CN102612564B - 新的抗衰老试剂及其鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明发现了衰老过程的新机制，并建立了一种高通量筛选方法来筛选鉴别，检测和提纯的试剂，用于改善线粒体功能的使用，在不分裂细胞和分裂静止细胞中维维持不分裂状态，预防或治疗与的线粒体功能加速丧失、染色体端粒功能异常和不分裂细胞死亡有关的老年性疾病。本发明也披露了用此方法筛选出来的一系列化合物或组合物构成。本发明进一步提供了低剂量雷帕霉素或它的衍生物作为热量限制模仿物在防治老年性疾病上的用途。

Description

新的抗衰老试剂及其鉴别方法
对相关专利申请的交叉引用
本申请要求2009年4月10日提交的美国临时专利申请号61/168,311；和2009年4月10日提交的美国临时专利申请号61/168,335的优先权，将其全部内容纳入本文作为参考。
技术领域
本发明是关于新的抗衰老试剂、新的筛选鉴别和检测抗衰老试剂的方法、和这些试剂在老年性疾病或老年症上的应用。本发明也报道了一个新的方法用于测量生物样品中的抗衰老试剂的活性浓度。本发明还介绍了低剂量的雷帕霉素和它的衍生物以及其他TOR途径的抑制剂，作为热量限制模仿物，在防治老年性疾病或老年症上的用途。
背景技术
研究人类的衰老过程是非常有意义的，部分原因是很多疾病在老年人中横行，例如癌症，老年痴呆症，帕金森氏病，脑卒中，心肌梗塞，心血管疾病，等等，许多老年性疾病缺乏预防和治疗的方法。因此，通过研究动物衰老过程来寻找有效预防和治疗老年性疾病的方法，在近十年里被科学界所重视。尽管有许多有关衰老的文献报道，完全了解衰老过程对人类在科学上仍旧是一个巨大的挑战。目前世界上老年人口增加的很快，相应的健康医疗的负担和花费也大大增加了，因此，研究衰老、发现用于老年性疾病的抗衰老试剂也变得很急切了。本发明披露这样一个系统方法，有效的发现可以开发成预防和/或治疗与老年性疾病或老年症的抗衰老剂。
在有关衰老过程的众多理论中，以及由此派生的用于防治老年性疾病的方法，有三个是主要的：营养信号途径(热量限制)，线粒体途径(活性氧，ROS)和端粒缺陷理论。
营养信号途径(热量限制)与衰老
热量限制(Caloric Restriction，CR)或限食是已被公认为最可行的延缓衰老的方法，从酵母到哺乳动物皆可。CR被显示可以降低老年性疾病的发病率或延缓发病时间，如灵长类动物的帕金森氏模型(Maswood N，et al.ProcNatl Acad Sci U S A 101：18171-6，2004)、老年痴呆症(Qin W，et al.JAlzheimers Dis.10：417-22，2006；Wang J，et al.Faseb J.19：659-61，2005)Dahl-SS大鼠的高血压和心脏病(Seymour EM，et al.J Mol Cell Cardiol.41：661-8，2006)、纤维化(Castello L，et al.Faseb J.19：1863-15，2005)和肾脏疾病(Yu BP，et al.J Gerontol，37：130-41，1982)，CR也抑制多种自发性肿瘤的，包括在p53基因敲除小鼠的产生肿瘤、小鼠模型的自发性前列腺癌(Berrigan D，et al.Carcinogenesis 23：817-22，2002；Huffman DM，et al.CancerRes.67：417-24，2007；Pollard M，et al.Comp Med.56：461-67，2006)、人类的乳腺癌、结肠癌和前列腺癌的发病率(Platz EA，J Nutr.132：3471S-81S，2002；Demark-Wahnefried W，et al.Curr Opin Urol.17：168-74，2007；Torti DC，et al.Spots Med.34：363-69，2004；Steinbach G，et al.Cancer Res.54：1194-7，1994；Michels KB，et al.Jama，291：1226-30，2004)。
进化上高度保守TOR(target of rapamycin)整合由营养、生长因子、能源和压力产生的信号，调节代谢与合成过程(Fingar DC，et al.Oncogene，23：3151-71，2004)。在最佳生长因子和营养条件下，哺乳动物的TOR(mTOR)刺激细胞的合成上调(如核糖体合成和蛋白质翻译功能)，导致细胞体积数量增加和加速的增殖(Kim E，et al.Hum Gene Ther.14：1415-28，2003)。反之，通过生长因子撤出、CR或压力而抑制mTOR，导致的对高耗能的过程下调和抑制细胞增殖。
很多研究提出，TOR途径在由CR诱导芽殖酵母，线虫和果蝇的寿命延长起了很重要的作用(Kaeberlein M，et al.Science 310：1193-6，2005；PowersRW，et al.Genes Dev.20：174-84，2006；Vellai T，et al.Nature，426：620，2003；Kapahi P，et al.Curr Biol.14：885-90，2004；Jia K，et al.Development131：3897-906，2004)。因为TOR途径非常保守，它在衰老上的作用也有可能适用于人类。
线粒体/活性氧与衰老
线粒体是细胞器通过氧化磷酸化的过程消耗代谢燃料(如葡萄糖和脂肪酸)，生产可用的能源ATP。线粒体还参与了其他重要的细胞功能，例如钙稳态，细胞内信号转导和细胞凋亡的调控。
为生产ATP的线粒体氧化磷酸化过程，是活性氧(ROS)在细胞内的主要来源(约90％的细胞总ROS)(Balaban RS，et al.Cell，120：483-95，2005)。在正常氧化磷酸化过程中，ROS泄漏估计占氧消耗的1-5％(Chance B，et al.Physiol Rev.59：527-605，1979)。由于线粒体对线粒体DNA(mtDNA)有限的修复能力和与ROS的近距离，线粒体特别容易积累ROS损伤，其产生的mtDNA突变可后导致线粒体氧化磷酸化功能受损，从而增加了ROS的泄露和随后更多的突变积累。由于ROS是高活性氧分子，可以对细胞产生各种损害，ROS泄露-基因突变这一恶性循环，被认为推动了随着时间而呈现指数增长的氧化损伤，而导致各种功能逐渐衰退，符合衰老过程的特征。
很多证据支持这样的观点，ROS参与了许多与老年性疾病的发展，包括糖尿病、心血管病、癌症和帕金森氏症的疾病(Kovacic P，et al.Curr MedChem.8：773-96，2001；Aviram M.，et al.Am J Clin Nutr.71：1062-76，2000；Maassen JA，et al.J Endocrinol Invest.25：477-84，2002)；真核生物具有的抗氧化防御系统也支持了产生内源性活性氧的重要作用(Mates JM，Toxicology153：83-104，2000)；而超氧化物歧化酶和过氧化氢酶大量表达确实可以延长果蝇寿命(Orr WC，et al.Science 263：1128-30，1994)。
一些研究还表明，线粒体功能完整随年龄而下降，例如，线粒体膜电位，线粒体量和ATP产生/O2消费也一直随衰老而下降(Hagen TM，et al.ProcNatl Acad Sci U S A.94：3064-69，1997；Greco M.et al.Faseb J.17：1706-8，2003)。线粒体功能的突变可以造成很多人类遗传病，它们在临床表现上包括失明、耳聋、运动失调、痴呆、心血管疾病、肌肉无力、肾功能不全如糖尿病和内分泌失调。最近也有报道表明，老鼠携带一个由于在线粒体DNA聚合酶PoIgA的校对缺陷突变，表现出线粒体DNA突变的大幅度提高和显着的寿命缩短，同时表现出衰老的表型(Trifunovic A，et al.Nature 429：417-23，2004)。在酵母中由于TOR1去除导致的寿命延长(chronological life span)和在线虫中由于限制葡萄糖导致的寿命延长是通过线粒体呼吸(Bonawiz，N.D.，et al.，Cell Metab.，5：233-235(2007)；Schulz，T.J.，et al.，Cell Motab.，6：280-293(2007))。这些结果表明线粒体功能在哺乳动物的老化和老年性疾病的的重要作用。但是也有证据反对这个推测，例如，CR导致的酵母寿命延长不需要线粒体功能(Kaeberlei，M.，et al.，PloS Genet.，1，e69(2005))。所以，线粒体在衰老过程的作用仍旧不清楚。
染色体端粒，衰老，和癌症
染色体端粒(telomeres)是染色体上的最末两端，其中一条DNA链由含丰富的鸟嘌呤脱氧核苷酸(G)的重复DNA序列组成。(染色体)端粒与端粒蛋白结合，从而防止细胞错认端粒为普通的双链DNA断裂(DSBs)。
端粒功能障碍可以是因为端粒在细胞分裂中一点儿点儿缩短了，这是由于DNA复制酶的内在缺陷以及大多数的人体细胞缺乏端粒酶活性，最后，严重缩短端粒不能结合端粒蛋白质，因此暴露这个自然双链断口，激活DNA损伤反应和诱导以RB和p53依赖的细胞周期阻滞，这一过程被称为replicative senescence，或翻译为细胞分裂静止。这种分裂静止状态也可以由癌基因活化引起的DNA损伤信号所导致，从而抑制癌症的发展(Di Micro，R.，et al.，Nature，444：638-642(2006)；Bartkova，J.，et al.，Nature，444：633-637(2006))。此外，引起DNA损伤的试剂也被报道引起这种静止状态。
端粒功能障碍也可以是因为端粒蛋白功能不良而引起的。例如一个TRF2(TTAGGG结合)的显性负突变体的表达，或者POT1敲除，导致端粒功能障碍和DNA损伤信号(Karlseder J，et al.Science 283：1321-5，(1999)；Denchi EL，et al.Nature 448：1068-71，2007；Guo X，et al.Embo J.26：4709-19，(2007)).
长的端粒与人类长寿有关，而短的端粒与癌症、特发性肺纤维化以及很多不同的分裂组织的病变有关。例如，端粒酶突变引起先天性角化不良症，患者通常过早死于骨髓衰竭。
有证据表示分裂静止状是一个防止肿瘤发展的屏障，因为癌细胞需要无限制的细胞分裂。确实，分裂静止状的指标被发现出现在老鼠和人的癌前病变组织中，但不在晚期癌症组织中(Braig，M.，et al.，Nature，436：660-665(2005)；Collado，M.，et al.，Nature，436：642(2005)；Michalogou，C.，et al.，Nature，436：720-724(2005))；所有的癌细胞都能稳定端粒长度，通过活化端粒酶，或者端粒重组(ALT)，从而绕过细胞分裂静止状态(Shay JW，et al.ExpCell Res.209：45-52，1993；Shay JW，et al.Eur J Cancer 33：787-91，1997；KimNW，et al.Science 266：2011-5，1994；Bryan TM；et al.Nat.Med.3：271-4，1997)；早期前列腺瘤的恶性进展可以被分裂静止状态所阻挡(Chen Z，et al.Nature 436：725-30，2005)；此外，由p53介导的分裂静止状抑制了端粒酶缺陷Terc-/-小鼠的原发性肿瘤(Cosme-Blanco W，et al.EMBO Rep.8：497-503，2007)。分裂静止状态可能阻止细胞分裂周期，以利于修复，并阻断早期病变的进一步发展。
同时，分裂静止状态也被认为是衰老的重要贡献者(Campisi，J，Nat.Rev.Cancer.3：339-49；Faragher，RG，Biochem.Soc.Trans，28：221-6，2000)。例如，在哺乳动物组织中，分裂静止状态的细胞随年龄而增加(Campisi J，Cell120：1-10，2005)；分裂静止细胞被发现的地方恰好有老年性病症，如骨关节炎，动脉粥样硬化(Price JS，et al，Aging Cell，1：57-65，2002；Vasile E，et al，FASEB J，15：458-66，2001；Matthews C，et al，Cir Res，99：156-64，2006)；此外，在小鼠，长期活跃表达p53基因既促进细胞的分裂静止状态，加速衰老症状(Maier B，et al.Genes Dev.18：306-19，2004；Tyner et al.Nature 415：45-53，2002)；有报道也表明，分裂静止状态的细胞分泌一些蛋白质，促进肿瘤发展和炎症反应(Coppe JP，et al，PlosBiology，6：2853-68，2008)。有人建议，分裂静止程序导致与老年性疾病，限制了人的寿命(Blagosklonny MV，CellCycle，5：2087-102，2006)。因此，从染色体端粒的角度的抗衰研究目前着重于防止分裂静止状态。
尽管已有许多的研究，端粒在衰老过程的作用还是不清楚。例如，目前解释不了为什么老鼠有比人类长的端粒，但寿命比人类短；端粒在不分裂细胞中(如神经细胞和心脏细胞)怎样与衰老相关也不清楚。
除上述提到的三个衰老的理论，还有许多其他的理论，例如，损伤蛋白积累的理论，DNA突变积累的理论，干细胞衰竭理论等。上面哪个理论代表的老化过程的真实本质，以及他们是否和/或如何相互关联的目前仍不清楚。因此，至少在一定程度上，人类衰老的进程仍然是一个谜。
老年性疾病，如癌症、心血管疾病、神经退化疾病等，是人类死亡的主要原因，目前针对这些疾病的药物的发现和研发都根据我们目前对特定疾病的认识，因为对衰老过程的有限认识。因此，迄今为止，对这些疾病的研究相互独立，与老化过程也没有关联。因此，有必要制定一个基于衰老过程的系统方法，去发现新型抗衰老试剂用于预防和治疗老年性疾病或老年症。
发明内容
本发明提供了一个衰老过程的新机理，并根据新机制创建了一个识别或检测抗衰老剂，用于预防和治疗老年性疾病或老年症，这个新方法可以用已被充分认知的酵母突变体模型来快速进行高通量筛选抗衰老剂。本发明披露筛选出来的一系列候选药物，尤其是低剂量的雷帕霉素或它的衍生物，在防治老年性疾病或老年症的用法和用途。
本发明的一个方面提供了一个筛选鉴别、检测防治老年性疾病或老年症药物的方法，此法包括用分裂静止状模型去筛选一种或多种化合物或组合物，并测量它们的抗衰老活性。
另一方面，本发明提供了一个筛选鉴别、检测防治老年性疾病或老年症药物的方法，此法筛选一种或多种化合物或组合物，并用TOR/AMPK/线粒体/分裂静止途径的最少一个成分测量它们的活性。
另一方面，本发明提供了一个筛选鉴别、检测防治老年性疾病或老年症药物的方法，此法筛选一种或多种化合物或组合物，并用线粒体生物合成途径的最少一个成分测量它们的活性。
另一方面，本发明提供了一个筛选鉴别、检测防治老年性疾病或老年症药物的方法，此法筛选一种或多种化合物或组合物，并用AMPK途径的最少一个成分测量它们的活性。
另一方面，本发明提供了一个筛选鉴别、检测防治老年性疾病或老年症药物的方法，此法筛选一种或多种化合物或组合物，并用分裂静止途径的最少一个成分测量它们的活性，此化合物在不分裂细胞中维持分裂静止或细胞周期阻滞状态、防止分裂静止状退化以及随后的线粒体衰退或细胞死亡。
另一方面，本发明提供了防治老年性疾病或老年症的方法，这个方法给需要的个体一个组合物包括用本发明描述的方法筛选出来的试剂，或它的药学上可接受的盐、溶剂化物，或药物前体(prodrug)等等。
另一方面，本发明提供了防治老年性疾病或老年症的方法，这些老年性疾病与染色体端粒功能受损和/或线粒体功能受损有关；这个方法是给需要的个体一个组合物包括AMPK活化剂，或它的药学上可接受的盐、溶剂化物，或药物前体等，AMPK活化剂直接或间接活化AMPK，增加线粒体生物合成，在个体的分裂静止细胞或不分裂细胞中维持细胞分裂静止状。
另一方面，本发明提供了防治老年性疾病或老年症的方法，这个方法是给需要的个体一个组合物包括TOR抑制剂，或它的药学上可接受的盐、溶剂化物，或药物前体(prodrug)等等，低剂量TOR抑制剂可以(a)增加细胞分裂次数，(b)在分裂静止细胞或不分裂细胞中维持细胞分裂静止状，(c)防治分裂静止状态退化消失后线粒体损坏或细胞死亡。在这里，TOR抑制剂是指低剂量的雷帕霉素或它的衍生物。
另一方面，本发明提供了一个用酵母分裂静止模型来测量生物样品中的抗衰老剂的方法。
另一方面，本发明提供了测量生物样品中抗衰化试剂的生物浓度的方法，此法用酵母分裂静止模型，并对比与事先设立抗衰老试剂的标准浓度。
另一方面，本发明披露，线粒体功能在维持染色体端粒功能障碍引起的分裂静止状态起了重要作用，热量限制(CR)通过TOR/AMPK/线粒体/分裂静止途径维持分裂静止状。这个机理从酵母到人的染色体端粒功能障碍模型中都是进化上保守的。这个保守机理使得这些酵母和人的染色体端粒功能障碍模型可以用于筛选药物，针对提高线粒体活性、防止、治疗分裂静止状退化。因为许多老年性疾病与线粒体和/或端粒功能障碍有关，用这些模型得到的试剂可以用于此防治类老年性疾病。目前抗衰老研究的主流是禁止分裂静止状态的发生，这是基于分裂静止状态是衰老的主要的促进者这样的概念；本发明报道了一个创新的防治老年性疾病或老年症的策略，即维持分裂静止状态。
本发明的其他方面在下面的说明和权利要求中有详细的描述。
附图说明
图1显示限制营养信号抑制cdc13-1p灭活引起的细胞死亡。(A)葡萄糖限制和2-脱氧葡萄糖抑制cdc13-1p灭活引起的细胞死亡，细胞死亡用菌落形成法测量。为了使染色体端粒功能失活，cdc13-1细胞的新鲜过夜培养液用YEPD培养基稀释，葡萄糖浓度和2-脱氧葡萄糖浓度如图所示，37℃培养24小时以灭活cdc13-1p。菌落形成法如下，cdc13-1p灭活的细胞用水作一系列10-倍稀释，取5μl点在普通YEPD培养板上，培养板在24℃培养，让存活的细胞形成菌落。起始用的活细胞数也用此法测量。(B)氮限制抑制cdc13-1p灭活引起的细胞死亡(菌落形成法测量)。细胞培养在合成培养基(SC)、或SC-N(SC去氨基酸和(NH)2SO4)中，37℃培养24小时，存活细胞数如图1A用菌落形成法测量。(C-D)低剂量(低于抑制细胞生长的浓度)雷帕霉素抑制TOR(标示为Rapa)抑制cdc13-1p灭活引起的细胞死亡。cdc13-1细胞在含如图所示的雷帕霉素的浓度YEPD培养基中37℃培养24小时，存活细胞数如图1A用菌落形成法测量。为得到生长曲线，用含如图所示的雷帕霉素的浓度YEPD培养基在24℃培养cdc13-1细胞，在图所示的时间测量的细胞密度(OD595)相对时间作图。(E)细胞周期阻滞的cdc13-1的丢失可以被雷帕霉素(1nM)和葡萄糖限制(0.5％葡萄糖)推迟，存活细胞数用菌落形成法测量。数据代表3次实验的平均数。
图2显示营养信号不影响灭活cdc13-1p引起的在G2/M的细胞周期阻滞，但维持这个G2/M周期阻滞状态，并防止细胞死亡。(A)培养在YEPD、YEPD+1nM雷帕霉素、或0.5％葡萄糖YEPD的cdc13-1细胞用37℃灭活cdc13-1p，在所示的时间点，取一部分细胞用50％乙醇在-20℃固定4小时，用0.2mg/ml RNaseA(Tris pH7.6)在37℃消化过夜，细胞用50mM Tris pH7.6洗过后，再用蛋白酶K在55℃处理2小时，然后清洗；细胞用100μg/ml碘化丙啶染色在黑暗中染色20分、FACS分析(B)细胞存活实验表示，cdc13-1p灭活引起的的在G2/M分裂停止2小时后，雷帕霉素或葡萄糖限制仍然可以抑制细胞死亡。cdc13-1细胞先在37℃孵化2小时，然后转入在37℃的YEPD、YEPD+雷帕霉素、或0.5％葡萄糖YPED。细胞在37℃培养22小时，存活细胞数用菌落形成法测量。
图3显示雷帕霉素(1nM)和葡萄糖限制(0.5％)降低cdc13-1p灭活而产生的ROS(ROS用脱氢罗丹明123(Invitrogen)染色，然后FACS分析)(A)，并降低细胞凋亡(用annexin V-FITC和FACS测量凋亡标记磷脂酰丝氨酸(PS)翻转(B)。A.细胞培养如同在图1A和1C所示，然后用5μg/ml脱氢罗丹明123在YEPD中染色1小时再FACS分析测量ROS。每个样本分析10,000细胞。B.测量细胞凋亡-处理好的细胞，悬浮于含1.1M山梨醇和2mg/ml zymolyase的PBS缓冲液中，37℃孵育20分，细胞用annexin V-FITC和碘化丙啶染色(在含1.1M山梨醇的PBS中)(BD BiosciencesPharmingen)。每个样本分析了10,000细胞。在此条件下，碘化丙啶-阴性群体表示完整细胞，碘化丙啶-阴性+FITC阳性代表凋亡细胞，碘化丙啶-阳性+FITC阳性代表晚期凋亡细胞或坏死细胞。
