CN102559522A - 一种高核酸面包酵母及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高核酸面包酵母及其制备方法。该高核酸面包酵母，相对于面包酵母菌体的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大于12.0重量％。本发明的高核酸面包酵母具有更高的RNA含量，能够提高高核酸面包酵母的利用率。
Description
技术领域
本发明提供一种面包酵母及其制备方法，具体涉及一种高核酸面包酵母及其制备方法。
背景技术
核酸在医药、食品、农业、化妆品等方面的应用越来越广，从酵母菌细胞内提取核酸已经成为核酸的重要来源。现有的技术方案中主要是以假丝酵母为菌种，进行扩大培养，收获酵母菌体，提取核酸。假丝酵母在普通的面包酵母工厂不能应用，限制性较大。
面包酵母菌种是国际公认的可以直接使用在饲料和食品中的安全菌株。现有技术生产鲜酵母的工艺流程一般通过菌种保藏管、斜面试管、液体试管、三角瓶、卡式瓶、种子罐、流加培养，最后得到商品酵母。其中流加培养一般为二级或三级培养，典型二级培养流程为：由种子罐培养得到一代酵母(种子酵母)，分离洗涤后经二级发酵扩大培养得到二代酵母，其中种子酵母扩大培养的时间一般在10小时以上，但是常规方法制备的面包酵母中核酸含量不高。
中国专利申请CN1498264A公开了一种“富核糖核酸啤酒酵母菌体及其制造方法”，该方法制备的酵母菌体中含有相当于菌体重量10％以上的核糖核酸，但是不超过12重量％。
中国专利申请CN101760437A公开了一种“高核酸面包酵母及其制备方法”，该方法通过控制扩大培养的培养时间等条件，制备得到了含有相当于面包酵母菌体重量的20重量％以上的核酸，其中RNA达到了9.5％以上。
如果能够进一步提高RNA的含量，那么将更加能够满足市场的需求，节约原材料。
发明内容
本发明所要解决的技术问题
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种高核酸面包酵母及其制备方法。本发明的高核酸面包酵母中RNA的含量更高，能够节约制备所需原料。该高核酸面包酵母的制备方法能够制备得到RNA含量更高的高核酸面包酵母。
另外，本发明还提供一种能够连续制备得到所述高核酸面包酵母的制备方法。
在本发明中，高核酸面包酵母所要满足的条件是，含有相当于面包酵母菌体重量的20重量％以上的核酸。
为了解决上述的技术问题，本发明提供以下的技术方案：
第一方面，本发明提供一种高核酸面包酵母，相对于面包酵母菌体的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大于12.0重量％。
优选地，其中的RNA大于12.1重量％。
优选地，其中的RNA大于12.2重量％。
第二方面，本发明提供一种高核酸面包酵母的制备方法，包括面包酵母菌体的种子罐培养和面包酵母菌体的扩大培养，
a)在扩大培养过程中，在面包酵母菌体湿重达到100g/L～120g/L之后，加入相对于扩大培养的发酵体系为1‰g/L以上的谷氨酰胺和1‰g/L以上的天冬氨酸；
b)继续扩大培养，直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.0重量％。
优选地，在步骤b)中，扩大培养直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.1重量％。
优选地，在步骤b)中，扩大培养直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.2重量％。
优选地，在步骤a)中，加入相对于扩大培养的发酵体系的为2‰g/L以上的谷氨酰胺和2‰g/L以上的天冬氨酸。
优选地，在步骤a)中，加入的谷氨酰胺和天冬酰胺的重量比为0.95∶1.05～1.05∶0.95。
第三方面，本发明提供一种高核酸面包酵母的制备方法，包括下列步骤：
S1)种子罐培养；
S2)从种子罐中取出一部分的面包酵母菌体料液，进行扩大培养；
S3)在扩大培养过程中，在面包酵母菌体湿重达到100g/L～120g/L之后，加入谷氨酰胺和天冬酰胺，直至谷氨酰胺和天冬酰胺相对于扩大培养的发酵体系为1‰g/L以上；
S4)继续扩大培养，直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.0重量％；
S5)取出扩大培养的发酵体系9.0～11.0％的面包酵母菌体料液，进行分离，得到高核酸面包酵母；并且在扩大培养的发酵体系中加入与取出的面包酵母菌体料液大致相等的面包酵母菌体料液；
重复进行步骤S3)～S5)。
优选地，在步骤S5)中，取出的面包酵母菌体料液相对于扩大培养的发酵体系为9.9～10.1％，优选为10.0％。
根据本发明的第一方面的高核酸面包酵母，由于其中的RNA的含量更高，所以能够节约制备所需原料。
根据本发明的第二方面的高核酸面包酵母的制备方法，能够制备得到上述的RNA含量更高的高核酸面包酵母。
根据本发明的第三方面的高核酸面包酵母的制备方法，能够实现连续制备得到上述的RNA含量更高的高核酸面包酵母。
具体实施方式
为了本领域的技术人员能够更加直观和清楚地了解本发明的技术方案，下面以实施例为例对本发明的技术方案做出进一步地解释和说明。
实施例1
斜面面包酵母菌种接种于250mL摇瓶，30℃培养24h后，转接与10L的卡氏瓶，30℃静置培养48h后再转接于10m3的种子罐，在通风为10m3/h、温度30℃条件下，培养24h后，再转接于160m3的大发酵罐进行补料发酵种子培养，发酵时间为20h，然后进行分离洗涤，将分离洗涤的酵母乳接种于160m3的发酵罐，做商品发酵，商品发酵的意思是在发酵阶段湿重长到100g/L时，每小时放出10m3的物料，同时补入29％糖蜜1.75m3、20％的尿素100L，25％磷酸二氢铵80L、无菌热水8.17m3，PH为5.0，温度为30℃，加入谷氨酰胺0.1％、天冬氨酸0.3％，进行连续流加培养阶段。取样检测，RNA为12.3％。
