조를 위한, 항분비 단백질 및/또는 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 또는 단편, 즉, 항분비 인자 및/또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다.

항분비 인자는 체내에서 자연적으로 발생되는 단백질이다. 인간의 항분비 인자는 뇌하수체로부터 단리된 경우 382개의 아미노산을 포함하는 41 kDa의 단백질이다. 본 발명에 따른 안압 감소 효과와 관련된 활성 부위는 서열번호 6의 1-163 아미노산으로 한정된, 단백질의 N-말단에 근접한 영역에 집중되어 있거나, 또는 이 영역의 단편으로 제한된다.

본 발명자들은 항분비 인자가 모든 척추동물 세포들, 26 S 프로테아좀, 보다 구체적으로는 19 S/PA 700 cap에서 우세한 성분의 서브유닛을 구성하고 있는, Rpn 10으로도 명명된 단백질 S5a와 어느 정도 상동성이 있음을 밝혀냈다. 본 발명에서, 항분비 단백질은 동일한 기능 특성을 갖는 동족체 단백질의 부류로서 정의된다. 프로테아좀은 잉여 단백질 뿐만 아니라 단수명의 단백질, 불필요한 단백질, 변성 단백질, 제대로 접히지 못한 단백질 및 그 밖의 기타 비정상적인 단백질의 분해와 관련된 다수의 기능을 지닌다. 또한, 항분비 인자/S5a/Rpn10은 흔히 시판되는 교재에 추가로 기술되는 바와 같은, 세포 성분, 가장 명확하게는 단백질의 세포 분배 및 수송에 관련된다.

본 발명에 따른 항분비 단백질 및/또는 펩타이드의 동족체, 유도체 및 단편은 모두 안압을 감소시킬 수 있는 유사한 생물학적 활성을 지니고 있다. 본원에서, 항분비 동족체, 유도체 및 단편은 자연 발생적인 항분비 단백질의 아미노산을 4개 이상 포함하며, 이는 고안압증의 치료 및/또는 예방에 있어서 항분비 인자의 생물학적 활성을 최적화시키기 위해 하나 이상의 아미노산을 변화시켜 추가로 변성시킬 수 있다.

항분비 단백질의 단편은 일반적으로 제제 내의 단백질 중 90% 이상, 예를 들어 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%가 본 발명에 따른 단백질, 펩타이드 및/또는 단편인 것인, 상기 제제 내에 펩타이드/아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함할 것이다.

또한, 본 발명의 항분비 단백질, 펩타이드, 동족체, 유도체 및/또는 단편의 아미노산 서열과 70% 이상, 예컨대 72%, 75%, 77%, 80%, 82%, 85%, 87%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상이 동일한 임의의 아미노산 서열도 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본원에서, 상동성 및 동일성은 상호 교환되어 사용된다. 즉, 다른 아미노산 서열과 동일한 특정 부분을 지닌 아미노산 서열은 특정된 아미노산 서열에 동일한 정도의 상동성을 지닌다.

본원에서 유도체라는 것은, 본원에서 정의된 바와 같은 항분비 활성을 갖는 단백질을 의미하며, 이는 다른 물질로부터 직접적으로 또는 변성이나 부분 치환에 의해 유도되며, 여기서 하나 이상의 아미노산은 다른 아미노산으로 치환되고, 상기 아미노산은 변성될 수 있거나 비자연적 아미노산일 수 있다. 이러한 변성 및/또는 비자연적 아미노산은 당업자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 항분비 인자 유도체는 N 말단 및/또는 C 말단 보호기를 포함할 수 있다. N 말단 보호기의 한 예로서 아세틸을 포함한다. C 말단 보호기의 한 예로서는 아미드를 포함한다.

기준 아미노산 서열과 예를 들어 95% 이상이 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질, 이의 동족체, 유도체, 펩타이드 및/또는 단편이라는 것은, 예를 들어 펩타이드의 아미노산 서열이 기준 아미노산 서열 중 각 100개의 아미노산 당 5개까지 점 돌연변이를 포함할 수 있는 것을 제외하고는 기준 서열과 동일하다는 것을 의미한다. 다시 말하면, 기준 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 수득하기 위해서는, 기준 서열의 5% 이하의 아미노산이 결실되거나 다른 아미노산으로 치환될 수 있거나, 또는 기준 서열의 총 아미노산 중 5% 이하의 아미노산 수가 기준 서열 내로 삽입될 수 있다는 것이다.

기준 서열의 이러한 돌연변이는 기준 아미노산 서열의 아미노 또는 카복시 말단 위치에서 발생할 수 있거나, 기준 서열의 아미노산들 사이에 개별적으로 또는 기준 서열 내의 하나 이상의 인접하는 기들에 산재된, 이러한 말단 위치들 사이의 임의의 지점에서 발생할 수 있다.

본 발명에서, 로컬 알고리즘 프로그램이 동일성을 결정하는데 있어서 매우 적합하다. 로컬 알고리즘 프로그램(예컨대, Smith-Waterman)은 한 서열의 하위 서열과 제2 서열의 하위 서열을 비교하여, 전체적인 유사도가 가장 높게 산출되는 하위 서열들의 조합 및 이러한 하위 서열들의 배열을 찾아낸다. 내부 갭(internal gap)이 있다면 패널티를 받게 된다. 로컬 알고리즘은 공히 하나의 도메인을 지니거나 단지 하나의 결합 부위를 갖는, 두 다중 도메인 단백질을 비교하는 데 있어서 매우 적합하다.

동일성과 유사성을 측정하는 방법은 공개 시판되는 프로그램에 체계적으로 정리되어 있다. 두 서열간의 동일성과 유사성을 측정하는 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법으로서는, 이에 제한되지는 않지만, GCG 프로그램 패키지(Devereux, J et al (1994)) BLASTP, BLASTN 및 FASTA (Altschul, S.F. et al (1990))를 포함한다. BLASTX 프로그램은 NCBI 및 다른 공급원(BLAST Manual, Altschul, S.F. et al, Altschul, S.F. et al (1990))들로부터 공개 시판된다. 각각의 서열 분석 프로그램은 디폴트값의 스코어링 행렬(scoring matrix)과 갭 패널티(gap penalty)를 가지고 있다. 일반적으로, 분자생물학자는 선택된 소프트웨어 프로그램에 의해 설정된 디폴트값의 세팅을 사용할 것이다.

본 발명에 따른 항분비 단백질 또는 항분비 활성의 갖는 이의 펩타이드 또는 동족체, 유도체 또는 단편은 4개 이상의 아미노산, 예컨대 5-16개의 아미노산, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 다른 바람직한 실시 양태에서, 항분비 인자는 42, 43, 45, 46, 51, 80, 128, 129 또는 163개의 아미노산으로 이루어진다. 바람직한 실시 양태에서, 항분비 인자는 5, 6, 7, 8 또는 16개의 아미노산으로 이루어진다.

