CN102590210B - 一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法，包括以下步骤：1）空白对照蔗汁的制备，2）待测样品蔗汁的制备；3）在步骤1）得到的蔗汁液体中加入浓度为三氯乙酸与助滤剂，将其混合均匀并过滤，并将得到的空白对照蔗汁滤液分成多份，向各份空白对照蔗汁滤液中加入α-葡聚糖溶液，使得各份滤液中的α-葡聚糖的含量呈梯度变化，再于其中分别加入无水乙醇，4）工作曲线的绘制；5）在步骤2）得到的蔗汁液体中加入三氯乙酸与助滤剂，将其混合均匀并过滤，再于其中分别加入无水乙醇，再测量滤液的浊度值；6）利用步骤4）得到的工作曲线与上步得到的滤液的浊度值，换算出待测样品蔗汁中的α-葡聚糖含量。本发明的测试方法测定结果准确度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法。
背景技术
α-葡聚糖是由肠膜明串珠菌利用蔗汁中的蔗糖发酵产生的多糖类物质，主链由α-D吡喃葡萄糖通过α-1-6糖苷键构成。当蔗汁中的α-葡聚糖含量达到一定程度时，其高粘性会引起蔗汁过滤、浓缩、结晶等后续操作困难，同时还造成糖分的大量损失。因此，定量分析蔗汁中的α-葡聚糖含量具有十分重要的现实意义。蔗汁中α-葡聚糖含量的测定方法，主要有罗伯特铜法、旋光法、酶解色谱法、抗体法等。罗伯特铜法需反复洗涤、多次过滤，操作步骤过多，结果误差大；旋光法与酶解色谱法测定需要专门的仪器，且适用于高α-葡聚糖含量的蔗汁；抗体法所必需的抗体价格昂贵，测定时需要配备专门的浊度仪。有些其他的方法则受蔗汁成分的影响较大，通常用于原糖或白糖中α-葡聚糖含量的检测，用于蔗汁中α-葡聚糖含量测定时，难以获得准确的结果。
发明内容
本发明的目的是提供一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法，包括以下步骤：
1）空白对照蔗汁的制备：在蔗汁中加入淀粉酶与α-葡聚糖酶，充分反应，其中，蔗汁、淀粉酶、α-葡聚糖酶三者的体积比为2000:(1-1.5):(1-1.5)；
2）待测样品蔗汁的制备：在蔗汁中加入淀粉酶，充分反应，其中，蔗汁、淀粉酶两者的体积比为2000:(1-1.5)；
3）在步骤1）得到的蔗汁液体中加入浓度为8-12%的三氯乙酸与助滤剂，其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，将其混合均匀并过滤，并将得到的空白对照蔗汁滤液分成多份，向各份空白对照蔗汁滤液中加入α-葡聚糖溶液，使得各份滤液中的α-葡聚糖的含量呈梯度变化，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1；
4）工作曲线的绘制：测量步骤3）中得到的含α-葡聚糖的空白对照蔗汁滤液的浊度，以各滤液中的α-葡聚糖浓度同浊度值的关系作图，得到α-葡聚糖在在蔗汁中的工作曲线；
5）在步骤2）得到的蔗汁液体中加入浓度为8-12%的三氯乙酸与助滤剂，其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，将其混合均匀并过滤，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1，再测量滤液的浊度值；
6）利用步骤4）得到的工作曲线，结合上步得到的滤液的浊度值，换算出待测样品蔗汁中的α-葡聚糖含量。
步骤1）中，在加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前，蔗汁还经过100-200目筛过滤。
步骤2）中，在加入淀粉酶之前，蔗汁还经过100-200目筛过滤。
所述的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石棉、活性炭、酸性白土、聚丙烯酰胺中的一种。
步骤1）中，反应时间为30-60mn，反应温度为60-70℃。
步骤2）中，反应时间为30-60mn，反应温度为60-70℃。
本发明的有益效果是：本发明的测试方法准确度较高。整个实验过程简便快捷，对实验设备要求低，适合在糖厂实时监测糖汁中的α-葡聚糖含量，该方法的建立为蔗汁中α-葡聚糖的测定提供了一个快速简便准确的新途径。
具体实施方式
一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法，包括以下步骤：
1）空白对照蔗汁的制备：在过100目筛的蔗汁（锤度15°Bx）中加入淀粉酶（novozymes 公司生产）与α-葡聚糖酶（阿玛诺天野酶制剂商贸（上海）有限公司提供），置于60℃水浴中反应30-60min，冷却至室温，其中，蔗汁、淀粉酶、α-葡聚糖酶三者的体积比为2000:(1-1.5):(1-1.5)，优选的，三者的体积比为200ml:100μl:100μl；
2）待测样品蔗汁的制备：在过100目筛的蔗汁（锤度15°Bx）中加入淀粉酶（novozymes 公司生产），置于60℃水浴中反应30-60min，冷却至室温，其中，蔗汁、淀粉酶两者的体积比为2000:(1-1.5)，优选的，两者的体积比为200ml:100μl；
3）在步骤1）最终得到的蔗汁液体中加入浓度为10%的三氯乙酸与硅藻土（硅藻土质量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积的比值为1-1.5g:10ml），其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，优选的，两者体积比为0.3:1，将它们混合均匀并过滤，并将得到的空白对照蔗汁滤液分成六份，向各份空白对照蔗汁滤液中加入浓度为40mg/ml的α-葡聚糖T2000（Sigma公司生产）溶液，使得各份滤液中的α-葡聚糖的含量呈梯度变化，优选的，使得各份滤液中的α-葡聚糖含量为0、100、200、300、400、500mg/L，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与各份滤液的体积比为0.9-1.5:1；
