CN109402014B - 一种产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一种产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用，属环境生物技术领域。本发明菌株Bacillus thermolactis strain B209具有良好的天然纤维素降解能力，与其他各菌株可良好共生，复配比例科学合理，使用该菌剂堆制堆肥，堆体达到高温所需时间短，高温持续时间长，纤维素降解率高，不仅可有效加快堆肥反应的速度，还可改善堆肥的无害化效果，具有极为广阔的应用前景。

Description

一种产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一种产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用，属环境生物技术领域。
背景技术
据统计，我国农作物秸秆近20种，年产量约7.0×108t，约占世界秸秆总量的25％，其中，稻草2.0×108t，玉米秸秆2.0×108t，小麦秸秆1.0×108t，豆类和杂粮作物秸秆1.0×108t，花生、薯类和甜菜等秸秆藤蔓1.0×108t。随着社会经济迅速发展和人口的增加，农作物秸秆总量将以年5％～10％的速度递增。
植物细胞壁中最主要的成分就是纤维素，它决定了细胞壁的结构。纤维素是由葡萄糖残基组成，以纤维二糖为基本连接单位的天然高分子化合物，是自然界中最丰富的可再生资源，而纤维素代谢则是生物圈碳源循环的重要组成部分。农作物秸秆富含纤维素等有机物，同时含有作物生长所需的氮、磷、钾、钙、镁等营养元素，碳氮比较高，与碳氮比较低的有机废弃物混合堆肥，是其重要的资源化利用途径之一。
然而，天然纤维素分子排列规则、聚集成束，较难生物降解。针对秸秆与其他堆肥原料的性质和组成，筛选高效降解天然纤维素的菌株、与其他微生物菌种复配获得复合微生物菌剂，对加快秸秆类原料的堆肥化进程、提高堆肥化效率和成品品质意义重大。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一株产纤维素酶的Bacillus thermolactis strainB209，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2018474，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。该菌株的发酵培养条件为：温度40℃-60℃，通气量0.5-1.0vvm，搅拌转速200-600r/min，溶解氧大于10％，pH值7.0-7.5。
本发明的第二个目的是提供含有所述Bacillus thermolactis strain B209的微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂还含有热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母。
在本发明的一种实施方式中，所述热噬淀粉芽孢杆菌B202已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018471，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
在本发明的一种实施方式中，所述嗜热短芽芽孢杆菌(Bacillus thermoruberstrain)B205，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018472，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
在本发明的一种实施方式中，所述耐硼赖氨酸芽孢杆菌和库德里阿兹威氏毕赤酵母可选用商业化菌株，例如Lysinibacillus boronitolerans ATCC BAA-1146、Pichiakudriavzevii ATCC 24210。
本发明的第三个目的是提供所述Bacillus thermolactis strain B209的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述应用是在食品厂污水处理剩余污泥与秸秆混合堆肥。
在本发明的一种实施方式中，所述应用是制备用于食品厂污水处理剩余污泥与秸秆混合堆肥的微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂是将Bacillus thermolactisstrain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202 CCTCC No.M 2018471、嗜热短芽芽孢杆菌B205CCTCC No.M 2018472、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液按比例混合，使各菌种的活菌数之比为48-80:60-120:30-50:12-22:0.5-1.5。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂的活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/mL或者CFU/g。
本发明的第四个目的是提供所述微生物菌剂的制备方法，所述方法为将Bacillusthermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母分别接种至培养基中，获得Bacillus thermolactisstrain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液；将获得的发酵液按比例混合，添加载体辅料，得到包含Bacillus thermolactis strain B209的液态复合微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述载体辅料包括但不限于褐煤、沸石、石粉中的一种或几种。
在本发明的一种实施方式中，所述复合微生物菌剂的制备方法为将获得的Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液按比例混合，添加粉碎秸秆、炭化秸秆、麸皮中的一种或几种，热风干燥后，得到包含Bacillus thermolactis strainB209的固态复合微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述获得Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌的发酵液为将其分别接种至高温灭菌后的营养肉汤培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，静置培养20-30h；所述耐硼赖氨酸芽孢杆菌的培养温度为28-37℃；所述Bacillusthermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202与嗜热短芽芽孢杆菌B205的培养温度为30-60℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述Bacillus thermolactisstrain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌的发酵液。