다른 바람직한 실시 양태에서, 본 발명에 따른 항분비 단백질, 항분비 활성을 갖는 이의 펩타이드 및/또는 동족체, 유도체 또는 단편은 하기 식에 따른 서열로 이루어진다:

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

상기 식 중에서, X1은 I이거나, 서열번호 6의 아미노산 1-35이거나 존재하지 않으며, X2는 H, R 또는 K이고, X3은 S 또는 L이며, X4는 T 또는 A이고, X5는 서열번호 6의 아미노산 43-46, 43-51, 43-80 또는 43-163이거나 존재하지 않는다.

본 발명에 따른 항분비 인자는 예를 들어 재조합, 화학 합성 및/또는 예컨대 돼지 뇌하수체 또는 새알과 같은 항분비 인자의 자연 발생적 원천으로부터 단리시키는 것과 같이, 생체 내 또는 시험관 내에서 제조될 수 있다. 제조 후, 항분비 인자는 화학적 또는 효소적 분해에 의해 더 작은 항분비 활성 단편으로 만들거나, 아미노산의 변성에 의해 추가로 가공될 수 있다. 현재는 정제에 의해 순수한 형태의 항분비 인자를 수득하는 것이 불가능하다. 그러나, WO 97/08202 및 WO 05/030246에 이미 개시된 바와 같이 재조합으로 생물학적 활성 항분비 인자 단백질을 제조하는 것은 가능하다. WO 05/030246 및 WO 97/08202는 또한 이러한 단백질의 생물학적 활성 단편의 제조도 개시하고 있다.

본 발명에 따른 항분비 인자는 N 말단 및/또는 C 말단 보호기를 더 포함할 수 있다. N 말단 보호기의 한 예로서 아세틸을 포함한다. C 말단 보호기의 한 예로서는 아미드를 포함한다.

"약학적 활성 염"이라는 용어는, 항분비 단백질의 염을 지칭하는 것으로, 소위 호프마이스터 계열(Hofmeister series)에 기초하여, 항분비 단백질로부터 유도되는 임의의 염일 수 있다. 단백질과 펩타이드가 양쪽성이기 때문에, 본 발명의 범위를 제한함이 없이, "약학적으로 허용가능한 염" 이라는 용어는 예를 들어 트리플루오로아세테이트 또는 아세테이트와 같이 저장되는 경우에는, 본 발명에 따른 항분비 인자의 보다 안정한 형태를 지칭한다.

본 발명의 약학 조성물 또는 약제는 당업계에 공지된 하나 이상의 약리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다.

조성물 또는 약제는 예를 들어, 유체, 반유체, 반고체 또는 고체 조성물, 예를 들어 이들로 제한되는 것은 아니지만 용해된 수혈 액체, 예컨대 멸균 식염수, 다양한 염 용액, 글루코스 용액, 인산염 완충된 식염수, 혈액, 혈장 또는 물, 분말, 마이크로캡슐, 미소구체, 나노입자, 스프레이, 에어로졸, 흡입 장치, 용액, 분산액, 현탁액, 에멀젼 및 이들의 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 조성물은 펩타이드 또는 단백질의 안정성과 반응성을 고려할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 통상적인 약학적 실무 절차, 예를 들어 문헌["Remington: The science and practice of pharmacy", 21^th edition. ISBN 0-7817-4673-6] 및 ["Encyclopedia of Pharmaceutical Technology", 2^nd edition, ed. Swarbrick, J. ISBN 0-8247-2800-9]에 따라 제형화될 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 항분비 인자는 서열번호 6에 나타난바와 같은 아미노산을 갖는 항분비 단백질 또는 서열번호 6의 아미노산 38-42를 포함하는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편이다.

본 발명의 바람직한 실시 양태에서, 항분비 인자는 서열번호 1-6, 즉 VCHSKTRSNPENNVGL (서열번호 1, 본원에서는 AF-16이라고도 불림), IVCHSKTR (서열번호 2), VCHSKTR (서열번호 3), CHSKTR (서열번호 4), HSKTR (서열번호 5), 또는 아미노산에 대한 공통적인 하나의 문자 약어를 이용한 서열번호 6에 따른 항분비 단백질의 아미노산 서열 (도 4에도 나타나 있음) 중에서 선택된다. 서열번호 1, 2, 및 3은 예를 들어 WO 05/030246에 이미 개시된 바 있으며, 서열번호 6은 US 6344440에 개시되어 있다. 첨부된 서열 목록에서도 특정된 바와 같이, 상기 특정된 서열 중의 일부 아미노산은 다른 아미노산으로 치환될 수 있다. 본 단락의 하기에서, 특정 아미노산 서열 중의 특정 아미노산의 위치는 좌측으로부터 산정하므로, 최말단인 N-말단 아미노산이 그 특정 서열에 1번 위치에 있게 됨을 알 수 있다. 하기 특정된 바와 같은 임의의 아미노산 치환(들)은 그 서열 중의 임의의 다른 아마노산 치환(들)과는 독립적으로 행해질 수 있다. 서열번호 1에서, 2번 위치의 C는 S로 치환될 수 있고/있거나, 3번 위치의 H는 R 또는 K로 치환될 수 있고/있거나, 4번 위치의 S는 L로 치환될 수 있고/있거나 6번 위치의 T는 A로 치환될 수 있다. 서열번호 2에서, 3번 위치의 C는 S로 치환될 수 있고/있거나, 4번 위치의 H는 R 또는 K로 치환될 수 있고/있거나, 5번 위치의 S는 L로 치환될 수 있고/있거나 7번 위치의 T는 A로 치환될 수 있다. 서열번호 3에서, 2번 위치의 C는 S로 치환될 수 있고/있거나, 3번 위치의 H는 R 또는 K로 치환될 수 있고/있거나, 4번 위치의 S는 L로 치환될 수 있고/있거나 6번 위치의 T는 A로 치환될 수 있다. 서열번호 4에서, 1번 위치의 C는 S로 치환될 수 있고/있거나, 2번 위치의 H는 R 또는 K로 치환될 수 있고/있거나, 3번 위치의 S는 L로 치환될 수 있고/있거나 5번 위치의 T는 A로 치환될 수 있다. 서열번호 5에서, 1번 위치의 H는 R 또는 K로 치환될 수 있고/있거나, 2번 위치의 S는 L로 치환될 수 있고/있거나 4번 위치의 T는 A로 치환될 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 상기 단편은 서열번호 1에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 상기 단편은 서열번호 2에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 상기 단편은 서열번호 3에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 상기 단편은 서열번호 4에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 상기 단편은 서열번호 5에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

또한, 본 발명에 따른 임의의 항분비 인자들을 2 이상 조합하거나, 임의로는 항분비 인자가 풍부한 난황(egg yolk)을 조합하는 것도 본 발명에 포함된다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 항분비 인자는 고안압증의 치료 및/또는 예방용 약학 조성물의 제조를 위해 사용되거나, 또는 고안압증의 치료 및/또는 예방 방법에서 사용되며, 여기서 안압은 21 mmHg 이상, 예컨대 22 mmHg 이상이다. 본 발명의 다른 바람직한 실시 양태에서, 안압은 정상이거나 더 낮은데, 즉 21-24 mmHg 이하, 바람직하게는 10-12 mmHg 이하, 예컨대 11-21 mmHg이다. 11 mmHg 이하의 IOP, 예컨대 10mmHg 이하, 특히 10-12 mmHg 이하의 IOP가 통상의 안압보다 낮아, 낮은 안압으로 본다. 또한, 본 발명에 따른 약학 조성물의 보통의 안압, 또는 보통 이하의 안압을 갖는 포유동물에 대한 투여의 유익한 효과는, 또한 이러한 포유동물이 하루 동안 안압에서 피크를 가질 때, 본 발명에 따른 약학 조성물에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있다는 점이다. 다른 바람직한 실시 양태에서, 안압은 21mmHg 초과, 예컨대 21-24mmHg, 특히 22-30mmHg 이다.