图4显示雷帕霉素和葡萄糖限制通过AMPK防止cdc13-1p灭活引起的细胞死亡。(A)去除AMPK调节亚基蛋白Sip2p取消了葡萄糖限制的作用。(B)去除AMPK的催化亚基蛋白Snf1p或调节亚基Snf4p显著的降低了雷帕霉素(1nM)的作用。cdc13-1sip2::Kan，cdc13-1snf1::kan和cdc13-1snf4::Kan双突变细胞是这样得到的：杂交从单个基因敲除库(Invitrogene，Carlsbad，CA)中来的单个基因敲除突变体与cdc13-1，培养单倍体的孢子并分离，筛选高温敏感和G418(200ug/ml)抗性的孢子。细胞培养如同在图1A和1C所示，存活细胞用菌落形成法来测量。
图5显示线粒体在热量限制预防cdc13-1死亡起的重要作用。(A)线粒体缺陷显著抑制雷帕霉素和葡萄糖限制的作用。cdc13-1培养在含溴乙啶的YC培养基来得到线粒体缺陷突变体ρo(Qi，H.，et al，J.Biol.Chem..，278：15136-15-41(2003))。细胞培养如同图1A和1C。存活细胞用菌落形成法来测量。(B-C)葡萄糖限制和雷帕霉素提高线粒体量。新鲜的过夜培养液用以下培养基稀释：YEPD，或YEPD+雷帕霉素(B)，YEPD，0.5％葡萄糖YEPD(C)，细胞在24℃培养4小时或到对数生长阶段，细胞被60％乙醇固定，MitoTracker Green FM染色，FACS分析，测量线粒体量。
图6显示营养信号通过TOR、AMPK、和线粒体来维持分裂静止状、在酵母cdc13-1模型中防止端粒功能障碍引起的细胞死亡的机理。
图7显示一些试剂抑制分裂静止的WI-38细胞的损失，这些试剂包括50pM雷帕霉素，250μM AICAR，20μg/ml儿茶素(EGCG)，1.6μg/ml葡萄籽提取物(GSE)，减少葡萄糖(从0.4％减到0.2％)，20μg/ml覆盆子提取物(BE)，1μM异硫氰酸烯丙酯(AITC)，和12.5μM 2-脱氧葡萄糖。AICAR和0.2％葡萄糖的用法是2天有/8天无的周期，其他的试剂是用3天有/7天无的周期。实验始于第29细胞传代(passage 29)。培养基每3天换一次，第31传代进入分裂静止状态。进入静止状态56天后，细胞用2％甲醛/0.2％戊二醛很快固定一下，用X-gal染色(溶液含1mg/ml X-gal，40mM柠檬酸/磷酸盐，pH6.0，5mM亚铁氰化钾，5mM铁氰化钾，150mM NaCl，1mM MgCl2)，37℃，18小时，测量细胞的β-半乳糖苷酶活性(彩照中为蓝色，黑白照中卫深灰色)。存活的静止状态细胞用显微镜观察。
图8显示低剂量雷帕霉素在人成纤维细胞中提高线粒体量，促进线粒体膜潜能，并降低ROS水平。(A)测量线粒体量：在传代24的WI-38细胞中加入不同浓度雷帕霉素培养2天。细胞-20℃用60％乙醇固定，用MitoTrackerGreen FM(Invitrogene)染色30分然后FACS分析。(B)测量线粒体膜潜能：在人淋巴细胞L40中加入不同浓度雷帕霉素培养2天，用5ug/ml JC-1(Invitrogene)在黑暗中染色15分。细胞用PBS缓冲液洗一次，然后FACS分析。用FL1测量单体JC-1的绿色荧光(λem＝525nm)，FL2测量聚合体JC-1的红色荧光(λem＝590nm)。FL2/FL1或红色/绿色的比例表示线粒体的膜潜能。只有正常细胞的数据被采用，正常细胞选定是根据不加试剂的样本中的细胞正向和侧向散射。(C)测量ROS。加药培养的L40细胞用2ug/ml的dehydrorhodamine 123染色30分，然后FAC分析。在以上的每一个实验中，至少10,000细胞被分析，数据代表两次实验的平均。
图9显示只有低剂量雷帕霉素(低于生长抑制剂量)可以防止分裂静止细胞WI-38损失。(A)传代29的WI-38细胞被加入图7表示的雷帕霉素的浓度，细胞在传代31的时候进入分裂静止状态，进入静止状态以后的第65天，存活细胞用MTT染色方法来测量。微孔皿酶标仪可在570纳米处读出紫色的深浅度，它由线粒体还原酶催化MTT产生的。这个数据代表三个独立的双实验。(B)雷帕霉素对WI-38细胞生长的作用。细胞培养如图7所示，箭头表示雷帕霉素在此时加入。25pM雷帕霉素对生长几乎没有抑制作用，但增加细胞分裂的次数(PD)从5.18到6.82。细胞分裂次数用以下公式来计算：PD＝log(Nf/N0)/log2，Nf为最终总细胞数，N0为起始总细胞数。数据代表两次独立的双实验。(C)低剂量的雷帕霉素增加以下蛋白的含量：p53，p21，和pRB。WI-38细胞在分裂静止状态第20天时，加雷帕霉素培养18小时。裂解细胞，用免疫印记(Western blotting)，通过抗体特异性反应，分析p53，p21和pRB的蛋白含量。
图10显示通过以下方法处理2天，人的淋巴细胞L40中增加线粒体量，(A)10μM LY294002(PI3K抑制剂)，2μM二烯丙基三硫(DATS)，1μM苄基异硫氰酸酯(BITC)，1μM苯基异硫氰酸酯(PITC)，2μg/ml白藜芦醇(RSV)，0.03μM番茄红素(lycopene)，(B)6.7μM异硫氰酸苯(PEITC)，5mM水飞蓟宾(silibinin)，1.25mM亚硒酸钠，2.5mM染料木素(genistein)，250μg/ml GSE，50μg/ml EGCG，3mg/ml BE，1μM AITC，50pM雷帕霉素，250μM AICAR，或葡萄糖减少(从0.4％到0.2％)。测量线粒体量-细胞用60％乙醇固定后，用MitoTracker Green FM染色，再FACS分析。
图11显示一些防癌剂或有抗衰老活性的试剂抑制cdc13-1p灭活引起的细胞死亡。6.7μM PEITC，5mM水飞蓟宾，1.25mM亚硒酸钠，2.5mM染料木素，250μg/ml GSE，50μg/ml EGCG，或3mg/ml BE与细胞共培养30小时。细胞存活用24℃菌落形成法测量。
图12显示低剂量雷帕霉素和AICAR扭转TPA降低的线粒体量。NIH3T3细胞用DMEM培养基培养，DMEM含有10％小牛血清，100单位/毫升盘尼西林，100μg/ml链霉素，2mM谷氨酰胺，DMSO对照、10μM TPA、1nM雷帕霉素、10μM TPA+1nM雷帕霉素，40μM AICAR、或10μM TPA+40μMAICAR加入培养基培养细胞(37℃、5％CO2)2天。细胞用胰酶收获、60％乙醇固定、MitoTracker Green FM在黑暗中染色30min，然后FACS分析。显示的数据是3次试验的平均结果。
图13显示低剂量雷帕霉素和AICAR防止TPA诱导的NIH3T3细胞的癌转化。(A)NIH3T3细胞培养在含10μM TPA的0.39％软琼脂中，对照DMSO、1nM雷帕霉素、或250nM AICAR被加入培养基中，培养7天，在显微镜下癌细胞克隆。(B)数据显示4次试验的平均。
图14显示低剂量雷帕霉素，0.2和2pM培养的延长小脑神经元细胞(CGN)细胞的寿命(A)并降低ROS水平(B)CGN细胞从7-天大的新生大鼠提取。简单的说，把小脑从大脑分离出来，切成小块，胰酶消化37℃15分，用40-μm孔膜过滤，细胞离心沉淀，再用含25mM KCl的B27神经细胞悬浮液(supplemented neurobasal medium)悬浮。(A)细胞寿命试验，细胞种在24-孔培养皿中(1皿/1小脑)加入神经元培养液(含B27，20mM KCl，0.5mM谷氨酸，100单位/毫升的盘尼西林，100μg/ml链霉素)。培养7天后，加入雷帕霉素，31天后存活的细胞用MTT测量。(B)ROS水平。悬浮在培养液中的CGN细胞分装在试管(12x75mm)中(1百万/ml/试管)，加入雷帕霉素培养20小时，细胞用2μg/ml的脱氢罗丹明123染色30分，然后FACS分析。
图15显示低剂量的雷帕霉素在大鼠脑卒中模型中减少大脑梗死体积。(A)10μg/kg雷帕霉素减少大脑损伤。以大脑中动脉梗塞(MCA)造成局灶性脑缺血。SHP-SP大鼠随机分成2组、每组8只：对照组和雷帕霉素组，给药10分后造模。MCA24小时后取大脑切片(2mm厚)，切片用2％的TTC(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride)染色，梗死细胞不能被染色，正常细胞染为红色。每片切片的梗死面积和正常面积用一个图像分析软件(Microsystems Type DM LB2，Leica，德国)来定量。大脑水肿对分析的干扰也被校正(在同一切片内，通过从对侧大脑半球减去无缺血的同侧大脑半球)。梗死面积表达为占对侧大脑半球比例。(B)一些低剂量的雷帕霉素减少大脑梗死造成的脑损伤。SHP-SP大鼠随机分组、每组8只。雷帕霉素0，0.3，1，3，10μg/kg给药20天，然后造模MCA。
图16显示低剂量雷帕霉素降低在WI-38细胞中MPP+引起的ROS水平。MPP+(200μM)和不同浓度的雷帕霉素加入细胞并培养3天。细胞用脱氢罗丹明123在黑暗中染色30分，然后进行FACS分析。
图17显示低剂量雷帕霉素在10μg/kg，而非100μg/kg，减少大鼠心肌梗死体积(MI)。SD雄性白化大鼠Sprague-Dawley在200-250g被随机分组，每组(n)10-12只，用0，10，或100μg/kg的雷帕霉素给药3天，然后麻醉老鼠，剥露心脏，结扎左前降动脉(在肺动脉流出道和左心房之间)，心脏放回去，缝合胸腔，去除空气，大鼠回笼。5个小时后，解剖老鼠，左心室被分出，垂直心脏长轴切成4-5片，然后用硝基四氮唑蓝磷酸盐缓冲液染色。正常组织呈蓝色，梗死组织不能被染色。染色和不被染色的组织被分别分离出来并称重。心肌梗死体积(MI)表达为不染色组织占左心室的比例。
图18显示葡萄糖或TOR调节衰老过程的模型，在多种组织中是通过AMPK/ROS/线粒体途径，导致老年性疾病。
图19图示了一个高通量筛选抗衰老试剂的方法，用酵母的存活来测量。
图20图示了一个高通量筛选抗衰老候选物的方法，用酵母的ROS水平来测量
图21显示用cdc17-1或cdc17-2来筛选抗衰老试剂的的例子。突变细胞用含雷帕霉素0，1，3nM的YEPD培养基、或0.5％葡萄糖的YEPD，37℃培养22hrs。细胞被10-倍系列稀释，点在YEPD培养板上，24℃培养，存活细胞将形成菌落。
具体实施方式
本发明描述一个创新的方法，筛选鉴别、检测和提纯抗衰老试剂，以及这些试剂在防治老年性疾病或老年症的用途。本发明基于，尤其是，以下的发现：(1)抑制营养信号在酵母中延长端粒功能障碍引起的分裂静止状态，通过AMPK下游的线粒体途径；(2)低剂量雷帕霉素、葡萄糖限制和AMPK激活剂在人成纤维细胞中刺激线粒体活性，延长端粒功能障碍引起的分裂静止状；(3)一些具某些抗衰老或防癌功能的试剂也能刺激线粒体功能，防止分裂静止的酵母和人细胞死亡；(4)许多老年性疾病或老年症与线粒体或端粒功能障碍有关，以及(5)低剂量雷帕霉素防止急性缺血性心肌损伤(心肌梗死)和缺血性大脑损伤(脑卒中)，降低MPP+引发的ROS升高，延长培养的神经元细胞的寿命，并防止细胞的癌转化。
第一部分，本发明提供了一个方法，筛选鉴别和检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法包括用分裂静止状模型筛选一个或多个化合物或组合物，跟踪它或它们的抗衰老活性。
在第一部分的一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的抗衰老活性是指在分裂静止状或不分裂细胞中可以防止分裂静止状态退化丧失。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的抗衰老活性是可以指刺激、增进或维持线粒体功能。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的抗衰老活性是指可以防治与线粒体或端粒功能障碍有关的老年性疾病。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的抗衰老活性是指可以可以防止端粒功能障碍引起的ROS升高或由端粒功能障碍引起的细胞凋亡增加。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止模型指酵母突变体的模型，含端粒功能障碍。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止模型指元代人体细胞系的模型，缺乏或不足端粒酶活性。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止模型指人体细胞系的模型，含端粒蛋白或端粒酶变异缺陷引起的端粒功能障碍或丧失。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的端粒功能障碍模型是由化学试剂引起的。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别和检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止模型是由癌基因活化和/或DNA损失反应引起的。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止模型指小鼠、大鼠或S.Pombe细胞株，含端粒功能功能缺陷。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防止老年性疾病或老年症，此方法包括以下的步骤：
(i)由端粒功能障碍或DNA损伤引起的分裂静止状的态酵母细胞与一个化合物或组合物一起孵化一段时间后；
(ii)用细胞凋亡实验测量死亡酵母细胞数量，或者，
(iii)去除引起细胞分裂静止的条件，测量存活细胞数；以及
(iv)与对照实验比较步骤ii的细胞死亡数或步骤iii的细胞存活数，所述对照实验除了没有化合物或组合物外，其他条件均与步骤i相同，
其中，如果相对于对照实验，步骤ii得到减少的死亡细胞数，或者步骤iii得到增加的存活细胞数，则表明此化合物或组合物是一个候选的抗衰老剂。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法也可以包括以下的步骤：
(i)将鉴别出的化合物或组合物与分裂静止状哺乳动物细胞一起孵化一段时间后；
(ii)测量存活的分裂静止状细胞数；和
(iii)与对照实验比较存活的分裂静止细胞数数量
其中，相对于对照实验，如果步骤ii中存活的分裂静止细胞数量增加，则确认此化合物或组合物是一个候选的抗衰老剂。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法也可以包括以下的步骤：
(i)将鉴别出的化合物或组合物与正常生长的人体细胞株一同孵育一段时间；
(ii)通过测量线粒体量、线粒体DNA含量、或线粒体转录因子的表达来测定人体细胞的线粒体生物合成，和
(iii)与对照实验比较得到结果，
其中，相对于对照实验，如果步骤ii得到增强的线粒体生物合成，则进一步确认鉴别出的化合物或组合物为候选的抗衰老剂。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法也可以是以上3个实施例的的步骤任意组合。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止状模型是含端粒功能障碍或丧失的变异酵母，包括cdc13-1，cdc13-2，stn1-1，cdc17-1，cdc17-2，hdf1，hdf2，est1，est2，和est3.
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止状模型是缺乏或不足端粒酶的元代人体细胞系，最少包括成纤维细胞，内皮细胞，外皮细胞中的一种。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止状模型是人体变异细胞引起的端粒功能障碍，包括变异在TRF2，POT1，TERT，TERC，或WRN等基因。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的分裂静止状模型是化合物引起的端粒功能障碍，包括博莱霉素，阿得瑞霉素(adiramycin)，和G4结构配体。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的老年性疾病是指非正常细胞增生疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第一部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测化合物，用以防治老年性疾病或老年症，此方法中的化合物或组合物可以属于一个化合物库。所以，本发明优选是实施例包括高通量筛选的方法。
第二部分，本发明提供了一个实施例，筛选鉴别或检测防防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法包括用筛选一个或多个化合物或组合物，并测量它或它们对TOR/AMPK/线粒体/分裂静止状途径中的至少一个组成成分的作用，在这里，此化合物或组合物(a)增加细胞分裂次数，(b)在不分裂细胞中维持分裂静止状态或细胞周期阻滞状态，(c)或防止线粒体功能退化或由于分裂静止状态/细胞周期阻滞状态的退化引起的细胞死亡。本发明的这一部分与第一部分相关，即抗衰老活性与TOR/AMPK/线粒体/分裂静止状途径有关，并维持分裂静止状态。
在第二部分的一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防防治老年性疾病或老年症的化合物，所述的老年性疾病或老年症，与分裂静止细胞和不分裂细胞的分裂静止状态退化、和接下来的细胞死亡有关，以及与线粒体退化的加速、ROS的增加和端粒功能障碍相关。
在第二部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中所说的TOR/AMPK/线粒体/分裂静止状途径中的组成成分包括胰岛素/IGF，胰岛素/IGF受体，PI3K，PDK1，PTEN，TSC1，TSC2，AKT，Rheb，raptor，GβL，S6K，TOR，AMPK，STRAD，MO25，LKB1，葡萄糖吸收，氨基酸吸收，CaMKKβ，PGC-1α，PGC-1β，NRF-1，NRF-2，TFAM，TFB1M，TFB2M，ERRs(如EERα，EERbα，ERRγ)，PPARs(如PPARα，PPARδ，PPARγ)，SIRT1，RIP140，PRC，POLRMT，ATM，p53，p21，p19ARF，WAF1，p16INK4a，pRB，PTEN，E2F，p27KIP1。
在第二部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的老年性疾病或老年症是指细胞非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第二部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的一个或多个化合物或组合物，每个可属于一个化合物库。
第三部分，本发明提供了一个实施例，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法包括用筛选一个或多个化合物或组合物，并测量它或它们对线粒体生物合成途径中的至少一个组成成分的作用，在这里，此化合物或组合物(a)增加细胞分裂次数，(b)在不分裂细胞中维持分裂静止状态或细胞周期阻滞状态，或(c)防止线粒体功能退化或由于分裂静止状态退化引起的细胞死亡。本发明的这一部分与第一部分相关，即抗衰老活性与线粒体生物合成途径有关，它在维持分裂静止状起作用。
在第三部分的一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的老年性疾病或老年症是指与在分裂静止细胞中或不分裂细胞中由分裂静止状态退化引起的细胞死亡有关的疾病、与加速的线粒体功能退化、增大的氧化压力、或端粒功能障碍有关的疾病。
