CN102600269A - 一种含异长春花苷内酰胺的胆木叶组合物及其制剂与用途 - Google Patents

Abstract

本发明是一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，其特征在于：该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为50-98%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～0.7：0.5～10。本发明还公开了上述组合物的制剂。本发明所述的组合物可以清热解毒、消肿止痛，可以治疗急性扁桃腺炎、急性咽喉炎、急性结膜炎、上呼吸道感染或慢性盆腔炎、附件炎等疾病；可以治疗轻至中度疼痛药。

Description

一种含异长春花苷内酰胺的胆木叶组合物及其制剂与用途

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，特别是一种含异长春花苷内酰胺的胆木叶组合物。本发明还涉及上述胆木叶组合物的制剂与用途。

背景技术

胆木，又名乌檀，药乌檀，黄羊木，为茜草科乌檀属植物乌檀（Nauclea officinalis Pierre ex Pitard）的干燥茎、枝、树皮和根。生于高山近顶或半山腰荫蔽潮湿地带的杂木林中，分布于广东(西部和西南部)、广西和海南等省区。胆木性味苦，寒，具有清热解毒、消肿止痛之功效。我国广西、广东和海南民间常用于感冒发热、肺炎、肠炎、痢疾、湿疹、皮疹、脓疡等病的治疗。国内目前有“胆木注射液”和“胆木浸膏片”中药制剂，临床用于急性扁桃腺炎，急性咽喉炎，急性结膜炎及上呼吸道感染。 “胆木注射液”和“胆木浸膏片”均以胆木心材作为原药材入药制备，年缺口500吨以上，备受原料的制约。而以胆木叶代替胆木心材作为原药材，有利于可持续开发利用和保护胆木资源。

目前针对胆木叶的公开专利文献主要为胆木叶制备工艺的技术方案，尚未见利用胆木叶制备总黄酮和3个生物碱（异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺、短小蛇根草苷）的总含量在50%~98%之间的组合物，也未见将该组合物用于制备抗感染、抗炎和缓解疼痛药物的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种成分明确、质量可控、疗效确切的胆木叶组合物。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了以上述胆木叶组合物为原料的制剂与用途。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明所述的一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，其特点是：该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为50-98%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～0.7 ：0.5～10。

根据对多批次胆木叶组合物的分析，以下是本发明的优选技术方案。

以上所述的胆木叶组合物，其特点是：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

  异长春花苷内酰胺                       3-46%；

     10-羟基-异长春花苷内酰胺               1-24%；

  短小蛇根草苷                           0.2-21%；

     山奈酚-3-O-芸香糖苷                    0.5-20%；

         芦丁                                   0.1-21%。

以上所述的胆木叶组合物，其特点是：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

 异长春花苷内酰胺                        4-40%；

    10-羟基-异长春花苷内酰胺                2-20%；

 短小蛇根草苷                            0.2-15%；

    山奈酚-3-O-芸香糖苷                     1-15%；

        芦丁                                    0.1-15%。

以上所述的胆木叶组合物，其特点是：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

 异长春花苷内酰胺                        5-35%；

    10-羟基-异长春花苷内酰胺                3-15%；

 短小蛇根草苷                            0.2-10%；

    山奈酚-3-O-芸香糖苷                     1.1-13%；

        芦丁                                    0.1-10%。

以上所述的胆木叶组合物，其特点是：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

        异长春花苷内酰胺                        5-34%；

    10-羟基-异长春花苷内酰胺                3-10%；

        短小蛇根草苷                            0.2-5%；

    山奈酚-3-O-芸香糖苷                     1.2-12%；

        芦丁                                    0.1-5%。

以上所述的胆木叶组合物，其特点是：该组合物中，异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～2 ：2～10。

以上所述的胆木叶组合物，其特点是：该组合物中，异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～3 ：3～10。

本发明还公开了一种如以上技术方案所述的胆木叶组合物制剂，其特点是，它以胆木叶组合物为有效原料，加入药剂学上可接受的药用辅料，制成临床上可接受的任何一种剂型的药剂，其剂型包括但不限于片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、液体制剂、煎膏剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂、注射剂、栓剂、凝胶剂、气雾剂、贴剂。

本发明所述的胆木叶组合物或者本发明所述的胆木叶组合物制剂可以用于制备清热解毒、消肿止痛的药物。也可以用于制备治疗急性扁桃腺炎、急性咽喉炎、急性结膜炎、上呼吸道感染或慢性盆腔炎、附件炎等疾病的药物。还可以用于制备治疗轻至中度疼痛的药物；所述的轻至中度疼痛包括但不仅限于头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛和痛经。

本发明所述的胆木叶组合物可以通过现有技术中公开的方法获得。也可以采用常规中药提取方法获得。采用前述方法获得胆木叶提取物后，按现有技术方法或者按本发明提供的方法进行检测本发明组合物所述的主要成份的含量，当含量达不到本发明要求的含量时，可以进行相关单体添加，或者对提取物进行进一步提纯，从而得到本发明所述的胆木叶组合物。

以下列举如下3种方法制备3批本发明所述的胆木叶组合物。

1、取胆木叶300kg，粉碎，加70%的乙醇溶液回流提取，提取液滤过，减压浓缩，放至室温，进行碱溶酸沉处理：加NaOH溶液调节pH至弱碱性，滤过；滤液加盐酸溶液调节pH至弱酸性，离心，上清液备用；沉淀再进行2次碱溶酸沉处理，合并3次碱溶酸沉处理的上清液，上HPD100树脂柱，依次用水、25%乙醇溶液洗脱除杂；以4倍柱体积的70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，减压干燥，得浸膏粉5.8kg，批号为20091008。

2、取胆木叶300kg，粉碎，加70%的乙醇溶液回流提取，提取液滤过，减压浓缩，放至室温，加NaOH溶液调节pH至弱碱性，滤过；滤液上HPD100树脂柱，依次用水、30%乙醇溶液洗脱除杂；以4倍柱体积的70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，得浸膏粉4.5kg，批号为20091026。

3、取胆木叶300kg，粉碎，加70%的乙醇溶液回流提取，提取液滤过，减压浓缩，放至室温，加NaOH溶液调节pH至近中性，离心，上清液上HPD100树脂柱，依次用水、30%乙醇溶液洗脱除杂；以3.5倍柱体积的70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，减压或喷雾干燥，得浸膏粉3.2kg，批号为20091221。

