CN102552297A - 一种药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从救必应(Cortex Ilicis Routundae)中提取的药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的新用途，该组合物的特征在于主要由紫丁香苷和救必应酸等物质组成，在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中可以是由紫丁香苷和救必应酸组成的组合物，也可以是由紫丁香苷和救必应酸组成的组合物与其他药物制成的制剂，可制备片剂、胶囊剂，颗粒剂以及注射剂与混悬剂。

Description

一种药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用

技术领域

本发明是关于一种从救必应(Cortex Ilicis Routundae)中提取的药物组合物的医药新用途，具体的说是救必应药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的应用，也涉及该药物的药物制剂，本发明属于医药技术领域。 

背景技术

糖尿病是目前仅次于肿瘤和心、脑血管病的常见病，近来研究发现其病发过程中往往先出现餐后高血糖，而后发展成糖尿病，故餐后高血糖对机体的危害非常大。而α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制葡萄糖苷酶的活性，使葡萄糖的生成和吸收减缓，从而减低餐后血糖峰值，调整血糖水平，减少血糖对胰腺的刺激，提高胰岛素的敏感性，保护胰腺的功能，有效预防并改善并发症的发生和发展(李玉萍，白冰，叶军，等.α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备和活性研究进展[J].食品科学，2008，29(9)：617.)。因此，葡萄糖苷酶抑制剂在治疗糖尿病方面具有广阔的应用前景。天然植物性食物和传统草药在降血糖、糖尿病防治中发挥着重要作用，是α-葡萄糖苷酶抑制剂的主要来源。利用生物导向鉴定、色谱、质谱等分析技术证明具有α-葡萄糖苷酶抑制剂样作用的植物化学物主要包括多糖、酚类物质、生物碱、糖苷、皂苷、植物固醇等(药物生物技术，2009年第16卷4期，388-392)。 

救必应(Cortex Ilicis Routundae)来源于冬青科植物铁冬青(Ilex Rotunda Thunb.)的干燥树皮。其味苦、性寒，有清热解毒、消肿止痛、祛风利湿等功效，异名为白木香，始载于《岭南采药录》，称“白木香，味苦，清热毒”，为我国南方地区民间惯用草药(黄闻健.救必应的民间应用[J].江西中医药，1996(1)：271)。救必应主要含黄酮苷、酚类、鞣质、三萜苷。救必应提取物具有降低冠脉流量，减慢心率使心肌收缩力减弱，提高耐缺氧能力及抗心律失常的作用，临床上常用于治疗心血管疾病。目前研究显示，救必应药材中主要的化学成分为具栖冬青苷、紫丁香苷及救必应酸。我们通过吸收入血的有效成分研究发现具栖冬青苷的主要吸收入血成分为救必应酸。经过进一步的研究发现，从救必应药材中提取分离出的由紫丁香苷(Syringin)20-50％，救必应酸(Rotundicacid)40-90％组成的救必应药物组合物，具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制作用。 

本发明完成前未发现有关由紫丁香苷及救必应酸组成的药物组合物作为α-葡萄糖苷酶抑制剂及其预防和治疗高血糖方面应用的报道，同时也未发现有关紫丁香苷或救必应酸单一成分作为α-葡萄糖苷酶抑制剂及其预防和治疗高血糖方面应用的报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种救必应药物组合物，该组合物可用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物，该组合物具有在制备高血糖疾病的药物中的新用途，具有明显的创新性。 

本发明的另一目的及特点是：提供了一种可产业化生产的救必应组合物，既具有中药化学成分复方的特点、又具有化学成分明确、组 成比例搭配得当的优势，该组合物是由三萜酸类、苯丙素类成分组成。与以往文献报道不同点在于，我们将以往文献报道中遗弃的水溶液中的多羟基苷类化合物紫丁香苷进行了富集和纯化，将具栖冬青苷降解得到进入人体直接吸收入血的化学成分救必应酸，得到一种全新复方化学成分组合物，具有明显的创新性。该组合物特征在于：按重量百分比计：具紫丁香苷(Syringin)20-50％、救必应酸(rotundic acid)40-90％，实验证明具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制剂，无明显毒副作用；性能稳定，可以制成各种不同的剂型。本发明完成前没发现有关从救必应中提取的以紫丁香苷、救必应酸组成的组合物具有α-葡萄糖苷酶抑制剂药理活性的研究报道。 

