CN102550411A - 一种生产马铃薯原原种的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种生产马铃薯原原种的方法，包括马铃薯试管苗的实验室生产、试管苗大棚内无糖培养快速繁殖及基质+液体培养生产马铃薯原原种。本发明采用了聚丙烯薄膜袋代替传统玻璃容器，透光透气性好、成本低、重量轻、搬运更简单；基质+液体培养的模式，实现了分层繁殖原原种，不仅能有效的控制地上部徒长、确保了植株匍匐茎的生长发育，更有效的促进了顶端块茎的形成膨大，简单易操作，一年可多季栽培，单位面积结薯数量和产量得到了较大的提高，大幅度地降低成本，提高了繁殖效率，实现了马铃薯脱毒微型种薯工厂化规模生产。

Description

一种生产马铃薯原原种的方法
技术领域
本发明涉及一种生产马铃薯原原种的方法，属于农业栽培领域。
背景技术
马铃薯既是我国主要粮食作物之一，又是重要的饲料和工业原料作物，具有很高的经济效益。但由于马铃薯品种退化、病害严重，导致薯类产业发展受限。近年来，通过培育脱毒种薯，建立良种繁育体系，有效地解决了制约马铃薯产业发展的一个关键问题。脱毒种薯是剥离马铃薯植株0.3mm茎尖培养成再生植株，经病毒血清学检测后的无毒植株，进行组织培养快速繁殖的生产出试管苗，在非常严格的防虫、防接触、防毒源等温室和网室隔离生产条件下，经过基质或雾化栽培结出小薯，这种小薯为原原种，再用原原种在网室或田间隔离生产条件下繁育一季，产出的薯块为原种，用原种扩大繁殖生产出的薯块为脱毒薯生产种，脱毒种薯是当前薯类生产中防治薯类病毒病、提高产量的一种有效途径。在脱毒种薯的生产过程中，脱毒试管苗的快繁及原原种的生产是一个关键环节，其快繁的速度和成本对脱毒原原种薯的成本影响较大，因此降低脱毒试管苗及原原种生产成本对薯类推广脱毒种薯具有重要的作用和意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简便、高效、低成本、流水化的生产马铃薯原原种的方法。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种生产马铃薯原原种的方法，包括以下步骤：
（一）马铃薯试管苗的实验室生产：
（1）制作聚丙烯薄膜袋：将聚丙烯薄膜裁减成35cm×10cm的长方形，从15cm处折叠两个2.5cm宽后，用塑料封口机将两边粘合在一起，做成高15cm，宽10cm的开口袋子；
（2）培养基的配制与分装：将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，冷却凝固后用塑料封口机进行封口待用；
（3）无菌操作：用75%酒精擦拭超净工作台，开超净工作台和室内紫外灯，杀菌20～30min；用75%酒精消毒双手、试验用具以及塑料袋封口机，打开接种消毒器，温度达290℃～300℃时把切割刀和镊子等操作工具放入消毒约5分钟，取出，放在工具架上冷却；
当脱毒马铃薯试管苗的基础苗繁殖到一定数量后，将要转接的马铃薯试管苗瓶用75%酒精喷雾消毒后放入超净工作台内，1号组培技术工人在超净工作台内将基础苗从培养袋中取出，置无菌滤纸上，用剪刀剪成1cm左右长度同时带1～2片叶的试管苗； 2号技术工人剪开已灌装培养基且培养基已凝固的薄膜袋封口处，用消毒过并冷却的镊子将1号组培技术工人切割的试管苗夹入薄膜袋内；3号组培技术工人将2号组培技术工人放入的试管苗的茎段插入培养基中0.3～0.5cm左右；4号组培技术工人将3号组培技术工人做好的装有繁殖的试管苗的薄膜袋用塑料袋封口机将其薄膜袋封口，写上培养的试管苗编号，放置于培养室中的培养架上，培养15～20天；
（4）将待要移栽的试管苗薄膜袋置于温室或网室中进行炼苗5～7天后，用剪刀剪开薄膜袋封口，取出试管苗用清水洗净根部培养基，保湿待用；
（二）试管苗大棚内无糖培养快速繁殖：  
（1）将试管苗浸泡在植物生长调节剂溶液中20分钟，取出，此时的试管苗是带腋芽的1～2节茎段的扦插苗，准备具有栽培基质的穴盘，将所述扦插苗扦插到穴盘的穴盘孔中，扦插完后浇水至水从穴盘底孔中流出；
（2）将完成的穴盘放入水槽内进行液体培养，水槽内具有营养液Ⅰ，保持营养液深度为0.3cm左右，在穴盘表面覆盖地膜培养，若晴天太阳大时遮阴；
（3）待扦插苗长根并长出新叶，苗高度达到2～3cm时，掀开薄膜，往穴盘里添加栽培基质至与穴孔口齐平；
（4）若水槽内营养液Ⅰ被蒸发和被根系吸收完毕时，重新配制营养液Ⅰ倒入水槽，保持营养液深度为0.3cm左右，此过程持续3周；
（5）待苗长成8～10片叶左右时，将离顶部4～6片叶茎段剪下，再将茎段剪成带腋芽的1～2节短茎段进行扦插繁殖；当留下的苗有分枝又长成8～10片叶左右时，将离顶部6～8片叶茎段剪下，再将茎段剪成带腋芽的1～2节短茎段形成扦插苗，重复步骤（二）2～3次继续扦插繁殖，扩大种苗数量；
（6）当扦插苗移栽生长到第4周时进入步骤（三）；
 （三）基质+液体培养生产原原种：
（1）扦插苗生长在第4周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅱ，深度保持为1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续2周；
（2）扦插苗生长在第6周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅲ，深度保持1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续2周；
（3）扦插苗生长在第8周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅳ，深度保持1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续至原原种收获期；
（4）在收获前一周放干水槽内的营养液，待植株自然黄化、萎蔫后，收获原原种，收获的原原种分级贮藏。
（一）（2）步骤中所述的培养基按照如下方法配制：