또한, 본 발명은 항분비 인자가 풍부한 난황을 사용한 고안압증의 치료 및/또는 예방 및/또는 약학 조성물의 제조도 포함한다. SE 9000028-2는 항분비 인자의 생성이 새들에 있어서 어떻게 자극될 수 있고, 이후 생성된 항분비 인자들이 난황의 소화로부터 어떻게 회수 또는 농축될 수 있는지를 개시하고 있다. WO 00/38535는 이렇게 회수 또는 농축된 항분비 인자가 식료품 또는 사료, 또는 약학 제품으로 제형화된 다소간 단리된 제품으로서 동물 또는 인간에게 어떠한 식으로 투여될 수 있는가를 추가로 개시하고 있다. 따라서, 본 출원에서는, 고안압증의 치료 및/또는 예방용 약학 조성물과 같은 제품의 제조를 위해, 또는 이러한 치료 방법에서 사용하기 위해, 항분비 인자가 풍부한 난황의 사용도 포함한다. 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질은 상기 난황내 1000 FIL 유닛/ml 이상의 농도로 제공된다. 본원에서, FIL 유닛은 WO 00/38535 및 SE 9000028-2에 개시된 바와 같이, 항분비 인자를 제공하지 않은 대조군과 비교했을 때, 장 내의 체액의 흐름이 50% 감소한 것에 해당된다. 따라서, 본 발명에 따른 항분비 인자(들)은 "의료 식품"의 형태로도 투여될 수 있다. 본원에서, 의료 식품은 항분비 단백질을 갖는 조성물로 제조된 식료품을 지칭한다. 상기 식료품은 액체 또는 분말과 같은 유체 또는 고체 형태의 임의의 적절한 식품, 또는 임의의 기타 적절한 식료품일 수 있다. 이러한 것들의 예는 WO 00/38535에서 찾을 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 실시 양태에서, 치료 및/또는 예방될 고안압증은 눈의 전방으로부터 안방수의 유출에 대한 저항에 의해 야기된다.

다른 바람직한 실시 양태에서, 본 발명에 따라 사용되는 약학 조성물은 섬유주 및 쉴렘관을 통한 전방으로부터의 안방수 유출에 대한 저항을 감소시킨다.

본 발명의 한 실시 양태에서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 본 발명에 따른 사용을 위한 약학적으로 허용가능한 부형제 및 이들의 최적 농도의 선택은 실험에 의해 당업자가 용이하게 결정할 수 있다. 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적으로 허용가능한 부형제는 용매, 완충제, 보존제, 킬레이트제, 산화방지제, 안정화제, 유화제, 현탁제 및/또는 희석제를 포함한다.

약학적으로 허용가능한 부형제는 조성물이 투여되는 개체에게 실질적으로 무해한 물질이다. 이러한 부형제는 보통 각국의 의약 관청에 의해 주어진 요건을 충족시킨다. 미국 약전 및 유럽 약전과 같은 공식 약전에는 널리 공지된 약학적으로 허용가능한 부형제에 대한 허용 기준이 설정되어 있다.

이하에 기재되어 있는 것은 본 발명에 따라 사용되는 관련 약학 조성물의 개관이다. 이러한 개관은 특정 투여 경로를 기초로 하여 이루어진 것이다. 그러나, 약학적으로 허용가능한 부형제가 다양한 투여 형태 또는 조성물에서 사용될 수 있는 경우, 특정한 약학적으로 허용가능한 부형제의 적용은 부형제의 특정 투여 형태 또는 특정 기능으로 제한되지 않는다.

비경구용 조성물:

전신 적용을 위해, 본 발명에 따른 조성물은 미소구체 및 리포좀을 포함하는 통상적인 비독성의 약학적으로 허용가능한 담체 및 부형제를 함유할 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 조성물은 모든 종류의 고체, 반고체 및 유체 조성물을 포함할 수 있다.

약학적으로 허용가능한 부형제는 용매, 완충제, 보존제, 킬레이트제, 산화방지제, 안정화제, 유화제, 현탁제 및/또는 희석제를 포함할 수 있다. 다양한 제제의 예가 하기에 주어진다.

다양한 제제의 예:

용매의 예로는 물, 알코올, 혈액, 혈장, 척수액, 복수액 및 림프액이 있으나, 이들로 제한되지 않는다.

완충제의 예로는 시트르산, 아세트산, 타르타르산, 락트산, 하이드로겐 포스포르산, 중탄산염, 인산염, 디에틸아민 등이 있으나, 이들로 제한되지 않는다.

킬레이트제의 예로는 나트륨 EDTA 및 시트르산이 있으나, 이들로 제한되지 않는다.

산화방지제의 예로는 부틸화 하이드록시 아니솔(BHA), 아스코르브산 및 이의 유도체, 토코페롤 및 이의 유도체, 시스테인 및 이들의 혼합물이 있으나, 이들로 제한되지 않는다.

희석제 및 붕해제의 예로는 락토스, 사카로스, 엠덱스, 인산칼슘, 탄산칼슘, 황산칼슘, 만니톨, 전분 및 미정질 셀룰로스가 있으나, 이들로 제한되지 않는다.

결합제의 예에는 사카로스, 소르비톨, 아카시아 고무, 알긴산 나트륨, 젤라틴, 전분, 셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈 및 폴리에틸렌글리콜이 있으나, 이들로 제한되지 않는다.

본 발명에 따라 사용되는 약제학적 조성물 또는 물질은 바람직하게는 말초혈관내 주입 또는 근육내 또는 피하 주사를 통해 환자에게 투여되거나, 볼, 폐, 비강 내, 피부 또는 구강 경로를 통해 투여된다. 또한, 약학적 조성물 또는 약학적 활성 물질을 외과적으로 삽입된 션트(shunt)를 통해 환자의 뇌실로 투여하는 것도 가능하다.