三萜酸类、苯丙素类两类化合物联合协同作用预防和治疗高血糖方面应用也是本发明的一个主要创新点及明显的技术进步。 

救必应酸(rotundic acid)结构式 

紫丁香苷(Syringin)结构式 

本发明所述的药物组合物，是由救必应药材提取精制而成，其制备方法如下，将救必应粉碎成粗粉，用5-10倍量药材重量的50-95％的乙醇回流提取1-3次，每次1-3小时，合并提取液，提取液回收乙醇，滤过，水洗沉淀，沉淀A及滤液B分别处理，首先沉淀A加含10-30％乙醇或甲醇的0.2-2mol/L的碱溶液10-80倍量，100℃水解1-5小时，放冷，用酸调PH值为2-7，过滤，弃去水解液，滤饼用水洗至中性，得提取物I；然后将前面所述滤液B，挥至无醇味，通过已处理好的大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用30-80％乙醇洗脱，浓缩乙醇液，得提取物II，将提取物I及提取物II合并，干燥得救必应药物组合物。 

本发明提取方法具有可操作性强、没有使用易燃易爆化学试剂、安全，成本低，可以满足大工业化生产的需要。鉴于本发明具有明确的药理活性，本发明工艺所得的救必应组合物可以产业化制备，具有广阔的应用前景。 

申请人在筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂药物的过程中，出乎意料地 发现紫丁香苷、救必应酸、具栖冬青苷均具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性，进一步的试验证明，具栖冬青苷在肠道的起作用的是经过酶解后的产物救必应酸，并且活性大大增强，所以我们通过现代的工艺手段得到由紫丁香苷和救必应酸组成的组合物，经过药理试验证明本组合物较单一的紫丁香苷及救必应酸具有更强的药理活性。因此可将紫丁香苷、救必应酸组成的组合物用于制备防治糖尿病的药物。其是将本组合物和医学上可接受的赋形剂或载体按照常规的制剂工艺，以5-95∶95-5的重量比例，或者1-9∶9-1的重量比例制成适于胃肠道途径给药或胃肠道外途径给药的各种剂型对患者给药，如加入常规的赋形剂、调味剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等药物辅剂，制成任何一种适合于临床使用的剂型，如：片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、注射剂等。 

由于本发明首次公开了紫丁香苷、救必应酸成的组合物具有抑制α-葡萄糖苷酶的药用作用，因此，将本组合物单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，只要是该药剂用于预防和治疗高血糖，均属于本发明的保护范围。本发明的救必应组合物在制成任何一种剂型时，均具有预防和治疗高血糖的作用。 

紫丁香苷、救必应酸高效液相色谱测定方法： 

对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品，用乙醇溶解制成0.05mg/ml对照品溶液；精密称取救必应酸对照品，用乙醇溶解制成0.008mg/ml对照品溶液 

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05％磷酸水溶液为 流动相：具体比例见下表，检测波长为210nm。 

供试品溶液的制备取组合物20mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加乙醇40ml，超声30min，放置至室温，乙醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 

分别取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

救必应药物组合物具有α-葡萄糖苷酶的抑制作用，通过以下药效学实验得到证实。 

1、救必应药物组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用 

标准反应体系67mmol/L磷酸钾缓冲液(ph6.8)150μl，1mg/ml谷胱甘肽溶液，50μl，0.1mg/ml α-葡萄糖苷酶溶液100μl，37℃保温10min，20mmol/LPNPG溶液100μl，37℃保温10min，再加底物反应20min，用Na₂CO₃溶液终止反应测定，400nm处光吸收值。 

样品对酶活性的抑制率计算公式： 

抑制率(％)＝(A对照-A样品)/A对照*100％ 

拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的影响  取研磨后的拜糖平配制成 10mg/ml的原溶液，并以此稀释成20，1，5，2.5，1mg/ml不同浓度。将100μl拜糖平加入到酶反应体系中，先与酶在37℃保温10min，再加底物反应20min，用Na₂CO₃溶液终止反应，400nm处光吸收值。 

救必应药物组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性的影响 

救必应药物组合物用二甲基亚砜溶解，用缓冲液稀释至1.0mg/ml，抑制率高于70％，然后进行复筛。用缓冲液将救必应组合物稀释至浓度为0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125，0.01mg/ml。将100μl救必应组合物加入到反应体系中，测定救必应组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。实验结果见表1。 

表1、救必应药物组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用 

结果表明，改变拜糖平的浓度，拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的 抑制作用具有良好的量效关系。救必应组合物在浓度为0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125，0.01mg/ml浓度下，对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用具有良好的量效关系，且抑制作用很强。 

2、救必应组合物对正常小鼠糖耐量实验 

取小鼠50只，每组10只，随机分成5组，按表2分组。阴性对照组灌生理盐水，阳性对照为拜糖平灌胃30mg/kg，按照表2给药连续给药7天，末次给药前禁食8h，给药时同时淀粉(5g/kg)灌胃，测定给淀粉后0.5h，1h，2h，3h的血糖值。眼眶静脉窦采血。用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。结果见表2。 