本发明对胆木叶组合物进行了物质基础研究。经反复硅胶柱层析和半制备HPLC制备，分离得到5个主要成份，利用波谱分析，并与参考文献对照，鉴定出3个生物碱成分：异长春花苷内酰胺（strictosamide）、10-羟基异长春花苷内酰胺（10-hydroxy strictosamide）、短小蛇根草苷（Pumiloside）；2个黄酮成分：山奈酚-3-O-芸香糖苷（Kaempferol-3-O-Rutinoside）、芦丁（Rutin），结构鉴定数据如下：

异长春花苷内酰胺（strictosamide）：白色无定形粉末(甲醇)，mp 179~180℃。UV(CH₃OH) λ _max nm: 202，226.5。ESI-MS m/z: 499.2（M＋H⁺）。¹H NMR (DMSO-d₆，500MHz) δ: 7.37 (1H，d，J =6.96 Hz，H-9)， 7.23 (1H，d，J =2.30Hz，H-17)，7.33(1H，d，J = 6.96 Hz，H-12)，7.06 (1H，td，J = 6.96，1.88 Hz，H-11)，6.97 (1H，t，J =6.96 Hz，H-10)，5.60 (1H，dt，J = 19.47，10.2Hz，H-19)，5.37 (1H，d， J = 1.8Hz，H-21) ，5.33(1H，dd，J = 19.47，1.8 Hz，Ha-18)，5.30 (1H, dd，J = 10.2，1.8 Hz，Hb-18)， 5.02 (1H，d，J =3.91 Hz，H-3)，4.78 (1H，dt，J = 14.83，6.43 Hz，Ha-5)，4.44 (1H，d，J = 7.91Hz，H-1')，3.66(1H，ddd，J =11.63，5.71，1.84Hz，Ha-6')，3.41 (1H，dt，J = 11.63，5.71Hz，Hb-6')，2.95～3.12 (3H，m，H-3'，H-4'，H-5')，2.97 (1H，m， Hb-5)，2.82 (1H，m，H-2')，2.79~2.84 (1H，m，Ha-6)，2.58~2.62 (3H，m，Hb-6，H-15，H-20)，2.49 (1H，br，Ha-14)，1.90 (1H，td，J = 13.43，5.72Hz，Hb-14)。¹³C NMR (DMSO-d₆，125 MHz) δ: 134.64 (C-2)，52.75 (C-3)，42.98 (C-5) ，20.71 (C-6)，108.54 (C-7)，127.13 (C-8)，117.7 (C-9)，118.79(C-10)，121.06 (C-11)，111.40 (C-12)，135.81 (C-13)，25.78 (C-14) ，23.55 (C-15)，107.67 (C-16) ，149.69 (C-17)，119.97 (C-18)，133.43 (C-19)，42.47 (C-20)，95.93 (C-21)，163.55 (C-22)， 99.08 (C-1')，72.80 (C-2')，77.28 (C-3')，70.05 (C-4')，76.87(C-5')，61.11(C-6')。 

10-羟基异长春花苷内酰胺（10-hydroxy strictosamide）：浅黄色无定形粉末(甲醇)。UV(CH₃OH) λ _max nm: 207、230、276。ESI-MS m/z: 515.3（M＋H⁺）。¹H NMR (CD₃OD，300MHz) δ: 6.76 (1H， d，J =1.92 Hz，H-9)，7.37 (1H，d，J =2.34 Hz，H-17)，7.15(1H，d，J = 8.16 Hz，H-12)，6.65(1H，dd，J = 8.34，2.34 Hz，H-11)，5.58~5.70 (1H，m，H-19)，5.39 (1H, dd，J =6.48，1.68Hz，Hb-18，H-21)，5.31(1H，dd，J =10.11，2.04 Hz，Ha-18)，5.03(1H，s，H-3)，4.92 (1H，dd，J =5.22，12.69Hz，Hb-5)，2.94~3.11 (1H，m，Ha-5)，4.58 (1H，d，J = 7.89Hz，H-1')，3.63 (1H，dd，J =5.43，11.82Hz，Ha-6')，3.86 (1H，dd，J =5.43，9.99Hz，Hb-6')，3.16~3.32 (3H，m，H-3'，H-4'，H-5')，2.94~3.11 (1H，m，H-2')，2.88 (H，m，Hb-6)，2.56 (1H，m，Ha-6)， 2.77 (1H，m，H-15)， 2.66 (H，m，H-20)，1.95~2.06 (1H，m，Ha-14) ，2.40~2.44 (1H，m，Hb-14)。¹³C NMR (CD₃OD， 75 MHz) δ: 135.5 (C-2)，55.1 (C-3)，44.7 (C-5)，22.1 (C-6) ，109.6 (C-7) ，129.4 (C-8) ，103.1 (C-9)，151.5 (C-10)，112.6 (C-11)，112.2 (C-12)，132.5 (C-13)，27.2 (C-14)，24.9 (C-15)，109.2 (C-16)，120.4 (C-17)，134.3 (C-18)，44.8 (C-19) ,98.0 (C-20)，167.0 (C-21)， 100.5 (C-1')，74.3 (C-2')，78.2 (C-3')，71.3 (C-4')，77.9 (C-5')， 62.6 (C-6')。

短小蛇根草苷（Pumiloside）：白色具棒状结晶(甲醇)，mp 286～288℃。UV(CH₃OH) λ _max nm: 210、244、315、328。ESI-MS m/z: 513.3（M＋H⁺）。¹H NMR (DMSO-d₆，500MHz) δ: 8.13(1H，d，J = 8.1 Hz，H-9)，7.67 (1H，m，H-11)，7.60 (1H，d，J =8.2Hz，H-12)，7.35 (1H，t，J = 8.1 Hz，H-10)，7.05 (1H，d，J =2.6 Hz，H-17)，5.82 (1H，m，H-19)，5.48 (1H，dd，J = 17.1，1.7Hz，H-18a)，5.40 (1H，s，H-21)，5.35 (1H，dd，J = 10.3，1.7Hz，H-18b)，4.77 (1H，d，J =12.0 Hz，H-3)，4.55 (1H，m，H-1')，4.48(1H，d，J =14.2 Hz，H-5a)，4.33 (1H，d，J =14.2 Hz，H-5b)，3.70(1H，m，Ha-6') ，3.44 (1H，m，Hb-6')，3.29 (1H，m，H-15) ，3.16~3.21 (2H，m，H-5'，H-3')， 2.97~3.07 (2H，m，H-4'，H-2') ，2.66(1H，m，H-20)，2.66 (1H, m，H-14a)，2.02 (1H, m，H-14b)。¹³C NMR (DMSO-d₆，125MHz) δ: 149.60 (C-2)，59.40(C-3)，47.40(C-5)，112.89 (C-6)，172.89 (C-7)，125.28 (C-8)，124.66(C-9)，123.15(C-10)，131.48(C-11) ，118.31(C-12)，140.31 (C-13)，28.13 (C-14)，23.63 (C-15)，108.89 (C-16)，145.02 ( (C-17)，120.41 (C-18)，132.47(C-19)，43.56 (C-20)，94.81 (C-21) ，163.88(C-22) ，97.78(C-1') ，73.12(C-2')，77.23 (C-3')，70.05 (C-4')，76.44 (C-5')，61.04 (C-6')。

