CN102584917B

CN102584917B - 高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法

Info

Publication number: CN102584917B
Application number: CN201110450545.9A
Authority: CN
Inventors: 赵尔跃; 樊献乔; 樊献俄
Original assignee: KUNMING LONGJIN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: KUNMING LONGJIN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2011-12-29
Filing date: 2011-12-29
Publication date: 2014-03-12
Anticipated expiration: 2031-12-29
Also published as: CN102584917A

Abstract

本发明涉及一种制药学中高纯度原料药的制备工艺。本发明由以下步骤组成：一、在市售灯盏花乙素含量大于85%的灯盏花素粗品中加入水润湿，加入碱性氨基酸水溶液，制成pH值7.5-9.0、含灯盏花素10mg-150mg/ml的水溶液；二、离心澄清过滤，滤液上以聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱层析柱；三、收集液加入转化剂有机酸，使灯盏花乙素盐还原成灯盏花乙素，自然沉降排弃上清液，干燥后即得纯度99%以上的高纯度灯盏花乙素原料药。由于本发明不需用有机溶剂重结晶，使工艺能连续化、自动化、规模化；更为重要的是避免使用易燃易爆的有机溶剂，更符合国家安全生产的产业政策。

Description

高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法

技术领域

本发明涉及一种制药学中高纯度原料药的制备工艺。

背景技术

灯盏花素系从菊科植物短葶飞蓬灯盏花又名灯盏细辛全草中分离出来的黄酮类有效成分，其中主要成分为灯盏花乙素，又名野黄芩苷，化学名:4′5、6-三羟基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷，分子式：C₂₁H₁₈O₁₂,分子量：462.37。灯盏花乙素属黄酮苷类，不溶于水，由于含有羧基，可与碱或碱性盐生成盐，而易溶于水，弃除水不溶物。人们利用这一性质，从1984年开始就有多家药厂相继制成水针剂上市，由于各家的工艺各异所致，灯盏花素原料HPLC分析，乙素含量在75%—93%之间，由此衍生的各种制剂在临床已广泛用于治疗心脑血管疾病，疗效显著，但临床上也发生了不少不良反应，如发冷发热反应、皮肤瘙痒、皮疹等过敏现象，这些现象的发生主要是由于原料药在生产过程中未除尽一些致敏杂质所致，这一问题自从灯盏花素产品问世30多年来一直未能解决，直到2004年后才逐步得以解决。

昆明龙津药业股份有限公司是研究和生产注射用灯盏花素，已有二十多年历史的老企业，本申请人先后七次申请“高纯度灯盏花乙素原料药的制备工艺”，其专利号申请分别为200410062573.3、200410040182.1、200410040352.6、200410079583.8、2004100479642.1、200510010723.0和200710066155.5，其方法均能制备纯度高于99%的灯盏花乙素，随着高纯度灯盏花乙素注射剂2010版标准的执行；随着生产规模的逐步扩大，国家强制要求执行“清洁”生产；随着中药现代化进程的加快，连续化、自动化要求的提高；我们发现以上专利仍有不能完全适应需要之处，为了满足灯盏花乙素原料药不断提高的质量要求和技术要求，实现灯盏花乙素原料药规模化、连续化、自动化的制备是现有技术中亟待解决的技术问题，节能、减排、安全、步骤简化更是现代科学技术日新月异的必然要求。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种既能够规模化、连续化、自动化，又能够节能、减排、安全、步骤简化的高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法。

本发明所述的高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法由以下步骤组成：

一、在市售灯盏花乙素含量大于85%的灯盏花素粗品中加入水润湿，加入碱性氨基酸水溶液，边加边搅拌，并加热至沸，制成PH值7.5-9.0、含灯盏花素10mg-150mg/ml的水溶液；

二、离心澄清过滤，滤液上以聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱层析柱，层析条件为：上样体积为柱床体积的0.1-1.0倍，上样重量毫克以灯盏花素计为柱床体积毫升的0.01-0.5倍，流动相为纯化水或注射用水，压力0.1-20 bar，检测波长335±2nm或284±2nm，收集中段颜色较黄纯度99%以上的澄清液，收集体积为柱床体积的0.1-2.0倍；

三、收集液加入转化剂有机酸，调PH值3以下，使灯盏花乙素盐还原成灯盏花乙素，自然沉降排弃上清液，灯盏花乙素混悬液输入干燥机干燥后即得纯度99%以上的高纯度灯盏花乙素原料药。

所述加入的碱性氨基酸为精氨酸、赖氨酸或羟赖氨酸。

所述的转化剂有机酸为冰醋酸、丙酸或醋酸酐。

所述的聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱填料为：骨架—聚丙烯酸酯，微球—单分散球形，形态—多孔，孔径—100-1000

Figure 2011104505459100002DEST_PATH_IMAGE001

，粒径—10-100μm，最大耐压—20bar，PH值稳定性—1-12，操作温度—4-60℃。

上述加入的碱性氨基酸精氨酸、赖氨酸或羟赖氨酸与灯盏花素形成的灯盏花素—氨基酸盐，由于分子量大小和静电效应与上述聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱填料匹配，能够达到高度分离纯化的效果，才能够一步分离纯化就能使灯盏花乙素纯度达99%以上，这是本发明的核心所在。另外碱性氨基酸为有机碱，不含有金属离子，不存在炽灼残渣，也保证灯盏花乙素原料药炽灼残渣检测项合格，从而不需用大量水洗涤灯盏花乙素结晶里包裹的金属离子，减少了工业废水排放。

上述聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱柱层析用来分离纯化灯盏花乙素，不需要特殊的有机流动相洗脱液，只要最普通的纯化水或注射用水，避免了有机溶剂混合流动相，回收耗能、直接排污等问题。

