CN113788870A - 一种高纯度灯盏花素原料药及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然中药植物原料纯化领域，具体公开了一种高纯度灯盏花素原料药及其制备工艺。本发明采用葡聚糖凝胶作为层析填料，以纯水为洗脱剂分离纯化灯盏花素。葡聚糖是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，各葡萄糖单元之间以糖苷键连接，葡聚糖凝胶在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都很稳定，对人体无毒副作用，用其作为填料纯化灯盏花素，具有纯度高，重现性好，容易再生，产品质量稳定等优点，且不会带入大孔树脂残留等对人体有毒副作用的杂质。整个工艺流程只需要使用纯水作为溶剂，避免使用有机溶剂，不仅符合当下绿色低碳、节能环保的发展趋势，同时还从源头上解决了有机溶剂残留的问题。
Description
技术领域
本发明属于天然中药植物原料纯化领域，具体公开了一种高纯度灯盏花素原料药及其制备工艺。
背景技术
灯盏花素是从菊科植物灯盏花(又名灯盏细辛)中提取分离得到的一种黄酮类有效成分，主要为灯盏花乙素，临床上用于治疗脑供血不足、脑出血所致后遗症、高粘脂血症、脑血栓、冠心病、心绞痛等疾病。
灯盏花素原料药，在《中国药典(2015版)》中的规定为：按干燥品算，含野黄芩苷不得低于90.0％(供口服用)或98.0％(供注射用)。国家药品监督管理局通过对市面上所有的灯盏花素原料药抽检后发现，目前市面上的灯盏花素原料药纯度基本未达到《中国药典(2015版)》的要求，因此，在《中国药典(2020版)》中，相关条款被修订为：按干燥品算，含野黄芩苷不得低于83.5％(供口服用)或91.0％(供注射用)。这种通过降低标准来使产品合格的方式，更体现出市场对高纯度灯盏花素原料药的迫切需求。
多年来，高纯度灯盏花素原料药的制备工艺一直未能取得突破，目前市面上灯盏花素原料药主要采用大孔树脂吸附法进行纯化，再通过有机溶剂如丙酮等进行沉淀，该工艺需要用到国家药品监督管理局限制使用的大孔树脂，容易有大孔树脂残留，且产品纯度不高，重现性较差，质量不稳定，同时还要用到大量的有机溶剂，给环境带来很大的污染。
发明内容
针对上述情况，本发明公开了一种高纯度灯盏花素原料药及其制备工艺。采用G-10葡聚糖凝胶作为层析填料，以水作为溶剂和洗脱剂。其过程包括将该填料装入层析柱中作为固定相，把待分离纯化的灯盏花素粗品水溶液流过该层析柱，其杂质被吸附在固定相上，然后用纯水将灯盏花素洗脱下来，从而达到分离纯化的目的。
本发明的具体技术方案如下：
一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，包括以下步骤：
S1样品准备与层析柱平衡：包括灯盏花素粗品预处理以及G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡；
S2上样：上样过程中层析柱体积ml与上样量g之比为100:3-100:7；
S3洗脱：纯水洗脱；
S4检验：对洗脱液采用高效液相色谱进行分析；若合格，进入步骤S5,；不合格，进行废液回收；
S5浓缩：将纯度满足要求的洗脱液合并，浓缩；
S6析出：用酸调节pH值，至样品析出；
S7水洗和干燥：纯水洗至中性后干燥，得纯度大于99％的灯盏花素原料药。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S1中的灯盏花素粗品预处理，包括以下具体步骤：称取纯度82％-90％的灯盏花素粗品，加入一定量纯水，保持浓度为10-50mg/ml，用碱调ph值至7-9,40-60℃水浴加热，待样品溶解后，趁热过滤。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S1中的G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡，包括以下具体步骤：以纯水为溶胀剂对G-10葡聚糖凝胶进行充分溶胀，去除悬浮细微颗粒，脱气后装入层析柱，保持液面高于填料，使其自然沉降，层析柱径高比为1:10-1:15；装柱完成后，以纯水为流动相对层析柱进行平衡，平衡流速为2-4BV/h。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S2上样，包括以下具体步骤：将步骤S1得到的滤液连续缓慢加入层析柱中，保持流速为2-4BV/h，上样过程中确保液面高于填料，上样过程中层析柱体积ml与上样量g之比为100:3-100:7。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S3洗脱，包括以下具体步骤：上样完成后，继续使用纯水洗脱，保持流速为2-4BV/h，分段收集洗脱液。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S5浓缩，包括以下具体步骤：将纯度满足要求的洗脱液合并，减压浓缩至灯盏花素粗品重量的10-15倍。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S6析出，包括以下具体步骤：用酸将上述浓缩液调至ph值1-2，静置5-20h，待样品析出。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，所述步骤S7水洗和干燥，包括以下具体步骤：将静置好的样品过滤，滤饼用纯水洗至中性，40-60℃下真空干燥，得到灯盏花素原料药，其纯度大于99％。