山奈酚-3-O-芸香糖苷（Kaempferol-3-O-Rutinoside）：黄色粉末(甲醇)，mp 191～192℃。UV(CH₃OH) λ _max nm: 209 nm、233 nm、269nm、372nm。ESI-MS m/z: 617.2[M＋Na]⁺。¹H NMR (DMSO-d₆，300MHz) δ: 12.53 (1H，s，5-OH)， 7.98(2H，d，J=8.58Hz，H-2'，6')，6.87(2H，d，J =8.73Hz，H-5'，3')，6.17 (1H，s，H-6)，6.38(1H，s，H-8)， 0.99 (3H，d ，J =6.03Hz，H-6''')。¹³C NMR (DMSO-d₆，75MHz) δ: 156.6 (C-2)，133.1 (C-3)，177.2 (C-4)，161.1 (C-5)，98.9 (C-6)，161.1 (C-7)，93.8 (C-8)，156.5 (C-9)，103.6 (C-10)，120.9 (C-1') ，130.8(C-2')， 115.0(C-3')，159.8(C-4')，115.1 (C-5')，120.9 (C-6')，101.4 (C-1'') ，74.1 (C-2'')，76.3 (C-3'')，70.6 (C-4'')，75.7 (C-5'')，66.9 (C-6'') ，100.7 (C-1''') ，70.3 (C-2''')，70.6 (C-3''')，71.8 (C-4''')，68.2 (C-5''')，17.7 (C-6''')。

          芦丁（Rutin）：黄色粉末(甲醇)，mp185～187℃。UV(CH₃OH) λ _max nm: 203 nm、258 nm、358 nm。¹H NMR (DMSO-d₆，300MHz) δ: 6.19 (1H，s，H-6)，6.38(1H ，s，H-8)，6.84(1H，d，J =8.31Hz，H-5')，7.54(2H，d，J =6.78Hz，H-6'，2')，0.99d（3H，J =5.82，H-6'''）。 ¹³C NMR (DMSO-d₆，75MHz) δ: 156.5 (C-2)，133.3 (C-3)，177.3 (C-4)，156.5 (C-5)，98.6 (C-6)，164.1 (C-7)，93.5 (C-8)，161.2 (C-9)，103.9 (C-10)，121.5 (C-1') ，115.2 (C-2')， 144.7(C-3')，148.4(C-4')，116.2 (C-5')，121.1 (C-6')，101.2 (C-1'') ，74.0 (C-2'')，76.4 (C-3'')，70.5 (C-4'')，75.9 (C-5'')，66.9 (C-6'') ，100.7 (C-1''') ，70.3 (C-2''')，70.5 (C-3''')，71.8 (C-4''')，68.2 (C-5''')，17.7 (C-6''')。

      本发明对胆木叶组合物进行了含量分析，包括5个主要成份：异长春花苷内酰胺（strictosamide）、10-羟基异长春花苷内酰胺（10-hydroxy strictosamide）、短小蛇根草苷（Pumiloside）、山奈酚-3-O-芸香糖苷（Kaempferol-3-O-Rutinoside）、芦丁（Rutin）的HPLC分析，及总黄酮的UV检测。具体方法和结果如下：

        一、胆木叶组合物的HPLC分析：

1、色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A为0.1%磷酸水溶液，B为乙腈，从15% B开始以线性梯度方式经30min达到32% B，再经5min达到95% B，检测波长：226nm（异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺、短小蛇根草苷）、360nm（山奈酚-3-O-芸香糖苷、芦丁），流速：1ml/min，柱温：30℃，理论板数按异长春花苷内酰胺计应不低于3000。

2、对照品溶液的制备：取各对照品适量，精密称定，加乙醇溶解，制成0.1mg/ml的溶液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

3、供试品溶液的制备：精密称取浸膏粉20mg至10ml量瓶中,加乙醇适量使溶解并定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

4、测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，计算。

    二、总黄酮的UV检测：参照2010版药典一部槐花项下总黄酮含测方法。

1、对照品溶液的制备：精密称取置P₂O₅干燥器中真空干燥24h的芦丁50mg，置25ml量瓶中，用甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml中含芦丁0.2mg）。

2、标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亚硝酸钠1ml，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应的溶液为空白，照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3、供试品溶液的配制：取胆木叶组合物10mg，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇适量，置水浴上微热，使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

4、样品测定：精密量取供试品溶液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（μg），计算，即得。

        三、胆木叶组合物主要成分的含量分析结果：详见下表。

胆木叶组合物中五种化合物及总黄酮的含量测定结果(%)一览表

发明人采用多批胆木叶组合物开展了的相关药效作用实验。在药效实验中，胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC均分别设置了不同剂量（为本文剂量的0.5、1、2倍等）进行相关药效考察，均具有相关的药效作用，且在不同实验中体现出了一定的量效关系，本发明中仅列出了各组单剂量（等效量）的考察结果，其余剂量组在本发明中不再赘述。

一、胆木叶组合物抗病毒抗菌作用

急性扁桃体炎、急性咽炎、急性结膜炎常为上呼吸道感染的一部分，多由病毒感染引起。主要致病病毒是流感病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒、腺病毒。少数由细菌感染引起者，致病菌多为肺炎球菌、葡萄球菌和链球菌。因此本研究选择如下抗病毒抗菌实验进行DMYA、DMYB、DMYC三个组合物的药效观察，获得以下结果。

1、胆木叶组合物体内抗肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌作用

取ICR小鼠140只，雌雄各半，随机分成14组，每组10只。每个菌株接种7组，7组的菌株浓度分别为：110、109、108、107、106、105、104（CFU/ml），金黄色葡萄球菌/肺炎双球菌腹腔注射感染小鼠，每只小鼠接种菌液0.5 ml。观察接种菌后72h内的小鼠死亡情况，确定细菌引起小鼠90%死亡的菌液浓度。菌液均用5%胃膜素的培养液稀释。确定细菌引起小鼠90%死亡的菌液浓度后，进行正式的细菌感染小鼠治疗保护性试验。