4）工作曲线的绘制：用远红外浊度仪测量步骤3）中最终得到的加入了无水乙醇的蔗汁滤液的浊度，以各滤液中的α-葡聚糖浓度同浊度值的关系作图，得到α-葡聚糖在在蔗汁中的工作曲线；
5）在步骤2）最终得到的蔗汁液体中加入浓度为10%的三氯乙酸与硅藻土（硅藻土质量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积的比值为1-1.5g:10ml），其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，优选的，两者体积比为0.3:1，将它们混合均匀并过滤，再于其中加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1，再利用远红外浊度仪测量滤液的浊度值；
6）利用步骤4）得到的工作曲线，结合上步得到的滤液的浊度值，换算出待测样品蔗汁中的α-葡聚糖含量。
下面结合实施例对本发明做进一步的说明：
实施例1：
空白对照蔗汁制备：
取200mL经100目筛过滤蔗汁(锤度15°Bx)，加入100μL淀粉酶与100μL α-葡聚糖酶，于60℃水浴反应30min，取出冷却至室温后将其体积补足至200mL。
样品蔗汁制备：
取200mL经100目筛过滤蔗汁(锤度15°Bx)，加入100μL淀粉酶，于60℃水浴反应30min，取出冷却后将其体积补足至200mL。
样品蔗汁α-葡聚糖含量测定：
在上述两种蔗汁中分别加入60mL 10%三氯乙酸和20g硅藻土，搅拌均匀，过滤；弃去最初的2mL滤液，其余滤液待用。在6个烧杯中分别加入20mL空白对照蔗汁滤液，依次加入40mg/mL的α-葡聚糖T2000溶液并使得各烧杯滤液中α-葡聚糖含量为0、100、200、300、400、500mg/L；然后加入20mL无水乙醇，搅拌均匀，静置5min。以空白调零，利用远红外浊度仪测定各滤液浊度值；以各滤液α-葡聚糖质量浓度同浊度值的关系作图，得到α-葡聚糖在在蔗汁中的工作曲线。在烧杯中加入20mL样品蔗汁滤液，加入20mL无水乙醇，搅拌均匀，静置5min。以空白调零，利用远红外浊度仪测定浊度值；根据工作曲线计算出α-葡聚糖的含量。
方法平行试验
按照实施例1提供的方法在同等条件下对一个蔗汁样品平行测定5次, 结果（见表1）表明：蔗汁样品α-葡聚糖含量平均测定值为151.07 mg/L，RSD为2.95%；说明此方法精度较高，符合分析要求。
方法回收率试验
在样品中加入不同量的α-葡聚糖T2000（Sigma公司生产）溶液（浓度为40mg/mL），按实施例1的方法进行测定，并根据原含量（表中的原含量数据指的是通过实施例1的方法所测定的待测样品蔗汁中的α-葡聚糖含量）、添加量（表中的添加量数据是指：如添加量75mg/L，指的是最终蔗汁总体积中含有添加的α-葡聚糖75mg，）和测定量（指的是添加了α-葡聚糖的样品蔗汁中，利用实施例1给出的方法测定的最终的α-葡聚糖含量）计算α-葡聚糖的回收率(见表2)。结果显示，回收率在94.2%-96.7%之间，平均相对误差在4.86%以内，表明该方法的测定结果比较准确可靠。
Claims (1)
1.一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）空白对照蔗汁的制备：在蔗汁中加入淀粉酶与α-葡聚糖酶，充分反应，其中，蔗汁、淀粉酶、α-葡聚糖酶三者的体积比为2000:(1-1.5):(1-1.5)；
2）待测样品蔗汁的制备：在蔗汁中加入淀粉酶，充分反应，其中，蔗汁、淀粉酶两者的体积比为2000:(1-1.5)；
3）在步骤1）得到的蔗汁液体中加入浓度为8-12%的三氯乙酸与助滤剂，其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，将其混合均匀并过滤，并将得到的空白对照蔗汁滤液分成多份，向各份空白对照蔗汁滤液中加入α-葡聚糖溶液，使得各份滤液中的α-葡聚糖的含量呈梯度变化，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1；
4）工作曲线的绘制：测量步骤3）中得到的含α-葡聚糖的空白对照蔗汁滤液的浊度，以各滤液中的α-葡聚糖浓度同浊度值的关系作图，得到α-葡聚糖在在蔗汁中的工作曲线；
5）在步骤2）得到的蔗汁液体中加入浓度为8-12%的三氯乙酸与助滤剂，其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，将其混合均匀并过滤，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1，再测量滤液的浊度值；
6）利用步骤4）得到的工作曲线，结合上步得到的滤液的浊度值，换算出待测样品蔗汁中的α-葡聚糖含量；步骤1）中，在加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前，蔗汁还经过100-200目筛过滤；步骤2）中，在加入淀粉酶之前，蔗汁还经过100-200目筛过滤；所述的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石棉、活性炭、酸性白土、聚丙烯酰胺中的一种；步骤1）中，反应时间为30-60min，反应温度为60-70℃；步骤2）中，反应时间为30-60min，反应温度为60-70℃。
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