한 실시 양태에서, 본 발명에 따른 약학 조성물은 안내, 비강내, 경구, 피하 및/또는 전신 투여를 위해 제형화된다. 약학 조성물은 하루에 1회 이상 투여될 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 스프레이로서 투여, 에어로졸로서의 투여, 분무기(nebulizer)에 의한 투여 또는 흡입기(inhaler)에 의한 투여를 위해 제형화된다. 다른 바람직한 실시 양태에서, 본 발명의 조성물은 현탁액으로서, 또는 보다 바람직하게는, 스프레이, 에어로졸 또는 분무기를 이용하여 비강 및/또는 호흡기로의 흡입을 위한 분말로서 투여된다. 분무기는 기도로 안개 형태의 액상 약제를 전달하는 의학적 장치이다. 분무기의 콤프레서는 액상 약제로 충진된 약제 컵 내의 튜브를 통해 공기를 밀어넣게 된다. 이 공기의 힘은 상기 액체를 기도를 통해 깊이 흡입될 수 있는 작은 안개상 입자로 부수게 된다. 본원에서 "에어로졸"이라는 용어는 미세 고체 또는 액상 입자의 기체상 현탁액을 지칭한다. 항분비 인자를 포함하는 분말 형태의 약학 조성물은 안정성 및 용량의 관점에서 추가의 장점을 지니며, 건조 분말은 흡입기로 투여될 수 있다. 또한, 약학 조성물은 눈, 안내, 비강내, 경구, 피하를 통해 국소적으로 투여되고/되거나 혈관을 통해 전신으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 눈에 국소적 투여를 위해 제형화된다. 보통, 눈에 국소적 적용을 위해 사용되는 경우, 본 발명의 조성물에 있어서 1일 당 적용되는 농도는 1회 적용 당 1 ㎍ 내지 10 mg, 예컨대 1회 적용 당 1 ㎍ 내지 1 mg, 바람직하게는 50-1000 ㎍/일, 예컨대 50-500 ㎍/일, 50-250 ㎍/일, 100-250 ㎍/일, 500-250 ㎍/일, 500-750 ㎍/일, 또는 50-100 ㎍/일이며, 이는 1일 당 단회 투여량으로서 투여하거나, 또는 1일 당 수회 반복 투여하는 것이 가능하다. 혈액으로 전신 투여되는 경우, 투여량은 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 10 mg, 예컨대 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 1 mg, 바람직하게는 체중 1kg 당 1-1000 ㎍, 바람직하게는 체중 1kg 당 1-100 ㎍이며, 이는 1일 단회 투여량으로서 투여하거나, 또는 1일 당 수회 반복 투여하는 것이 가능하다. 항분비 인자가 풍부한 난황이 본 발명에 따라 사용되는 경우, 이는 바람직하게는 경구 투여된다. AF 단백질, 이의 펩타이드, 단편 및/또는 유도체의 중요한 특징은 높은 투여량에서도 국소적이거나 또는 전체적인 부작용이 알려진 것이 없어, 알려진 위험 없이 집중적인 치료가 가능하다는 것이다.

또한, 본 발명은 안내 투여용 약학 조성물의 제조를 위한, 항분비 단백질 또는 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편, 및/또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 서열번호 4에 나타낸 바와 같은 펩타이드, 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편에 대한 것이다. 본 발명은 추가로 의학적 사용을 위한 서열번호 4에 따른 펩타이드의 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 서열번호 5에 나타낸 바와 같은 펩타이드, 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편에 대한 것이다. 본 발명은 또한 의학적 사용을 위한 서열번호 5에 따른 펩타이드의 용도에 관한 것이다. 이러한 펩타이드는 또한 구획 증후군(compartment syndrome)의 치료 및/또는 예방용 약학 조성물의 제조에서의 사용을 위한 본 출원인의 동시 계류중인 출원에도 개시되어 있다.

또한, 본 발명은 포유동물에 있어서 고안압증의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 항분비 단백질 또는 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편, 및/또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물의 유효량을 고안압증의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 방법에서의 사용을 위한 약학 조성물은 상기 개시된 바와 같다.

따라서, 본 발명은 포유동물에 있어서 고안압증의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 항분비 단백질, 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편, 및/또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

바람직한 실시 양태에서, 본 발명에 다른 방법은 상기 약학 조성물을 안내 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명에 따른 방법의 바람직한 실시 양태에서, 상기 약학 조성물은 서열번호 1-6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 단편을 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질은 하기 식에 따른 서열로 이루어진다:

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질은 서열번호 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 단백질, 또는 서열번호 6의 아미노산 38-42를 포함하는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편이다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질의 단편은 서열번호 1에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질의 단편은 서열번호 2에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질의 단편은 서열번호 3에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질의 단편은 서열번호 4에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 항분비 단백질의 단편은 서열번호 5에 나타나 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 약학 조성물은 본 발명에 따른 임의의 항분비 인자들을 2 이상 포함하고, 또한 임의로는 항분비 인자가 풍부한 난황도 조합하여 포함할 수 있다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 포유동물에서의 안압은 21 mmHg 이상이다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 안압은 정상이거나 낮다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 항분비 단백질은 이러한 항분비 단백질이 풍부한 난황으로 제공되며, 상기 항분비 단백질은 바람직하게는 상기 난황내 1000 FIL 유닛/ml 이상의 농도로 제공된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 고안압증은 눈의 전방으로부터 안방수 유출에 대한 저항에 의해 야기된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 섬유주와 쉴렘관을 통해 안구 전방으로부터 안방수의 유출에 대한 저항을 감소시킨다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 추가로 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 안내, 비강내, 경구, 피하 및/또는 전신 투여를 위해 제형화된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 상기 약학 조성물은 스프레이로서 투여, 에어로졸로서의 투여, 분무기에 의한 투여 또는 흡입기에 의한 투여를 위해 제형화된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 10 mg, 바람직하게는 체중 1kg 및 1회 적용 당 1 내지 1000 ㎍의 용량으로 혈액에 전신 투여된다. AF 단백질, 이의 펩타이드, 단편 및/또는 유도체의 중요한 특징은 높은 투여량에서도 국소적이거나 또는 전신 부작용이 알려진 것이 없어, 알려진 위험 없이 집중적인 치료가 가능하다는 것이다.

본 발명에 따른 방법의 동일한 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 10 mg, 예컨대 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 1 mg, 바람직하게는 체중 1kg 및 1회 적용 당 1 ㎍ 내지 100 ㎍의 용량으로 혈액에 전신 투여된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 눈에 국소 투여를 위해 제형화된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 1일 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 10 mg, 바람직하게는 50-1000 ㎍의 용량으로 국소적으로 투여된다.

본 발명에 따른 방법의 동일한 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 10 mg, 예컨대 1일 및 1회 적용 당 1 ㎍ 내지 1 mg, 바람직하게는 50-250 ㎍의 용량으로 투여된다.

본 발명의 방법에 따른 바람직한 실시 양태에서, 약학 조성물은 1일 당 1회 이상 투여된다.