在本发明的一种实施方式中，所述营养肉汤培养基为高温灭菌后的营养肉汤培养基。
在本发明的一种实施方式中，所述营养肉汤培养基的成分包含葡萄糖15.0g，酵母膏5.0g，氯化钙(带两个结晶水)0.2g，水1000mL。
在本发明的一种实施方式中，所述获得库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液为将库德里阿兹威氏毕赤酵母分别接种至高温灭菌后的马铃薯葡萄糖培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，静置培养20-30h，培养温度为20-30℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述深库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液。
在本发明的一种实施方式中，所述马铃薯葡萄糖培养基为高温灭菌后的马铃薯葡萄糖培养基。
在本发明的一种实施方式中，所述马铃薯葡萄糖培养基的成分包含马铃薯浸粉6.0g，葡萄糖20.0g，水1000mL。
本发明第五个目的是提供上述一种复合微生物菌剂的应用方法，包含如下步骤：
(1)将所述复合微生物菌剂和堆肥原料按照0.1-0.5：100的比例进行混合；
(2)将混合物堆制堆肥，测量堆体温度，按照温度变化进行翻堆。
在本发明的一种实施方式中，所述(2)是将所述混合物堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量堆体温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，堆制结束。
本发明的有益效果：
(1)本发明公开了一株产纤维素酶的Bacillus thermolactis strain B209CCTCC No.M 2018474。该菌株培养26h纤维素酶酶活可达395U/mL，具有较好的降解纤维素的能力，具有极为广阔的市场应用前景。
(2)本发明提供的这种复合微生物菌剂，可用于食品厂污水处理剩余污泥与秸秆混合堆制堆肥，较好实现食品厂污水处理剩余污泥与秸秆混合堆肥的资源化利用。
(3)本发明提供的这种复合微生物菌剂，堆制7d后，可使堆肥原料中纤维素的降解率达32.5％-45.2％，而对照实验的降解率为5.2％。
(4)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可有效缩短堆体升温时间，使得堆体达到高温55℃所需时间由对照实验的75h缩短至35-45h。
(5)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可有效提高堆体的最高温度，使得堆体达到的最高温度由对照实验的52℃提高至57-64℃。
(6)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可有效延长堆体的高温持续时间，堆体高温55℃持续时间为81-88h，而对照实验的堆体温度始终低于55℃。
(7)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可有效提高堆肥速度及稳定化效果，堆制7d后，可使混合物料的碳氮比由对照实验的20.5降低至13.5-17.3。
(8)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可改善堆肥的无害化效果，堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为72-93个/g与95.5-97.6％，而对照实验分别为360个/g与78.9％。
生物材料保藏
Bacillus thermolactis strain B209，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018474，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans strain)B202，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018471，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
嗜热短芽芽孢杆菌(Bacillus thermoruber strain)B205，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018472，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
具体实施方式
检测方法参见我国生物有机肥质量标准(NY 884-2012)。
本发明涉及的检测方法如下：
纤维素含量的检测方法：采用试亚铁灵指示剂法进行检测。纤维素的降解率为R(％)：
R＝[(m1-m2)/m1/*100％
其中，m1为起始原料中纤维素的质量(mg)，m2为堆制一段时间后物料中小维素的质量(mg)。
纤维素酶酶活：采用CMC糖化力法测定纤维素酶酶活。定义在25℃下，每1分钟内转化生成1μg葡萄糖的酶量为一个酶活单位(U)。
粪大肠菌群数的检测方法：采用肥料中粪大肠菌群数的检测方法(GB/T19524.1-2004)进行检测。
蛔虫卵死亡率的检测方法：采用肥料中粪大肠菌群数的检测方法(GB/T19524.2-2004)进行检测。
具体实施方式中，耐硼赖氨酸芽孢杆菌和库德里阿兹威氏毕赤酵母可选用商业化Lysinibacillus boronitolerans ATCC BAA-1146、Pichia kudriavzevii ATCC 24210，但不受限于上述菌株。
实施例1 Bacillus thermolactis strain B209的筛选
(1)将食品厂污水处理的剩余污泥与玉米秸秆按质量比1：0.7：0.8的比例混合，接种5％(w/w)的江苏省无锡市某区夏季腐叶，混合物料的含水率为55％，C/N比为25，混合均匀后堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量堆体温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样；
(2)称取堆肥样品10g，放入装有90mL灭菌水的三角烧瓶中，120r/min摇床震荡1h，得到10-1稀释液，并依次制成10-4、10-5和10-6的三种堆肥样品稀释液，分别吸取上述三种稀释液100μL均匀涂布于营养琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基和马铃薯琼脂培养基平板上，分别置于45℃的培养箱中倒置培养1～7d，然后反复划线分离，直至获得纯菌株；
(3)将适量刚果红溶液滴定纯菌菌落边缘，染色1h，再用适量NaCl漂洗1h后观察，若产生透明圈，说明有纤维素降解酶产生，并可据透明圈大小判断菌株的产酶能力，透明圈越大降解纤维素能力越强，最终筛选获得一株产纤维素酶及纤维素降解能力最强的菌株。
实施例2 Bacillus thermolactis strain B209的鉴定
在营养琼脂培养基平板上于45℃培养过夜后，形成圆形、奶油色、边缘不规则、略粗糙、直径1-4mm的菌落，用光学显微镜观察呈革兰氏染色阳性，呈单个或2-4各细胞呈链状排列，杆状，产芽孢，可利用碳水化合物产酸。