在第三部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中所说的线粒体生物合成途径中的组成成分包括AMPK，STRAD，MO25，LKB1，葡萄糖吸收，氨基酸吸收，CaMKKβ，PGC-1α，PGC-1β，NRF-1，NRF-2，TFAM，TFB1M，TFB2M，ERRs(如EERα，EERbα，ERRγ)，PPARs(如PPARα，PPARδ，PPARγ)，SIRT1，RIP140，PRC，POLRMT。
在第三部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的老年性疾病或老年症是指非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第三部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的一个或多个化合物或组合物，每个可属于一个化合物或组合物库。
第四部分，本发明提供了一个实施例，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法包括用筛选一个或多个化合物或组合物，并测量它或它们对AMPK途径中的至少一个组成成分的作用，在这里，此化合物或组合物(a)增加细胞分裂次数，(b)在不分裂细胞中维持分裂静止状态或细胞周期阻滞状态，或(c)防止线粒体功能退化或由于分裂静止状态退化引起的细胞死亡。本发明的这一部分与第一部分相关，即抗衰老活性与AMPK途径有关，它在维持分裂静止状起作用。
在第四部分的一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中所说的老年性疾病或老年症与分裂静止状态退化、衰老引起的细胞丧失、肿瘤形成或癌症发展恶化有关。
在第四部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中所说的AMPK途径中的组成成分包括AMPK，STRAD，MO25，LKB1，和CaMKKβ。
在第四部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的老年性疾病或老年症是指非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第四部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的一个或多个化合物或组合物，每个可属于一个化合物或组合物库。
第五部分，本发明提供了一个实施例，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法包括用筛选一个或多个化合物或组合物，并测量它或它们对分裂静止状途径中的至少一个组成成分的作用，在这里，此化合物或组合物在不分裂细胞中维持分裂静止状态或细胞周期阻滞状态，或防止线粒体功能退化或由于分裂静止状态退化引起的细胞死亡。本发明的这一部分与第一部分相关，即抗衰老活性与分裂静止状途径有关，它维持分裂静止状。
在第五部分的一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中所说的老年性疾病或老年症与分裂静止状态退化、在分裂静止细胞中或不分裂细胞中由分裂静止状态退化引起的细胞死亡、与加速的线粒体功能退化、增大的氧化压力、或端粒功能障碍有关。
在第五部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中所说的分裂静止状途径中的组成成分包括ATM，p53，p21，p19ARF，WAF1，p16INK4a，pRB，E2F，PTEN，p27KIP1。
在第五部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的老年性疾病或老年症是指非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第五部分的另一个实施例，本发明提供了一个方法，筛选鉴别或检测防治老年性疾病或老年症的化合物，此方法中的一个或多个化合物或组合物，每个可属于一个化合物或组合物库。
第六部分，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此法包括给需要的个体一种组合物，其含有一个根据以上描述的第一到第五方面实施例筛选出的化合物，或它的药学上可接受的盐、溶剂化物、或药物前体。这个方面包含用以上所述方法筛选的化合物来配成或成药用于防治老年性疾病。
在第六部分的一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此法中所说的老年性疾病或老年症与在分裂静止细胞中或不分裂细胞中的分裂静止状态退化、线粒体功能退化、或端粒功能障碍相关。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的化合物可以是无机分子、有机分子、天然化合物、多肽、蛋白、DNAs、RNAs、或代谢中间体等。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的化合物可以是AICAR，低剂量雷帕霉素或它的衍生物，EGCG，葡萄籽提取物，覆盆子提取物，亚硒酸钠，染料木素，二烯丙基三硫，苯基异硫氰酸酯，苄基异硫氰酸酯，异硫氰酸苯乙酯，白藜芦醇，番茄红素，异硫氰酸烯丙酯。
在第六部分的一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中可以含第二种化合物，包括抗氧化、防高血压的、降低血脂的、防治中风的、防癌的、或另一个抗衰老试剂。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中的、第二种化合物中的抗氧化剂，可以是维他命C、维他命E、β-胡萝卜素、其他类胡萝卜素、亚硒酸钠，硫辛酸、番茄红素、叶黄素、玉米黄质、辅酶Q10、谷胱甘肽、N-乙酰半胱氨酸、褪黑色素、染料木素、雌二醇、茶提取物、葡萄籽提取物等。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中也包括一个药学上可接受的载体。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物可以是口服剂，针剂，外敷剂，皮肤渗透剂，栓剂，或喷雾剂。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的老年性疾病或老年症是指非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的老年性疾病或老年症可以是肿瘤形成和癌症的发展恶化，神经退化性疾病，心肌梗死，心脏衰竭，血管硬化，高血压，骨性关节炎，骨质疏松，肌肉萎缩，骨髓衰竭，白内障，多发性硬化，干燥综合征，类风湿关节炎，免疫功能退化，糖尿病，特发性肺纤维化，老年性黄斑变性，小脑梗死，中风，老年痴呆症，帕金森病，亨廷顿氏症，以及由睾丸激素、雌性激素、生长激素、IGF-I或能量生产的退化引起的功能障碍。
在第六部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的所示说的需要的个体是指一种哺乳动物。
在第六部分的另一个方面，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的所述的需要的个体是指人。
第七部分，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此法包括给需要的个体一种组合物，其含AMPK激活剂，或它的药学上可接受的盐、溶剂化物、或药物前体，其直接或间接活化AMPK，增加线粒体生物合成，在不分裂细胞中和分裂静止细胞中维持分裂静止状态。本发明的这一部分是用一个AMPK激活剂来制备或生产一个药剂，用以防治老年性疾病或老年症。本发明的这一部分与第六部分相关，即筛选出的化合物为一个AMPK激活剂。
在第七部分的一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此法中所说的老年性疾病或老年症与线粒体功能退化或丧失、端粒功能障碍、在分裂静止细胞中或不分裂细胞中的分裂静止状态退化、或衰老细胞的死亡相关。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此法中所说的AMPK激活剂可以选择于AICAR，二甲双胍，2-脱氧葡萄糖，3-O-甲基葡萄糖，LY294002，黄连素，苯乙双胍，A769662，噻唑烷二酮，地塞米松，他汀类药物，瘦素，脂联素，西洛他唑，EGCG，亚硒酸钠，异硫氰酸烯丙酯，异硫氰酸苯乙酯。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中可以含第二种化合物，可以从抗氧化剂、防高血压的、降低血脂的、防治中风的、防癌的、或另一个抗衰老试剂中选择。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中也可以包括一个药学上可接受的载体。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的老年性疾病或老年症是指非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，和功能减弱症。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的老年性疾病或老年症可以是肿瘤形成和癌症的发展恶化，神经退化性疾病，心肌梗死，心脏衰竭，血管硬化，高血压，骨性关节炎，骨质疏松，肌肉萎缩，骨髓衰竭，白内障，多发性硬化，干燥综合征，类风湿关节炎，免疫功能退化，糖尿病，特发性肺纤维化，老年性黄斑变性，小脑梗死，中风，老年痴呆症，帕金森病，亨廷顿氏症，以及由睾丸激素、雌性激素、生长激素、IGF-I或能量生产的退化引起的功能障碍。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的所示说的需要的个体是指一种哺乳动物。
在第七部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的所示说的需要的个体是指人。
第八部分，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法包括给需要的个体一种组合物，其含有低剂量TOR抑制剂，或它的药学上可接受的盐、溶剂化物、或药物前体，它能(a)增加细胞分裂次数，(b)在不分裂细胞中维持分裂静止状态或细胞周期阻滞状态，或(c)防止由于线粒体功能退化或分裂静止状态退化引起的细胞死亡。本发明的这一部分是用一个低剂量TOR抑制剂、它的药学上可接受的盐、溶剂化物、或药物前体来制备或生产一个药方，用以防治老年性疾病或老年症。本发明的这一部分与第六部分相关，即筛选出的化合物为一个TOR抑制剂。
在第八部分的一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的老年性疾病或老年症与线粒体功能退化或丧失、端粒功能障碍、在分裂静止细胞中或不分裂细胞中的分裂静止状态退化、或衰老细胞的死亡相关。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的低剂量mTOR抑制剂是雷帕霉素或一个它的类似物。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的低剂量TOR抑制剂是雷帕霉素或它的一个类似物，后者可以选择于：Deforolimus，AP-23675，AP-23841，Zotarolimus，CCI779/Temsirolimus，RAD-001/Everolimus，7-epi-雷帕霉素，7-硫代甲基-雷帕霉素，7-epi-三甲基-雷帕霉素，2-脱甲基-雷帕霉素，42-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素，或一个药学上可接受的盐、溶剂化物、或药物前体。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的TOR抑制剂是低剂量雷帕霉素、它的一个药学上可接受的盐、有机物、或药前体。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的TOR抑制剂雷帕霉素的低剂量，在血清、培养基中为0.1到10000pM，在动物中为0.1到10000ng/kg/天。令人惊奇的是，不同于细胞生长的抑制功能，雷帕霉素在低剂量时展现全新的作用，尽管在目前的临床剂量下(1mg/天到5mg/天)，雷帕霉素是一个免疫抑制剂，可以在G1细胞周期抑制细胞生长，也有可能作用在其他的靶点蛋白。结果，临床剂量的雷帕霉素有很多副作用，例如升高血液中的胆固醇、三脂甘油，肾脏功能受损，贫血，伤口愈合受损，腹泻，乏力、高血压，疼痛，恶性瘤发展，肝脏肿瘤恶化，腹水，生长发育不良，精神状态改变，脾梗塞，和结肠炎，等等。在本发明中，用低剂量的雷帕霉素可以避免这些副作用。
雷帕霉素或它的类似物的有效剂量也许取决于这个特定的化合物、给药方式、特定的疾病、以及被治疗个体的身体条件等。当雷帕霉素在0.01到50μg/天的口服给药剂量是，可能得到最佳效果。这个剂量是目前临床剂量(1mg/天到5mg/天)的0.001％到5％；同时与本发明的方法相匹配，给药的安排将为连续给药2-4天，然后连续2-5天不给药，这样的安排可以进一步降低雷帕霉素的副作用。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的低剂量雷帕霉素或它的类似物为低于10％，8％，6％，4％，2％，1％，0.1％，0.01％，或0.001％左右的目前的临床用药剂量。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量8％到10％。
在第八部分的另一个方面实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量6％到8％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量4％到6％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量2％到4％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量1％到2％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量0.1％到1％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量0.01％到0.1％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量0.001％到0.01％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的雷帕霉素或它的类似物给药剂量是目前的临床用药剂量0.0001％到0.001％。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所述的低剂量雷帕霉素是以纯化的化合物来给药。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的低剂量雷帕霉素是以粗提纯物来给药，其含雷帕霉素。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的低剂量雷帕霉素是以非纯化的发酵液给药，其含雷帕霉素。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的低剂量雷帕霉素是以非纯化的产生雷帕霉素的菌丝体吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)为主体，其含雷帕霉素。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中可以含第二种化合物，可以从抗氧化剂、防高血压的、降低血脂的、防治中风的、防癌的、和另一个抗衰老试剂中选择。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中可以进一步含有抗氧化剂，用以控制细胞内和线粒体内的活性氧水平。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物中的、第二种化合物中的抗氧化剂，可以是维他命C、维他命E、β-胡萝卜素、其他类胡萝卜素、亚硒酸钠，硫辛酸、番茄红素、叶黄素、玉米黄素、辅酶Q10、谷胱甘肽、N-乙酰半胱氨酸、褪黑色素、染料木素、雌二醇、茶提取物、葡萄籽提取物等。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中所说的组合物可以是口服剂，针剂，外敷剂，皮肤渗透剂，栓剂，或喷雾剂。
在第八部分的另一个实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的老年性疾病是指非正常细胞增殖疾病，退化性疾病，或功能减弱症。
在第八部分的另一个优选实施例，本发明提供了一个防治老年性疾病或老年症的方法，此方法中的老年性疾病可以是肿瘤形成和癌症的发展恶化，神经退化性疾病，心肌梗死，心脏衰竭，血管硬化，高血压，骨性关节炎，骨质疏松，肌肉萎缩，造血功能丧失，白内障，多发性硬化，干燥综合症，类风湿关节炎，免疫功能退化，糖尿病，特发性肺纤维化，老年性黄斑变异，小脑梗死，中风，老年痴呆症，帕金森病，亨廷顿氏症，以及由睾丸激素、雌性激素、生长激素、IGF-I或能量生产的退化引起的功能障碍。
第八部分的另一个优选实施例，即本发明提供了一个防治老年性疾病的方法，其中所述的化合物是低剂量雷帕霉素或它的衍生物，其中所述的老年性疾病或老年症是肿瘤形成或癌症恶性发展、帕金森氏症、中风、小脑梗死、或心肌梗死。
第八部分的另一个优选实施例，即本发明提供了用低剂量雷帕霉素维持延长细胞的分裂静止状态，此状态可以由衰老的染色体端粒的功能缺陷丧失、癌基因活化、或DNA损伤剂(如ROS，抗癌药物，UV或放射性辐射)引起，因为同样的分裂静止状态的机理参与了这些过程，即通过DNA损伤反应。本发明的方法可以用以治疗各种良性肿瘤、防止肿瘤恶化。此方法可以用以得癌症的高危险人群，如老年人，与致癌剂经常接触的人群，或经常暴露在UV或放射性辐射的人群；此方法也可以用于正在服用某药物，其可以增加患癌几率，如在用激素替代疗法的妇女。此方法也可以用于正在进行某种化疗的癌症病人，其化疗可能引起二级癌症。
第八部分的另一个优选实施例，即本发明提供了用低剂量雷帕霉素防止脑中风引起的大脑损伤。低剂量的雷帕霉素可以被用于脑中风急救药，适用于缺血性和出血性的脑中风。为了得到最佳效果，低剂量雷帕霉素可以与急救药一起治疗缺血性脑中风，比如t-PA，一种血块溶解药。
第八部分的另一个优选实施例，即本发明提供了用低剂量雷帕霉素防止脑中风和脑中风复发。为了得到最佳效果，此方法的另一个方面是，低剂量的雷帕霉素与某个不同机理的防治脑中风的药一起用以减少中风机会，后者可以是，但不限于是：抗血小板凝集药(如氯吡格雷(clopidogrel)，agrrenox)、抗凝血剂(如华法林(warfarin)，肝素)，降血脂药(如他汀类药物(statins))、高血压药物(如ACE-抑制剂，ARBs、β-阻滞剂、利尿剂、钙离子通道阻滞剂)。
第八部分的另一个优选实施例，即本发明提供了用低剂量雷帕霉素防治神经退化疾病，包括但不限于老年痴呆症、帕金森氏症、亨廷顿氏症。
第八部分的另一个优选实施例，即本发明提供了用低剂量雷帕霉素防治心肌梗死引起的心脏损伤。本发明提供了低剂量雷帕霉素在预防心肌梗死或心脏病发作的用途。为了得到最佳效果，低剂量的雷帕霉素与某个不同机理的药一起用来防治心脏病，后者可以是，但不限于是：抗血小板凝集药(如氯吡格雷(clopidogrel)，agrrenox)、抗凝血剂(如华法林(warfarin)，肝素)，降血脂药(如他汀类药物(statins))、高血压药物(如ACE-抑制剂，ARBs、β-阻滞剂、利尿剂、钙离子通道阻滞剂)、血糖控制药物(如二甲双胍，吡格列酮)。
本领域的技术人员可以理解雷帕霉素在不同的组织、细胞中的分布是不均匀的，而用此抗衰老法筛选出的每一个化合物在不同的组织、细胞中，也可能有特定的分布式样。因此，此方法的一个方面是用低剂量雷帕霉素，与最少另一个抗衰老剂一起用，以得到最佳效果。所述另一个抗衰老剂不限于是AICAR，2-脱氧葡萄糖，LY294002，二甲双胍，EGCG，葡萄籽提取物，亚硒酸钠，染料木素，水飞蓟宾，覆盆子提取物，二烯丙基三硫，苄基异硫氰酸酯，异硫氰酸苯乙酯，白藜芦醇，番茄红素，异硫氰酸烯丙酯。