실험 섹션

실시예 1

젊은 성체 래빗(뉴질랜드 백색종; New Zealand White, NZW)를 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, 정상적인 래빗에서 IOP가 어둠이 개시될 때 증가되기 때문에, IOP의 상관 관계를 알 수 있었다. 안구와 테논낭(Tenon's capsule) 사이에 10-50 ㎍의 AF-16 (서열번호 1) (10 또는 50%의 에탄올이 첨가된 PBS에 용해됨)을 편면 주입(unilateral deposition)시켜 마취된 래빗의 IOP가, TonoPen® (Medtronic Inc., 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)을 이용하여 측정했을 때, 2시간 내에 2.5 mmHg까지 일시적으로 하강하는 결과를 초래하였다. 염료인 플루오레세인(Sigma-Aldrich, Inc, 미국 미소리주 세인트 루이스 소재; PBS에 용해된 나트륨염)을 정맥내 주사하고 슬릿 램프 배열(slit lamp arrangement)이 구비된 수술 현미경으로 트레이서(tracer)의 양상을 측정하였다. AF-16으로 처리된 눈과 비히클로만으로 처리된 반대쪽 눈 사이의 염료인 플루오레세인의 시간에 따른 양상에 있어서는 별다른 차이가 없었다. 상기 기술된 절차를 반복하여 동일한 결과가 증명되었다. 유사한 IOP 감소 효과는 높은 투여량인 100 ㎍의 AF-16으로 달성되었다. 따라서, 사용된 트레이서인 플루오레세인이 AF-16 처리된 눈과 비히클 처리된 눈에서 각각 거의 동시에 나타나는 것으로 설명될 수 있다는 사실에 비추어 볼 때, AH의 생성은 명백히 AF-16 처리에 의해 현저히 영향받는 것은 아닌 것으로 결론지을 수 있었다.

실시예 2

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 상관 관계를 알 수 있었다. 2마리의 마취된 래빗에 있어서, 안구와 측두 테논낭 사이에 10-50 ㎍의 AF-16 (서열번호 1) (10 또는 50%의 에탄올이 첨가된 50 또는 100㎕의 PBS에 용해됨)을 주사에 의해 편면 주입시켰더니, IOP가 TonoPen®을 이용하여 측정했을 때, 2시간 내에

2.5 mmHg까지 하강하는 결과가 유도되었다. 다음으로, 3% 에반스 블루(Merck, Sigma) 및 2% 소태아 혈청 알부민(Sigma)을 포함하는 PBS 중의 20 또는 50 ㎕의 용액을, 안구의 후방과 초자체 사이의 경계로 편평부(pars plana)를 통해 두 눈 모두에 주입하였다. 안과용 봉합사로 주입 부위를 봉합시켜 역류 및 누수를 방지하였다. 상기 블루 염료가 전방으로 들어가 상공막 정맥을 통해 눈으로부터 나오는 것이 관찰되었는데, 이는 비히클로만 처리된 반대쪽 눈에 비해 AF-16으로 미리 처리된 눈에서 보다 신속히 이동하였다. 이 실험을 다음날 한번 더 반복하여 동일한 실험 결과를 얻었다. 따라서, 홍채각막각을 통해 쉴렘관 및 이에 연결된 정맥으로 이동하는 알부민-염료 복합체의 이동을 시각적으로 확인할 수 있는 바와 같이, AH의 유출은 외관상 펩타이드 AF-16의 적용에 의해 촉진되었다.

실시예 3

마취된 성체 동물은 반복하여 공지된 접근법으로 확립된 각막윤부 흡입컵(perilimbal suction cup) 기법에 따라 측정된 AH의 흐름 및 유출에 대한 저항을 가질 것이다. 추가적인 접근 방법이 이들 파라미터를 결정하기 위해 사용될 것이다. 이로써 정상적인 동물 및 실험적으로 상승된 IOP를 갖는 동물에 있어서, AH 및 IOP의 상관 관계에 대한 AF-16의 효과와 관련한 정량 및 정성 수치가 수득될 것이다. 이는 선천적인 고안압증을 갖는 동물에게도 동일하게 해당될 것이다.

실시예 4

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP가 어둠에 노출된 첫 수시간 동안 수 mmHg까지 상승되었다. 마취된 동물의 테논낭 아래에 10% 에탄올이 첨가된 PBS에 용해된 100 ㎍ 이하의 AF-16을 편면 주입(50-250 ㎕)하였더니, 비히클(10% 에탄올이 첨가된 PBS)만으로 침착된 반대쪽 눈에 있어서의 IOP와 비교했을 때, 1시간 내에 5 mmHg 이하까지 IOP가 현저히 하강하는 결과를 가져왔다. AF-16으로 처리 후 IOP의 감소는 4시간 동안 지속되었으며, 이후 다음날 측정하였을 때는 반대쪽 눈의 IOP와 동일하게 되었다. 이러한 결과들은 3일 연속으로 3마리의 래빗에 대해 반복하였을 때도 그러하였다. 결론적으로, AF-16은 수 mmHg를 갖는 보통의 눈에서 IOP를 효율적으로 감소시켰으며, 이는 IOP를 저하시킬 목적으로 다른 약물로 달성된 것으로 보고되었던 수치에 상응하는 것이다.

실시예 5

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. 마취된 동물의 하결막원개(fornix conjunctivae inferior, cul-de-sac) 내에 25 ㎕의 인산염 완충된 식염수(PBS) 중의 25 ㎍의 AF-16(모두 50㎍ 중)을 2분 간격으로 2회 편면 주입시켰더니, 비히클인 PBS만을 침착시킨 반대쪽 눈의 IOP와 비교했을 때, 1시간 후에 1.5-2.5 mmHg까지 IOP가 하강되었다. AF-16으로 처리 후 IOP의 감소는 4시간 동안 지속되었으며, 이후 다음날 측정하였을 때는 반대쪽 눈의 IOP와 동일하게 되었다. 이러한 결과들은 2일 연속으로 2마리의 래빗에 대해 반복하였을 때도 그러하였다. 따라서, 이러한 실험은 보통의 래빗에서 cul-de-sac 내에 AF-16을 국소적으로 침착시키면 IOP의 일시적 저하를 유도할 수 있다는 사실을 증명하는 것이다.

실시예 6

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. 마취된 동물의 하결막원개 내에 50 ㎕의 인산염 완충된 식염수(PBS) 중의 50 ㎍의 AF-16(모두 100㎍ 중)을 2분 간격으로 2회 편면 주입시켰더니, 비히클만을 침착시킨 반대쪽 눈의 IOP와 비교했을 때, 1시간 후에 2-4 mmHg까지 IOP가 하강되었다. AF-16으로 처리 후 IOP의 감소는 4시간 동안 지속되었으며, 이후 다음날 측정하였을 때는 반대쪽 눈의 IOP와 동일하게 되었다. 이러한 결과들은 3일 연속으로 2마리의 래빗에 대해 반복하였을 때도 그러하였다. 결론적으로, 실시예 5에 언급된 바와 같이, 2배 투여량의 AF-16으로 보통의 눈을 국소적으로 처 리하면 역시 명백한 국소 또는 전신 부작용이 없이 IOP를 일시적으로 감소시킬 수 있었다.

