CN102580088A

CN102580088A - 一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的生产方法

Info

Publication number: CN102580088A
Application number: CN2012100808391A
Authority: CN
Inventors: 王庆福; 刘易通; 李振天
Original assignee: GUANGDONG ZIJIN ZHENGTIAN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GUANGDONG ZIJIN ZHENGTIAN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2012-03-26
Filing date: 2012-03-26
Publication date: 2012-07-18

Abstract

本发明涉及一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的生产方法，属于动保行业兽医兽药领域，本发明提供了一种用于猪圆环病的临时预防和免疫失败后紧急治疗的药物同时提高机体自身免疫水平，用于猪圆环病的临时预防和紧急治疗。本方法利用蛋白质的等电点特性，通过沉降法将卵黄抗体与杂蛋白有效分离，且在纯化浓缩过程中不破坏卵黄抗体的空间结构，充分保护了卵黄抗体的生物活性，所生产的卵黄抗体纯度高、活性强；再配伍中药提取物制成复合物，兼具有综合提高机体基础免疫水平的作用，便于对猪圆环病的治疗与控制。

Description

一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的生产方法

技术领域

本发明涉及一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的生产方法属于动保行业兽医兽药领域，所提供卵黄抗体及其复合物可用于猪圆环病的临时预防和免疫失败后的紧急治疗。

背景技术

圆环病毒最早发现于1974年德国学者Tischer等的科研工作；后来的试验证实，来源于猪肾组织的该种病毒基因组由单股环状的DNA组成，由此得名为猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)。按照国际病毒分类委员会第六次学术报告新增病毒科的结论，PCV在分类上属于圆环病毒科、圆环病毒属，是已知的最小的动物病毒之一。该科病毒科内尚无具体的分属标准，共同特征为病毒粒子无囊膜，基因组由一条单股、环状的DNA链组成。被列入该科的动物病毒有猪圆环病毒、鸡传染性贫血病病毒，鹦鹉喙羽病病毒、鸽圆环病毒、金丝雀圆环病毒和人的TT病毒（一种肝炎病毒）等。

目前的研究认为猪圆环病毒粒子直径14～17nm，呈20面体对称结构，无囊膜，含有共价闭合的单股环状负链DNA，基因组大小约为1.76kb。PCV对外界理化因子的抵抗力相当强，即便在PH3的酸性环境及72℃的高温环境中也能存活一段时间，氯仿作用不失活，无血凝活性。

现已知PCV有两个血清型，即PCV1和PCV2。PCV1基本上无致病性；PCV2被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，此外还有皮炎/肾病综合征、繁殖障碍、呼吸道病复合症、先天性震颤及中枢神经系统疾病等多种临床疾病类型。不同年龄的猪对PCV2均具有较强的易感性，感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，传染途径为口腔和呼吸道。

目前的研究表明，PCV2主要在机体的单核/巨噬细胞中复制，少数可在肾小球、支气管上皮细胞、内皮细胞、肝细胞和淋巴细胞中增殖。一方面，PCV2与其它病毒，如猪繁殖与呼吸道综合征病毒和PPV同时接种试验猪时，这些病毒可以刺激和活化免疫系统，从而促进感染猪体内PCV2的增殖。因此，免疫系统的激活可能是PMWS的触发因素。另一方面，PCV2感染也使机体产生严重的淋巴组织病变，包括淋巴细胞的缺失及淋巴组织免疫细胞亚群的变化，这就使机体的免疫力下降，从而对其它病原不能产生有效的免疫应答，也是该病发生的重要机理。因此，猪感染PCV后免疫刺激与免疫抑制同时存在，这给疾病防御带来很大困难。

在兽医临床上，具有抗病毒作用的化学药物已被禁用；传统中药制剂主要通过提高机体自身免疫水平来实现降低发病率，虽有一定作用但存在效果不稳定的问题；而疫苗免疫甚至不足10％，形成PCV感染普遍存在的局面，造成的经济损失几乎是毁灭性的。因此，急需一种可用于猪圆环病的临时预防和免疫失败后紧急治疗的药物。

发明内容

本发明提供了一种用于猪圆环病的临时预防和免疫失败后紧急治疗的药物___抗猪圆环病卵黄抗体及其复合物，能与圆环病毒发生免疫学反应，同时提高机体自身免疫水平，用于猪圆环病的临时预防和紧急治疗。

一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的生产方法，其生产过程如下：

（1）、购买猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）、猪圆环病毒2型（SH株）存储于4～8℃备用；

（2）、购买道地药材板蓝根、黄芪、白术、甘草，按一定比例配伍后加水煎煮，取其浓缩液干燥粉碎后作为中药提取物密封备用；

（3）、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养；

（4）、于70日龄给全鸡群做猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）、猪圆环病毒2型（SH株）胸部双侧皮下注射各2头份；