进一步的，上述一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，包括以下步骤：
S1样品准备与层析柱平衡：包括灯盏花素粗品预处理以及G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡；
所述灯盏花素粗品预处理，包括以下具体步骤：称取纯度82％-90％的灯盏花素粗品，加入一定量纯水，保持浓度为10-50mg/ml，用碱调ph值至7-9,40-60℃水浴加热，待样品溶解后，趁热过滤；
所述G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡，包括以下具体步骤：以纯水为溶胀剂对G-10葡聚糖凝胶进行充分溶胀，去除悬浮细微颗粒，脱气后装入层析柱，保持液面高于填料，使其自然沉降，层析柱径高比为1:10-1:15；装柱完成后，以纯水为流动相对层析柱进行平衡，平衡流速为2-4BV/h；
S2上样：将步骤S1得到的滤液连续缓慢加入层析柱中，保持流速为2-4BV/h，上样过程中确保液面高于填料，上样过程中层析柱体积ml与上样量g之比为100:3-100:7；
S3洗脱：上样完成后，继续使用纯水洗脱，保持流速为2-4BV/h，分段收集洗脱液；
S4检验：对洗脱液采用高效液相色谱进行分析；若合格，进入步骤S5,；不合格，进行废液回收；
S5浓缩：将纯度满足要求的洗脱液合并，减压浓缩至灯盏花素粗品重量的10-15倍；
S6析出：用酸将上述浓缩液调至ph值1-2，静置5-20h，待样品析出；
S7水洗和干燥：将静置好的样品过滤，滤饼用纯水洗至中性，40-60℃下真空干燥，得到灯盏花素原料药，其纯度大于99％。
进一步的，上述任一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺制备获得的灯盏花素原料药。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明采用葡聚糖凝胶作为层析填料，以纯水为洗脱剂分离纯化灯盏花素。葡聚糖是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，各葡萄糖单元之间以糖苷键连接，葡聚糖凝胶在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都很稳定，对人体无毒副作用，用其作为填料纯化灯盏花素，具有纯度高，重现性好，容易再生，产品质量稳定等优点，且不会带入大孔树脂残留等对人体有毒副作用的杂质。整个工艺流程只需要使用纯水作为溶剂，避免使用有机溶剂，不仅符合当下绿色低碳、节能环保的发展趋势，同时还从源头上解决了有机溶剂残留的问题。
附图说明
图1为本发明所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺的流程示意图；
图2为实施例1和2中原料的高效液相色谱图；
图3为实施例1中的成品的高效液相色谱图；
图4为实施例2中的成品的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中使用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场渠道购获得的常规试剂产品。
实施例1
如附图1所示的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺流程，包括以下步骤：
1)取G-10葡聚糖凝胶，纯水浸泡24h，充分溶胀后，去除液体表面的悬浮物，超声脱气20min，缓慢倒入20mm×350mm玻璃层析柱中，保证湿态装柱并防止产生气泡和断层，自然沉降1h，再用纯水以2BV/h流速平衡4BV，得到平衡好的层析柱，该层析柱柱床规格为20mm×243mm。
2)取2.00g市售灯盏花素粗品(口服用，经液相检测纯度为85％,如附图2所示)，加入100ml纯水，搅拌均匀，用10％碳酸氢钠溶液调节ph值至7.4，50℃水浴加热使样品溶解，趁热过滤。
3)将滤液缓慢滴加到层析柱中，保持流速为2BV/h，上样完成后继续用纯水以相同流速洗脱，从上样开始分段收集滤液，每段收集50ml，直至洗脱液无色，共收集得到洗脱液510ml。