第八部分的另一个实施例，低剂量雷帕霉素可以以任何一种有用的方式给药，包括口服，缺少：via implants，注射(如静脉、皮下、腹腔)，皮上敷用、直肠、鼻腔、阴道，吸入给药，或气雾剂、皮肤渗透等。皮肤渗透是指所有穿过身体表面和身体内的膜包括上皮和粘膜组织。此种给药方式可以由于雷帕霉素、它的药学可接受的盐或有机制剂制成的乳液，膏，泡沫，贴剂，悬浮液，液体，栓剂(直肠和阴道)。
第八部分的另一个实施例，本发明提供了低剂量雷帕霉素的另一个用途，即可作为固体食物、饮料、或液体食物的一个成分，其中饮料和液体食物包括含酒精与不含酒精的，例如水，酒，果汁等。
在第九部分，本发明提供了一个方法，用以在生物样本中检测抗衰老剂，此方法包括下面的步骤：
(i)生物样本用溶剂适当稀释；
(ii)在引起端粒异常或DNA损伤进而造成细胞周期阻滞的条件下，把稀释的样本与变异酵母细胞一同孵化；
(iii)去掉引起细胞周期阻滞的孵化条件，测定存活酵母细胞数；并
(iv)比较步骤iii得到的存活细胞数和对照试验的细胞存活数，对照试验除不含所述的生物样本外，其它条件均与步骤ii相同，
其中，相比于对照试验，如果存活细胞数增加，表明所述生物样本包含抗衰老剂。
在第十部分，本发明提供了一个方法，用以在生物样本中计算抗衰老剂的生物活性浓度(即抗衰老活性浓度)，此方法包括步骤：
(i)生物样本用溶剂适当稀释；
(ii)在引起端粒异常或DNA损伤进而造成细胞周期阻滞的条件下，把稀释的样本与变异酵母细胞一同孵化；
(iii)去掉引起细胞周期阻滞的孵化条件，并且测定存活酵母细胞数；
(iv)比较步骤iii得到的存活细胞数和与对照试验的存活细胞数，对照试验除不含所述的生物样本外，其它条件均与步骤ii相同，
(v)通过将存活酵母细胞数目代入预先制定的抗衰老剂的浓度对存活酵母细胞数目的标准公式或曲线，来计算所述抗衰老剂的生物学浓度。
在第十部分的一个方面，本发明提供了一个用标准公式或曲线来计算在生物样本中的抗衰老剂的生物活性浓度。标准公式或曲线通过以下的步骤得到：
(vi)制备一系列含有不同浓度且浓度已知的经提纯的抗衰老剂的标准溶液，该标准溶液采用培养所述生物样本个体时所用的溶剂；
(vii)在引起端粒异常或DNA损伤进而造成细胞周期阻滞的条件下，将标准溶液与突变酵母细胞一起孵化；
(viii)去掉引起细胞周期阻滞的条件并测定每份所培养的标准溶液中存活酵母细胞数目；并
(ix)以步骤viii中获得的存活细胞数对与其对应的抗衰老剂浓度作图，从而获得标准曲线和/或得到标准公式。
本发明的这一部分与第九部分相关，即都有定量分析抗衰老物质的生物活性浓度，是用以上所述的标准浓度或曲线来计算的。因此本发明包含的方法，可以是在以上两个部分所述步骤的任何组合。
在第十部分的一个实施例，本发明提供了一个用标准公式或曲线来计算在生物样本中的抗衰老剂的生物活性浓度，在此所述抗衰老剂是指以上所述任何一个部分的任何一个方面中得到的、或用到的一个化合物或组合物。
第十部分的另一个实施例，方法中所述变异酵母可以从cdc13-1，cdc13-2，stn1-1，cdc17-1，cdc17-2，hdf1，hdf2，est1，est2，est3中选择。
本发明的其他部分或重要方面可以包括以上所述任何实施例的合适组合。在这里，其他部分或实施例也可以被展现在这里所述的其他部分。
定义
本文中所使用的术语，除非文章特别指出，一般“a”，“an”，“the’，指单数，也指复数。
本文中所使用的术语“optional”或“optionally”指接下来所述的事件或情况有可能发生，或者所述包括事件或情况发生例子和不发生的例子。
本文中所使用的术语“老年症”或“老年性疾病”定义为衰老是此症或疾病一个主要危险因素。老年性疾病或老年症可以分为3个主要类型：(1)非正常细胞增殖性疾病，如癌症；(2)退化性疾病，如神经退化疾病(老年痴呆症，帕金森氏症，脑中风等)，心肌梗死，心脏衰竭，血管硬化，高血压，骨性关节炎，骨质疏松，肌肉萎缩，骨髓衰竭，类风湿性关节炎，免疫功能退化，糖尿病，特发性肺纤维化，衰老性的黄斑变性，和(3)功能下降性疾病或障碍，如激素降低(雌激素、睾丸激素、生长激素，IGF-I等)，能量生产减少等。根据细胞类型，老年性疾病或老年症可以分为2类，(1)在不分裂细胞中，神经退化疾病(如老年痴呆症，帕金森氏症，脑中风等)，肌肉萎缩，心血管疾病(如心肌梗死，心脏衰竭等)，(2)在分裂细胞中，骨髓衰竭，免疫功能退化，糖尿病，特发性肺纤维化，衰老性黄斑变性，类风湿性关节炎，骨性关节炎，骨质疏松，血管硬化，高血压。
更进一步，老年性疾病或老年症与线粒体和/或端粒功能退化丧失有关，包括并不限制于癌症，骨性关节炎，老年性黄斑疾病，多发性肺纤维化，帕金森氏症，老年痴呆症，亨廷顿氏症，皮肤老化，白内障，多发性硬化症，干燥综合征，类风湿性关节炎，血管硬化，心肌梗死，心脏衰竭，高血压，中风，糖尿病，骨质疏松，肥胖症，白发脱发，听力退化等等，以上所述的疾病都被此发明所包括。
在本文中一些优选实施例中，使用的术语“老年性疾病”或“老年症”是指以下的疾病：肿瘤形成和癌症恶化发展，心肌梗死、心脏衰竭，脑梗死，中风，帕金森氏症，心衰竭，血管硬化，高血压，白内障，老年性黄斑变性，肌肉萎缩，骨性关节炎，骨质疏松，骨髓衰竭，多发性硬化症，干燥综合征，类风湿性关节炎，免疫功能退化，糖尿病，特发性肺纤维化，神经退化，帕金森氏症，阿尔茨海默氏病，亨廷顿氏病，由于睾丸激素、雌激素、生长激素、IGF-I等减少或能量减少引起的功能障碍或疾病。
本文中使用的术语“抗衰老作用”是指，包括增加线粒体生物合成和功能，降低活性氧的水平，延长分裂静止细胞和不分裂细胞的寿命，例如神经细胞，预防老年学疾病，如肿瘤的形成、癌症的恶性发展、脑梗死和心肌梗死等。
本文中使用的术语“防治老年性疾病”是指，减少发病率，推迟发病时间，或扭转治愈老年性疾病。
本文中使用的术语“分裂静止状态”是指停止细胞周期、细胞不继续进行有丝分裂，可由端粒功能异常、DNA损伤、或癌基因激活等引起。在出芽酵母中，由端粒功能受损引起的分裂静止状是细胞周期停止在G2/M期上。在哺乳动物细胞中，由端粒功能受损引起的分裂静止状是细胞周期停止在G0期上，G0细胞逃出了细胞分裂周期。在人的成纤维细胞WI-38中，分裂静止状是指在显微镜的观察下，细胞数传代10天以后都不再增加，并且显示β-乳糖苷酶阳性染色。
本文中使用的术语“不分裂细胞(post-mitotic cell)”是指那些停止在G0期的细胞，G0期在细胞分裂周期以外，不再分裂复制，但细胞在生物个体的生命中具有应有的功能。不分裂细胞包括有神经细胞，心肌细胞，肌肉细胞等。有的细胞在成熟个体中，非永久性性地进入G0期，不分裂了，只有在特别的情况下，才能被诱导再次进入细胞周期进行分裂，如肝脏和肾的实质细胞。这些细胞在G0期时，也被认为是不分裂细胞。
本文中使用的术语“cdc13-1”是指在CDC13基因上有一个点变异的酵母细胞，也指这个点变异，“cdc13-1p”指有由此基因变异的基因转录的蛋白，Cdc3p指野生型的CDC13基因转录的蛋白。
本文中使用的术语“cdc13-2”，“stn1-1”，“cdc17-1”，“cdc17-2”，是指酵母细胞含有相应的基因变异，也指此变异的基因。术语“est1”，“est2”，“est3”，“hdf1”，和“hdf2”是指酵母细胞分别含有相应的基因敲除，即EST1，EST2，EST3，HDF1和HDF2基因敲除，也指此敲除的基因。
本文中使用的术语“TOR抑制剂”是指一组免疫抑制化合物，含有基本的雷帕霉素核心结构，包括雷帕霉素和它的化学、生物学修饰后的衍生物等，并具有维持细胞静止状态的活性。相应的，TOR抑制剂可以是以雷帕霉素的酯、醚、腙、胲、或肟的形式存在。此术语也包括在雷帕霉素核心结构上功能基团上的修饰，例如，通过氧化或还原反应。因此，TOR抑制剂包括但不限于雷帕霉素和类似物，如AP-23573(Deforolimus)，AP-23675，AP-23841，ABT-578(Zotarolimus)，CCI-779(Temsirolimus)，RAD-001(Everolimus)，7-epi-雷帕霉素，7-硫代甲基-雷帕霉素，7-epi-三甲基-雷帕霉素，7-epi-硫代甲基-雷帕霉素和7-去甲氧基-雷帕霉素，32-去甲氧基-雷帕霉素，2脱甲基-雷帕霉素和42-O(2-羟基)乙基-雷帕霉素。
本文中使用的术语“雷帕霉素的临床剂量”是指从1mg/天到5mg/天的剂量范围，此范围也可延伸从0.1mg/天到15mg/天，但不能多于40mg/天。在这些剂量范围下，雷帕霉素抑制蛋白合成，在G1期停止细胞周期，并也引起细胞自噬。在动物和体外细胞培养中，临床剂量在鼠类模型中大于0.1mg/kg/天，在人细胞中大于10ng/ml，在鼠类细胞中大于100ng/ml。此领域的普通技术人员都知道，具体的临床剂量随不同的细胞株和特定的动物而变化。
本文中使用的术语“低剂量雷帕霉素”是指低于雷帕霉素的临床剂量，例如，低剂量可以是0.1到1000pM当用于细胞培养时，0.01到100μg/kg/天当用于鼠类模型中，0.01到100μg/天当用于人体。具体的浓度是根据特定的细胞类型、或特定的疾病或特定的给药方式而定。低剂量雷帕霉素大约为临床剂量的0.001％到10％。
本文中所用的术语化合物或组合物的“抗衰老生物活性浓度”是指化合物或组合物中具有抗衰老的活性成分的浓度，相对于化合物或组合物的浓度。此抗衰老生物活性浓度可以用延长酵母cdc13-1细胞的分裂静止状的实验来测量。
本文中所用的术语“癌症”是指患病状态，其中一个正常细胞变成非正常，始于如DNA损伤，癌基因激活，或端粒功能障碍的初始异常的细胞病变，然后侵入到邻近组织，区域淋巴结和遥远的地点。癌症可以是与衰老有关的癌症，诱变剂引起的癌症，抗癌药物化疗引起的二级癌症，针对其他疾病的治疗方法引起的，如激素替代，由环境引起的，如紫外线、发射性辐射、或吸烟。
本文中所使用的术语“防止肿瘤的形成”，是指抑制一个正常细胞变为一个异常细胞，或抑制正常细胞到良性肿瘤的形成转化。本文中所使用的术语“防止恶性进展”是指以抑制良性肿瘤发展为恶性肿瘤或癌症。本文中所使用的术语“防治癌症”和“癌症防治”是指以防止肿瘤的形成和/或防止恶性进展。
本文中所使用的术语“防癌化合物试剂”是指天然的或实验室合成的物质，可用以抑制肿瘤生长。
术语“药学上可接受的载体”是指一种在此领域中被接受的载体基质，通常用于把生物活性剂载入动物中，尤其是哺乳动物，包括佐剂，赋形剂或媒介物，例如稀释剂，保鲜剂，填料，流动调节剂，崩解剂，润湿剂，乳化剂，悬浮剂，增甜剂，调味剂，香料，抗生素，抗真菌剂，润滑剂，配药剂，选择取决于给药模式和剂量形式。药学上可接受的载体包括水性和非水性的液体基质，以及各种固体和半固体的基质。如此的载体可以含除了活性物质外的有许多不同的成分和添加剂，它们因为各种原因被放在配方中，如稳定活性成分，粘合等，这些都是此领域的普通技术人员所熟知的。
本文所用术语“药学上可接受的盐”，是指一个化合物的盐或两性离子的状态，是水溶或油溶的、或可分散的，在可靠的医学判断的范围内，适合用于病人的组织而没有过多的毒性、刺激性、过敏性、或其他的问题或并发症，并且益处/风险比合理，可以达到预定的有效性。代表性的成盐的酸包括醋酸，己二酸，褐藻胶，柠檬酸，天门冬氨酸，苯甲酸，苯磺酸，硫酸氢钠，丁酸，樟脑磺酸，脲硫酸盐，庚酸，己酸，甲酸，富马酸，盐酸，氢溴酸，碘酸，乳酸，马来酸，均三甲苯磺酸钠，甲磺酸，萘磺酸，烟酸，2-萘磺酸，草酸，双萘水杨酸，果胶酸，过硫酸铵，特戊酸，丙酸，琥珀酸，酒石酸，三氯乙酸，三氟乙酸，磷酸，谷氨酸钠，碳酸氢盐，对甲苯磺酸。可用于形成药学上可接受的盐的其它酸的例子包括盐酸，氢溴酸，硫酸和磷酸等无机酸，和有机酸，如草酸，马来，琥珀酸，柠檬酸。
药学上可接受的盐的阳离子包括锂，钠，钾，钙，镁，铝，以及无毒的季铵盐阳离子，如铵，四甲铵，四乙铵，四丁基胺，甲胺，二甲胺，三甲胺，三乙胺，二乙胺，乙胺，三丁胺，吡啶，N，N-二甲基苯胺，N-甲基苯胺，N-甲基哌啶，甲基二环己胺。其他代表性的可形成盐的有机胺包括乙二胺，乙醇胺，二乙醇胺，哌啶和哌嗪。
本文所用术语“溶剂化物”是指一个或多个、最好是一至三个溶剂分子，有机或无机的，物理结合。这个结合包括氢键结合。在某些情况下溶剂化物可以被隔离，例如，当一个或多个、最好是一至三个溶剂分子结晶在固体晶格中。在溶液中溶剂化分子可能会是有序的排列和/或是非有序排列。溶剂化物可能会包括溶剂分子的化学当量或非化学当量。“溶剂化物”包括可溶的相和不可溶溶剂。范例溶剂化物包括、但不仅限于水合物、乙醇合物，甲醇合物，异丙醇合物。溶剂化的方法在此领域中是公知的。
此外，本发明涉及的化合物可能有药物前体形式。在本发明的范围内，任何可在体内转化为有生物活性的化合物都是药物前体。在各种形式的药物前体在领域内是众所周知的。对于这类药物前体以及衍生物的例子，请参阅Design of Prodrugs，edited by H.Bundgaard(Elsevier，1985)；Methods inEnzymology，Vol.112，at pp.309-396，edited by K.Widder et al.(AcademicPress，1985)；and A Textbook of Drug Design and Development，edited byKrosgaard-Larsen and H.Bundgaard，Chapter 5，“Design and Application ofProdrugs，”by H.Bundgaard，at pp.113-191(1991)。
作为一个例证，含有羟基基团的化合物，如雷帕霉素及其类似物，可以形成可水解的酯类，碳酸盐，或氨基甲酸酯类，作为药物前体可在体内水解产生的有活性的化合物。因此，本发明包括使用雷帕霉素类似物及其相应的酯、碳酸、或氨基甲酸酯衍生物作为抗老化剂。这些前体药物可以被领域内一般的人用传统的合成方法合成。例如，酯类包括但不限于那些用普通酰化剂酰化羟基的衍生物，如，醋酸，醋酐，乙酰氯酸，丙酰氯，苯甲酰氯，丁酰氯，琥珀酸酐等等。碳酸盐包括、但不仅限于，用含有一个X-C(O)OR结构的化合物与羟基的反应而来的衍生物，其中X是一个卤化物和R可以是任何基团含一个碳连在氧原子上，例如，烷基，芳基，芳烷基等；氨基甲酸酯也可以以类似的方式合成。
此外，雷帕霉素的药物前体，也可以是其他形式，如美国专利4650803和美国专利5151413所述的，或在任何出版或要公布的。此处所描述的大多数药物前体，最好口服，因为在许多情况下，药物前体主要由消化酶水解。注射给药也可，当前体药物本身是有活性的，或可在血液中的发生水解。
本发明的配方，可在用任何合适的途径给药，例如，通过口服，外用，注射(包括皮下，肌肉，静脉注射和皮内)，和肺部给药。在一些实施例中，配方是用单位表示剂量，可用何任方法配制。通常，药方是均匀制备的与活性成分密切关联的(例如，雷帕霉素或及其类似物)，使用液态载体或极细的的固态载体，或两者。
包含本发明所述的活性化合物的口服剂可是任何常规的口服剂包括片剂，胶囊剂，片剂，颊形式，锭剂和口服液，混悬剂，或溶液的形式，或作为粉末或颗粒，在水或非水性的溶液或悬浮液，水包油型乳状或油包水型乳状。胶囊可是含有活性化合物、惰性填料和/或稀释剂的混合物。片剂配方可由传统的压缩，湿法或干法造粒的方法，并用药学上可接受的稀释剂，结合剂，崩解剂，润滑剂，表面改性剂(包括表面活性剂)，或悬浮剂或稳定剂。口服制剂也可利用标准的延缓或控释剂，来改变活性化合物的吸收。
在某些情况下，可以以气雾剂的形式直接向呼吸系统，耳朵，皮肤，或咽喉给药。
低剂量雷帕霉素在也可外用。外用的形式包括、但不仅限于，霜剂，软膏，乳剂，凝胶，乳液，和喷雾剂。本发明的外用制剂一个实施例是，外用配方是惰性材料(如油)，还有一实施例是基础保湿霜成分，防腐剂也可用于增加保质期。此领域的技术人员知道如何添加额外的活性成分或惰性材料来修改外用配方。本发明的外用制剂可用于防止皮肤老化和治疗癌症等疾病的早期阶段。
在一些实施例中，片剂包括至少一个活性成分和选择性的一个或多个药学上可接受的载体，后者由压缩或成型剂组成。在优选实施例中，压缩片剂由合适的机器压缩活性成分，其在自由流动的状态，含如粉末或颗粒，也可混合于粘结剂(如碘伏，明胶，羟丙基甲基纤维素)，润滑剂，惰性稀释剂混合，压缩崩解剂，防腐剂，崩解剂(例如，钠乙醇酸淀粉，交联聚维酮，交联羧甲基纤维素钠)，表面活性剂或分散剂。
本发明的化合物或组合物，可单独或联合给药，可结合一个或多个，最好是一到三个，额外的治疗药物。“联合给药”或“综合疗法”是指本发明中和一个或以上，最好一至三个额外的治疗药物，对接受治疗的哺乳动物同时给药。联合给药时，每个组成部分可以以任何顺序给药，在同一时间或在不同的时间点。因此，每个组成可单独给药，但相近的时间，以提供理想的治疗效果。
范围这里可表示为从“大约”一个特定的值，和/或到“大约”另一个特定值。当范围这样表示时，一方面包括从一个特定的值到另一特定值。同样，当值以前缀’“大约”表示为近似值，它会被理解为此特别值形式的另一个方面；这将被进一步理解为每个范围的端点与其他端点显著的有关并独立；它也被理解为有系列的值被披露者，此处披露每个值除了此特定的值本身也含“大约”的值。例如，如果值“10”披露，则“大约10”也披露。同时也被理解为在此申请中数据有许多不同的格式，这些数据代表终点的出发点、范围是数据点的任意组合。例如，如果一个特定的数据“2％”和一个特定的数据“4％”被披露，被理解为大于、大于或等于、小于、小于或等于、等于2％和4％、以及2％和4％之间被披露了。也被理解为在两个特别单位之间的每个单位被透露了。当“大约(about)”出现在表示剂量数字前，这意味着至少±30％可变性，较好在±20％以内，最好的±10％以内；当这个词出现在表示温度的数字前，这意味着值可以有所不同，至少±2℃，最好±1℃，表示时间时，这意味着该值可以有所不同，至少在15％在10％以内，最好在5％以内。
鉴别、检测和纯化抗衰老试剂方法
本发明是基于下面讨论的各种发现。
A.抑制营养信号通过AMPK和随后的线粒体途径延长端粒功能障碍诱导 的酵母细胞周期阻滞状态。
A-1、抑制营养信号维持端粒功能障碍引起细胞周期阻滞状态，从而防止随后的细胞死亡。
基于各种原因，芽殖酵母cdc13-1是端粒功能障碍的重要模型。第一，灭活cdc13-1p引起的端粒功能障碍和端粒酶的失活激活同样的下游途径：MEC1(与ATM和ATR同源)依赖的G2/M细胞周期停止，以及随后大量的细胞死亡，并伴有细胞体积增大，ROS大幅增加，细胞凋亡标记，和在单倍体细胞中多倍体(＞2N)的DNA含量。TOR抑制剂雷帕霉素防止cdc13-1p或端粒酶的失活引起的细胞的死亡。有趣的是，雷帕霉素不影响因灭活cdc13-1p引起的G2/M细胞周期停止，但维持、延长G2/M的周期阻滞状态，从而防止多倍体(＞2N)DNA含量的出现，这是分裂静止状态的退化和细胞死亡的一个指标(Qi，H.，Chen，Y.et al.，PLoS ONE，3，e3520，2008)。第二，端粒的结构和功能从酵母到人类都是保守的。在人类细胞中，端粒功能障碍也导致ATM-/ATR-依赖的细胞周期阻滞，伴随着增大的细胞体积，细胞凋亡标记和多倍体(Denchi EL，et al，Nature 448：1068-71，2007；Shay JW，et al，Carcinogenesis 26：867-74.2005)，与cdc13-1类似。因此，cdc13-1可以用来研究端粒功能障碍引起的下游事件。
本发明揭示，类似于低剂量雷帕霉素，葡萄糖限制-即减少酵母培养基中的葡萄糖或加200μM 2-脱氧葡萄糖(葡萄糖的类似物)，以及氮限制，也阻止灭活cdc13-1p引起的细胞死亡，其用菌落形成实验来监测。如图1A所示，cdc13-1细胞(单倍体)在YEPD培养基中(蛋白胨1％，2％酵母提取物，2％葡萄糖)、非允许温度(37℃)孵化22小时后经菌落形成测试可知导致细胞的大量细胞死亡。然而，减少YEPD培养基中的葡萄糖(从2％至1％、0.5％或0％)以及加入200μM 2-脱氧葡萄糖的2％葡萄糖的YEPD，有效地阻止细胞死亡：糖越少，存活细胞越多。此外，限制氮的培养基SC-N(0.67％酵母氮源(yeast nitrogen base)不含氨基酸和(NH4)2SO4，2％葡萄糖，组氨酸，亮氨酸，色氨酸和尿嘧啶各100mg/L)也阻止细胞死亡(图1B)。此外，雷帕霉素预防cdc13-1细胞死亡与剂量相关，浓度在0.3至1nM(图1C)之间。0.5和1nM的雷帕霉素没有阻止细胞生长、相反微有促进(图1D)，表明低剂量雷帕霉素的新功能。图1E显示，低剂量雷帕霉素和葡萄糖限制延迟cdc13-1细胞死亡。相比于在37℃20小时后大量的细胞死亡，雷帕霉素和葡萄糖限制减慢了细胞死亡，在37℃培养60小时后，与未经处理的细胞相比，细胞的存活至少提高了100倍以上。