表2、救必应组合物对正常小鼠糖耐量实验结果 

*与阴性对照组比较，*P＜0.01；**P＜0.001 

说明救必应组合物能抑制正常小鼠餐后血糖升高，各剂量组具有显著性差异。 

3、救必应组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠耐糖量实验 

取雄性小鼠50只，每组10只，禁食14h后，腹腔注射2％四氧嘧啶(200mg/kg)生理盐水溶液，注射72h后，眼眶静脉窦采血。测 定空腹血糖(取血前禁食10h)，用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。血糖高于11.1mmol/L的为糖尿病模型小鼠。模型按照表3分组，模型对照组灌生理盐水，阳性对照为拜糖平灌胃30mg/kg，按照表3给药连续给药10天，末次给药前禁食6h，给药同时淀粉(5g/kg)灌胃，测定给淀粉后0.5h，1h，2h的血糖值。眼眶静脉窦采血。用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。结果见表3。 

表3、救必应组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠耐糖量实验结果 

*与模型对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.001 

说明救必应组合物能延缓四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠餐后血糖升高。各剂量组均有显著性差异。 

4、救必应组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖值实验 

取雄性小鼠50只，每组10只，禁食14h后，腹腔注射2％四氧嘧啶(200mg/kg)生理盐水溶液，注射72h后，眼眶静脉窦采血。测定空腹血糖(取血前禁食10h)，用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。血糖高于11.1mmol/L的为糖尿病模型小鼠。模型按照表4分组，模型对照组灌生理盐水，阳性对照为拜糖平灌胃30mg/kg，按照表4给药连续给药10天，末次给药前禁食10h，眼眶静脉窦采血，离心取 血清。用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。结果见表4。 

表4、救必应组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖值实验结果 

*与模型对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.001 

说明救必应组合物高、中、低剂量组均能显著降低四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖水平。 

本发明是通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明仅限于此，具体实施方案如下： 

实施例1、救必应组合物的提取制备 

救必应粉碎成粗粉1kg，用8倍量药材重量的80％的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，提取液回收乙醇，滤过，水洗沉淀，沉淀A及滤液B分别处理，首先沉淀A加含30％乙醇的1mol/L的碱溶液40倍量，100℃水解3小时，放冷，用酸调PH值为5，过滤，弃去水解液，滤饼用水洗至中性，得提取物I；然后将前面所述滤液B，挥至无醇味，通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用50％乙醇洗脱，浓缩乙醇液，得提取物II，将提取物I及提取物II合并，干燥得救必应药物组合物。利用高效液相色谱法测 定，计算，紫丁香苷占28.5％、救必应酸占63.2％。 

实施例2、救必应组合物的提取制备

救必应粉碎成粗粉1kg，用10倍量药材重量的70％的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，提取液回收乙醇，滤过，水洗沉淀，沉淀A及滤液B分别处理，首先沉淀A加含20％乙醇的1mol/L的碱溶液50倍量，100℃水解3小时，放冷，用酸调PH值为4，过滤，弃去水解液，滤饼用水洗至中性，得提取物I；然后将前面所述滤液B，挥至无醇味，通过已处理好AB-8的大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用40％乙醇洗脱，浓缩乙醇液，得提取物II，将提取物I及提取物II合并，干燥得救必应药物组合物。利用高效液相色谱法测定，计算，紫丁香苷占29.3％、救必应酸占60.9％。 

实施例3、(胶囊剂)

组合物原料100g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入1号胶囊，制成1000粒，即得。每次1粒、每日2次。 

实施例4、(片剂)

组合物原料100g，药用淀粉适量，糊精适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，干燥，加入润滑剂适量，压片，制成1000片，即得。 

每次1片、每日2次。 

实施例5、(滴丸剂)

称取20g聚乙二醇4000，在水浴上熔化，加组合物原料20g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90℃下滴入冷却过的液体石蜡中，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，制成 1000粒，即得。每次5粒、每日2次。 

实施例6、(颗粒剂)

组合物原料100g，糖粉400g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装，制成1000袋，即得。每次1袋、每日2次。 

Claims (4)

1.紫丁香苷与救必应酸组成的药物组合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：按重量百分比计：紫丁香苷占20-50％，救必应酸占40-90％。

3.根据权利要求1所述的应用其特征在于：在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用是指含有效治疗剂量的紫丁香苷与救必应酸组成的组合物与一种或多种药学上可接受的药用赋形剂。

4.根据权利要求3所述药物制剂其特征在于：所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的任何一种。