4)采用液相色谱对收集得到的洗脱液进行检测，合并纯度99％以上的洗脱液，合计得到纯度99％以上的洗脱液450ml，60℃下对合并后的洗脱液进行减压浓缩，得到浓缩液29ml。
5)用10％盐酸将浓缩液ph值调值1.9，开始析出黄色沉淀，静置5h待沉淀析出完全后，过滤，所得滤饼用纯水洗至中性。
6)所得滤饼在50℃下真空干燥10h，得到灯盏花素纯品1.37g，通过液相检测其纯度为99.12％，如附图3所示，回收率为68.5％。
实施例2
如附图1所示的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺流程，包括以下步骤：：
1)取G-10葡聚糖凝胶，纯水浸泡24h，充分溶胀后，去除液体表面的悬浮物，超声脱气20min，缓慢倒入20mm×350mm玻璃层析柱中，保证湿态装柱并防止产生气泡和断层，自然沉降1h，再用纯水以2BV/h流速平衡4BV，得到平衡好的层析柱，该层析柱柱床规格为20mm×256mm。
取2.00g市售灯盏花素粗品(口服用，经液相检测纯度为85％，如附图2所示)，加入100ml纯水，搅拌均匀，用10％碳酸氢钠溶液调节ph值至7.1，50℃水浴加热使样品溶解，趁热过滤。
将滤液缓慢滴加到层析柱中，保持流速为2BV/h，上样完成后继续用纯水以相同流速洗脱，从上样开始分段收集滤液，每段收集50ml，直至洗脱液无色，共收集得到洗脱液460ml。
采用液相色谱对收集得到的洗脱液进行检测，合并纯度99％以上的洗脱液，合计得到纯度99％以上的洗脱液400ml，60℃下对合并后的洗脱液进行减压浓缩，得到浓缩液27ml。
用10％盐酸将浓缩液ph值调值1.9，开始析出黄色沉淀，静置5h待沉淀析出完全后，过滤，所得滤饼用纯水洗至中性。
所得滤饼在50℃下真空干燥8h，得到灯盏花素纯品1.28g，通过液相检测其纯度为99.25％，如附图4所示，回收率为64.0％。
由上述2个实施例可以看出，本发明采用葡聚糖凝胶作为层析填料，以纯水为洗脱剂分离纯化灯盏花素。葡聚糖是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，各葡萄糖单元之间以糖苷键连接，葡聚糖凝胶在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都很稳定，对人体无毒副作用，用其作为填料纯化灯盏花素，具有纯度高，重现性好，容易再生，产品质量稳定等优点，且不会带入大孔树脂残留等对人体有毒副作用的杂质。整个工艺流程只需要使用纯水作为溶剂，避免使用有机溶剂，不仅符合当下绿色低碳、节能环保的发展趋势，同时还从源头上解决了有机溶剂残留的问题。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (10)
1.一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1样品准备与层析柱平衡：包括灯盏花素粗品预处理以及G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡；
S2上样：上样过程中层析柱体积ml与上样量g之比为100:3-100:7；
S3洗脱：纯水洗脱；
S4检验：对洗脱液采用高效液相色谱进行分析；若合格，进入步骤S5,；不合格，进行废液回收；
S5浓缩：将纯度满足要求的洗脱液合并，浓缩；
S6析出：用酸调节pH值，至样品析出；
S7水洗和干燥：纯水洗至中性后干燥，得纯度大于99％的灯盏花素原料药。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S1中的灯盏花素粗品预处理，包括以下具体步骤：称取纯度82％-90％的灯盏花素粗品，加入一定量纯水，保持浓度为10-50mg/ml，用碱调ph值至7-9,40-60℃水浴加热，待样品溶解后，趁热过滤。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S1中的G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡，包括以下具体步骤：以纯水为溶胀剂对G-10葡聚糖凝胶进行充分溶胀，去除悬浮细微颗粒，脱气后装入层析柱，保持液面高于填料，使其自然沉降，层析柱径高比为1:10-1:15；装柱完成后，以纯水为流动相对层析柱进行平衡，平衡流速为2-4BV/h。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S2上样，包括以下具体步骤：将步骤S1得到的滤液连续缓慢加入层析柱中，保持流速为2-4BV/h，上样过程中确保液面高于填料，上样过程中层析柱体积ml与上样量g之比为100:3-100:7。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S3洗脱，包括以下具体步骤：上样完成后，继续使用纯水洗脱，保持流速为2-4BV/h，分段收集洗脱液。