实验结果进一步证明，葡萄糖限制，与雷帕霉素治疗相似，维持灭活cdc13-1p引起的G2/M周期阻滞状态，并防止随后的细胞死亡。如图2A所示，在非允许温度(37℃)培养2小时后，超过95％的cdc13-1细胞进入G2/M期，葡萄糖限制(0.5％葡萄糖)和雷帕霉素(1nM)与对照实验同样。葡萄糖在YEPD培养基中从2％减少至0.5％与雷帕霉素(1nM)相同，抑制多倍体(＞2N)DNA含量的增加，表明维持细胞周期阻滞状态。如图2B所示，cdc13-1在37℃预培养2小时，使大于95％的细胞进入G2/M期，并不会影响葡萄糖限制和雷帕霉素对细胞死亡的预防作用。因此，营养限制，与TOR抑制剂雷帕霉素相似，保持端粒功能障碍引起的细胞周期阻滞状态，从而防止分裂静止状态的退化，以及随后的细胞死亡。
A-2、葡萄糖限制，类似于低剂量TOR抑制剂雷帕霉素，防止cdc13-1细胞死亡时的ROS的增加并抑制凋亡标记的出现。
图3A显示cdc13-1细胞的死亡时伴有急剧增加的ROS。雷帕霉素(1nM)以及葡萄糖从2％至0.5％的减少(0.5％GLC)，有效地降低ROS的增加，至同一温度下的野生型(WT)的水平。图3B显示，灭活cdc13-1P诱导的细胞死亡也伴有细胞凋亡的增加，其以磷脂酰丝氨酸(PS)翻转来测量，葡萄糖减少(0.5％Glc)或雷帕霉素(1nM)有效地抑制细胞凋亡。
A-3、AMPK和线粒体功能，在雷帕霉素和葡萄糖限制预防cdc13-1细胞死亡中发挥重要作用。
本发明还公开了AMPK在预防cdc13-1细胞死亡的重要作用。图4A显示，删除Sip2p，酵母AMPK的调节亚基β，能显着减弱葡萄糖限制的预防效果。此外，删除Snf1p及Snf4p，分别是AMPK的催化亚基α和调节亚基γ，大大降低雷帕霉素的预防效果(图4B)。
本发明进一步揭露，线粒体，其功能可以通过激活AMPK和下游的线粒体生物合成而改进提高，在预防cdc13-1细胞死亡中发挥了重要作用。cdc13-1线粒体缺陷的细胞是通过培养在含溴乙锭的培养基得到的((Qi，H.J.Biol.Chem.，278，15136-15141，2003)。图5A显示，线粒体功能缺乏显著减弱了葡萄糖限制和雷帕霉素(1和5nM的)的预防效果。通过测量线粒体量的增加，葡萄糖限制(0.5％葡萄糖)和雷帕霉素(1nM)也被证明了可以上调线粒体生物合成(图5B及5C)。
图6总结了上述的结果。线粒体在维持端粒功能障碍引起的分裂静止状态发挥了重要作用，雷帕霉素和葡萄糖限制通过激活AMPK刺激线粒体功能，从而防止分裂静止状态退化和随后的细胞死亡。
B.低剂量雷帕霉素、葡萄糖限制、和AMPK活化剂，都相似的刺激线 粒体的功能，并延长元代人成纤维细胞分裂静止状态。
本发明揭示了，在人细胞中，CR或雷帕霉素也延长端粒功能障碍引起的分裂静止状态，并防止细胞死亡。实验采用元代人胚肺成纤维细胞WI-38。此细胞缺乏端粒酶活性，在通常的常规培养条件下，在第31次传代(passage31)时达到最大复制的潜力，表现出端粒功能障碍，并进入分裂静止状态。在第29传代时加入50pM的雷帕霉素。疗程是10天一个周期，其中3天给药、7天无药(也称为3-day-on/7-day-off周期)。不论有无雷帕霉素，细胞在第31传代停止分裂(在显微镜下检查)，并展现出分裂静止状态，通过测量细胞质β-半乳糖苷酶的活性，即用5-溴-4-氯-3-吲哚基β-D-半乳糖苷(X-Gal)(1mg/ml X-gal，40mM的柠檬酸/磷酸钠，pH值6.0，5mM亚铁氰化钾，5mM氰化钾，150mM氯化钠，2mM氯化镁)染色。由于分裂静止细胞增加细胞质中的β-半乳糖苷酶的活性而被染成蓝色的颜色(黑白画面中呈暗灰色)。图7显示，在分裂静止后的第56天，在对照中可见大量的细胞损失，50pM雷帕霉素强力抑制细胞损失。雷帕霉素并没有转化细胞，因为分裂静止状态的标记仍然存在，并且也没有观察到细胞的分裂。此外，在培养液中葡萄糖减少(从0.4％到0.2％)或2-脱氧葡萄糖(12.5μM)也阻止分裂静止细胞的消失(图7)。
同酵母相似，AMPK在雷帕霉素或葡萄糖限制预防人类细胞中的端粒紊乱引起的细胞死亡也起着重要作用。如图7所示，AMPK的特异性激活剂5-氨基咪唑(Aminoimidazole)-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(ribofuranoside)(AICAR，250uM)(给药方式为10天一个周期，其中2天给药、8天无药，以避免毒性)防止静止的WI-38细胞的损失。此外，用免疫印迹来检测AMPK在Thr172(数据未显示)的磷酸化表示，雷帕霉素(50pM)可以激活AMPK。此外，雷帕霉素、2-脱氧葡萄糖、葡萄糖限制和AICAR，增加人体中线粒体量和提高线粒体的功能(图8和图10)。低剂量雷帕霉素在人成纤维细胞(图8A)以及淋巴L40细胞(数据未显示)都可以增加线粒体的质量。低剂量雷帕霉素在成纤维细胞和L40细胞也增加了线粒体膜电位并减少ROS的水平(图8B，8C和数据未显示)。
令人惊讶的是，只有低剂量雷帕霉素(从10到100pM)可防止静止的WI-38细胞的损失，如图9A所示，相反，在浓度超过500pM时促进细胞的损失。例如，25pM雷帕霉素阻止细胞的损失(图9A)，但不抑制细胞生长(图9B)，相反，它增加了细胞复制的次数，从5.12至6.8；此外，在低剂量雷帕霉素(50和100pM)增加的分裂静止关键蛋白质p53，p21和pRb的水平，但高剂量(2000pM)不能(图9C)。此外，低剂量雷帕霉素增加人类细胞中线粒体量和膜电位，并降低ROS水平，而大于10nM的雷帕霉素似乎失去了这个效果(图8)。因此，低剂量雷帕霉素的功能与临床治疗剂量不同，它刺激线粒体功能和防止分裂静止状态退化，而不是阻止蛋白质的翻译和在G1期抑制细胞生长。
综上所述，1)分裂静止细胞的细胞周期阻滞状态的维持从酵母到人类是保守的，2)CR，葡萄糖限制或低剂量雷帕霉素通过AMPK的刺激线粒体的功能，延长分裂静止状态，从而抑制了随后的细胞死亡，3)只有低剂量雷帕霉素，模仿CR，维持人体细胞的分裂静止状态。
C.一些抗衰老或癌症的化学预防剂刺激线粒体功能，并抑制酵母和人 类的分裂静止细胞的死亡。
本发明公开，被报道两种试剂-可以预防一些与老年性疾病绿茶提取物(GTE)中的儿茶素EGCG的和葡萄籽提取物(GSE)，均可增加线粒体量并延长分裂静止状态。
绿茶提取物被报道可以防止多种癌症(美国专利7192612和7384655，和美国专利申请：20040142048和20040047921，Shimizu M，et al.，CancerEpidemiol Biomarkers Prev，17：3020-25，2008；Nakachi K，et al.，Jpn J CancerRes.89：254-61，1998)。儿茶素(EGCG)是GTE的最有效成分。EGCG被报道可延长线虫的寿命(Abbas S and Wink M，Planta.Med.75：216-21，2009)。它也被报道调节淀粉状(amyloid)前体蛋白裂解和减少阿尔茨海默氏症的转基因小鼠的脑淀粉样变性病(amyloidosis)((Rezai-Zadeh K，et al.，J Neurosci.25(38)：8807-14，2005)，防止大鼠急性大脑中动脉闭塞后的脑损伤(Choi YB，etal，Brain Res.1019：47-54，2003)，在大鼠离体心脏中，通过线粒体K(ATP)通道的激活保护心肌细胞由缺血/再灌注引起的细胞凋亡，并减少梗死面积(Townsend PA，et al.，FASEB J.18：1621-3，2004；Song，DK，et al，J Korean MedSci.2010 Mar；25(3)：380-6)。此外，它也被证明在分离出胰岛中防止细胞凋亡(Hara Y，et al，J Hepatobiliary Pancreat Surg.14：493-7，2007)，防止低剂量链脲菌素诱导的小鼠自身免疫性糖尿病((Song EK，et al，Arch Pharm Res.26：559-63，2003)减少了人类干燥综合征小鼠模型的自身免疫性症状(Hsu，S.D.，et al.，Autoimmunity，40：138-47，2007)，并防止硒引起的大鼠白内障(GuptaSK，et al.，Ophthalmic Res.34：258-63，2002)。有趣的是，EGCG还能激活AMPK(Huang CH，et al，Mol Nutr Food Res.53(9)：1156-65，2009)。
GSE也被证明有预防癌症的活性(美国专利申请：20040047921和20050013880)。例如，五倍子酸，一个GSE的主要组成部分，在TRAMP小鼠前列腺癌模型中防止向中晚期的进展(Raina K，et al.，Cancer Res.67：5976-82，2007)，GSE也可以防止致癌剂NNK诱发人类乳腺上皮细胞MCF10A癌变((Siriwardhana N，et al.，Breast Cancer Res Treat.109：427-41，2008)。此外，GSE已被证明在雌激素耗尽(estrogen depleted)的动物模型中减少动脉压和盐敏感的高血压(see review by Carlson S，et al.，Gend Med.5Suppl A，S76-90，2008)，它在一个三维的人体表皮组织培养模型中有效地防止紫外线引起的皮肤损伤(Tomaino A，et al.，Toxicol In Vitro.20：1395-402，2006)，在阿尔茨海默氏病的小鼠模型中防止Aβ的集聚和认知功能减退(Wang J，et al，J Neurosci.28：6388-92，2008)，在小鼠和仓鼠中防止高脂肪饮食诱导的肥胖症((Park SH，et al，Nutr Res Pract.2：227-33，2008；DécordéK，et al，Mol Nutr Food Res.53：659-66，2009)，在一个大鼠模型中抑制衰老引起的氧化损伤的DNA在脊髓和大脑的积累(Balu，M.，et al.，Brain Res Bull.68：469-473，2006)，并保持在衰老过程中红细胞膜的完整性(Sangeetha P，et al.，Exp Gerontol.40：820-828，2005)。
如图10所示，250μg/ml的GSE和50μg/mL的GTE中EGCG增加在人的细胞中的线粒体量，例如，在淋巴L40细胞中，也阻止酵母和人原代成纤维细胞WI-38的端粒功能障碍引起的细胞死亡(图11和7)
图10显示了许多肿瘤化学预防剂在人类淋巴母细胞中增加线粒体量，例如，10μM LY294002(PI3K抑制剂)，2μM二烯丙基三硫化物(DATS)，1μM苄基异硫氰酸酯(BITC)，1μM苯基异硫氰酸酯(PITC)，2μg/mL的白藜芦醇(RSV)和0.03μM的番茄红素，6.7μM苯乙基异硫氰酸酯(PEITC)，1μM烯丙基异硫氰酸酯(AITC)，水飞蓟宾5mM，1.25mM亚硒酸钠，2.5mM染料木素，3mg/ml的越橘提取物。图7和11显示许多肿瘤化学预防剂，包括异硫氰酸苯乙酯，水飞蓟宾，亚硒酸钠，染料木素，越橘提取物，对酵母和/或人端粒功能障碍引起的细胞死亡展示出不同程度的的保护作用。
D.许多老年性疾病或老年症与线粒体功能异常和/或端粒功能障碍有 关，低剂量雷帕霉素在动物或组织培养模型防止多种老年性疾病或老年症。
癌症。几乎所有的肿瘤细胞表现出线粒体的功能障碍，这种现象被称为Warburg效果，即在肿瘤细胞中高达60％的ATP是通过糖酵解生产的，尽管有氧存在，而在正常细胞中，大部分的ATP通过线粒体氧化磷酸化生成的。癌转化已被证明导致抑制氧化磷酸化并且增加糖酵解，相反，肿瘤抑制蛋白p53的上调氧化磷酸化并抑制糖酵解。不过，目前尚不清楚线粒体功能障碍是癌症原因还是结果。
由于逐步缩短的端粒，端粒功能障碍是年龄依赖性的，维持端粒功能障碍引起的分裂静止状态是预防与年龄有关的癌症的一个关键机制。由于由癌基因的激活和诱变剂引起的分裂静止状态也是通过DNA损伤反应，与端粒功能障碍的相同，分裂静止状态的维持应是防止各种癌症的一个内在机制。
本发明公开了线粒体的功能在维护分裂静止状态中起着关键作用。因此，线粒体的功能通过维持分裂静止状态在癌症预防起重要作用，线粒体功能障碍是分裂静止状态退化和癌症发展的早期步骤。因此，端粒功能障碍模型可以用来筛选候选药物，用以刺激线粒体功能、延长分裂静止状态、和预防癌症。事实上，本发明披露，许多已知的癌症化学预防剂，可以延长衰老分裂静止状态，增加线粒体量(图7，10和11)。此外，可以延长分裂静止状态的低剂量雷帕霉素和AICAR，如图7所示，在NIH3T3细胞中扭转了诱变剂TPA(12-O-酰佛波醇(Tetradecanoylphorbol)-13-醋酸酯)引起的线粒体量的降低和防止肿瘤形成(图12和13)(见实施例15)。
神经行性疾病。尽管有大量的研究，神经退行性疾病的机制尚不清楚。线粒体功能障碍可能在疾病中起作用，因为Pakin(与帕金森氏病有关)，Huntintin(与亨廷顿氏病有关)和β-淀粉样蛋白(Amyloid-β)(导致阿尔茨海默氏症的老年斑)都参与线粒体功能。最近的研究也建议自体吞噬(一种蛋白质的降解)在这些疾病中也起一些的作用。
本发明公开了低剂量雷帕霉素、而非高剂量的雷帕霉素，降低培养的大鼠小脑颗粒神经元(CGN)的ROS水平、增加细胞的寿命(图14A和图14B)，在大鼠中风模型中防止由于小脑梗死引起的脑损伤(图15A及15B)(见实施例16-18)，低剂量雷帕霉素也减少了200μM MPP+诱导的ROS水平的增加，MPP+是多巴胺神经毒，可诱发鼠类帕金森症(图16)。此外，曾被报道可防治神经退行性疾病的EGCG，这里被显示可延长分裂静止状态(图7和图11)。因此，低剂量雷帕霉素和EGCG可以延长不分裂细胞和分裂静止细胞的寿命，这表明维持不分裂神经细胞的G0阶段与维持分裂静止细胞中的G0阶段有着类似的机制。因此，本发明的一个方面，是基于这样的发现，即分裂静止态模型可以用来筛选和检测候选药物，用于防止神经退行性疾病或症状，包括但不限于中风、现帕金森症、阿尔茨海默氏症、和亨廷顿氏病。
心脏衰竭，动脉粥样硬化和心肌梗死。端粒功能障碍已被显示在慢性心力衰竭中起重要作用。在培养的心肌细胞中干扰TRF2的功能可引发端粒侵蚀和细胞凋亡。相反，外源性TRF2可保护免于氧化压力，表明在不分裂细胞中，通过端粒功能障碍引起的细胞死亡(Oh，H，et al.，Proc Natl Acad Sci U SA.100：5378-5383，2003)。在第五代TERC基因缺陷小鼠(G5TERC KO)(一个由于缺乏端粒酶RNA基因TERC的端粒酶突变模型)表现出，心肌细胞中端粒明显缩短，心肌心室扩张，心肌变薄，心功能障碍，突然死亡。G5TERC-KO小鼠的心脏切片揭示，与野生型小鼠相比，DNA损伤反应蛋白p53的表达增加，细胞凋亡也增加了，并且左心室心肌细胞的数量减少了50％(Leri，A，et al.，EMBO J.22：131-139，2003)。
动脉粥样硬化通常指动脉硬化或动脉管壁的垢，它是因为动脉内多个斑块的形成。因动脉粥样化的刺激引发血管内皮细胞(ECs)功能障碍，对动脉粥样硬化的发病机制非常重要。加速端粒缩短和提前进入静止状态已被发现于人的动脉粥样硬化病变组织(Ogami M，et al.，Arterioscler Thromb VascBiol.24：546-550，2004；(Minamino T，et al.，Circulation.105：1541-1544，2002)，建议由年龄依赖性的端粒缩短而引起的ECs的功能障碍或死亡可能是斑块形成的早期步骤。
冠状动脉粥样硬化导致的冠脉循环阻塞，引起心肌梗塞(MI，俗称心脏病发作)。MI导致的不分裂的心肌细胞的死亡，重塑适应不良，心脏收缩功能障碍，并最终充血性心力衰竭。
本发明公开了低剂量雷帕霉素在10μg/kg，而不是高于100μg/kg，在大鼠模型中显着降低缺血性心肌梗死(图17和例19)。此外，据报道，AMPK激活剂二甲双胍也可以在鼠类模型中减少心肌梗死和防止线粒体介导的心肌细胞死亡(Calvert，JW，Diabetes，57：696-705，2008)。这些结果表明，TOR/AMPK的/线粒体途径对维持的不分裂心肌细胞的重要性，类似与对分裂静止细胞。因此，端粒功能障碍所致分裂静止模型可以用来选择预防或治疗心肌梗死的的候选药物。
老年性黄斑退化。年龄相关性黄斑变性(AMD)是老年人(＞50岁)失明的主要原因。它是开始于视网膜色素上皮(RPE)细胞退化，结果于视野中心(黄斑区)的视力的丧失。据报道端粒侵蚀、线粒体功能的丧失和细胞丢失与此病相关(Matsunaga H，Invest Ophthalmol Vis Sci.40：197-202，1999；Liang FQ，et al.，Exp Eye Res.76：397-403，2003)。因此，改善线粒体功能，防止细胞端粒侵蚀引起的细胞死亡，可以防止或稳定疾病的早期阶段。有趣的是，50pM低剂量雷帕霉素治疗本病的(美国专利号7083802)已有专利申请。因此，端粒功能障碍所致分裂静止模型可以用来选择预防或治疗AMD的的候选药物。
骨性关节炎。骨性关节炎(OA)-关节软骨逐渐丧失，是老年人中最常见的慢性关节病，显著导致疼痛和残疾。软骨细胞的功能对维持适当的软骨基质必不可少。有报道显示，软骨细胞的端粒功能障碍、线粒体突变和凋亡与OA相关((Martin，JA，et al.J Bone Joint Surg Am.85-A Suppl 2：106-110，2003；Ruiz-Romero C，et al.，Mol Cell Proteomics.8：172-189，2009.Dave M.，et al.，Arthritis Rheum.，58：2786-2797，2008)，表明端粒功能障碍引起的软骨细胞的死亡是一个潜在的疾病启动机制。因此，改善线粒体功能，防止细胞端粒功能障碍所致的细胞丢失，可以防止或稳定疾病的早期阶段。所以，粒功能障碍所致分裂静止以用来选择预防或治疗OA的候选药物。
特发性肺纤维化(IPF)。这是一种慢性的，渐进的间质性肺疾病，特点是在肺间质的纤维组织异常和过度沉积。它通常发生在50岁以后。有证据显示，端粒酶基因突变可导致成人的肺间质纤维化(Tsakiri KD，et al.，ProcNatl Acad Sci U S A.104：7552-7557，2007)，并且短的端粒与IPF相关(AlderJK，et al.，Proc Natl Acad Sci U S A 105：13051-13056，2008；Armanios MY，etal.，N Engl J Med.356：1317-1326，2007)。肺上皮细胞中的线粒体和凋亡也被证明参与IPF((Kuwano P，Intern Med.47：345-353，2008)。这些结果表明，端粒功能障碍引起的肺上皮细胞的损失可能是老年性IPF的初始机制。因此，改善线粒体功能，防止肺上皮细胞中的端粒侵蚀引起的细胞损失可能会阻止或稳定疾病的早期阶段。因此，端粒功能障碍所致分裂静止模型可以用来筛选防治IPF的的候选药物。
皮肤老化。成纤维细胞在皮肤老化中起着重要作用，如皱纹等。逐步缩短的端粒、DNA损伤的积累、活性氧或紫外线都导致成纤维细胞老化，其中包括成纤维细胞的分裂静止状态和随后的细胞丢失。成纤维细胞老化导致功能丧失，包括增细胞殖潜能的丧失，细胞形态和代谢的变化，细胞外基质蛋白的生产的下降，如I型和III型胶原(Varani J，et al.，Am J Pathol.168：1861-1868，2006)，分解细胞外基质的蛋白酶的高表达(West MD，et al.，Exp Cell Res.184：138-147，1989)。在这些体外变化都或多或少参与在体内皮肤老化的变化。保持的线粒体功能不仅减慢端粒的缩短(图9B)，也可防止仍由功能的静止的成纤维细胞的丢失(图7和图9A)，因此，延迟皮肤老化并防止皮肤癌。