取小鼠240只，雌雄各半，按体重随机分成12组，12组小鼠中，正常对照2组，试验菌株感染模型组2组（金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌各1组），阳性药物双黄连口服液组2组（金黄色葡萄球菌和肺炎双球菌各1组），胆木叶组合物样品组 6组（金黄色葡萄球菌感染组3组，肺炎双球菌感染组3组）。分组及给药如下：正常对照组：等量NS；模型组：等量NS；双黄连组：20ml/kg； DMYA组：0.4g/kg； DMYB组：0.4g/kg； DMYC组：0.4g/kg。

以上动物各组均灌胃给药，给药容量20ml/kg，每天1次，连续给5天。于第4天给药后1h，各组小鼠均腹腔注入金黄色葡萄球菌或肺炎双球菌液0.5ml/只鼠（除正常组外），继续给药1天。观察以上各组动物注入金黄色葡萄球菌或肺炎双球菌液后7天内的死亡情况，计算死亡率和存活天数，比较各组间差异。结果见表1、2。

表1  胆木叶组合物对金黄色葡萄球菌感染小鼠死亡的保护作用

实验结果显示：DMYA、DMYB、DMYC三个给药组均可减少金黄色葡萄球菌感染小鼠死亡数，延长存活天数，与模型组比较具有显著性差异（P<0.05、0.01）。提示DMYA、DMYB、DMYC对金黄色葡萄球菌感染小鼠均具有保护作用。

表2  胆木叶组合物对肺炎双球菌感染小鼠死亡的保护作用

实验结果显示：DMYA、DMYB、DMYC三个给药组均可减少肺炎双球菌感染小鼠死亡数，延长存活天数，与模型组比较具有显著性差异（P<0.05、0.01）。提示DMYA、DMYB、DMYC对肺炎双球菌感染小鼠均具有保护作用。

2、胆木叶组合物体内抗甲型流感病毒、乙型流感病毒作用

甲型流感病毒感染小鼠试验：取ICR小鼠120只，体重13-16g，雌雄各半，随机分6组，每组10只。正常组、模型组、利巴韦林组（50mg/kg）、胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.4g/kg给药），以上各组按上述剂量灌胃给药，每天1次，连续5天。于给药当日，各组小鼠（除正常组）在乙醚浅麻醉下，以血凝滴定度640以上的尿囊液给小鼠滴鼻感染。每鼠50μl，观察动物感染后发病及死亡情况，记录14天内死亡数以及存活天数。

表3：胆木叶组合物对甲型流感病毒A/PR8/34感染小鼠死亡的保护作用

乙型流感病毒感染小鼠试验同甲型流感病毒感染小鼠试验方法。

表4：胆木叶组合物对乙型流感病毒B/京防98-76感染小鼠死亡保护作用

实验结果表明：胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组可明显延长甲型、乙型流感病毒感染小鼠后的存活天数、减少感染动物死亡数量，与模型组比较具有显著性差异（P<0.01，P<0.05）。提示：胆木叶组合物对甲型、乙型流感病毒感染的小鼠的有一定的保护作用，可延长甲型、乙型流感病毒感染小鼠后的存活天数。

二、胆木叶组合物抗炎作用

1、胆木叶组合物对小鼠耳廓肿胀炎症的影响

取50只ICR小鼠，体重25～30g，雄性。随机分为5组，每组10只小鼠，即正常对照组、阿司匹林组（0.2g/kg）和胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.4g/kg给药），分别灌胃给予相应药物(正常对照组灌胃给予等容积蒸馏水)，每日一次，连续3日。

第3日各组给药40min后，分别用2％巴豆油0.05ml涂于小鼠左耳前后两面，在致炎4h后处死小鼠，沿耳廓基线剪下左右两耳，用打孔器(直径 9mm)分别在同一部位取下圆耳片，电子天平称重，以小鼠左右耳壳重量之差值作为耳壳肿胀度，并计算肿胀百分率。

肿胀百分率＝（左耳壳重－右耳壳重）/右耳壳重×100%

胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组均能减轻巴豆油致小鼠耳肿胀度，降低肿胀率，与对照组相比有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。表明胆木叶组合物具有显著的抗炎作用，结果见表5。

表5   胆木叶组合物对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响(

±S)

        2、胆木叶各提取部位对角叉菜胶致大鼠足肿的影响

SD大鼠50只，全雄，体重150～180g，随机均分为5组，每组10只。正常对照组（灌胃）、乙酰水杨酸组（0.1g/kg）和胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.2g/kg给药）。各组大鼠灌胃给予受试药物，10ml/kg体重，每日一次，共5日。末次给药后，分别于各大鼠足跖中部注射1％角叉菜胶（用生理盐水于实验前24ｈ配制）0.1ml。操作时两人配合，一人手捉大鼠，将大鼠后肢拉直，另外一个人用1ml注射器（4号针头）先自足跖中部皮下向上注入部分角叉菜胶，然后调转针头再向下注入其余部分角叉菜胶。用油性笔在大鼠肢踝关节周围做一记号，于注射完角叉菜胶后立即用足肿测量仪测足跖容积，然后分别于注射角叉菜胶后1、2、3、4h分别测定大鼠足跖容积，计算足跖肿胀度，比较各组间差异。结果见表6。

表6 胆木叶组合物对角叉菜胶致大鼠足肿的影响(

±S)

致炎后大鼠足跖持续肿胀，说明造模成功。胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组不同时间段足肿胀度与模型组比较有显著差异（P<0.01，0.05），提示药物对大鼠足肿的发展有一定的抑制作用。

3．胆木叶组合物对大鼠纽扣肉芽肿的影响

SD雄性大鼠60只，体重130～170g，随机分为6组，每组10只。即模型组、阿司匹林组（0.1g/kg）、胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.2g/kg给药）和胆木浸膏片组（0.2g/kg），各组大鼠用水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，腹部去毛后用碘酒和酒精棉球消毒，腹部正中切口约1cm（仅切开外层皮肤），向两侧腹股沟处做一个皮下隧道，将灭菌纽扣（预先用天平筛选，保证所有的纽扣重量一致，重量小的纽扣弃去不用，重量大的纽扣用砂纸打磨到合适重量后使用）分别植入大鼠左右腹股沟皮下各1枚，缝合。植入纽扣后第6日起，各组大鼠分别灌胃给予各受试药物，每日1次，共10日，给药容积为10ml/kg。末次给药后24h，处死动物，将纽扣和肉芽组织一起取出，称重（湿重）后于60℃干燥24h后再次称重（干重），减去纽扣重量，即为肉芽净重，比较各组间的差异。结果见表7。