실시예 7

본 실험(본 출원인 대신에 스웨덴 웁살라 소재의 Visionar AB가 수행함)의 목적은 AF-16으로 국소적 처리 후 래빗에서의 IOP의 상관 관계를 연구하고, 여기서 달성된 효과를, 고안압을 감소시킨다고 알려져 있는 약물인 티몰롤

(2,5 mg/ml; Alcon Sweden AB, 스웨덴 스톡홀롬 소재)과, 비히클인 PBS의 효과와 비교하고자 하는 것이다. 2.1-2.4 kg의 무게를 갖는 20마리의 알비노 암컷 NZW 래빗을 구입하여 하나의 우리 속에서 각각 키웠고, 이때 사료(K1, Lactamin, 스웨덴 스톡홀롬 소재) 및 수돗물에 대해서는 자유롭게 접근할 수 있도록 하였다. 오전 9시부터 오후 9시까지 빛에 노출시켜 일광주기를 조절하였다. 3주 동안의 새 환경 순응 기간 동안, 동물들을 각막에 국소 마취 후 IOP를 측정하는 시험 상황에 매일 훈련을 시켰다.

동물들은 두 그룹으로 무작위 분류하였다:

그룹 1, (n=10). 이들 동물들은 한쪽 눈에 2 방울의 AF-16 (50 ㎕의 PBS 중, 모두 50 ㎍ 중)을 넣고, 반대쪽 눈에는 동일한 부피인 2 x 25 ㎕의 비히클인 PBS를 적용하였다.

그룹 2, (n=10). 이들 동물들은 한쪽 눈에 1 방울 (50 ㎕의 티몰롤®; 125 ㎍)을 넣고 다른 쪽 눈에는 동일한 부피의 PBS를 적용하였다. 티몰롤®은 래빗의 안압을 감소시키는 것으로 알려져 있어, 기준으로서 모델을 입증하기 위해 사용하였다. 국소 마취로서 각 각막에 1 방울의 Tetrakain Chauvin® (Novartis Ophthalmics, 스웨덴 타디 소재)을 적용시킨 후, TonoPen XL® (Medtronic)을 이용하여 IOP를 측정하였다. 마지막 프로토콜에서는, 이렇게 설계한 두 계열의 측정을 스케쥴링하였다. AF-16 및 비히클로 국소적 처리 5일 후의 한 계열과, 티몰롤® 또는 비히클로 국소적 처리 5일 후의 또다른 계열이 그것이다.

제1 측정에서는 티몰롤®의 IOP 저하 효과가 5번째와 6번째 측정시에 기대되었는데, 이는 IOP가 일중 주기에 의해 상승되었기 때문이다. IOP 측정의 마지막 날은 측정을 장시간 동안(동물 우리에 어둠이 시작된 후 1, 2, 3.25, 4.25, 5.5, 6.5, 7.75, 9, 및 1O 시간 동안) 수행하여, 장시간 동안의 데이터 수집을 확실히 하였다. 결과를 첨부된 도 3에 나타내었다. 5일의 처리 기간 중 개시날의 IOP를 도 2에 나타내었다. AF-16으로 처리시 국소적으로나 전신에 불리한 효과나 징후를 발견할 수 없었다.

데이터로부터 AF-16이 비히클인 PBS로만 처리된 후 측정된 IOP와는 현저히 달리, IOP에 대한 저하 효과를 지님이 명백하였다. AF-16에 의해 발생되는 매우 현저한 효과는 티몰롤®에 의한 효과에 필적할 만한 것이다(도 3). 결론적으로, 상기 데이터는 이러한 효과를 지닌다고 알려진 흔히 사용되는 약물(티몰롤®)과 같이 래빗에 있어서 IOP를 저하시킬 수 있는 동일한 유효한 효과를 나타낼 수 있다는 것을 알려준다. 따라서, AF-16은 인간에 있어서 고안압증의 치료에 유용할 수 있다.

실시예 8

젊은 성체 NZW 래빗(2.4-2.9 kg, 암컷)을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. 마취된 동물의 하결막원개 내에 각 회마다 50 ㎕의 인산염 완충된 식염수(PBS) 중의 50 또는 100 ㎍의 합성 헥사펩타이드 CHSKTR(모두 100-200㎍ 중)을 2분 간격으로 2회 편면 주입시켰더니, 비히클만을 침착시킨 반대쪽 눈의 IOP와 비교했을 때, 1시간 후에 2-3 mmHg까지 IOP가 하강되었다. 헥사펩타이드로 처리 후 IOP의 감소는 2시간 동안 지속되었으며, 이후 다음날 측정하였을 때는 반대쪽 눈의 IOP와 동일하게 되었다. 이러한 결과들은 2마리의 래빗에 대해 반복하였을 때도 달성이 가능하였다. 결론적으로, 하부 눈물 주머니(lacrimal sac)에 주입되며, 서열번호 6의 항분비 단백질의 활성 서열 부분인, CHSKTR (서열번호 4)을 갖는 합성 펩타이드로 정상적인 눈을 국소 처리하면, IOP를 감소시킬 수 있다.

실시예 9

2마리의 정상적인 젊은 성체 NZW 래빗(2.4-2.9 kg, 암컷)을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. 마취된 동물을 10% 에탄올이 첨가된 100 ㎕의 PBS 중에 용해된 50 또는 100 ㎍의 합성 헥사펩타이드 CHSKTR로 테논낭 아래 측두 위치에 편면 주사하였더니, 동시에 비히클을 유사하게 침착시킨 반대쪽 눈의 IOP와 비교했을 때, 30분 후에 2-4 mmHg까지 IOP가 하강되었다. 헥사펩타이드로 처리 후 IOP의 감소는 2시간 동안 지속되었다. 두마리 모두에 있어서 IOP는 다음날 측정하였을 때의 반대쪽 눈의 IOP와 동일하였다. 이러한 결과들은 2일 연속으로 달성할 수 있었다. 결론적으로, 서열번호 6의 항분비 단백질의 활성 서열 부분인, CHSKTR (서열번호 4)을 갖는 합성 펩타이드로 안구의 외부를 시험 물질을 주입함으로써 정상적인 눈을 국소 처리하면, 국소적 또는 전신 부작용을 초래하지 않고도 IOP를 감소시킬 수 있다.

실시예 10

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. 마취된 래빗에 10%의 에탄올이 첨가된 PBS에 용해된 체중 1kg 당 50 또는 100 또는 1000 ㎍의 용량 중 두가지 투여량 농도로 AF-16을 정맥 내 주입하였더니, AF-16을 주입하기 바로 직전에 측정된 IOP와 비교했을 때, 1시간 후에 양쪽 눈에서 2-3 mmHg까지 IOP가 하강되었다. AF-16으로 처리 후 IOP의 감소는 2시간 동안 지속되었다. 상기 동물의 좌, 우측 눈 사이의 IOP에 있어서 명백한 차이점은 없었다. 양쪽 눈에 있어서 IOP를 다음날 측정하였을 때는 AF-16 처리하기 전날의 수치와 근접하게 회복되었다. 이렇다할 부작용도 발견되지 않았다. 결론적으로, 체중 1kg 당 50 또는 100 또는 가장 효율적으로는 1000 ㎍의 투여량으로 AF-16을 정맥 내 주사하면 IOP의 감소를 유도할 수 있는데, 이는 1시간 내에 이루어지며 수시간 지속되었으며, 하루 만에 IOP는 원래 수준으로 회복되었다. 처리된 래빗의 두 눈은 IOP에 대한 AF의 효과와 관련하여 동일한 역학 패턴을 보여주고 있었다. 결론적으로, 펩타이드 AF-16이 정맥 내, 즉 전신 투여되는 경우, 효율적으로 IOP를 저하시킬 수 있지만, 허용가능한 정도에서는, 비정상적으로 낮은 IOP를 야기시킬 수도 있다.