类风湿关节炎(RA)。端粒功能异常和线粒体基因突变是在RA的潜在致病因子。RA患者的造血前体细胞(HPCS)和骨髓间质干细胞(MSCs)显示过早的端粒缩短和增殖潜力的减少(Colmegna I，et al.，Arthritis Rheum.58：990-1000，2008；Kastrinaki MC，et al，Ann Rheum Dis.67：741-749，2008)。此外，HLA-DRB1*04等位基因，本病的主要易感基因，已被证明调节端粒的缩短过程(，et al.，Proc Natl Acad Sci U S A.100：13471-13476，2003)。一些研究还表明，RA中发炎滑膜的组成和结构的一些特征性的改变，与滑膜细胞凋亡反应的改变有关(Korb A，et al.，Apoptosis.14：447-454，2009)。此外，从RA滑膜细胞得到的线粒体DNA的突变与对照组相比大大增加(Da Sylva TR，et al.，Arthritis Res Ther.7：R844-851，2005)。因此，可改善线粒体功能和防止端粒缩短诱导的细胞死亡的候选药物，可以被研发来防治此疾病。
糖尿病。糖尿病是指一组疾病，导致高血糖，原因是胰岛素的减少(1型)或对胰岛素不敏感(2型和妊娠期)。胰岛β-细胞由于端粒功能障碍或线粒体功能障碍而过早丧失功能可能是糖尿病的起始步骤。线粒体DNA的缺陷是糖尿病的病因一个常见的因素而且线粒体DNA的重排(Ballinger SW，etal.，Nat.Genet.7：458-459，2004；Ballinger SW，et al.，Nat.Genet.1：11-15，1992)和tRNA基因突变(van den Ouweland JM，et al.，Diabetes 43：746-751，1994)与糖尿病是相关的。此外，在小鼠胰腺的β-细胞，灭活线粒体转录因子TFAM，一个线粒体生物合成的关键的蛋白质，导致细胞凋亡引起的β细胞数量的逐渐下降，结果血清胰岛素的严重减少，并且血糖和空腹血糖大大增加(KosterJC，et al.，Cell 100：645-654，2000；Wallace DC，Am.J.Med.Genet，106：71-93，2001)。也有证据显示人体胰岛β-细胞在体外有端粒侵蚀和其诱导的分裂静止状态(Halvorsen TL，J Endocrinol.166：103-109，2000)。因此，改善线粒体功能、防止端粒侵蚀引起的细胞丧失的候选药物可能预防这种疾病。
上面提到的老年性疾病或老年症的几个例子，都与线粒体退化和/或端粒功能障碍相关。有许多其他疾病，都属于这一类，包括，但不仅限于，肥胖症，骨质疏松，高血压，老年性肌肉萎缩，白内障，多发性硬化症，干燥综合征，年龄相关性听力损失，白发，与年龄有关的免疫失调，以及睾酮，雌激素，生长激素，IGF-I或能源生产下降造成的障碍等等。因此，本发明还包括将发现的任何与线粒体、端粒的相关的老年性疾病或老年症。
综上所述，本发明披露，在分裂静止细胞和不分裂细胞中如神经元和心肌细胞，线粒体对维持分裂静止状态起重要的作用、并与许多老年病相关联。此外，线粒体功能障碍和端粒功能障碍也被认为与老年性疾病相连。这些原则是使用的分裂静止模型来搜寻老年性疾病的候选药物的基础上。
图18总结了老年性疾病的机制，并说明抑制营养/TOR途径怎样防止与老年性疾病。简单地说，在各种的细胞和组织中，线粒体在老年性疾病中都发挥了重要的作用。在不分裂细胞中，如神经细胞、肌肉细胞和心肌细胞，线粒体可以维持的不分裂状态，从而防止细胞重新进入细胞周期和随后的发生细胞死亡。在增殖组织，改善线粒体功能，可以减少氧化压力，提高细胞的增殖潜力。进入静止状态后，线粒体也保持静止状态，防止细胞丧失，如同在不分裂细胞中。细胞丧失可能引发修复反应，如在RA和IPF中的炎症反应。细胞丧失也可导致组织的功能丧失和退化性疾病，如骨髓造血功能衰竭，神经元退化和心脏衰竭。在另一种情况下，分裂静止状态的消失可能导致肿瘤的发生和癌症的发展。热量限制，包括葡萄糖限制和低剂量雷帕霉素，刺激线粒体功能，并防止各种与老年性疾病或功能障碍。
总结，本发明披露包括：(一)，线粒体功能可维持分裂静止状态；(二)维持不分裂状态是类似维持分裂静止状态；(三)CR通过提高线粒体功能维分裂静止和不分裂的细胞，因而分裂静止模型可以用来鉴别筛选候选药物，用以刺激线粒体功能和预防各种老年症；(四)许多癌症的化学预防剂，葡萄糖的摄入抑制剂和AMPK的活化剂都能延长分裂静止状态，从而可以研发为老年性疾病的候选药物；和(V)低剂量雷帕霉素，作为CR模仿物，能维持分裂静止的和不分裂状态的细胞，防止癌症，中风引起的脑损伤，心肌梗死的和其他老年性疾病或老年症。
最近，在前申请要求相应权益的优先权后，一些研究报告说，临床剂量的雷帕霉素可通过抑制蛋白质的翻译和刺激自噬而对衰老和老年性疾病有一定的效果。例如，在小鼠模型中，高剂量雷帕霉素(7.5mg/kg)，通过抑制蛋白质翻译，特别是RTP801/REDD1/Ddit4，而对帕金森氏病有效，此蛋白在受影响的神经元中表达高并导致神经元死亡(Malagelada C et al.，JNeurosci.30(3)：1166-1175，2010 Jan 20)；高剂量雷帕霉素(2.24mg/kg)，在阿尔茨海默病的小鼠模型中，通过增加自体吞噬，能改进的认知障碍，并能够改善Aβ和tau蛋白病理(Caccamo A，et al.，J Biol Chem.2010 Feb 23)；此外，高剂量雷帕霉素能稍稍延长小鼠和果蝇的寿命(～10％)(Harrison DE，et al.，Nature.460(7253)：392-395，2009 Jul 16)，但与CR(约30-40％)相比效果小多了。有趣的是，高剂量雷帕霉素这样的延长果蝇寿命的机制不是通过AMPK/线粒体途径，但通过抑制蛋白质的翻译和/或刺激自体吞噬(Bejdov I，et al.，Cell Metab.11(1)：35-46.2010 Jan 06)。
这些结果表明，高剂量或临床剂量雷帕霉素，通过抑制蛋白质翻译以及生长、或增加细胞自噬，可能对某些特定的老年性疾病和寿命有一定作用。然而，由于各种副作用，临床剂量雷帕霉素不适合长期使用，来防止老年性疾病或老年症。另一方面，本发明披露低剂量雷帕霉素，作为模仿CR者(事实上，由于非常小的副作用，比CR更好)，可用于防止衰老和老年性疾病，通过AMPK的/线粒体途径，相比于使用临床高剂量雷帕霉素，低剂量雷帕霉素有各种明显的优势，如上面所讨论的，比如更高的有效性和更小的副作用。
实施例
A.用端粒功能障碍模型来高通量筛选鉴别和检测抗衰老的候选物，以预 防或治疗老年性疾病或老年症。
在本发明的的一个方面，是用酵母端粒功能障碍模型cdc13-1进行高通量筛选，发现有用的抗老化剂，来预防或治疗与老年性疾病或老年症。cdc13-1模型已经被很好的研究过，一旦cdc13-1p被灭活后，立即进入在G2/M细胞周期阻滞，以及随后的细胞死亡。采用此模型，本发明提供了一种快速的方法来筛选候选物，防止端粒功能障碍诱导的细胞死亡。其他的有端粒功能障碍、并表现出快速的细胞周期阻滞和随后的细胞死亡的模型也可用，例如，stn1-1，cdc17-1和cdc17-2，分别是Stn1p(酵母的端粒封盖蛋白)和Cdc17p(酵母DNA聚合酶的催化亚基中的α-引物酶)温度敏感突变体。此外，其他酵母细胞表现出端粒功能障碍和细胞凋亡，也可以使用，其中包括、但不仅限于est1，est2，est3，hdf1，hdf2，或cdc13-2突变体。人类的元代成纤维细胞WI-38，是人类的端粒功能障碍模型，可用以确认或检测的候选药物。以下(实施例1-6)使用cdc13-1模型。
实施例1
用细胞存活实验筛选鉴别试剂来防止在cdc13-1模型中的细胞死亡(如图所示19)
为高通量筛选在cdc13-1模型中可改善线粒体功能、延长细胞周期阻滞状态、并防止细胞死亡的化合物或化学成分，-80℃保存cdc13-1细胞先被激活，即放在新鲜YEPD或酵母完全培养基(YC)培养板上，然后在允许细胞生长的温度培养为3～5天(约24℃)，直至形成单菌落。几个酵母菌落被培养在液体培养基中过夜(24℃)，然后用新鲜培养基稀释，从1∶2到1∶20(对cdc13-1菌株1∶10稀释最合适)。
酵母细胞液分装到96-孔板或任何合适培养板。要测试的化合物或化学成分，如药物、化合物、肽库或其他的库，用水、DMSO(二甲基亚砜)或其他有机溶剂连续稀释，然后加入细胞培养液，加入的体积小于5％的总体积；加入相应的溶剂作为阴性对照、1nM的雷帕霉素作为阳性对照。然后酵母细胞被培养在一个非允许温度中(约37℃)两天，或直至阴性对照组无存活细胞。
取少量(如5μl)的细胞转移到含YEPD琼脂的另一个96-孔或任何其他培养板上(细胞还可以稀释后再转移)，然后在允许生长的温度(约24℃)孵育至少3天，或直至阳性对照有菌落形成。促进菌落形成的化合物将被视为初级候选药物。另外，少量(如5μl)的细胞也可被转移到含YEPD液体的另一个96-孔或任何其他适用培养板中，然后在24℃培养，并在595nm定期读取光密度OD595值，比如每天一次。相对于阴性对照，能增加细胞密度是初级候选药物。这种方法图示于图19。
初级候选药物将由细胞凋亡和ROS测量的实验来确认，如实施例2和3所的分别描述的。初级候选药物可以进一步被测试是否抑制细胞生长于G1期，通过监测在允许生长的温度下的生长曲线如同图1D和通过使用流式细胞仪分析DNA含量的分布如图2A。为了消除初级候选药物刺激细胞突变、从而在不允许生长温度中形成菌落的可能性，候选药物与cdc13-1细胞一起孵化在37℃去形成菌落。另一个重要方面是候选药物将被测试是否能改善线粒体功能、和抑制静止状态的哺乳动物细胞如WI38的损失。它们是否可有效地预防某老年性疾病将被用特定的疾病模型来测试，例如，它们是否可以抑制肿瘤的发生、和/或在动物模型中减少脑梗塞。
适合高通量筛选的其他类型的培养板包括但不限于384-孔板。此外，这种方法可以用其他类型培养板来检测和确认的候选药物，如6-孔、12-孔板等。
实施例2
用细胞凋亡实验筛选鉴别防止cdc13-1细胞死亡的试剂
cdc13-1的细胞死亡展现凋亡标记，这个特点可以用于高通量筛选，因它比实施例1的细胞存活实验所需时间少。它也可用于确认从实施例1的高通量筛选出阳性候选药物。另外，此实验也可以用以筛选抑制细胞凋亡的试剂。
化合物与cdc13-1在非允许温度(约37℃)中孵化一天(约18-24小时)后，细胞用FITC-Z-VAD-FMK(只结合到激活的caspase的自杀底物)在黑暗中20分钟染色，或其他合适的细胞凋亡检测剂。细胞与磷酸盐缓冲液(PBS)洗一次，用荧光酶标仪读取荧光值。由于细胞死亡，阴性对照组(筛选的无化合物或组合物)会有很高的FITC信号，减少FITC的化合物或组合物，被认为是阳性的候选药物。它们可以用实施例1的细胞存活实验来确认，并被进一步测试能否减少活ROS和改善线粒体功能。这些活性也将用人的端粒功能障碍模型如WI-38分裂静止细胞进行测试。它们在预防癌症和其他与老年性疾病或老年症活性，也将进一步在适当的模型进行测试。
作为凋亡标记，测量磷脂酰翻转的膜联蛋白V结合法已在图3B中描述，它也可用于高通量筛选。
实施例3
用ROS测量法来筛选鉴别防止cdc13-1细胞死亡试剂(图20所示)
cdc13-1细胞死亡展现显著升高的ROS水平，这种特性可以用于筛选抑制cdc13-1细胞死亡的试剂。ROS测量法比实施例1的细胞存活实验所需时间少，可以用于高通量筛选。它也可用于确认从实施例1和实施例2的高通量筛选出阳性候选药物。此外，这也可以被用来检测筛选抗氧化剂。
图20说明的实验过程。细胞与化合物在非允许温度(37℃)中孵化一天后，用脱氢罗丹明-123染色(或其他合适的ROS检测剂)黑暗中一小时，用荧光酶标仪读取荧光值。阴性对照(筛选的无化合物或组合物)在细胞死亡过程中释放的高水平ROS。能减少ROS的化合物或组合物是阳性的候选药物，他们对细胞死亡的预防和线粒体功能的改善将在酵母和人体模型中进一步测试。它们在预防癌症、神经退行性病变和其他老年性疾病或老年症的作用也将在适当的模型被测试。
实施例4
测量线粒体量来筛选鉴别防止端粒功能障碍模型的分裂静止细胞退化的试剂
cdc13-1的细胞死亡伴随着线粒体量(mito mass)的急剧增加。这种特性可以用来寻找抑制cdc13-1细胞死亡的分子。线粒体量检测比实施例1中所描述的细尚存活实验花费较少的时间，可用于高通量筛选，以及确认从实施例1，2和3中所述的高通量筛选出的阳性的候选药物。
化合物与cdc13-1细胞在非允许温度(约37℃)孵化一天后，用MitoTracker Green FM(或任何合适的线粒体量染色剂)在黑暗中染色20分钟，荧光酶标仪读取荧光值。由于死细胞中含有更多恶化并失去了膜电位的线粒体，它们会展现急剧增加的线粒体量染色。改善线粒体功能防止细胞死亡的化合物或化学成分，能降低线粒体的恶化、减少线粒体量信号，被认为是阳性候选物，它们将被进一步测试是否可以延长酵母和人细胞的分裂静止状态。
实施例5
从DNA或核酸库中筛选鉴别防止分裂静止细胞死亡的生物分子
这里以Li-PEG转染法作为例子，其他的转染方法也可使用。对数期快速生长的新鲜酵母细胞(cdc13-1)用蒸馏水洗净，然后和DNA库或核酸库一起孵化在转染缓冲液中(2mM TRIS pH7.5，100mM LiAC，0.5mM MgAC2，0.1mM CaAC2，15％甘油，40％PEG-4000，24μg/ml ssDNA)，24℃1-4小时。混合物然后在约42℃热休克15分钟，再加入3倍体积的丰富的培养基YEPD，并在室温(约24℃)孵育一个小时。离心去除液体后，细胞重新悬浮于蒸馏水H2O，然后根据特定的核酸库的要求涂在选择培养基平板上。在允许的温度24℃培养至少4天后，收获转染菌落并在允许温度(约24℃)培养在液体选择培养基中。对数生长期的细胞被转移到一个非允许温度(约37℃)培养2天，让灭活cdc13-1p诱导的细胞进入死亡。细胞然后被适当稀释，涂在YEPD培养基，在约24℃培养4天以上，或直到存活细胞形成菌落。每个菌落被单独挑出，DNA被分离并用PCR(DNA聚合酶链反应)扩增和测序来确定DNA序列。可防止cdc13-1死亡的DNA将被确认，通过把纯化的DNA再引入cdc3-1细胞中。阳性DNA将被进一步测试是否预防分裂静止的人成纤维细胞的恶化和调节线粒体和氧化应激的功能。
实施例6
从基因破坏或基因删除库中筛选鉴别促进细胞死亡的蛋白质
要筛选鉴别可促进由端粒功能障碍引起的细胞死亡的功能的蛋白质，基因干扰的库(例如酵母转座子插入库)可以引入cdc13-1细胞。另外，cdc13-1基因也可以引入酵母的基因删除菌株库，其中每一株都有一个特定的基因删除，可以防止灭活cdc13-1p引起的细胞死亡的缺失的蛋白的或功能丧失的蛋白，被认为是阳性候选物。
实施例7
在哺乳动物细胞中筛选鉴别刺激线粒体生物合成的试剂
这个实验可直接用人体细胞。细胞株的选择是根据某一老年性疾病或老年症。细胞与化合物一起孵化在96-孔板大约一天，用乙醇(最后的60％左右)固定以消除线粒体膜电位的影响，然后用MitoTracker染料(Invitrogen)染色、荧光酶标仪读取荧光信号。与对照比，大于20％荧光信号的增加为阳性，阳性化合物将在cdc13-1和WI-38模型中被测试是否防止端粒功能障碍引起的细胞损失，以及对线粒体膜潜能和ROS水平影响。
筛选鉴别刺激线粒体生物合成的候选物另一种方法，是使用实时定量反向转录聚合酶链反应(即real time quantitative RT-PCR or qRT-PCR)，以测试线粒体生物合成的转录因子的mRNA是否被上调。线粒体生物合成的转录因子，包括TFAM，NRF-1，NRF-2，PGC-1α，PGC-1β，TFB1M，TFB2M，ERRS(ERRα，ERRβ，ERRγ)，PRC，POLRMT，PPAPs(PPAPα，PPAPγ，PPAPδ)，和RIP140。在这里，以TFAM作为一个例子，优选用元代人体细胞。WI-38细胞接种于96-孔板(或其他格式)，与化合物一起培养一定的时间(如，大约18小时)。细胞用PBS洗涤和用TaqMan Gene Expression Cells-to-CT Kit(Applied Biosystems)溶解于孔板中，如此可去除DNA，使细胞裂解物可进行RT-PCR。细胞裂解液用Qiagene的onestep qRT-PCR试剂盒和QuantiFast多重RT-PCR试剂盒的试剂稀释在一个新96孔板，TFAM的引物组5’-ACAGCTAACTCCAAGTCAGATTATGTC-3’和5’-GTAGACACTTGAGACTAACAACCGT-3’，肌动蛋白(对照组)的引物组5’-CAAAGACCTGTACGCCAACACAGT-3’和5’-TTGCTGATCCACATCTGCTGGAAG5-3’已被成功地用于检测由50pM雷帕霉素和其他试剂对TFAM mRNA的提高(数据未显示，见Fu X，et al，PLoS ONE，3(4)：e2009，2008)。能增加TFAM表达＞2倍左右的化合物或组合物，将视为阳性，被进一步在cdc13-1或WI-38端粒功能障碍模型的维持分裂静止的测试。
实施例8
在WI-38成纤维细胞中测试化合物或组合物的防止分裂静止状态丧失的活性
会有这样情况，如化合物或组合物是已知的药物、天然物或天然提取物、已知的肽、蛋白，或从酵母分裂静止模型筛选获得的候选物，它们需要在人体细胞中被测试它是否具有抗衰老的作用。这些实验可以如图7所示，用人的WI-38成纤维细胞完成。
实施例9
用cdc13-1酵母细胞测定雷帕霉素及其类似物的抗衰老的生物活性浓度
有时会需要确定雷帕霉素的抗衰老的生物活性的浓度或含量，例如，不同批纯化的雷帕霉素，样品在纯化过程中的粗提取物，给药后血液、组织中雷帕霉素、或雷帕霉素衍生物的化学衍生物等。为确定从各种来源的雷帕霉素的抗衰老生物活性，含雷帕霉素材料将被适当的溶剂进行所需的连续稀释(如3倍或10倍的系列稀释)。大约或小于5％培养总体积的稀释物将被加入到被YEPD培养基10倍稀释新鲜cdc13-1细胞中。在非允许温度(约37℃)孵化约24至36小时来诱导细胞死亡的后，存活细胞的数量用图1所述的菌落形成实验测量。为了得到活性雷帕霉素的标准浓度，纯化雷帕霉素是用DMSO稀释到1μM。过夜培养的cdc13-1用YEPD稀释10倍。1μM雷帕霉素用含细胞培养基的连续稀释3倍或2倍至10pM，然后将混合物在约37℃孵育约24-36小时以灭活cdc13-1p诱导细胞死亡。不同浓度的标准雷帕霉素得到的存活细胞数用菌落形成来测量，并相对相应的浓度绘制标准曲线。用各种雷帕霉素来源而得到的存活细胞数比较的标准曲线，从而确定雷帕霉素的抗衰老活性浓度。对于一种雷帕霉素的衍生物，标准曲线将先被相同的衍生物创造出。为测量雷帕霉素衍生物的活性浓度，纯化的衍设立生物将被用于标准曲线。除了菌落形成，cdc13-1细胞死亡引起的细胞凋亡检测和释放ROS也可以被用来确定雷帕霉素的抗衰老的生物浓度。
这种方法也可以用来确定其他抗衰老试剂或化学成分的抗衰老活性的生物浓度，如EGCG。此外，这种方法可用于检测生物样品的抗衰老活性。
实施例10
用cdc17-1和cdc17-2酵母突变体检测抗衰老剂
雷帕霉素(1和3nM)和葡萄糖限制用来作为抗衰老药物的例子。从-80℃的储藏cdc17-1和cdc17-2酵母细胞被培养在新鲜YEPD板上以被活化，然后在允许温度(约24℃)孵育5天，直到单菌落形成。挑取几个酵母菌落放在YEPD液体培养基中24℃培养过夜。培养液(10倍稀释)用新鲜YEPD含有雷帕霉素0，1和3nM，或0.5％葡萄糖YEPD的培养基稀释，然后在一个非允许高温(约37℃)培养22小时，以灭活的DNA聚合酶-α、引起生长停滞和随后的细胞死亡。用菌落形成实验测定存活细胞数目。简短的说，处理过得细胞被连续稀释(10倍)，然后放少量的细胞(5μL)在YEPD培养板上，再在允许的温度(约24℃)孵育至少4天，让存活细胞形成菌落。如图21A所示，雷帕霉素防治在cdc17-1和cdc17-2变异酵母中灭活DNA聚合酶-α诱导的细胞死亡。
实施例11
用est1-ts酵母突变体检测抗衰老剂
在此模型中用雷帕霉素作为抗衰老药物的例子。雷帕霉素可以防止端粒酶失活est1-ts酵母细胞(est1-ts rad52::URA3)中ROS上升和类似凋亡细的胞死亡，如文章所述(Qi H et al，PlosOne，2008)。此实验是用含雷帕霉素的培养板做的，此法也可改为在液体培养基中培养细胞，以适应高通量筛选。简单的说，est1-ts细胞被从-80℃储存中激活，即把菌划在新鲜YEPD培养板后在允许的温度(约24℃)培养5天，直到单菌落形成。挑几个酵母菌落在YEPD液体培养基中，在一个允许温度约24℃培养过夜。细胞用新鲜YEPD稀释约100-300倍到，加入0或1nM雷帕霉素，在非允许温度约37℃孵育混合物两天左右。细胞再次用含0或1nM的雷帕霉素的YEPD或对照溶剂稀释100-300倍，然后在不允许温度37℃培养两天左右。不允许温度中灭活端粒酶导致逐步缩短的端粒和最终端粒功能障碍，从而引起ROS上升和类似凋亡的细胞死亡。用细胞凋亡检测或ROS的检测来测量细胞死亡。ROS测量用脱氢罗丹明123(约5μg/ml在PBS缓冲液中)黑暗中染色并用流式细胞仪分析。细胞的凋亡也可用如例2的caspase活性来测定.