表7 胆木叶组合物对大鼠纽扣肉芽肿的影响（±S，n＝10）

胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组均可以显著降低大鼠纽扣肉芽肿的湿重和干重，和模型组相比，具有统计学差异（P<0.05，P<0.01）。表明胆木叶组合物具有一定的抑制炎症后期肉芽组织增生的作用。

 4．胆木叶组合物对大鼠子宫炎症的影响

SD雌性大鼠60只，体重180～220g，随机分为6组，每组10只。即假手术组、模型组、妇科千金片组（0.5g/kg）、胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.2g/kg给药）。大鼠用乙醚麻醉，腹部去毛后，用碘酒和75％酒精消毒，于腹部正中作1长2cm的切口，暴露子宫角。除假手术组外，沿子宫角右侧角上作一长1cm切口，将一塑料环（75％乙醇浸泡）迅速放入子宫内，子宫切口缝合固定，逐层缝合伤口。整个手术过程保证无菌操作。手术后次日开始灌胃给予受试药物，每日1次，共8日。末次给药后1h，取出子宫称重，左右侧子宫重量差为炎症肿胀度，计算肿胀率，比较各组间差异。

肿胀度＝右侧子宫重量－左侧子宫重量

肿胀率＝(右侧子宫重量－左侧子宫重量) /左侧子宫重量

胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组均可以显著降低大鼠子宫的肿胀度和肿胀率，和模型组相比，有统计学差异（P<0.01）。表明胆木叶组合物具有一定减轻异物导致的子宫炎症的作用。结果见表8。

表⒏ 胆木叶组合物对大鼠子宫炎症的影响（

±S，n＝10，单位：mg）

        5．胆木叶组合物对大鼠慢性盆腔炎模型的影响

选用体重为180~ 220g 的SD雌性大鼠60 只，随机分成假手术组、模型组、妇乐冲剂组（10g/kg给药），胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.2g/kg给药），除正常组外其余动物用乙醚吸入麻醉，腹部常规消毒，取下腹部正中切口约2cm, 暴露并固定子宫，一侧子宫用1ml 注射器抽取0.2ml 大肠杆菌悬液，在注入菌液之前用注射器机械损伤子宫内膜，然后注入0.1ml 菌液，另一侧子宫不注射菌液，注毕，分层关腹，消毒术区。假手术组仅进行开腹和关腹手术，未进行子宫处理。造模后第10d 开始灌胃( ig) 给药，每天1 次，连续20d。假手术组及模型组动物每日给予蒸馏水。

血液中MDA 测定：末次给药24h 后, 将动物用戊巴比妥钠30mg/ kg 腹腔麻醉, 剖腹, 腹主动脉取血，离心，取血清，按照试剂盒说明书中所述的方法进行操作，用754 型分光光度计测定结果，计算出血液中MDA的浓度。

造模子宫肿胀率测定：末次给药24h 后，将动物用戊巴比妥钠30mg/ kg 腹腔麻醉，剖腹，摘取双侧子宫，除去脂肪组织后用电子天平称重，子宫左右两侧的重量差即为炎症肿胀程度，求出肿胀率和抑制率，进行组间比较。

肿胀率= ( 致炎侧子宫重量- 未致炎侧子宫重量) /未致炎子宫重量×100%

抑制率= (模型组子宫平均肿胀率－给药组子宫平均肿胀率) / 模型组子宫平均肿胀率× 100%

病理测定：子宫称重后用10% 的甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规切片，HE 染色，光镜下观察子宫病理形态学变化。结果见表9~11。

胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组均能不同程度抑制大肠杆菌引起的子宫炎性肿胀，降低血清MDA水平，改善子宫病变程度，和模型组相比，有统计学差异（P<0.01，0.05）。表明胆木叶组合物具有一定治疗大肠杆菌引起的大鼠慢性盆腔炎的作用。

表9 胆木叶组合物对大鼠慢性盆腔炎子宫肿胀率的影响（±S，n＝10）

表10 胆木叶组合物对大鼠慢性盆腔炎血清MDA水平的影响（

±S，n＝10）

表11胆木叶组合物对大鼠慢性盆腔炎子宫病变的影响（

±S，n＝10）

三、胆木叶组合物镇痛作用

1．胆木叶组合物对热板致小鼠足底疼痛的影响

体重18～22g的雌性ICR小鼠，实验前筛选痛阈在5～30秒内的小鼠用于实验。将筛选合格的小鼠随机分为5组，每组10只。即模型组、盐酸曲马多组、胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.4g/kg给药）。分别给予各受试药物，给药5日。末次给药后1h，将小鼠放在预热50℃的金属板上，恒温，以小鼠舔后足反应的潜伏期作为痛阈指标。比较各组间的差异。结果见表12。

表12 胆木叶组合物对热板致小鼠足底疼痛的影响（

±S，n＝10）

胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC三个组均能显著提高小鼠的痛阈值，小鼠在50℃的金属板上舔后足反应的潜伏期和模型组相比，有统计学差异（P<0.05，P<0.01）。

2．胆木叶组合物对缩宫素致小鼠痛经模型的影响

ICR雌性小鼠50只，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。即模型组、阿司匹林组、胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.4g/kg给药）。各组每日口服给予己烯雌酚2mg/kg。各组小鼠分别灌胃给予各受试药物，每日一次，共12日，末次给药1h后腹腔注射缩宫素20u/kg，观察记录每只小鼠30min内扭体次数，比较各组的差异。结果见表13。

表13  胆木叶组合物对缩宫素致小鼠痛经模型的影响（

±S，n＝10）

DMYA、DMYB、DMYC三个组均可以减少缩宫素诱导的小鼠扭体次数，和模型组相比，具有统计学差异（P<0.05, P<0.01）。表明胆木叶组合物可以减轻由缩宫素诱导的小鼠子宫疼痛。

        3．胆木叶组合物对醋酸致小鼠扭体的影响

ICR雌性小鼠50只，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。即模型组、阿司匹林组、胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.4g/kg给药）。各组小鼠分别灌胃给予各受试药物，每日一次，共5日，末次给药1h后腹腔注射0.6％醋酸生理盐水溶液0.2ml/只，观察记录每只小鼠30min内扭体次数，比较各组的差异。结果见表14。

胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组均可以减少缩宫素诱导的小鼠扭体次数，和模型组相比，具有统计学差异（P<0.05，P<0.01）。表明胆木叶组合物具有一定的镇痛作用。

表14   胆木叶组合物对醋酸致小鼠扭体的影响（

±S，n＝10）

 4．胆木叶组合物对电嘶叫法致小鼠疼痛的影响

参照文献方法，合格雌性小鼠，随机按体重分组，每组10只，实验设：空白溶媒对照组 (2ml/kg)，胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.4g/kg给药），盐酸曲马多组，各鼠给药前置于底部为铜网的单向穿梭箱内，通电并渐增电压至小鼠发生第一声嘶叫，以该电压值为痛阈指标（v）， 给药前测定二次正常痛阈值（v），以其平均值为给药前正常值， 各小鼠灌胃给药，分别于给药后1、2、3、4h测定各鼠的痛阈值(v)。痛阈值用均数±标准差表示（±s ），以t检验作统计学处理。结果如表15。

表15.胆木叶组合物对电嘶叫法小鼠痛阈值的影响(

±S)

结果表明，与空白对照组相比，胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组给药后可显著提高电嘶叫小鼠的痛阈值（P<0.05）。

5．胆木叶组合物对大鼠机械压痛阈值的影响

参照文献方法，取SD大白鼠50只，雌雌各半，体重120～150g，按体重随机分成5组，每组10只。给药前用特制的大白鼠压痛测定装置，将大鼠放入固定筒内，以鼠尾尖端1/3处加压(以g计) 至大鼠出现甩尾（或嘶叫）为痛阈值，实验时先连测两次压痛阈值，取平均值作给药前正常值。两次间隔15min，以防短时间内连续测定引起大鼠痛觉过敏，影响准确性。实验设：空白对照组(2ml/kg)，阿斯匹林组(0.1g/kg)，胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.2g/kg给药），各鼠灌胃给药每日一次，末次给药后1、3h测定各鼠的压痛阈值(g)。用均数±标准差表示（

±s ），以t检验作统计学处理。结果如表16。

表16. 胆木叶组合物对机械压痛法大鼠痛阈值（g）的影响

与空白对照组相比，胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组给药均能显著地提高大鼠压痛阈值(P<0.01，P<0.05)。

6．胆木叶组合物对实验性偏头痛大鼠的影响

SD大鼠60只，雌雄各半，180-220 g，将大鼠按体重分为6组，每组10只，即空白对照组：给予等体积的生理盐水；模型组：给予等体积的生理盐水；天舒胶囊组：0.35 g/kg；胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（均按0.2g/kg给药）。连续口服灌胃5日，每日1次，在第5日给药 30 min后，除空白对照组外，其余各组动物皮下注射硝酸甘油注射剂10 mg/kg，复制实验性偏头痛动物模型。包括：

①行为学评分：

观察各组动物的行为表现至造模后3 h，并按四级评分法评分。大鼠偏头痛发作时症状为：双耳发红，摇头，震颤，前肢频繁搔头，头颈部抽动，躯体平展，爬笼次数增多，烦躁不安等；四级评分法评分标准为：

评级得分	症      状
		0	无上述表现
1	行为表现不甚明显
		2	行为表现明显
3	行为表现持续而强烈

②对脑组织5-HT含量的影响：

硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠造模3 h后，以10％水合氯醛麻醉(300 mg/kg，ip)，左脑立即置于含冷酸性正丁醇(100 mg组织/1ml正丁醇)的匀浆器中，在冰浴条件下，充分匀浆后，离心(3000 r/min，5 min)，吸取2 ml×2上清液分别加到10 ml已含有2.5 ml正庚烷和1 ml (0.1 mol/L) HCL带塞离心管A和B中，然后，向A管中加入0.2 ml (0.01mol/L) HCl，向B管中加入0.2ml含标准5-HT400 ng的0.01 mol/L HCl(内标准管)，机械振荡5 min，离心(1500 r/min，5min)，吸取水相1 ml，向样品中依次加入0.1 ml (10mol/ml) 半胱氨酸、2ml(0.004%) OPT和0.1 ml(0.02%)NaIO₄溶液。摇匀后，放水浴中煮沸10min，然后用水冷却至室温。在激发光波长360 nm/发射光波长480 nm下测定样品荧光强度。

③对脑组织NOS的影响：

硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠造模3 h后，以10％水合氯醛麻醉(300 mg/kg，ip)，在冰浴下将右脑制成10%的脑匀浆，3000 r/min离心10min，取上清液进行NOS活性的测定。

上述实验结果见表17~19。结果表明：①胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组能降低模型大鼠偏头痛发作的行为学评分，改善症状，与模型组比较差异显著(P<0.05)。②胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组能增加偏头痛模型大鼠的5-HT含量，与模型组比较差异显著(P<0.05)。③胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组能显著降低偏头痛模型大鼠的NOS含量，与模型组比较差异显著(P<0.05)。

表17胆木叶组合物对硝酸甘油型偏头痛大鼠行为学评分的影响(±S)

表18  胆木叶组合物对硝酸甘油型偏头痛大鼠的5-HT含量的影响 (

±S)

表19 胆木叶组合物对硝酸甘油型偏头痛大鼠的NOS含量的影响 (

±S)

        7．胆木叶组合物对三叉神经痛模型大鼠的影响

实验用成年SD大鼠230～270g，乙醚麻醉， 腹位固定, 局部用2% 利多卡因麻醉， 手术，用微量进样器取新配制的青霉素G- K 3 μl( 剂量为3000 IU/ kg) , 在第1 颈椎棘突左上方约1 mm 处进针, 待有落空感即将青霉素G- K 缓慢推入, 缝合创口, 置笼内观察。模型成立标准：大鼠发生尖叫、甩头、左后肢快速抓同侧面部，可以发生其中之一项、二项或三项同时发生， 30 min 内累计次数达100 次为模型成立, 从注药完毕到出现第1 次反应的时间为潜伏期；尖叫、甩头、左后肢抓同侧面部等反应发作的次数之和为总发作次数。二项或三项同时出现。 记为1 次，连续发作亦记为1 次；自发反应持续时间以第1 次出现反应为开始， 连续3 min 无反应为终止, 自发反应终止后, 以玻璃棒轻触左侧面部， 引出上述反应者为诱发反应阳性， 维持时间为诱发反应阳性时间。

分组及给药：模型组给予等体积的生理盐水；卡马西平组灌胃卡马西平0.1g/ kg ,  胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC组（灌胃0.2g/kg）。连续口服灌胃6日，于末次灌胃后将其固定, 20 min 后造模, 观测相应指标。