上述加入的转化剂有机酸为易挥发酸，使用该类酸避免了用大量水洗涤残留酸根离子，造成大量工业废水排放的问题。另外该类酸为弱酸，腐蚀性极弱，几乎不与不锈钢器具发生化学反应，便于选择机械设备，也为连续化、自动化设计提供了方便。

本发明工艺步骤简化，不需前七个专利用有机溶剂重结晶的繁琐步骤，只需一步色谱分离纯化，就能得到纯度99%以上的灯盏花素原料药。

由于本发明不需用有机溶剂重结晶，使工艺能连续化、自动化、规模化；更为重要的是避免使用易燃易爆的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮等，不但使用有机溶剂成本高、回收需消耗能源，而且有安全隐患，不使用有安全隐患的有机溶剂更符合国家安全生产的产业政策。

申请公布号CN101747395A的专利所使用的助溶剂碱为无机碱氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和氨水；所使用的酸无明确要求，从实施例可知是腐蚀性极强的盐酸；所使用的填料是自己合成的改性聚酰胺；更为差异的是从实施例可知该技术只能达到灯盏花乙素重量百分比即纯度分别为98.5%、98.7%、98.4%、98.6%，虽然距离99%以上看视一小步，但是科技乃一大步，要跨越这一小步，要付出巨大的创造性劳动和成百上千次的试验。

本发明所述工艺步骤简化、节能、减排、安全，适用于规模化、连续化、自动化的大生产，所制备灯盏花乙素经高压液相色谱（HPLC）分析，灯盏花乙素纯度能达到99.5%以上，填补了本申请人以前申请的七个“高纯度灯盏花乙素原料药的制备工艺”专利和现有技术的不足。即①解决了有机溶剂用量大，耗费能源太多，不安全的问题；②解决了高纯度灯盏花乙素原料药有机溶剂残留的问题；③解决了清除有机溶剂洗涤过程不能连续化、自动化的问题；④解决了水洗涤沉淀弃除酸根离子，不连续化、自动化、排污的问题；⑤解决了涉及易燃易爆有机溶剂，厂房设施需防爆增加投资的问题；总之工艺步骤简化、节能减排、安全符合国家的产业政策。

附图说明

图1为本发明实施例1液相色谱图。

图2为本发明实施例2液相色谱图。

使用仪器类型：高效液相色谱梯度方式：恒流检测器：紫外

仪器型号：Agilent1100 波长（nm）：335nm

柱温（℃）：32

计算方法：面积归一法

图1中：

图2中：

检测方法：色谱条件与系统适用性试验［用十八烷基键合硅胶为填充剂：甲醇-0.1%磷酸溶液（40:60）为流动相；检测波长为335nm。理论版数按灯盏乙素峰计算不应低于5000］。取本品，按照每10mg灯盏乙素1ml溶解，加乙醇制成每1ml约含灯盏乙素0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，作为对照溶液。取对照溶液5μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%。再取供试品溶液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍左右。测量供试品溶液色谱图上各杂质峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算出灯盏花乙素纯度。

具体实施方式

实施例1：称取市售灯盏花乙素含量90.25%的粗品原料6.5kg，加水50L搅拌润湿，加20%精氨酸液边加边搅拌加热至沸，调PH值8.0，补加水至130L，离心、澄清过滤，滤液分别上直径20cm高180m的聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱柱，一次上样650g，上样体积13L，用纯化水洗脱，压力4bar，收集中段纯度99%以上黄色澄清洗脱液，合并收集液，在收集液里加入冰醋酸调PH3以下，自然沉降1小时后，放出上清液，沉淀混悬液输入干燥机干燥得灯盏花乙素原料药3.92kg，经HPLC测定乙素纯度为99.4014%，如图1所示。

实施例2：称取市售灯盏花乙素含量87.32%的粗品，原料35kg，从配液罐人孔投入，打开放水阀放水150L，开启搅拌器搅拌润湿，边输入30%精氨酸液边搅拌，开启蒸汽阀加热至沸，控制PH值为8.3，再次打开进水阀补水至总体积580L搅匀，取样检测PH值8.25，灯盏花素含量60.5mg/ml。开启放液阀将药液输入高速管式离心机，离心出液输入澄清过滤机，澄清液输入直径50cm高400cm的聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱柱，一次上样7000g，上样体积115L，压力6bar，收集中段纯度99%以上黄色澄清洗脱液于沉淀罐，计算所需冰醋酸的量，开启冰醋酸输送阀输送至沉淀罐内并开启搅拌器搅拌，自然沉降1小时后，开启上清液排出阀，放出上清液，沉淀混悬液输入干燥机干燥，得灯盏花乙素原料药19.25kg，经HPLC测定乙素纯度为99.1376%，如图2所示。

Claims

1.一种高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

二、离心澄清过滤，滤液上以聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱层析柱，层析条件为：上样体积为柱床体积的0.1-1.0倍，上样重量毫克以灯盏花素计为柱床体积毫升的0.01-0.5倍，流动相为纯化水或注射用水，压力0.1-20 bar，检测波长335±2nm或284±2nm，收集中段颜色较黄纯度99%以上的澄清液，收集体积为柱床体积的0.1-2.0倍；所述的聚丙烯酸酯为基质的大孔树脂色谱填料为：骨架：聚丙烯酸酯，微球：单分散球形，形态：多孔，孔径：100-1000

，粒径：10-100μm，最大耐压：20bar，pH值稳定性：1-12，操作温度：4-60℃；

2.如权利要求1所述的高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法，其特征在于所述加入的碱性氨基酸为精氨酸、赖氨酸或羟赖氨酸。

3. 如权利要求1所述的高纯度灯盏花乙素原料药的制备方法，其特征在于所述的转化剂有机酸为冰醋酸或丙酸。