B.针对营养信号/TOR/AMPK/线粒体/分裂静止途径来防治老年性疾病或 老年症
实施例12
在哺乳动物模型系统测量分裂静止途径的组成部分。
此例使用免疫印迹在哺乳动物细胞中确定抗老化剂诱导的的分裂静止途径关键蛋白质的增加。雷帕霉素作为一个例子。最后传代20天后的WI-38细胞后(分裂静止态)用图示的雷帕霉素剂量处理18小时，细胞裂解液用免疫印迹分析。低剂量雷帕霉素(50和100pM)，但不是高剂量(2000pM)，增加分裂静止途径的关键蛋白P53，P21和pRb(图9C)。
实施例13
具有防止老年性疾病或癌症化学预防活性的试剂刺激线粒体的功能并延长分裂静止状态
实施例如图7、10和11所述。在图10显示，50pM雷帕霉素、250μM AICAR、20μg/ml EGCG、1.6μg/ml GSE、葡萄糖限制(从0.4％到0.2％)、20μg/ml的越橘提取物(BE)、1μM AITC和12.5μM 2-脱氧葡萄糖增加线粒体量(一个线粒体生物合成的指标)，也可阻止分裂静止细胞WI-38的损失(图7)。此外，苯异硫氰酸盐、水飞蓟宾、亚硒酸钠和染料木素可以增加线粒体量，也在酵母细胞中表现出不同程度的对端粒死亡的保护作用(图10和11)。
实施例14
AMPK的活化剂抑制TPA诱导NIH3T3细胞的癌转化。
此实验如实施例19所述。简单的说，1500个NIH3T3细胞分别与50μL的0.4％琼脂培养基(10％的牛胎血清基础培养基)混合，铺在在96孔板中，其孔中已经铺了一层50μl的0.8％琼脂培养基，加入100μl的含药物的液体培养基，使终浓度如图所示，DMSO，10μM TPA，40μM AICAR，或10μM TPA+40μM AICAR，在5％CO2 37℃培养大于7天，每5天加50μl新鲜培养基，细胞克隆数在显微镜下计数。如图12所示，TPA急剧减少NIH 3T3细胞中的线粒体量，AMPK的活化剂AICAR扭转这种下降(图12)。此外，AICAR也减少(图13A及13B)TPA诱导的NIH 3T3细胞的癌转化形成的克隆。
C.用低剂量TOR抑制剂模仿的CR以预防和治疗与老年性疾病或老年症
TOR抑制剂和雷帕霉素。TOR特异抑制剂雷帕霉素(西罗莫司)是一类的大环三烯分子的原始成员，包括CCI779(temsirolimus)，RAD-001(everolimus)，AP-23573(Deforolimus)，AP-23675，AP-23841，ABT-578(zotarolimus)，7-epi-雷帕霉素，7硫代甲基-雷帕霉素，7-epi-三甲氧苯基-雷帕霉素，7-epi-硫代甲基-雷帕霉素，7-去甲氧基-雷帕霉素，32-去甲氧基-雷帕霉素，2-去甲基-雷帕霉素，以及42-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素。雷帕霉素最早被发现具有抗真菌活性(C.Vezina et al.，J.Antibiot.28，721，1975；S.N.Sehgal et al.，J.Antibiot.28，727，1975；H.A.Baker et al.，J.Antibiot.31，539，1978；U.S.Patent 3,929,992；andU.S.Patent 3,993,749)。
雷帕霉素是用来作为免疫抑制剂(Santos E and Nebreda AR，Santos，FASEB 3：2151-63，1989)：预防或治疗系统性红斑狼疮(美国专利5,078,999)、肺部炎症(美国专利5,080,899)、在器官移植时的排斥反应性、关节炎(Carlson et al，J Pharmacol Exp Ther 266：1125-38，1993；Foroncewi.cz et al，Transpl Int 18：366-8，2005)、眼内炎症(美国专利5,387,589)、和心脏炎症性(美国专利5,496,832)；用于防止血管损伤后平滑肌细胞增殖和内膜增厚(美国专利号5,288,711，和5,516,781)，也用于预防再狭窄(美国专利第6585764号)；也被专利用于治疗眼疾(美国专利号7083802)。包括老年性黄斑变性(AMD)(美国专利申请公布号2006/0182771，2006/0247265，2006/0263409，及2007/0105761，2006年获得专利/0264453)，脉络膜新生血管(CNV)和湿性AMD(美国专利申请公布号2005/0187241)。
雷帕霉素已被证明有抗增殖和抗肿瘤活性。雷帕霉素单独或与其他药物合用，已显示出对成人T细胞白血病/淋巴瘤的抗肿瘤活性，(美国专利号4,885,171和4,401,653；欧洲专利申请525960A1)以及对恶性癌(美国专利号为5,206,018)和贫血(美国专利号为5,561,138)的作用。它可用于治疗转移性乳腺癌(美国专利申请公布号2007/0104721)，肿瘤(美国专利申请公布号2004/0176339和2006/0035904)，和早期的B细胞产生的急性淋巴细胞白血病(美国专利7026330)。也被专利用于治疗结节性硬化症(美国专利申请公布号2005/0070567)，抑制哺乳动物的异常细胞的生长(美国专利申请公布号2006/0035907)，降低增殖和促进肿瘤细胞的凋亡(美国专利专利申请公布号2006/0094674)，和治疗增生及炎症性疾病(美国专利申请公布号2006/0135549)和慢性病毒感染(美国专利申请公布号2007/0099844)。
使用雷帕霉素/mTOR抑制剂或与其他药物的组合也被用于治疗其他各种疾病或症状，如糖尿病(美国专利号为5,321,009)，皮肤病(美国专利号为5,286,730)的报告，肠道疾病(美国专利号5,286,731)，神经系统疾病，神经退行性疾病(美国专利号6,187,756)，骨质流失(美国专利申请公布号2006/0173033)，抗血管生成的缓释人工晶体植入(美国专利申请公布号2007/0059336)，和自体吞噬诱导而抑制蛋白质的构象紊乱(美国专利申请公布号2007/0155771)。
雷帕霉素被发现与TOR和FKBP12形成复合物，抑制TOR与它正常的底物蛋白形成复合物如TOR-Raptor(TORC1)，抑制TORC1形成导致蛋白翻译和核糖体生物合成被抑制，因此细胞周期抑制在G1期。TORC1抑制也导致为营养而增加蛋白质和细胞内器官的自体吞噬。目前雷帕霉素对各种疾病的治疗用途主要是基于这个TORC1干扰和随后的在G1细胞周期的抑制和自体吞噬。与此对比，低剂量的雷帕霉素及其类似物，模仿CR，通过AMPK/线粒体/分裂静止途径来预防或治疗老年性疾病。
实施例15
低剂量雷帕霉素抑制TPA诱导NIH3T3细胞癌转化
NIH3T3细胞的癌转化是以很好的肿瘤的形成在体外模型，以在软琼脂中形成克隆来测定(称为锚碇独立增长(anchorage-independent))。诱变剂TPA(12-O-Tetradecanoylphorbol-13醋酸酰佛波醇-13-乙酯)是众所周知的蛋白激酶C(PKC)激活剂，在小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中激活原癌基因和癌转化。肿瘤形成的检测，采用TPA诱导NIH3T3细胞锚地独立增长。有趣的是，10μM TPA急剧减少NIH 3T3细胞中线粒体量，1nM雷帕霉素扭转这种下降如图12所示。此外，1nM雷帕霉素防止10μM TPA诱导的NIH 3T3细胞的转化(图13)。1500个NIH3T3细胞分别与50mL的0.4％琼脂培养基(10％的牛胎血清培养基)，铺在在96孔板中，其孔中已经铺了一层50μL的0.8％琼脂培养基，加入100ml的含药物的液体培养基，使终浓度如图所示，DMSO，10μM TPA，1nM雷帕霉素，或10μM TPA+1nM雷帕霉素。在5％CO2 37℃培养超过7天，每5天加50μL新鲜培养基，细胞克隆数在显微镜下计数。如图13A及13B所示，1nM雷帕霉素完全阻止癌转化。雷帕霉素为1nM略放慢了NIH3T3的增长速度，为等待生长慢的克隆，继续培养21天后再计数，结果与培养7天的相同。因此，1nM雷帕霉素放慢生长，不是阻止克隆形成的原因，却支持线粒体功能通过维持分裂静止而防止锚碇独立增长或肿瘤形成。相反，临床剂量雷帕霉素被报道促进肿瘤的发生，从而增加淋巴瘤、人类皮肤癌和其他癌症的风险。最近发现的临床剂量的雷帕霉素抗增殖活性是限制已形成的肿瘤的生长，可能是通过其抑制G1期和蛋白合成的作用。
此外，AICAR(40μM)，能激活AMPK并延长分裂静止状的人成纤维细胞的寿命(图7)，也能扭转TPA引发的线粒体量下降(图12)，以及抑制锚碇独立增长(图13A和13B)。这些数据进一步支持线粒体功能在防止锚碇独立增长或肿瘤形成的作用。结论，低剂量雷帕霉素和AICAR防止肿瘤形成，起码是TPA诱导的肿瘤形成的情况下。
实施例16
低剂量雷帕霉素降低ROS和延长培养的GCN神经细胞的寿命
小脑颗粒神经元(CGN)从7日龄幼鼠得到。简短地说，从大脑剥离的小脑被放置在一个含BMEM与20mM HEPES缓冲液(BMEM-HEPES)的Petri培养皿中。小脑的脑膜和血管被丢弃，以确保最小的血管内皮细胞的污染，用解剖刀切成小碎块，用胰酶消化37℃15分钟，再加入1ml含0.025％大豆胰蛋白酶抑制剂和0.05％DNA酶的BME胰来抑制胰酶，组织碎片通过火抛光过的巴斯德吸管被小心磨碎，直到它被分散成均匀的悬浮液。悬浮液通过乙醇消毒过得40微米的滤膜过滤，再离心沉淀。小脑颗粒神经元被悬浮在B27补充神经基质(neurobasal)培养基中含有25mM氯化钾(Invitrogen，Carlsbad，CA)。细胞然后接种到24孔板(1板/小脑)，并在含B27，20mM的氯化钾，0.5mM的谷氨酰胺，100单位/ml青霉素，100μg/ml链霉素的神经基质(Neurobasal)培养基(Invitrogen)中培养。培养7天后加雷帕霉素。培养31天后，用MTT法测量神经细胞的存活。如图所示14A，大多数CGN细胞培养31天后已经死亡丢失了。然而，低剂量雷帕霉素防止这种丢失，延长CGN细胞的寿命，但高剂量的雷帕霉素没有此效应。
为分析ROS，刚分离的CGN细胞液悬浮在Neurobal完全培养基中，以1百万细胞/毫升/管的密度，接种于12X75毫米试管中，细胞经雷帕霉素处理20小时后，用2μg/ml的脱氢罗丹明123染色30分钟，流式细胞仪分析。图14B显示，雷帕霉素降低了悬浮的CGN细胞的ROS水平。
实施例17
低剂量雷帕霉素在大鼠中风模型中减少小脑梗死面积
此例用缺血性中风的大脑中动脉(MCA)闭塞模型。自发性高血压易中风的大鼠(SHR-SP)被随机分为两组(n＝每组8只)：对照组DMSO和雷帕霉素组。大鼠被15％水合氯醛(300毫克/公斤，腹膜内(I.P.))的麻醉。用改进后的田村和McGill的方法造成电凝MCA末端引起的永久局灶性脑缺血(Tamura A，et al.，J Cerebral Blood Flow Metab.1981；1：53-60.McGillJK，et al.，Stroke.36：135-141，2005)。简短地说，右MCA在嗅束和下脑静脉之间的一段被电凝固。凝固的动脉用微型剪刀以确保血液供应完全停止。
MCA闭塞10分钟后，雷帕霉素和对照组DMSO给药，24小时后收获MCA闭塞脑样品，2毫米厚的冠状切片立即用2％2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色，梗死区域为白色，正常为红色。梗死面积和大脑半球每个切片(双面)的面积被用图像分析来描绘和量化分析(Microsystems Type DM LB2，Leica，Germany)。脑水肿可能会干扰在评估梗死体积，此点可用标准方法来纠正，即从对侧大脑半球体积减去非缺血同侧半球体积。梗死体积表达为占对侧半球体积的百分比。梗死组织和半球的重量以类似的方式测定。如图15A所示，雷帕霉素低剂量在10μg/kg明显减少MCA闭塞引起的梗死体积，而临床剂量1mg/kg的雷帕霉素没有这种效果(Sharkey，JJ and Butcher SP，Nature，371：336-339，1994)。此外，MCA闭塞20天前给药雷帕霉素，剂量为0，0.3，1，3和10μg/kg，也可阻止脑梗死(图15B)。
实施例18
低剂量雷帕霉素降低MPP+诱导的ROS
MPP+是线粒体呼吸链复合物I(NADH CoQ1还原酶)的抑制剂，也是多巴胺神经毒素。它通常用于在鼠类中诱发帕金森氏病。人原代成纤维细胞WI-38细胞与200μM MPP+孵化3天，图14表示的不同浓度的雷帕霉素也与细胞一起孵化3天，然后用脱氢罗丹明123在黑暗中染色30分钟，再用流式细胞仪分析。脱氢罗丹明123可被氧化成罗丹明(显示荧光)，与ROS水平成正比。如图16所示，MPP+大大增加了ROS水平，低剂量雷帕霉素在pM范围明显减少此增加。
实施例19
低剂量雷帕霉素在大鼠模型中减少心肌梗死面积
心肌梗死(MI)实验选用200至250克的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(每组n＝10-12只)。雷帕霉素以0，10，或100μg/kg/天的剂量，给药3天，然后进行心肌梗死实验。大鼠在乙醚麻醉时被左侧开胸暴露心脏，在肺动脉流出道和左心房之间的左前降支动脉用6-0聚丙烯缝线结扎，然后跳动的心脏被迅速放到其正常的位置，关闭胸部，排除空气。大鼠被送回具有以前提过的条件的笼子里。冠状动脉结扎后5个小时，用过量苯巴比妥处死大鼠。左心室被分离并沿心脏长轴垂直切成4～5片，切片在37℃用0.1％的硝基蓝四氮唑磷酸盐缓冲液染色30分钟，和MI的大小的测量用所述方法(Lin LL，et al，J Cardiovasc Pharmaco，50：327-332，2007)。正常组织被染成蓝色，而坏死组织仍然不染色。分离染色和未染色的组织并分别称重。MI的大小表达为占总左室重量比例。如图所示。如图16所示，在10μg/kg/天的低剂量雷帕霉素显著减少心肌梗死面积，但高剂量100μg/kg/天不行。
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应理解上述详细的说明文本和所附的例子是为了说明、而非限制该发明的范围。本领域的技术人员一旦看过本发明文本后，基于本发明的多种变体都是显而易见的。本发明的全部范围应该由权利要求及其等同物、说明书及其变体来确定。

Claims (13)

1.一种鉴别或测定试剂的方法，包括用分裂静止模型筛选一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物，其中所述一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物能够防止分裂静止细胞或不分裂细胞的细胞周期阻滞状态的退化，且其中所述的分裂静止模型为分裂静止或不分裂细胞，且所述的分裂静止模型为包含功能异常的染色体端粒的变异酵母。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述包含功能异常的染色体端粒的变异酵母选自cdc13-1、cdc13-2、stn1-1、cdc17-1、cdc17-2、hdf1、hdf2、est1、est2以及est3。
3.如权利要求1所述的方法，包含如下步骤：
(i)在细胞周期由于端粒功能异常而被阻滞的条件下，将一种化合物或组合物与酵母细胞一同孵育；
(ii)用细胞凋亡实验测量死亡细胞数量，或者，作为替代的，
(iii)去除造成细胞周期阻滞的条件，并且测量存活细胞数；以及
(iv)与对照实验比较步骤(ii)的细胞死亡数或步骤(iii)的细胞存活数，所述对照实验除了没有化合物或组合物外，其他条件均与步骤(i)相同，
其中，如果相对于对照实验，步骤(ii)得到减少的死亡细胞数，或者步骤(iii)得到增加的存活细胞数，则表明所孵育的化合物或组合物是一个候选的抗衰老剂。
4.如权利要求3所述的方法，进一步包含如下步骤：
(v)将鉴别出的化合物或组合物与哺乳动物分裂静止细胞一同孵育一段时间；
(vi)测量存活的分裂静止细胞数量；和
(vii)与对照实验比较存活的分裂静止细胞数量
其中，相对于对照实验，如果存活的分裂静止细胞数量增加，则确认孵育的化合物或组合物是一个候选的抗衰老剂。
5.如权利要求2或3所述的方法，进一步包含如下步骤：
(viii)将鉴别出的化合物或组合物与正常生长的人体细胞株一同孵育一段时间；
(ix)通过测量线粒体量、线粒体DNA含量、或线粒体转录因子的表达来测定人体细胞的线粒体生物合成，和
(x)与对照实验比较步骤(ix)得到的结果，
其中，相对于对照实验，如果步骤(ix)得到增强的线粒体生物合成，则进一步确认鉴别出的化合物或组合物为候选的抗衰老剂。
6.一种鉴别或测定试剂的方法，包括用分裂静止模型筛选一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物，其中所述一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物能够防止分裂静止细胞或不分裂细胞的细胞周期阻滞状态的退化，且其中所述的分裂静止模型为分裂静止或不分裂细胞，且所述的分裂静止模型为表现出端粒酶活性不足的原代人体细胞株。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述表现出端粒酶活性不足的原代人体细胞株包含成纤维细胞、内皮细胞或上皮细胞中的至少一种。
8.一种鉴别或测定试剂的方法，包括用分裂静止模型筛选一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物，其中所述一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物能够防止分裂静止细胞或不分裂细胞的细胞周期阻滞状态的退化，且其中所述的分裂静止模型为分裂静止或不分裂细胞，且所述的分裂静止模型为表现出端粒酶活性不足的人体细胞株。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述表现出端粒酶活性不足的人体细胞株包含在TRF2、POT1、TERT、TERC或WRN基因上的变异。
10.一种鉴别或测定试剂的方法，包括用分裂静止模型筛选一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物，其中所述一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物能够防止分裂静止细胞或不分裂细胞的细胞周期阻滞状态的退化，且其中所述的分裂静止模型为分裂静止或不分裂细胞，且所述的分裂静止模型为由化学试剂导致的端粒功能异常模型。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述的化学试剂是博来霉素、阿霉素、或G-四链体配体。
12.一种鉴别或测定试剂的方法，包括用分裂静止模型筛选一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物，其中所述一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物能够防止分裂静止细胞或不分裂细胞的细胞周期阻滞状态的退化，且其中所述的分裂静止模型为分裂静止或不分裂细胞，且所述的分裂静止模型为由癌基因活化和/或DNA损伤反应的活化而创建的模型。
13.一种鉴别或测定试剂的方法，包括用分裂静止模型筛选一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物，其中所述一个或多个抗衰老的候选化合物或组合物能够防止分裂静止细胞或不分裂细胞的细胞周期阻滞状态的退化，且其中所述的分裂静止模型为分裂静止或不分裂细胞，且所述的分裂静止模型为表现出端粒功能异常的小鼠、大鼠或粟酒裂殖酵母菌株。
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CN (2) CN104997774A (zh)
AU (1) AU2010233073B2 (zh)
BR (1) BRPI1010655A2 (zh)
EA (1) EA023244B1 (zh)
ES (1) ES2685947T3 (zh)
WO (1) WO2010118419A2 (zh)

Families Citing this family (108)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130128018A (ko) 2009-04-10 2013-11-25 하이얀 치 새로운 노화 방지 물질 및 그 확인 방법
KR101372037B1 (ko) 2010-04-06 2014-03-10 (주)아모레퍼시픽 근육 타입 변화를 촉진하는 조성물
US11998479B2 (en) 2011-02-04 2024-06-04 Seed Health, Inc. Method and system for addressing adverse effects on the oral microbiome and restoring gingival health caused by sodium lauryl sulphate exposure
US10940169B2 (en) 2015-11-30 2021-03-09 Joseph E. Kovarik Method for reducing the likelihood of developing cancer in an individual human being
US11844720B2 (en) 2011-02-04 2023-12-19 Seed Health, Inc. Method and system to reduce the likelihood of dental caries and halitosis
US11951139B2 (en) 2015-11-30 2024-04-09 Seed Health, Inc. Method and system for reducing the likelihood of osteoporosis
US11951140B2 (en) 2011-02-04 2024-04-09 Seed Health, Inc. Modulation of an individual's gut microbiome to address osteoporosis and bone disease
US9358236B2 (en) 2011-02-16 2016-06-07 Novartis Ag Combinations of therapeutic agents for use in the treatment of neurodegenerative diseases
WO2012177927A1 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transgenic animals capable of being induced to delete senescent cells
US8574852B2 (en) * 2011-07-01 2013-11-05 National Yang Ming University Method for evaluating cell aging by expression level of cofilin
KR101900478B1 (ko) * 2011-08-04 2018-09-20 한올바이오파마주식회사 암의 재발 또는 전이의 억제용 약제학적 조성물
RU2014128010A (ru) 2011-12-13 2016-02-10 Бак Инститьют Фо Рисерч Он Эйджин Способы улучшения средств консервативной терапии
CA2771621A1 (en) * 2011-12-15 2013-06-15 Sabine Mai Methods for diagnosing alzheimer's disease
US10646552B2 (en) 2012-01-17 2020-05-12 Tyme, Inc. Pharmaceutical compositions and methods
US8481498B1 (en) 2012-01-17 2013-07-09 Steven Hoffman Pharmaceutical compositions and methods
US20130183263A1 (en) 2012-01-17 2013-07-18 Steven Hoffman Pharmaceutical compositions and methods
US10272068B2 (en) 2012-01-17 2019-04-30 Tyme, Inc. Pharmaceutical compositions and methods
WO2013158664A2 (en) 2012-04-17 2013-10-24 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Use of engineered viruses to specifically kill senescent cells
WO2013165921A2 (en) 2012-04-30 2013-11-07 Sonomaceuticals, Llc Therapeutic use of chardonnay seed products
WO2013177599A1 (en) * 2012-05-22 2013-11-28 Lunar Pharmaceuticals (Pty) Ltd Nutricosmetic composition
US20140010801A1 (en) * 2012-06-08 2014-01-09 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Compositions and Methods for Restoring or Rejuvenating Stem/Progenitor Cell Function
JP6126216B2 (ja) * 2012-06-18 2017-05-10 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 薬剤分野の老化防止利益を評価するための方法及びモデル
US9901081B2 (en) 2012-08-23 2018-02-27 Buck Institute For Research On Aging Transgenic mouse for determining the role of senescent cells in cancer
US9901080B2 (en) 2012-08-23 2018-02-27 Buck Institute For Research On Aging Transgenic mouse having a transgene that converts a prodrug into a cytotoxic compound in senescent cells
CN102871991B (zh) * 2012-10-24 2014-06-18 中国医学科学院放射医学研究所 二甲双胍在对放化疗损伤起保护作用的药物中的应用
WO2014089124A1 (en) * 2012-12-03 2014-06-12 Cenexys, Inc. Immunogenic compositions for inducing an immune response for elimination of senescent cells
KR101425303B1 (ko) * 2013-01-11 2014-07-31 공주대학교 산학협력단 이소플라본을 포함하는 관절염 예방 및 치료용 약학적 조성물
CN105073119A (zh) * 2013-01-23 2015-11-18 司菲埃拉制药私人有限公司 用于线粒体生物发生和与线粒体功能障碍或耗竭相关的疾病的新颖11β-羟基类固醇化合物
EP2948134B1 (en) 2013-01-24 2020-03-04 Palvella Therapeutics, Inc. Compositions for transdermal delivery of mtor inhibitors
FR3002453B1 (fr) * 2013-02-28 2015-08-07 Univ Bordeaux Segalen Nouvelles combinaisons comprenant un extrait polyphenolique de marc de raisin avec un antihypertenseur et leurs utilisations
CA2903565A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbott Laboratories Methods of maintaining and improving muscle function using epigallocatechin-3-gallate
KR101497797B1 (ko) * 2013-03-19 2015-03-04 이화여자대학교 산학협력단 열충격단백질(Heat shock protein) 및 LRPPRC 단백질 신호전달을 이용한 파킨슨병 치료제 스크리닝 방법
US9943497B2 (en) 2013-05-15 2018-04-17 Gachon University Of Industry-Academic Cooperation Foundation Pharmaceutical composition for preventing or treating pulmonary fibrosis
CA2856419C (en) 2013-09-20 2018-06-26 Sabine Mai Methods for evaluating alzheimer's disease and disease severity
WO2015054280A1 (en) 2013-10-08 2015-04-16 Lam Therapeutics, Inc. Rapamycin for the treatment of lymphangioleiomyomatosis
US9326962B2 (en) 2013-10-22 2016-05-03 Steven Hoffman Compositions and methods for treating intestinal hyperpermeability
US9763903B2 (en) 2013-10-22 2017-09-19 Steven Hoffman Compositions and methods for treating intestinal hyperpermeability
US9585841B2 (en) 2013-10-22 2017-03-07 Tyme, Inc. Tyrosine derivatives and compositions comprising them
US10751313B2 (en) 2013-10-22 2020-08-25 Yamo Pharmaceuticals Llc Compositions and methods for treating autism
US10813901B2 (en) 2013-10-22 2020-10-27 Yamo Pharmaceuticals Llc Compositions and methods for treating autism
US11826388B2 (en) 2013-12-20 2023-11-28 Seed Health, Inc. Topical application of Lactobacillus crispatus to ameliorate barrier damage and inflammation
US11213552B2 (en) 2015-11-30 2022-01-04 Joseph E. Kovarik Method for treating an individual suffering from a chronic infectious disease and cancer
US11980643B2 (en) 2013-12-20 2024-05-14 Seed Health, Inc. Method and system to modify an individual's gut-brain axis to provide neurocognitive protection
US11969445B2 (en) 2013-12-20 2024-04-30 Seed Health, Inc. Probiotic composition and method for controlling excess weight, obesity, NAFLD and NASH
US11839632B2 (en) 2013-12-20 2023-12-12 Seed Health, Inc. Topical application of CRISPR-modified bacteria to treat acne vulgaris
US11833177B2 (en) 2013-12-20 2023-12-05 Seed Health, Inc. Probiotic to enhance an individual's skin microbiome
US11529379B2 (en) 2013-12-20 2022-12-20 Seed Health, Inc. Method and system for reducing the likelihood of developing colorectal cancer in an individual human being
US11026982B2 (en) 2015-11-30 2021-06-08 Joseph E. Kovarik Method for reducing the likelihood of developing bladder or colorectal cancer in an individual human being
US11672835B2 (en) 2013-12-20 2023-06-13 Seed Health, Inc. Method for treating individuals having cancer and who are receiving cancer immunotherapy
US11642382B2 (en) 2013-12-20 2023-05-09 Seed Health, Inc. Method for treating an individual suffering from bladder cancer
US11998574B2 (en) 2013-12-20 2024-06-04 Seed Health, Inc. Method and system for modulating an individual's skin microbiome
US12005085B2 (en) 2013-12-20 2024-06-11 Seed Health, Inc. Probiotic method and composition for maintaining a healthy vaginal microbiome
WO2015095968A1 (en) * 2013-12-23 2015-07-02 University Of Prince Edward Island Lipoic acid-resveratrol conjugates and uses thereof
WO2015103480A1 (en) * 2014-01-02 2015-07-09 Massachusetts Eye & Ear Infirmary Treating ocular neovascularization
WO2015116735A1 (en) 2014-01-28 2015-08-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and combinations for killing senescent cells and for treating senescence-associated diseases and disorders
US9993472B2 (en) 2014-01-28 2018-06-12 Unity Biotechnology, Inc. Treatment for osteoarthritis in a joint by administering a means for inhibiting MDM2
HRP20230863T1 (hr) 2014-04-04 2023-11-10 AI Therapeutics, Inc. Inhalacijska formulacija rapamicina, namijenjena liječenju stanja povezanih sa starenjem
AU2015249923B2 (en) 2014-04-21 2020-09-17 Sonomaceuticals, Llc Therapeutic use of grape seed products
GB201407805D0 (en) * 2014-05-02 2014-06-18 Dukosi Ltd Battery condition determination
US10729668B2 (en) * 2014-06-30 2020-08-04 The Regents Of The University Of California Ketobutyrate compounds and compositions for treating age-related symptoms and diseases
EP3795578A3 (en) 2014-07-23 2021-05-26 Sphaera Pharma Pvt. Ltd. Hydroxysteroid compounds, their intermediates, process of preparation, composition and uses thereof
US20170290763A1 (en) * 2014-09-30 2017-10-12 Taiwan Mitochondrion Applied Technology Co., Ltd. Composition with exogenous mitochondria as active ingredients and use thereof and cell repairing method therefor
MX2017004440A (es) 2014-10-07 2017-11-01 Lam Therapeutics Inc Una formulacion de rapamicina inhalable para el tratamiento de hipertension pulmonar.