6.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S5浓缩，包括以下具体步骤：将纯度满足要求的洗脱液合并，减压浓缩至灯盏花素粗品重量的10-15倍。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S6析出，包括以下具体步骤：用酸将上述浓缩液调至ph值1-2，静置5-20h，待样品析出。
8.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，所述步骤S7水洗和干燥，包括以下具体步骤：将静置好的样品过滤，滤饼用纯水洗至中性，40-60℃下真空干燥，得到灯盏花素原料药，其纯度大于99％。
9.根据权利要求1所述的一种高纯度灯盏花素原料药的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1样品准备与层析柱平衡：包括灯盏花素粗品预处理以及G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡；
所述灯盏花素粗品预处理，包括以下具体步骤：称取纯度82％-90％的灯盏花素粗品，加入一定量纯水，保持浓度为10-50mg/ml，用碱调ph值至7-9,40-60℃水浴加热，待样品溶解后，趁热过滤；
所述G-10葡聚糖凝胶处理及装柱和平衡，包括以下具体步骤：以纯水为溶胀剂对G-10葡聚糖凝胶进行充分溶胀，去除悬浮细微颗粒，脱气后装入层析柱，保持液面高于填料，使其自然沉降，层析柱径高比为1:10-1:15；装柱完成后，以纯水为流动相对层析柱进行平衡，平衡流速为2-4BV/h；
S2上样：将步骤S1得到的滤液连续缓慢加入层析柱中，保持流速为2-4BV/h，上样过程中确保液面高于填料，上样过程中层析柱体积ml与上样量g之比为100:3-100:7；
S3洗脱：上样完成后，继续使用纯水洗脱，保持流速为2-4BV/h，分段收集洗脱液；
S4检验：对洗脱液采用高效液相色谱进行分析；若合格，进入步骤S5,；不合格，进行废液回收；
S5浓缩：将纯度满足要求的洗脱液合并，减压浓缩至灯盏花素粗品重量的10-15倍；
S6析出：用酸将上述浓缩液调至ph值1-2，静置5-20h，待样品析出；
S7水洗和干燥：将静置好的样品过滤，滤饼用纯水洗至中性，40-60℃下真空干燥，得到灯盏花素原料药，其纯度大于99％。
10.由权利要求1-9的任一项所述的高纯度灯盏花素原料药的制备工艺所制备得到的灯盏花素原料药。
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|---|---|---|---|
| CN202111282861.XA CN113788870A (zh) | 2021-11-01 | 2021-11-01 | 一种高纯度灯盏花素原料药及其制备工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111282861.XA CN113788870A (zh) | 2021-11-01 | 2021-11-01 | 一种高纯度灯盏花素原料药及其制备工艺 |
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|---|---|
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|---|---|
| CN (1) | CN113788870A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101376668A (zh) * | 2007-08-31 | 2009-03-04 | 樊献俄 | 高纯度灯盏花乙素原料药的制备工艺 |
| CN102659872A (zh) * | 2012-04-11 | 2012-09-12 | 苏州纳微生物科技有限公司 | 一种高纯度灯盏花乙素的制备方法 |
| WO2014015625A1 (zh) * | 2012-07-23 | 2014-01-30 | 昆明制药集团股份有限公司 | 一种制备高纯度灯盏花乙素苷元的方法 |
-
2021
- 2021-11-01 CN CN202111282861.XA patent/CN113788870A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| Title |
|---|
| 叶萌: "灯盏花：预防和治疗心脑血管病的天赐良药", 云南科学技术出版社, pages: 116 * |
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