采用16SrDNA测序进行分类学分子鉴定，将测序结果(1506bp)在NCBI中进行Blast比对，发现其16SrDNA碱基序列与thermolactis芽孢杆菌(Bacillus thermolactisstrain)的相似性最高，鉴定为Bacillus thermolactis strain。
综合上述形态特征、生理生化特征及遗传性特征，可鉴定该产纤维素酶菌株为Bacillus thermolactis strain，将其命名为Bacillus thermolactis strain B209，并于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC No.M 2018474。
对菌株产纤维素酶的能力进行验证。将菌株接种至营养琼脂培养基平板上，45℃培养26h，然后转接于液体营养肉汤培养基中，45℃培养26h，将发酵液离心，采用试亚铁灵指示剂法测定纤维素酶活力，经测定，纤维素酶酶活为395U/mL。
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按1.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将0.3％(按质量计)Bacillus hisashii strain B207的发酵液与物料混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，结果显示，堆制7d后，原料中纤维素含量降低了30.9％。
实施例3 Bacillus thermolactis strain B209菌种活化与培养
将Bacillus thermolactis strain B209接种至营养琼脂培养基平板上，45℃培养22h。营养琼脂培养基的组成为葡萄糖15.0g，酵母膏5.0g，氯化钙(带两个结晶水)0.2g。
将活化好的菌种接种于装有100mL液体培养基的250mL摇瓶中，45℃条件下，160r/min振荡培养22h。摇瓶培养基组成为葡萄糖15.0g，酵母膏5.0g，氯化钙(带两个结晶水)0.2g，水1000mL，pH为7.3。
将摇瓶培养液按体积比3％-10％接种至3L发酵罐中，搅拌转速为200-600r/min，通气量为0.5-1.0vvm，溶解氧大于10％，40℃-60℃条件下发酵培养20-30h。发酵罐培养基组成为葡萄糖15.0g，酵母膏5.0g，氯化钙(带两个结晶水)0.2g，磷酸二氢钾2.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，pH为7.3。
实施例4含Bacillus thermolactis strain B209的液态复合微生物菌剂的制备
(1)Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌为将Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌分别接种至高温灭菌后的营养肉汤培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，培养20-30h；所述耐硼赖氨酸芽孢杆菌的培养温度为28-37℃；所述Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202与嗜热短芽芽孢杆菌B205的培养温度为30-60℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌的发酵液；
(2)库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液为将库德里阿兹威氏毕赤酵母接种至高温灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，培养20-30h，培养温度为20-30℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液；
(3)将获得的Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母发酵液按一定比例混合，使各菌种的活菌数之比为48-80:60-120:30-50:12-22:0.5-1.5，添加发酵液质量0.1～10％的市售的载体辅料褐煤、沸石、石粉中的一种或几种，获得活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/mL的液态复合微生物菌剂。
实施例5含Bacillus thermolactis strain B209的固态复合微生物菌剂的制备
将获得Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液按照一定的比例混合，添加粉碎秸秆、炭化秸秆、麸皮中的一种或几种，热风干燥后，得到包含Bacillusthermolactis strain B209的固态复合微生物菌剂。
实施例6堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按1.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将含Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比为65:90:42:18:1的液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.3：100的比例混合，菌剂添加量为0.3％，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆体达到最高温度所需时间为37h，最高温度为62℃，高于55℃持续时间为84h；堆置7d后，纤维素的降解率为40.9％；堆肥结束时，混合物料的碳氮比为14.5，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为77个/g与96.6％。
实施例7堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按2.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为25，将含Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比为48:60:30:12:0.5的液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.5：100的比例混合，菌剂添加量为0.5％，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆体达到最高温度所需时间为42h，最高温度为59℃，高于55℃持续时间为82h；堆置7d后，纤维素的降解率为38.9％；堆肥结束时，混合物料的碳氮比为17.3，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为86个/g与96.5％。