KR101676609B1 (ko) * 2014-10-07 2016-11-17 차의과학대학교 산학협력단 Rheb 유전자를 이용한 연골세포의 노화 및 탈분화 억제 방법
KR20160049435A (ko) 2014-10-27 2016-05-09 삼성전자주식회사 Atm 저해제를 포함하는 세포의 노화를 감소시키기 위한 조성물 및 그의 용도
WO2016066608A1 (en) * 2014-10-28 2016-05-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treatment of pulmonary cell senescence and peripheral aging
EP3473253A1 (en) 2014-10-29 2019-04-24 University Of Maryland Methods of treating age-related symptoms in mammals and compositions therefor
CN107427434A (zh) * 2014-11-28 2017-12-01 株式会社爱茉莉太平洋 用于诱导促进细胞复壮的包含染料木黄酮或表没食子儿茶素没食子酸酯的组合物
DK3248597T3 (da) 2015-01-19 2024-04-08 Univ Keio Terapeutisk middel til sensorineuralt høretab
JP6524465B2 (ja) 2015-04-28 2019-06-05 タイコエレクトロニクスジャパン合同会社 コネクタ
EP3297629A1 (en) 2015-05-20 2018-03-28 Novartis AG Pharmaceutical combination of everolimus with dactolisib
KR20180081501A (ko) * 2015-09-24 2018-07-16 드렉셀유니버시티 진피 장애를 치료하거나 예방하는 신규한 조성물 및 방법
WO2017066712A2 (en) * 2015-10-16 2017-04-20 The Children's Medical Center Corporation Modulators of telomere disease
WO2017066796A2 (en) * 2015-10-16 2017-04-20 The Children's Medical Center Corporation Modulators of telomere disease
CN105441481B (zh) * 2015-12-29 2019-01-15 中国科学院生物物理研究所 一种sirtuin6基因缺失人类间充质干细胞的制备方法
ITUB20160068A1 (it) * 2016-01-28 2017-07-28 Paolo Ferrazza Composizione utile nella prevenzione o trattamento degli stati di malassorbimento secondari a chirurgia bariatrica in soggetti obesi.
WO2017129772A1 (en) * 2016-01-29 2017-08-03 Xellia Phamaceuticals Aps Stable pharmaceutical compositions of temsirolimus
WO2017142952A1 (en) * 2016-02-15 2017-08-24 University Of Southern California Drug combinations and methods to stimulate embryonic-like regeneration to treat diabetes and other diseases
CN106109737A (zh) * 2016-06-29 2016-11-16 中科和素（天津）医药科技有限公司 一种抗氧化的营养制剂及其制备方法
MX2019006090A (es) 2016-11-23 2019-08-21 Novartis Ag Metodos para mejorar la respuesta inmune con everolimus, dactolisib o ambos.
WO2018129007A1 (en) * 2017-01-03 2018-07-12 Bioatla Llc Protein therapeutics for treatment of senescent cells
EP3565520A4 (en) 2017-01-06 2020-08-19 Palvella Therapeutics, Inc. Anhydrous compositions of MTOR inhibitors and method of use
JP6967261B2 (ja) * 2017-03-01 2021-11-17 国立大学法人九州大学 メタボリックシンドロームの予防又は改善用食品組成物及び医薬組成物
US20210275543A1 (en) * 2017-03-30 2021-09-09 Nserm (Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale) Methods for the treatment of mitochondrial genetic diseases
JP2018172346A (ja) * 2017-03-31 2018-11-08 株式会社東洋新薬 妊娠サポート用組成物
KR102643567B1 (ko) * 2017-04-25 2024-03-05 버크 인스티튜트 포 리서치 온 에이징 수명 및 건강수명을 연장시키기 위한 제제
EP3665184A4 (en) 2017-08-09 2022-03-23 Intervene Immune, Inc. MEDICATION AND DOSING DEVICE TO REVERSE HUMAN AGING
AU2017442781B2 (en) * 2017-12-15 2020-10-01 Tsukasa Nagao Health food and cosmetics for increasing the amount of apoptosis cells and decreasing the amount of necrosis cells and a method of manufacturing a sprout-forcing grape seed-derived ingredient for increasing the amount of apoptosis cells and decreasing the amount of necrosis cells
US11911356B2 (en) 2017-12-22 2024-02-27 The Johns Hopkins University Regulation of mutant TERT by BRAF V600E/map kinase pathway through FOS/GABP in human cancer
EP3743515A4 (en) * 2018-01-23 2021-12-01 The General Hospital Corporation COMPOSITIONS AND METHODS TO IMPROVE MITOCHONDRIAL FUNCTION
CN108295068A (zh) * 2018-01-25 2018-07-20 沈阳药科大学 小檗碱的医药用途
WO2019157516A1 (en) 2018-02-12 2019-08-15 resTORbio, Inc. Combination therapies
JP2021530463A (ja) 2018-07-02 2021-11-11 パルヴェラ セラピューティクス、インク． ｍＴＯＲ阻害剤の無水組成物および使用方法
WO2020068705A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Ponce De Leon Health Designated Activity Company Process of making calcium alpha-ketoglutarate
KR20200046680A (ko) * 2018-10-25 2020-05-07 한국과학기술원 Pdk1 저해제를 포함하는 역노화 유도용 조성물
KR102405350B1 (ko) * 2018-10-25 2022-06-07 한국과학기술원 Pdk1 저해제를 포함하는 역노화 유도용 조성물
KR102132921B1 (ko) * 2018-12-13 2020-07-13 영남대학교 산학협력단 조타로리무스를 유효성분으로 함유하는 세포노화 관련 질환 예방 또는 치료용 조성물
CN110161226A (zh) * 2019-02-27 2019-08-23 杭州晟康细胞生物科技有限公司 一种检测衰老细胞用的抗体、试剂盒及检测方法
CN110101697A (zh) * 2019-05-28 2019-08-09 北京大学 小檗碱在制备抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16表达的药物中的应用
JP2021038147A (ja) * 2019-08-30 2021-03-11 国立大学法人 鹿児島大学 ミトコンドリア生合成促進剤
CA3158905A1 (en) * 2019-12-09 2021-06-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Chemical cocktail for inducing senescence in human neurons to promote disease modeling and drug discovery
CN111286500B (zh) * 2020-03-23 2022-08-23 华东理工大学 一种等离子体作用结合氧限制生产辅酶q10的方法
CN116194115A (zh) * 2020-10-21 2023-05-30 南京纽邦生物科技有限公司 提高运动表现及其耐力的方法
CN112553288B (zh) * 2020-12-09 2022-06-07 汤臣倍健股份有限公司 一种筛选具有抗衰老潜力天然产物的方法
CN113215066B (zh) * 2021-06-29 2021-09-24 中国农业科学院农产品加工研究所 一种砖红链霉菌a001及其应用
CN114504598B (zh) * 2022-02-23 2023-08-22 前沿外泌体(珠海横琴)生物医药研发有限公司 脐带干细胞在制备抗衰老的药物中的应用
WO2024109652A1 (zh) * 2022-11-24 2024-05-30 长风药业股份有限公司 (-)-表没食子儿茶素没食子酸酯类化合物的应用
CN115998881A (zh) * 2023-02-08 2023-04-25 暨南大学附属第一医院（广州华侨医院） 自噬调节剂在制备治疗脑梗死后脑细胞衰老的药物中的应用

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US525960A (en) * 1894-09-11 montgomery
ZA737247B (en) 1972-09-29 1975-04-30 Ayerst Mckenna & Harrison Rapamycin and process of preparation
US3993749A (en) * 1974-04-12 1976-11-23 Ayerst Mckenna And Harrison Ltd. Rapamycin and process of preparation
US5206018A (en) * 1978-11-03 1993-04-27 Ayerst, Mckenna & Harrison, Inc. Use of rapamycin in treatment of tumors
US4885171A (en) * 1978-11-03 1989-12-05 American Home Products Corporation Use of rapamycin in treatment of certain tumors
US4401653A (en) * 1981-03-09 1983-08-30 Ayerst, Mckenna & Harrison Inc. Combination of rapamycin and picibanil for the treatment of tumors
US4650803A (en) * 1985-12-06 1987-03-17 University Of Kansas Prodrugs of rapamycin
US5355245A (en) * 1988-02-12 1994-10-11 Donnelly Corporation Ultraviolet protected electrochemichromic rearview mirror
US5078999A (en) * 1991-02-22 1992-01-07 American Home Products Corporation Method of treating systemic lupus erythematosus
US5080899A (en) 1991-02-22 1992-01-14 American Home Products Corporation Method of treating pulmonary inflammation
US5321009A (en) 1991-04-03 1994-06-14 American Home Products Corporation Method of treating diabetes
DK0525960T3 (da) 1991-06-18 1996-04-15 American Home Prod Anvendelse af rapamycin til behandling af T-celle leukæmi/lymfon
ZA924953B (en) 1991-07-25 1993-04-28 Univ Louisville Res Found Method of treating ocular inflammation
US5286731A (en) * 1991-09-17 1994-02-15 American Home Products Corporation Method of treating immunoinflammatory bowel disease
US5286730A (en) * 1991-09-17 1994-02-15 American Home Products Corporation Method of treating immunoinflammatory disease
US5151413A (en) 1991-11-06 1992-09-29 American Home Products Corporation Rapamycin acetals as immunosuppressant and antifungal agents
US5516781A (en) 1992-01-09 1996-05-14 American Home Products Corporation Method of treating restenosis with rapamycin
US5288711A (en) * 1992-04-28 1994-02-22 American Home Products Corporation Method of treating hyperproliferative vascular disease
US5489508A (en) 1992-05-13 1996-02-06 University Of Texas System Board Of Regents Therapy and diagnosis of conditions related to telomere length and/or telomerase activity
DE4322826A1 (de) * 1993-07-08 1995-01-12 Galenik Labor Freiburg Gmbh Pharmazeutisches Präparat
US5561138A (en) * 1994-12-13 1996-10-01 American Home Products Corporation Method of treating anemia
US5496832A (en) * 1995-03-09 1996-03-05 American Home Products Corporation Method of treating cardiac inflammatory disease
TW427904B (en) * 1995-12-07 2001-04-01 American Home Prod Neuroprotective agents
US5688245A (en) * 1996-05-02 1997-11-18 Runge; Thomas M. Cannula system for a biventricular cardiac support system or a cardiopulmonary bypass system
US6043224A (en) 1996-09-05 2000-03-28 The Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for treatment of neurological disorders and neurodegenerative diseases
US6273913B1 (en) 1997-04-18 2001-08-14 Cordis Corporation Modified stent useful for delivery of drugs along stent strut
JP2004520076A (ja) * 2000-10-03 2004-07-08 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 疾患の治療におけるテロメア維持への干渉
US7192612B2 (en) 2001-02-22 2007-03-20 Purdue Research Foundation Compositions and methods based on synergies between capsicum extracts and tea catechins for prevention and treatment of cancer
TWI296196B (en) 2001-04-06 2008-05-01 Wyeth Corp Antineoplastic combinations
US20040142048A1 (en) * 2002-02-22 2004-07-22 Morre Dorothy M. Compositions based on proanthocyanadin-catechin synergies for prevention and treatment of cancer
US7026330B2 (en) 2002-05-30 2006-04-11 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods for treatment of acute lymphocytic leukemia
WO2004000045A2 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Canacure Corporation Liquid compositions comprising non-digestible oligosaccharides and green tea catechins, method and uses thereof
US20060094674A1 (en) 2002-07-05 2006-05-04 Neel Benjamin G Combination of mtor inhibitor and a tyrosine kinase inhibitor for the treatment of neoplasms
US20050070567A1 (en) * 2002-08-12 2005-03-31 The Regents Of The University Of Michigan Diagnosis and treatment of diseases arising from defects in the tuberous sclerosis pathway
US20060078533A1 (en) * 2004-10-12 2006-04-13 Omoigui Osemwota S Method of prevention and treatment of aging and age-related disorders including atherosclerosis, peripheral vascular disease, coronary artery disease, osteoporosis, arthritis, type 2 diabetes, dementia, alzheimer's disease and cancer
EP1539157B1 (en) 2002-09-18 2013-08-21 Trustees Of The University Of Pennsylvania Rapamycin for use in inhibiting or preventing choroidal neovascularization
UA83484C2 (uk) * 2003-03-05 2008-07-25 Уайт Спосіб лікування раку грудей комбінацією похідного рапаміцину і інгібітора ароматази - летрозолу, фармацевтична композиція
US20050013880A1 (en) * 2003-03-06 2005-01-20 Magnuson Bernadene Ann Anthocyanin-rich compositions and methods for inhibiting cancer cell growth
EP1613308A4 (en) 2003-03-27 2008-02-20 Lankenau Inst Medical Res CANCER TREATMENT METHODS
US20070155771A1 (en) 2003-04-11 2007-07-05 David Rubinsztein Methods and means for treating protein conformational disorders
AU2004255340B2 (en) * 2003-07-08 2008-05-01 Novartis Ag Use of rapamycin and rapamycin derivatives for the treatment of bone loss
US7083802B2 (en) * 2003-07-31 2006-08-01 Advanced Ocular Systems Limited Treatment of ocular disease
US20080194019A1 (en) * 2003-09-09 2008-08-14 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Tumor Suppressor Lkb1 Kinase Directly Activates Amp-Activated Kinase
EP2261331A1 (en) 2003-09-11 2010-12-15 Hubit Genomix, Inc. Method and kit for detecting proliferative diseases causing sclerosis, preventive and/or remedy for proliferative diseases causing sclerosis and method and kit for identifying substance efficacious in preventing and/or treating proliferative diseases causing sclerosis
BRPI0507834A (pt) * 2004-02-23 2007-07-10 Sugen Inc método para tratar o crescimento celular anormal usando inibidores de c-met e de m-tor
EP2266586A1 (en) 2004-03-23 2010-12-29 Lifeline Nutraceuticals Corporation Compositions and method for alleviating inflammation and oxidative stress in a mammal
US7846940B2 (en) * 2004-03-31 2010-12-07 Cordis Corporation Solution formulations of sirolimus and its analogs for CAD treatment
US8003122B2 (en) * 2004-03-31 2011-08-23 Cordis Corporation Device for local and/or regional delivery employing liquid formulations of therapeutic agents
US20070059336A1 (en) 2004-04-30 2007-03-15 Allergan, Inc. Anti-angiogenic sustained release intraocular implants and related methods
WO2006050461A1 (en) * 2004-10-28 2006-05-11 Wyeth Use of an mtor inhibitor in treatment of uterine leiomyoma
NZ574663A (en) * 2004-12-20 2010-05-28 Wyeth Corp Rapamycin analogues and the uses thereof in the treatment of neurological, proliferative, and inflammatory disorders
WO2006084233A2 (en) * 2005-02-04 2006-08-10 Cytrx Corporation Modulation of endogenous aicar levels for the treatment of diabetes and obesity
BRPI0608152A2 (pt) * 2005-02-09 2009-11-10 Macusight Inc formulações para tratamento ocular
EP1848432B1 (en) 2005-02-16 2013-07-17 Md Bioalpha Co., Ltd. Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of diseases involving obesity, diabetes, metabolic syndrome, neuro-degenerative diseases and mitochondria dysfunction diseases
JP2006249015A (ja) * 2005-03-11 2006-09-21 Mochida Pharmaceut Co Ltd 細胞老化抑制剤
US20060247265A1 (en) 2005-04-28 2006-11-02 Clackson Timothy P Therapies for treating disorders of the eye
US8093401B2 (en) * 2005-08-04 2012-01-10 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Sirtuin modulating compounds
CN103110948A (zh) 2005-11-04 2013-05-22 惠氏公司 mTOR抑制剂、赫赛汀和/或HKI-272的抗肿瘤组合
ZA200804550B (en) * 2005-11-09 2009-08-26 Combinatorx Inc Methods, compositions, and kits for the treatment of medical conditions
US20090029904A1 (en) 2006-07-21 2009-01-29 Sean Oldham Compositions and methods for treatment of insulin-resistance diseases
RU2010104916A (ru) * 2006-08-16 2011-08-20 Михаил В. Благосклонный (US) Способ профилактики и лечения возрастных заболеваний
JP2010520289A (ja) * 2007-03-07 2010-06-10 アブラクシス バイオサイエンス， エルエルシー 抗癌剤としてラパマイシンおよびアルブミンを含むナノ粒子
CA2686736A1 (en) * 2007-05-03 2008-11-13 Abraxis Bioscience, Llc Nanoparticle compositions comprising rapamycin for treating pulmonary hypertension
CN101333503B (zh) 2007-06-27 2013-02-06 中国科学院上海生命科学研究院 分离衰老细胞的方法和模型
KR20130128018A (ko) 2009-04-10 2013-11-25 하이얀 치 새로운 노화 방지 물질 및 그 확인 방법

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
p53/p21CIP1 Cooperate in Enforcing Rapamycin-induced G1 Arrest and Determine the Cellular Response to Rapamycin;Shile Huang;《CANCER RESEARCH》;20010415;第61卷;3373–3381 *
TOR Regulates Cell Death Induced by Telomere Dysfunction in Budding Yeast;Haiyan Qi;《Plos One》;20081024;第3卷(第10期);e3520:1-10 *

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