观测指标：观察三叉神经痛反应模型成立后, 其总发作次数、自发反应持续时间、诱发反应阳性时间。

上述实验结果见表20。

 

表20   胆木叶组合物对三叉神经痛模型大鼠的影响(

±S)

结果表明：在总发作次数、自发反应持续时间、诱发反应阳性时间方面各组比较后显示，胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC各组、卡马西平组与模型组比较有显著性差异( P <0.01，0.05) , 提示胆木叶各组合物可明显减少大鼠三叉神经痛样反应的发作次数，缩短自发反应持续时间及诱发反应阳性时间。

通过上述实验，本发明的有益效果如下：

（1）经实验证明：①本发明组合物DMYA、DMYB、DMYC具有抗菌活性。对金黄色葡萄球菌感染小鼠（体内）、肺炎双球菌感染小鼠具有保护作用；②本发明组合物DMYA、DMYB、DMYC具有抗病毒活性。对甲型、乙型流感病毒感染小鼠具有明显的保护作用；能减轻甲型、乙流感病毒所致小鼠的感染、死亡，具有抗甲、乙型流感病毒的作用。提示本发明胆木叶组合物DMYA、DMYB、DMYC具有治疗由呼吸道易感病毒（如甲流、乙流）和细菌（如肺炎双球菌、葡萄球菌）引起的急性扁桃腺炎、急性咽喉炎、急性结膜炎及上呼吸道感染的功效。

（2） 本发明组合物DMYA、DMYB、DMYC具有显著的抗炎作用。能减轻巴豆油致小鼠耳肿胀度，降低肿胀率，具有显著的抗巴豆油致小鼠耳廓炎症作用；胆木叶组合物各组能显著降低不同时间段角叉菜胶致大鼠足肿胀度；胆木叶组合物各组均可以显著降低大鼠纽扣肉芽肿的湿重和干重，表明胆木叶组合物具有一定的抑制炎症后期肉芽组织增生的作用；胆木叶组合物各组均可以显著降低大鼠子宫的肿胀度和肿胀率，，表明胆木叶组合物具有一定减轻异物导致的子宫炎症的作用；胆木叶组合物各组均能不同程度抑制大肠杆菌引起的子宫炎性肿胀,降低血清MDA水平，改善子宫病变程度，表明胆木叶组合物具有一定治疗大肠杆菌引起的大鼠慢性盆腔炎的作用。以上结果提示本发明组合物可对各种炎症模型具有显著的抑制作用。具有治疗各类炎症的功效。

（3）本发明组合物DMYA、DMYB、DMYC具有显著的镇痛作用。胆木叶组合物均可以显著提高小鼠热板反应的痛阈值；胆木叶组合物均可以减少缩宫素诱导的小鼠扭体次数，表明胆木叶组合物可以减轻由缩宫素诱导的小鼠痛经；胆木叶组合物各组给药后可显著提高电嘶叫小鼠的痛阈值；显著提高大鼠压痛阈值；胆木叶组合物各组能降低模型大鼠偏头痛发作的行为学评分，改善症状，增加偏头痛模型大鼠的5-HT含量，能显著降低偏头痛模型大鼠的NOS含量；胆木叶各组合物可明显减少大鼠三叉神经痛样反应的发作次数，缩短自发反应持续时间及诱发反应阳性时间。提示本发明组合物具有缓解轻至中度疼痛（头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛、痛经）的功效。

四、胆木叶组合物的初步毒性评价：以下结果表明，胆木叶组合物是安全的。

（1）小鼠MTD试验：以DMYA、DMYB、DMYC0.6g/ml药液，一日内2次给予小鼠，每次给药30ml/kg，折合剂量36g/kg，动物给药后除部分出现活动减少外，其它未出现死亡、毒性异常反应，解剖也未见异常。提示本品在小鼠最大给药量试验中较为安全。此剂量约为拟临床人用剂量的1050倍。

（2）大鼠MTD试验：以0.6g/ml药液，一日内两次给予大鼠，每次给药20ml/kg，折合剂量24g/kg，动物给药后活动减少，其它未出现死亡，解剖也未见异常。提示本品在大鼠最大给药量试验中有一定的不良反应。此剂量约为拟临床人用剂量的700倍。

（3）大鼠长毒预试验：以0.15g/ml、0.3g/ ml药液，一日内一次给予大鼠，每次给药10ml/kg，折合剂量1.5g/kg、3g/kg，动物给药后活动减少，血液检查、解剖和病检未见异常。提示本品高剂量运用在大鼠长毒试验中未见明显的不良反应。此剂量约为拟临床人用剂量的87.5倍。

具体实施方式

以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步理解本发明，而不构成对其权利的限制。

实施例1。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为50%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10 ：0.5。

实施例2。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为98%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为0.7 ：10。

实施例3。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为80%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～0.7 ：0.5～10。

实施例4。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为90%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10：3。

实施例5。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为70%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为3 ：10。

实施例6。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为55%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为8 ：10。

该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

异长春花苷内酰胺                      3%；

       10-羟基-异长春花苷内酰胺              24%；

           短小蛇根草苷                          0.2%；

       山奈酚-3-O-芸香糖苷                   20%；

           芦丁                                  0.1%。

实施例7。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为85%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10 ：4。

该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

异长春花苷内酰胺                    46%；

       10-羟基-异长春花苷内酰胺            1%；

           短小蛇根草苷                        21%；

       山奈酚-3-O-芸香糖苷                 0.5%；

           芦丁                                10%。

实施例8。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为62%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为4 ：10。

该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

         异长春花苷内酰胺                      4%；

     10-羟基-异长春花苷内酰胺              10%；

         短小蛇根草苷                          3%；

     山奈酚-3-O-芸香糖苷                   10%；

         芦丁                                  21%。

实施例9。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为71%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为8 ：1。

该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

         异长春花苷内酰胺                      40%；

     10-羟基-异长春花苷内酰胺              2%；

         短小蛇根草苷                          10%；

     山奈酚-3-O-芸香糖苷                   1%；

         芦丁                                  5%。

实施例10。一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，该组合物从胆木叶中提取的由生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为51%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为7：2。

