CN102584991A - 一种治疗新城疫的新型卵黄抗体及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明一种治疗新城疫的新型卵黄抗体及其制作方法属于动保行业兽用生物制品领域，其制作方法经蛋鸡的免疫、卵黄抗体的提取与纯化浓缩及卵黄抗体的干燥过程。本发明能最大限度将卵黄中特定的新城疫抗体从杂蛋白中分离出来而纯化浓缩过程不对卵黄抗体产生破坏作用，不影响产品生物活性，并且包含基因型II和基因型VII的新型新城疫抗体，使用范围更广阔，能够覆盖新城疫强毒感染的全部范围；本发明所提供的卵黄抗体干粉，可在符合GMP要求的环境下与葡萄糖、乳糖等适宜辅料以适当比例可配制成粉剂、溶液剂、注射液、注射用粉剂等临床适用剂型，可用于诊断、预防和治疗新城疫病毒感染。

Description

一种治疗新城疫的新型卵黄抗体及其制作方法

技术领域

本发明属于动保行业兽用生物制品领域，所提供新型卵黄抗体用于检测、预防和治疗新城疫病毒感染。

背景技术

鸡新城疫是一种具有高度传染性的病毒性疾病，各种品种、年龄、性别的鸡都易感染，发病率和死亡率在90%以上，是严重危害养鸡生产的最主要疾病之一。在西方发达国家往往采取以扑杀强毒感染群为主的方法；而在我国，由于经济发展水平的限制以及强毒感染的普遍存在，主要通过应用疫苗进行免疫接种来控制新城疫的发生，由于新城疫疫苗种类繁多，质量参差不齐，临床疫苗使用方法不一，往往会因疫苗的选择和使用不当造成免疫失败，给养鸡生产带来极大的经济损失，近年来的实践证明不明原因的免疫失败普遍存在。

近年来，随着食品安全问题的日益严重，化学药物的使用大大受到限制，以往临床使用的盐酸吗啉胍、金刚烷胺等抗病毒药物已经由农业部禁止使用，而卵黄抗体作为一种安全、高效、无公害的生物制品，来源广泛、品质优良且价格低廉，在临床上用于动物疾病的治疗和诊断，具有广阔的市场前景。

当前卵黄抗体提取纯化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、盐析法等，这些方法收率低、杂蛋白多、产品活性低。虽然市场上曾经一度流行使用卵黄抗体，但由于技术水平所限，真正起到治疗作用的难觅其踪。

发明内容

本发明旨在提供一种治疗新城疫的新型卵黄抗体及其制作方法。

制作步骤如下：

第一步骤，购买鸡新城疫活疫苗（C30-86株）、鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)存储于-15℃以下备用；购买注射用生理盐水、鸡新城疫灭活疫苗存储于2～8℃备用;

第二步骤，购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养;

第三步骤，分别于7日龄、21日龄给全鸡群做鸡新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，饮水途径，剂量分别依次为2羽份、4羽份;

第四步骤，在70日龄时，在鸡胸部左侧皮下注射2羽份鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)；右侧皮下注射2羽份鸡新城疫灭活疫苗;

第五步骤，在100日龄时，在鸡胸部左侧皮下注射4羽份鸡新城疫灭活疫苗；在颈部皮下注射4羽份鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系);

第六步骤，在140日龄时，给全鸡群做鸡新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，饮水途径，剂量为10羽份;

第七步骤，自150～160日龄起收集新城疫抗体水平10以上的鸡蛋保存在4℃环境备用;

第八步骤，在超净台上收集蛋黄，按3倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4℃环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液;

第九步骤，将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0.22微米的滤膜进行超滤浓缩，收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液;

第十步骤，将卵黄抗体浓缩液做50～56℃减压干燥，制成卵黄抗体干粉，方便保存；

第十一步骤，将卵黄抗体干粉按照一定的剂量分装即可。

本方法利用适当的免疫程序获得高效价鸡蛋，利用蛋白质的亲水性特点，通过沉降法将卵黄抗体与脂类分离，且在浓缩过程中不破坏卵黄抗体的空间结构而出去杂蛋白，充分保护了卵黄抗体的生物活性和纯粹性，所制造的卵黄抗体纯度高、活性强；本发明所提供的新型卵黄抗体提取纯化方法，能最大限度将卵黄中特定的新城疫抗体从杂蛋白中分离出来而纯化浓缩过程不对卵黄抗体产生破坏作用，不影响产品生物活性，并且包含基因型                                                