실시예 11

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. PBS에 용해된 체중 1kg 당 50, 100 또는 1000 ㎍의 용량으로 AF-16의 비강 내 주입을 3마리의 마취된 래빗에게 수행하였더니, 콧구멍에 AF-16을 주입하기 바로 직전에 측정된 IOP와 비교했을 때, 1시간 후에 양쪽 눈에서 2 mmHg 이상까지 IOP가 하강하였다. 고용량의 AF-16으로 처리 후 IOP의 감소는 2-3 시간 동안 지속되었다. 동일한 동물의 좌, 우측 눈 사이의 IOP에 있어서 차이는 없었다. 양쪽 눈에 있어서 IOP를 다음날 한번 더 측정하였더니, AF-16 처리하기 전날의 수치로 거의 회복되었음을 알 수 있었다. 이렇다할 부작용도 발견되지 않았다. 결론적으로, 체중 1kg 당 1000 ㎍ 이하의 투여량으로 AF-16을 비강내 주입하면 IOP의 감소를 유도할 수 있는데, 이는 1시간 내에 이루어지며 3시간 이상 지속되었으며, 하루 만에 IOP는 원래 수준으로 회복되었다. 각 래빗의 두 눈 모두 동일한 압력 패턴을 나타내었다. 국소적이거나 전체적인 부작용도 나타나지 않았다.

실시예 12

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 일중 역학 변화를 알 수 있었다. 이러한 래빗을 일반적인 마취를 시키고, AF-단백질 (희석된, 시판되는 오렌지 주스 용해시킨 Salovum™)이 풍부한 동결건조된 난황 10 g을 위장에 침착시켰다. 이렇게 AF 단백질을 장내 주입시켰더니, Salovum™을 주입시키기 바로 직전에 측정된 IOP와 비교했을 때, 1시간 후에 양쪽 눈에서 IOP가 하강하였다. 동물의 좌, 우측 눈 사이의 IOP에 있어서 차이는 없었다. 양쪽 눈에 있어서 IOP를 다음날 한번 더 측정하였더니, Salovum™으로 처리하기 전날의 수치로 거의 회복되었음을 알 수 있었다. 이렇다할 부작용도 발견되지 않았다. 결론적으로, 항분비 단백질이 풍부한 난황, 예를 들어 Salovum™을 경구 주입하여 소화시키면 IOP의 감소를 유도할 수 있는데, 이는 대략 1시간 내에 이루어지며 수시간 이상 지속되었으며, 하루 만에 IOP는 원래 수준으로 회복되었다. 두 눈 모두 동일한 IOP 패턴을 나타내었다.

실시예 13

편면에 가벼운 우안(牛眼)증(unilateral slight buphthalmos, 좌측 안구 확대됨)이 있는 젊은 성체 NZW 래빗을 마취시키고 TonoPen® 안압계를 이용하여 IOP를 측정하였다. 반복하여 검사했을 때, 우안증이 있는 눈의 IOP는 30-32 mmHg인 반면, 반대쪽의 정상적인 눈의 안압은 11-12 mmHg이었다. 10% 에탄올이 첨가된 100 ㎕의 PBS 중의 50 ㎍의 AF-16을 마취된 동물의 테논낭 아래 측두 부위에 편면 주입하였더니, 1시간 안에 IOP가 14-16 mmHg으로 감소하는 결과를 가져왔다. 동량의 AF-16을 반대쪽 눈에 주입하였더니, TonoPen®으로 측정시 약 2 mmHg만의 안압 강하를 가져왔다. 우안증이 있는 좌측 눈의 IOP는 다음날 30 mmHg를 초과할 때까지 증가하였으나, 원래 수준을 회복하였다. AF-16을 한번 더 투입하였더니 2시간 만에 IOP가 15-16 mmHg로 유도된 반면에, 같은 투여량의 AF-16는 우측 눈의 IOP를 1-2 mmHg 정도만 감소시켰다. 불리한 반응들은 나타나지 않았다. 따라서, 안구에 주사 에 의한 국소적 주입은 우안증이 있는 눈에 있어서 상승된 안압을 통상의 수준으로 일시적으로 낮추어 준다는 결론을 얻을 수 있다.

실시예 14

젊은 성체 NZW 래빗을 오전 9시부터 오후 9시까지는 어둠에, 오후 9시부터 오전 9시까지는 빛에 노출시켜 주간리듬을 조절하였다. 이로써, IOP의 상관 관계를 IOP에 있어서 일중 교번과 일치시켰다. 의과학 국제 저널(scientific medical international journal)의 최근 간행물(Krave U, Hoejer S & Hansson H.-A., European J Neuroscience, 21, 2867-2882, 2005)에 기술된 바와 같이, 이러한 래빗의 두부에 대한 회전 가속 외상(sagittal rotational acceleration impulse)에의 노출에 대한 내용은, 눈에 손상을 줌과 더불어 미만성 뇌손상(diffuse brain injury)을 야기시키는 본 연구 도중에 개시되었다. 마취된 래빗 두부에 대해, 전방에서 후방으로의 회전 가속 외상 또는 후방에서 전방으로의 회전 가속 외상의 200 krad/s² 이하의 힘에 노출시켰더니 눈에 기계적 변형과 부하가 걸리는 결과가 나타났다. 이후 30분 동안 IOP는 TonoPen® 안압계로 마취된 동물에 대해 측정시 35-40 mmHg까지 증가하였고, 수시간 동안 상승된 상태를 지속하였다. 시상 회전 가속 외상 10-30분 후 테논낭과 눈의 측두 영역의 공막 사이에 AF-16 (10% 에탄올이 첨가된 100 ㎕의 PBS)의 용액을 주사함으로써 체중 1kg 당 100 ㎍의 AF-16을 침착시켰더니, 1시간 내에 거의 통상의 수치로 IOP가 회복되는 결과가 유도되었다. AF-16을 조금도 투여받지 못한 반대쪽 눈의 IOP는 상승된 상태를 유지하였다.

래빗을 이러한 시상 회전 가속 외상에 노출시키면, 예를 들어 신경 세포 및 혈관 세포에서의 광범위한 세포 골격상의 변형을 초래하게 된다(Hamberger et al., 2003). 돼지 대뇌를 고에너지 부하에 노출시킨 후의 경우에도 동일한 사실이 이미 증명되었다(Suneson et al., 1990). 따라서, 회전 가속 외상에 의해 유도된 섬유주 와 쉴렘관의 세포에서 막 변형 및 세포 골격상의 변형이, 전방으로부터 AH의 유출에 일시적으로 손상을 초래하여, IOP를 일시적으로 상승시킨다는 결과를 얻을 수 있다. 펩타이드 AF-16을 이용한 국소적 처리는 상승된 IOP를 완화시키는 듯하다.