其中，mL代表毫升，℃代表摄氏度，h代表小时，L代表升，g代表克，m3代表立方米。在没有特别说明的情况下，百分比代表质量体积百分比，单位是g/L。
实施例2
斜面面包酵母菌种接种于250mL摇瓶，30℃培养24h后，转接与10L的卡氏瓶，30℃静置培养48h后再转接于10m3的种子罐，在通风为10m3/h、温度30℃条件下，培养24h后，再转接于160m3的大发酵罐进行补料发酵种子培养，发酵时间为20h，然后进行分离洗涤，将分离洗涤的酵母乳接种于160立方发酵罐，做商品发酵，商品发酵的意思是在发酵阶段湿重长到120g/L时，每小时放出10立方米的物料，同时补入29％糖蜜1.90m3、20％尿素120L，25％磷酸二氢铵96L、无菌热水7.89m3，PH为5.0，温度为30℃，加入谷氨酰胺0.3％、天冬氨酸0.2％，进行连续流加培养阶段。取样检测，RNA12.5％。
其中，mL代表毫升，℃代表摄氏度，h代表小时，L代表升，g代表克，m3代表立方米。在没有特别说明的情况下，百分比代表质量体积百分比，单位是g/L。
在本实施例中，RNA检测方法如下(也可以采用其他的公认的检测方法来检测)：
(1)试剂
0.5N的HClO4；0.25N的HClO4，N代表摩尔。
(2)设备
1.毫克级天平
2.4000rpm离心机，
3.容积至少10ml的离心管
4.可在260nm读数的分光光度计
5.70℃热水水浴锅
6.4℃冷水水浴锅
7.10ml和1ml吸液管
8.100ml容量瓶
(3)测试方法
如果是酵母干粉，称0.06-0.15mg酵母加入离心管；如果是18％浓度的酵母乳，则称0.4-0.8mg；如果是3.5％浓度的液体，则称1.5-3.0mg。mg代表毫克。百分比浓度如无特别说明，是指质量百分比浓度。
1.加8ml的冷的0.25N HClO4到离心管中。
2.将该离心管放入4℃冷水水浴锅中，保温15分钟
3.4000rpm离心10分钟
4.轻轻地倒出浮在表面的物质
5.如果是酵母小颗粒，加入5ml的0.5N HClO4.振荡混匀。
6.将该离心管放入70℃水浴锅中，保温15分钟；每3-4分钟振荡一次。
7.4000rpm离心10分钟
8.酵母颗粒溶解后，吸取1ml上清液，加入100ml的蒸馏水，混匀。
9.260nm测光吸收值，蒸馏水作为空白。
10.用待测样品冲洗比色皿，装满比色皿后放入分光光度计。擦净表面。
11.记录吸光度，重复第11步。两次测量的平均值。
(4)计算，按照下式进行计算
其中，样品重量以毫克计。
例如在干酵母中，假设吸光度是0.7，干粉重量为145mg，样品固形物百分含量是96％，那么％RNA为7.8。
Claims (10)
1.一种高核酸面包酵母，其特征在于，相对于面包酵母菌体的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大于12.0重量％。
2.根据权利要求1所述的面包酵母，其特征在于，其中的RNA大于12.1重量％。
3.根据权利要求2所述的面包酵母，其特征在于，其中的RNA大于12.2重量％。
4.一种高核酸面包酵母的制备方法，包括面包酵母菌体的种子罐培养和面包酵母菌体的扩大培养，其特征在于，
a)在扩大培养过程中，在面包酵母菌体湿重达到100g/L～120g/L之后，加入相对于扩大培养的发酵体系为1‰g/L以上的谷氨酰胺和1‰g/L以上的天冬氨酸；
b)继续扩大培养，直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.0重量％。
5.根据权利要求4所述的高核酸面包酵母的制备方法，其特征在于，在步骤b)中，扩大培养直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.1重量％。
6.根据权利要求4所述的高核酸面包酵母的制备方法，其特征在于，在步骤b)中，扩大培养直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.2重量％。
7.根据权利要求4～6中任意一项所述的高核酸面包酵母的制备方法，其特征在于，在步骤a)中，加入相对于扩大培养的发酵体系为2‰g/L以上的谷氨酰胺和2‰g/L以上的天冬氨酸。
8.根据权利要求4～7中任意一项所述的高核酸面包酵母的制备方法，其特征在于，在步骤a)中，加入的谷氨酰胺和天冬氨酸的重量比为0.95∶1.05～1.05∶0.95。
9.一种高核酸面包酵母的制备方法，包括下列步骤：
S1)种子罐培养；
S2)从种子罐中取出一部分的面包酵母菌体料液，进行扩大培养；
S3)在扩大培养过程中，在面包酵母菌体湿重达到100g/L～120g/L之后，加入谷氨酰胺和天冬氨酸，直至谷氨酰胺和天冬氨酸相对于扩大培养的发酵体系为1‰g/L以上；
S4)继续扩大培养，直至相对于面包酵母菌体的100重量％，RNA大于12.0重量％；
S5)取出扩大培养的发酵体系9.0～11.0％的面包酵母菌体料液，进行分离，得到高核酸面包酵母；并且在扩大培养的发酵体系中加入与取出的面包酵母菌体料液大致相等的面包酵母菌体料液；
重复进行步骤S3)～S5)。
10.根据权利要求9所述的高核酸面包酵母的制备方法，其特征在于，在步骤S5)中，取出的面包酵母菌体料液相对于扩大培养的发酵体系为9.9～10.1％，优选为10.0％。
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