实施例8堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按2.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为25，将含Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比为65:90:42:18:1的液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.5：100的比例混合，菌剂添加量为0.5％，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆体达到最高温度所需时间为35h，最高温度为64℃，高于55℃持续时间为88h；堆置7d后，纤维素的降解率为45.2％；堆肥结束时，混合物料的碳氮比为13.5，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为72个/g与97.6％。
实施例9堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按2.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为25，将含Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比为80:120:50:22:1.5的固态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.1：100的比例混合，菌剂添加量为0.1％，混合均匀后堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆体达到最高温度所需时间为45h，最高温度为57℃，高于55℃持续时间为81h；堆置7d后，纤维素的降解率为32.5％；堆肥结束时，混合物料的碳氮比为17.3，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为93个/g与95.5％。
对比例1
(1)将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按1.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将不含Bacillus thermolactis strain B209的上述液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.3：100的比例混合，菌剂添加量为0.3％，其中，热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比为90:42:18:1，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆体达到最高温度所需时间为75h，最高温度为52℃，低于55℃；堆置7d后，纤维素的降解率为5.2％；堆肥结束时，混合物料的碳氮比为20.5，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为360个/g与78.9％。
对比例2
具体实施方式同实施例6，区别在于，Bacillus thermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比有差异，具体如表1所示。结果表明，堆体达到最高温度所需时间延长至62h和58h，最高温度为55℃和57℃；堆置7天后，纤维素降解率为28.0％和33.2％；堆肥结束时，混合物料的碳氮比为21.1和18.4，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为540和620个/g、77.1％和69.5％。
表1
Figure GDA0002476420590000081
Figure GDA0002476420590000091
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一株产纤维素酶的Bacillus thermolactis strain B209，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018474，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
2.含有权利要求1所述Bacillus thermolactis strain B209的微生物菌剂。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，还含有热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母；所述热噬淀粉芽孢杆菌B202已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2018471，保藏地址为中国，武汉，武汉大学；所述嗜热短芽芽孢杆菌B205已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018472，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，Bacillus thermolactis strainB209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的活菌数之比为48-80:60-120:30-50:12-22:0.5-1.5；所述微生物菌剂的活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/mL或者CFU/g。
5.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，制备方法为：将Bacillusthermolactis strain B209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液按比例混合，添加载体辅料，得到包含Bacillus thermolactis strain B209的液态复合微生物菌剂；所述载体辅料包括但不限于褐煤、沸石、石粉中的一种或几种。
6.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，制备方法为：将获得的Bacillusthermolactis strainB209、热噬淀粉芽孢杆菌B202、嗜热短芽芽孢杆菌B205、耐硼赖氨酸芽孢杆菌与库德里阿兹威氏毕赤酵母的发酵液按比例混合，添加粉碎秸秆、炭化秸秆、麸皮中的一种或几种，热风干燥后，得到包含Bacillus thermolactis strain B209的固态复合微生物菌剂。
7.权利要求1所述的Bacillus thermolactis strain B209在降解纤维素中的应用。
8.一种促进食品厂污水处理的剩余污泥与秸秆进行混合堆肥的方法，其特征在于，应用含有权利要求1所述Bacillus thermolactis strain B209的微生物菌剂进行堆肥。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，
(1)将权利要求2～6任一所述微生物菌剂和堆肥原料按照0.1-0.5：100的比例进行混合；
(2)将混合物堆制堆肥，测量堆体温度，按照温度变化进行翻堆。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述(2)是将所述混合物堆制堆肥，每天早上和下午各测量堆体温度1～2次，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，堆制结束。
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