실시예 15

래트의 4개의 상공막 정맥 중 3개를 한쪽 면만을 제거하였다. 이로써, 수술된 눈의 전방 세그먼트의 정맥혈은 전방 세그먼트로부터 혈액의 유출을 위한 하나의 정맥만을 가지게 될 것이다. 이러한 처리는 수주일 후 처리된 눈에 있어서 상승된 IOP를 초래하게 될 것이다. 상승된 IOP를 갖는 눈은, AF-16을 이용한 이러한 처리가 IOP를 정상화시킬 수 있을지의 여부를 알아보기 위해 PBS 중의 AF-16을 이용하여 국소적 및/또는 전신 처리될 것이다. 이러한 결과들로부터 AH 생성 속도와 유출 특성의 계산을 가능하게 하여, 눈을 통한 AH의 경로에 있어서 AF-16의 작용 부위를 한정시키는 것이 가능하다.

실시예 16

추가의 래트의 측두 상공막 정맥에 고장성 식염수를 주사하고, 다른 3개의 상공막 정맥은 일시적으로 혈류를 봉쇄하였다. 이러한 처리는 문헌[Morrison et al.]에 기술된 바에 따르면, 수 주일 후에 처리된 눈에 상승된 IOP를 초래하게 될 것이다. 상승된 IOP를 갖는 눈은, AF-16을 이용한 이러한 처리가 IOP를 정상화시킬 수 있을지의 여부를 알아보기 위해 PBS 중의 AF-16을 이용하여 국소적 및/또는 전체적으로 처리될 것이다. 이러한 결과들로부터 AH 생성 속도와 유출 특성의 계산을 가능하게 하여, 눈을 통한 AH의 경로에 있어서 AF-16의 작용 부위를 한정시키는 것이 가능하다.

실시예 17

일부 유전자 도입된, 특정 계통의 설치류를 높은 빈도로 증가된 안압을 나타내도록 사육하였다. IOP에 대한 국소적으로, 국부적으로 및/또는 전신에 적용된 AF-16의 효과를 평가하였다. 이러한 결과들로부터 AH 생성 속도와 유출 특성의 계산을 가능하게 하여, 눈을 통한 AH의 경로에 있어서 AF-16의 작용 부위를 한정시키는 것이 가능하다. 이러한 동물의 사용은 고안압증의 치료를 위한 약물을 평가하는 기준 접근법을 구성하기 위한 것으로 생각된다.

요약 및 결론

상기 차별적으로 기술된 실험들은 항분비 인자를 이용한 처리가 포유류 눈의 상승된 안압을 감소시키고 정상화시킨다는 점에 대해 개시한다. 이는 임상적 실무에서 고안압증을 갖는 환자에서 상승된 IOP를 제어하기 위한, 항분비 인자, 단백질, 펩타이드, 동족체 및 단편을 포함하는 약물의 용도를 보여준다. 항분비 인자인 AF-16은 상승된 IOP를 갖는 눈의 압력을 효율적으로 정상화하기 위해 실험적으로 개시되었다. AF-16의 주된 효과는 안방수의 유출을 개선시키는 능력을 발생시키는 것으로 생각된다. 따라서, AF-16은 결론적으로 섬유주와 쉴렘관의 세포를 통한 AH 의 유출을 촉진함으로써 고안압을 낮추고 정상화시킨다.

참고 문헌

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Claims

고안압증의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물의 제조를 위한, 항분비 단백질, 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편, 및/또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
제1항에 있어서, 상기 항분비 단백질은 하기 식에 따른 서열로 이루어지는 것인 용도:

X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5

상기 식 중에서, X1은 I이거나, 서열번호 6의 아미노산 1-35이거나 존재하지 않으며, X2는 H, R 또는 K이고, X3은 S 또는 L이며, X4는 T 또는 A이고, X5는 서열번호 6의 아미노산 43-46, 43-51, 43-80 또는 43-163이거나 존재하지 않는다.
제1항에 있어서, 상기 항분비 단백질은 서열번호 6에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 단백질, 서열번호 6의 아미노산 38-42를 포함하는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편인 것인 용도.
제1항에 있어서, 상기 단편은 서열번호 1에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 상기 단편은 서열번호 2에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 상기 단편은 서열번호 3에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 상기 단편은 서열번호 4에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 상기 단편은 서열번호 5에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 것인 용도.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 단편을 2 이상 포함하는 것인 용도.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 안압이 22 mmHg 이상인 용도.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 안압이 22-30 mmHg인 용도.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 안압은 정상이거나 낮은 것인 용 도.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항분비 단백질은 이러한 항분비 단백질이 풍부한 난황으로 제공되며, 상기 항분비 단백질은 바람직하게는 상기 난황내 1000 FIL 유닛/ml 이상의 농도로 제공되는 것인 용도.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고안압증은 눈의 전방(anterior chamber)으로부터의 안방수(aqueous humour)의 유출에 대한 저항에 의해 야기되는 것인 용도.
제14항에 있어서, 상기 약학 조성물은 섬유주(trabecular meshwork)와 쉴렘관(Schlemm's canal)을 통해 눈의 전방으로부터의 안방수의 유출에 대한 저항을 감소시키는 것인 용도.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비정상적인 안압은 눈에서 안방수의 형성이 방해됨으로써 야기되는 것인 용도.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함하는 것인 용도.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 국소, 안내, 비강내, 경구, 피하, 피부, 점막 및/또는 전신 투여를 위해 제형화되는 것인 용도.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 스프레이로서 투여, 에어로졸로서 투여, 분무기(nebulizer)에 의한 투여 또는 흡입기(inhaler)에 의한 투여를 위해 제형화되는 것인 용도.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 1일, 체중 1kg 및 1회 적용 당 0.1 ㎍ 내지 10 mg, 바람직하게는 체중 1kg 및 1회 적용 당 1 내지 1000 ㎍의 용량으로 혈액에 전신 투여되는 것인 용도.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 눈에 국소 투여하기 위해 제형화되는 것인 용도.
제21항에 있어서, 상기 약학 조성물은 1일 1회 적용 당 1 ㎍ 내지 10 mg, 바람직하게는 50 내지 1000 ㎍의 용량으로 투여되는 것인 용도.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 1일 당 1회 이상 투여되는 것인 용도.
안내 투여용 약학 조성물의 제조를 위한, 항분비 단백질, 항분비 활성을 갖는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편, 및/또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
서열번호 4에 나타낸 바와 같은 펩타이드 또는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편.
제25항에 있어서, 의학 용도인 펩타이드.
서열번호 5에 나타낸 바와 같은 펩타이드 또는 이의 동족체, 유도체 및/또는 단편.
제27항에 있어서, 의학 용도인 펩타이드.