该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

         异长春花苷内酰胺                      5%；

     10-羟基-异长春花苷内酰胺              15%；

         短小蛇根草苷                          2%；

     山奈酚-3-O-芸香糖苷                   1.2%；

         芦丁                                  1.5%。

     实施例11。一种如实施例1-10任何一项所述的胆木叶组合物制剂，它以所述的胆木叶组合物为有效原料，加入药剂学上可接受的药用辅料，制成临床上可接受的任何一种剂型的药剂，其剂型包括但不限于片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、液体制剂、煎膏剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂、注射剂、栓剂、凝胶剂、气雾剂、贴剂。所述的胆木叶组合物制剂可以在制备清热解毒、消肿止痛的药物中应用。所述的胆木叶组合物制剂还可以在制备治疗急性扁桃腺炎、急性咽喉炎、急性结膜炎、上呼吸道感染或慢性盆腔炎、附件炎等疾病的药物中应用；还可以在制备治疗轻至中度疼痛药物中应用；所述的轻至中度疼痛包括但不仅限于头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛和痛经。实施例12。实施例1-10任何一项所述的胆木叶组合物，可以通过以下所述的方法之一获得：

1、取胆木叶，加75%乙醇回流提取2次，提取液滤过，滤液合并，减压浓缩，碱溶酸沉二次，上清液上HPD100大孔吸附树脂柱，分别以水、35%乙醇溶液除杂，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，粉碎成细粉，即得胆木叶组合物。

2、取胆木叶，加65%乙醇回流提取2次，提取液滤过，滤液合并，减压浓缩，碱溶，滤过，滤液上D101大孔吸附树脂柱，分别以水、25%乙醇溶液除杂，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩真空干燥，粉碎成细粉，即得胆木叶组合物。

         3、取胆木叶，加80%乙醇，热回流提取2次，提取液过滤，滤液合并，减压浓缩，碱溶，滤过，调pH至5.5，滤过，滤液上AB-8大孔吸附树脂柱，分别以水、30%乙醇溶液除杂，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，即得胆木叶组合物。

        4、取胆木叶，加水提取，滤过，浓缩，用醇沉与过大孔树脂方法除去杂质，即得胆木叶组合物。

        5、取胆木叶，加水提取，滤过，浓缩，经有机溶剂氯仿、醋酸乙酯或正丁醇萃取并回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

        6、取胆木叶，加水提取，滤过，浓缩，经有机溶剂异丙醇、戊醇、醋酸乙酯、醋酸丁酯或其它有机溶剂萃取并回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

         7、取胆木叶，加乙醇适量提取，滤过，浓缩，经水沉方法除去杂质，即得胆木叶组合物。

        8、取胆木叶，加乙醇提取，滤过，浓缩，用有机溶剂氯仿、醋酸乙酯或正丁醇的萃取并回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

         9、取胆木叶，加乙醇提取，滤过，浓缩，用有机溶剂异丙醇、戊醇、醋酸乙酯、醋酸丁酯或其它有机溶剂萃取并回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

    10、取胆木叶，用乙醇提取，滤过，用水沉的方法除去杂质，即得胆木叶组合物。

    11、取胆木叶，加亲脂性有机溶剂正丁醇适量提取，过滤，回收有机溶剂正丁醇，即得胆木叶组合物。

    12、取胆木叶，加亲脂性有机溶剂醋酸乙酯适量提取，滤过，回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

        13、取胆木叶，加亲脂性有机溶剂氯仿或异丙醇适量提取，滤过，合并提取液，回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

        14、取胆木叶，加亲脂性有机溶剂戊醇、醋酸乙酯、醋酸丁酯或其它亲脂性有机溶剂适量提取，滤过，合并提取液，回收有机溶剂，即得胆木叶组合物。

Claims (10)

1.一种含异长春花苷内酰胺胆木叶组合物，其特征在于：该组合物由从胆木叶中提取的生物碱与黄酮类化合物组合而成；所述的生物碱中含有异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷；所述的黄酮类化合物中含有山奈酚-3-O-芸香糖苷和芦丁；组合物中，前述3种生物碱与黄酮类化合物的总重量占组合物的重量百分比为50-98%，且前述3种生物碱的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～0.7 ：0.5～10。

2.根据权利要求1所述的胆木叶组合物，其特征在于：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

         异长春花苷内酰胺                      3-46%；

     10-羟基-异长春花苷内酰胺              1-24%；

         短小蛇根草苷                          0.2-21%；

     山奈酚-3-O-芸香糖苷                   0.5-20%；

         芦丁                                  0.1-21%。

3.根据权利要求1所述的胆木叶组合物，其特征在于：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

异长春花苷内酰胺                        4-40%；

   10-羟基-异长春花苷内酰胺                2-20%；

短小蛇根草苷                            0.2-15%；

   山奈酚-3-O-芸香糖苷                     1-15%；

       芦丁                                    0.1-15%。

4.根据权利要求1所述的胆木叶组合物，其特征在于：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

  异长春花苷内酰胺                     5-35%；

     10-羟基-异长春花苷内酰胺             3-15%；

         短小蛇根草苷                         0.2-10%；

     山奈酚-3-O-芸香糖苷                  1.1-13%；

         芦丁                                 0.1-10%。

5.根据权利要求1所述的胆木叶组合物，其特征在于：该组合物中，主要原料所占的重量百分比为：

异长春花苷内酰胺                       5-34%；

   10-羟基-异长春花苷内酰胺               3-10%；

       短小蛇根草苷                           0.2-5%；

   山奈酚-3-O-芸香糖苷                    1.2-12%；

       芦丁                                   0.1-5%。

6.根据权利要求1所述的胆木叶组合物，其特征在于：该组合物中，异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～2 ：2～10。

7.根据权利要求1所述的胆木叶组合物，其特征在于：该组合物中，异长春花苷内酰胺、10-羟基-异长春花苷内酰胺和短小蛇根草苷的总重量与黄酮类化合物的总重量比为10～3 ：3～10。

8.一种如权利要求1-7中任何一项所述的胆木叶组合物制剂，其特征在于，它以胆木叶组合物为有效原料，加入药剂学上可接受的药用辅料，制成临床上可接受的任何一种剂型的药剂，其剂型包括但不限于片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、液体制剂、煎膏剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂、注射剂、栓剂、凝胶剂、气雾剂、贴剂。

9.权利要求1-7中任何一项所述的胆木叶组合物或者权利要求8所述的胆木叶组合物制剂在制备清热解毒、消肿止痛的药物中的应用。

10.权利要求1-7中任何一项所述的胆木叶组合物或者权利要求8所述的胆木叶组合物制剂在制备治疗急性扁桃腺炎、急性咽喉炎、急性结膜炎、上呼吸道感染或慢性盆腔炎、附件炎的药物中的应用；或者在制备治疗轻至中度疼痛药物中的应用；所述的轻至中度疼痛包括但不仅限于头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛和痛经。