（5）、于77日龄给全鸡群做猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）、猪圆环病毒2型（SH株）胸部双侧皮下注射各5头份；

（6）、于90日龄给全鸡群做猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）、猪圆环病毒2型（SH株）胸部双侧皮下注射各10头份；

（7）、于210日龄给全鸡群做猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）、猪圆环病毒2型（SH株）胸部双侧皮下注射各15头份；

（8）、收集150～360日龄的鸡蛋保存在4℃环境备用；

（9）、在超净台上收集蛋黄，按3倍比例加入灭菌蒸馏水搅拌30分钟以上，配成均一的蛋黄液，转移至4℃环境冷藏、静置12小时，用过滤气泵回收上清液；

（10）、将含卵黄抗体的蛋黄上清液依次通过0.45微米和0.22微米的滤膜进行超滤浓缩，收集介于两种滤膜之间的物质即为卵黄抗体的浓缩液；

（11）、将卵黄抗体浓缩液做50～56℃减压干燥，制成卵黄抗体干粉；

（12）、将卵黄抗体干粉和中药提取物按照1:5～50的比例混合均匀得到黄抗体复合物。

本发明所提供的卵黄抗体及其复合物，可经过添加适当辅料和适当工艺制成粉剂、颗粒剂、片剂、溶液剂、注射液、注射用冻干粉等临床适用剂型。

本发明所述卵黄抗体及其复合物使用方法及使用量是：按全价饲料重量的0.5～1.0％混合以后使用，或者按照1：10～1000的比例兑水饮用，或者按照每公斤体重100～500mg的剂量进行肌肉或皮下注射。

本方法利用蛋白质的等电点特性，通过沉降法将卵黄抗体与杂蛋白有效分离，且在纯化浓缩过程中不破坏卵黄抗体的空间结构，充分保护了卵黄抗体的生物活性，所生产的卵黄抗体纯度高、活性强；再配伍中药提取物制成复合物，兼具有综合提高机体基础免疫水平的作用，便于对猪圆环病的治疗与控制。卵黄抗体作为紧急治疗性药物的来源之一，来源广泛、价格低廉、技术成熟度好的特点，适合作深度开发。

具体实施方式

举例说明本发明的生产过程如下：

（3）、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养；

（8）、收集150～360日龄的鸡蛋保存在4℃环境备用；

本发明的的应用例；

1：将卵黄抗体与中药（板蓝根:黄芪:白术:甘草=3:3:2:1）提取物按照1: 10的比例混合成卵黄抗体复合物备用；

2：将卵黄抗体复合物与水按1:200的比例配成无菌溶液备用；

3：将卵黄抗体与PEG-200、PVP-K30、水配成0.2%的注射液备用；

4：将卵黄抗体与可溶性淀粉、明胶、乳糖混合后冻干，制成100mg/支的注射用冻干粉针剂备用；

以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

部分试验结果报告：

猪圆环病卵黄抗体用途的试验报告

选用某已确诊感染猪圆环病的猪场里的小猪116头，随机分为A、B两组。全价料，定时饲养，自由饮水，统一管理，保持干净，及时通风，做好记录。

A组添加本卵黄抗体（由广东紫金正天药业有限公司、广东省中兽药工程技术研究开发中心联合制作），按1:100的比例兑水饮用；B组为黄芪多糖注射液（抗病毒I号注射液）（由河源市兽药工程技术研究开发中心提供），按每公斤体重0.1ml注射，一天两次。

表1 A、B组治疗对比试验结果

Figure 2012100808391100002DEST_PATH_IMAGE001

由表1可以看出，使用了含有圆环病卵黄抗体治疗的病猪，A组死亡数量从第四天开始明显下降，采食量明显恢复，精神状况从用药后第三天就有所好转，治疗用药五天基本结束，且效果优于对照组。

而B组控制效果较差，从第五天起立即开始注射其它化学药物进行对症治疗和保守支持治疗。

因此说明此种含有圆环病卵黄抗体的药物可用于治疗猪圆环病毒感染，是控制猪圆环病的理想药物。

Claims

1.一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的生产方法，其生产过程如下：

（3）、购买经检疫合格的SPF蛋鸡雏作隔离饲养；

（8）、收集150～360日龄的鸡蛋保存在4℃环境备用；

2.根据权利要求1所述的一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物，其特征在于可制成粉剂、颗粒剂、片剂、溶液剂、注射液、注射用冻干粉的临床适用剂型。

3. 根据权利要求1所述的一种治疗猪圆环病的卵黄抗体及其复合物的使用方法是：按全价饲料重量的0.5～1.0％混合以后使用，或者按照1：10～1000的比例兑水饮用，或者按照每公斤体重100～500mg的剂量进行肌肉或皮下注射。