和基因型

的新型新城疫抗体，使用范围更广阔，能够覆盖新城疫强毒感染的全部范围；本发明所提供的卵黄抗体干粉，可在符合GMP要求的环境下与葡萄糖、乳糖等适宜辅料以适当比例可配制成粉剂、溶液剂、注射液、注射用粉剂等临床适用剂型，可用于诊断、预防和治疗新城疫病毒感染。

具体实施方式

实施例：

①蛋鸡的免疫

购买SPF蛋鸡雏，分别于7日龄、21日龄给全鸡群做鸡新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，饮水途径，剂量分别依次为2羽份、4羽份。

在70日龄时，在鸡胸部左侧皮下注射2羽份鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)；右侧皮下注射2羽份鸡新城疫灭活疫苗。

在100日龄时，在鸡胸部左侧皮下注射4羽份鸡新城疫灭活疫苗；在颈部皮下注射4羽份鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)。

在140日龄时，给全鸡群做鸡新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，饮水途径，剂量为10羽份。

自160日龄起收集鸡蛋保存在4℃环境备用。

经新城疫抗体检测，全部能够达到10以上。

②卵黄抗体的提取与纯化浓缩

在超净台上收集蛋黄，按3倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌35分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4℃环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液，即为卵黄抗体溶液。

将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0.22微米的滤膜进行超滤浓缩，收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液。

③卵黄抗体的干燥

将卵黄抗体浓缩液做55℃减压干燥，制成卵黄抗体干粉，保存即可。

以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

部分试验结果报告：

一种治疗新城疫的新型卵黄抗体的试验报告

      选用某已确诊感染新城疫的病鸡3700只，随机挑选30只最为空白对照，其余平均分为A、B两组。网上平养，保持干净，及时通风，做好记录。饲料参考NRC肉鸡饲养标准，配制基础日粮，自由采食，自由饮水，统一管理。A组添加本卵黄抗体冻干粉制剂（由广东紫金正天药业有限公司、广东省中兽药工程技术研究开发中心联合制作），按1:100的比例兑水饮用；B组为黄芪多糖注射液（抗病毒I号注射液）（由河源市兽药工程技术研究开发中心提供），按每50ml兑水1kg自由饮用；C组为空白对照组。

表1  A、B、C三组治疗对比试验结果

由表1可以看出，使用了此种抗新城疫卵黄抗体治疗的病鸡，成活率从第三天开始明显提高，采食量明显恢复，精神状况在第四天就基本恢复正常，治疗用药四天基本结束，且效果优于对照组。因此说明此种卵黄抗体可用于治疗新城疫病毒感染。 

Claims (2)

1.一种治疗新城疫的新型卵黄抗体，其制作步骤如下：

第一步骤，购买鸡新城疫活疫苗（C30-86株）、鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)存储于-15℃以下备用；购买注射用生理盐水、鸡新城疫灭活疫苗存储于2～8℃备用;

第二步骤，购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养;

第三步骤，分别于7日龄、21日龄给全鸡群做鸡新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，饮水途径，剂量分别依次为2羽份、4羽份;

第四步骤，在70日龄时，在鸡胸部左侧皮下注射2羽份鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系)；右侧皮下注射2羽份鸡新城疫灭活疫苗;

第五步骤，在100日龄时，在鸡胸部左侧皮下注射4羽份鸡新城疫灭活疫苗；在颈部皮下注射4羽份鸡新城疫中等毒力活疫苗(I系);

第六步骤，在140日龄时，给全鸡群做鸡新城疫活疫苗（C30-86株）免疫，饮水途径，剂量为10羽份;

第七步骤，自150～160日龄起收集新城疫抗体水平10以上的鸡蛋保存在4℃环境备用;

第八步骤，在超净台上收集蛋黄，按3倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4℃环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液;

第九步骤，将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0.22微米的滤膜进行超滤浓缩，收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液;

第十步骤，将卵黄抗体浓缩液做50～56℃减压干燥，制成卵黄抗体干粉，方便保存；

第十一步骤，将卵黄抗体干粉按照一定的剂量分装即可。

2.根据权利要求1所述的一种治疗新城疫的新型卵黄抗体，可制成粉剂、液剂、喷雾剂、注射液、注射用粉剂。