①准确称取KH 2 PO 4  170mg、NH 4 NO 3  1650mg、KNO 3  1900mg、CaCl 2 ·2H 2 O 440mg和MgSO 4 ·7H 2 O 370mg，分别置于200ml的烧杯中，加纯净水100ml分别溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液混合在2000ml的烧杯中，注意混合时要慢，不断搅拌，待用；
②准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 22.3 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 8.6 mg、 H 3 BO 3   6.2 mg、  KI 0.83 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.25 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.025 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.025 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 27.8 mg、Na 2 —EDTA 37.3 mg、烟酸 0.5 mg、维生素B 6  0.5mg、维生素B 1  0.1mg、甘氨酸2.0 mg以及肌醇100 mg，置于200ml的烧杯中，加纯净水溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
③准确称取琼脂6g、蔗糖30g、抗生素3mg、杀菌剂1mg以及多效唑5mg，倒入①步骤中的2000ml的烧杯中搅拌，同时加热，沸腾后加纯净水至烧杯刻度1000mL处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节培养基的PH值到6.5。
（二）（1）步骤中所述的植物生长调节剂溶液为1升水中同时含有NAA 25mg、IBA 25mg以及IAA 40mg。
（二）（1）步骤中所述的穴盘为孔数在72穴以下的穴盘或其他栽培平盘；栽培基质配方为沙:蛭石:珍珠岩=2:2:1。
（二）（2）步骤中所述的营养液Ⅰ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取KH 2 PO 4  34mg、NH 4 NO 3  330mg、KNO 3  380mg、 MgSO 4 ·7H 2 O 74mg、CaCl 2 ·2H 2 O 88mg，分别置于200 ml的烧杯中，加水100 ml溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液混合在2000ml的烧杯中，注意混合时要慢，不断搅拌，待用；
②准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、 H 3 BO 3  1.24 mg、KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
③准确称取NAA 10mg、IBA 10mg于烧杯中，加少量酒精溶解后加水200ml，再缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，并加水至烧杯刻度1000ml处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（三）（1）步骤中所述的营养液Ⅱ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、H 3 BO 3  1.24 mg 、  KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P 2 O 5 :K 2 O=19:19:19复合肥1g于烧杯中，加水400 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000ml处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（三）（2）步骤中所述的营养液Ⅲ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、 H 3 BO 3  1.24 mg 、 KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P 2 O 5 :K 2 O=13:34:22复合肥2g于烧杯中，加水600 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000mL处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（三）（3）步骤中所述的营养液Ⅳ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、 H 3 BO 3  1.24 mg 、 KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P 2 O 5 :K 2 O=14:14:30复合肥3g于烧杯中，加水600 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000mL处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、采用聚丙烯薄膜袋作为培养容器，其具较玻璃好的透光透气性，培养出的作物苗较传统玻璃容器的青绿、健壮。聚丙烯薄膜传热良好，有利于早期将试管苗放置于大棚或网室中炼苗，使之更适应自然温度，移栽成活率提高。占用培养室空间少，并且在培养室中培养时间降低，可在自然光下继续培养，节约约10天电费。
2、传统玻璃容器重量大而有效重量小，空瓶重约200克，而苗及培养基只有30克，有效重量不足15%，玻璃瓶的搬运成了一项比较繁重的体力劳动，若要将组培苗运入温室移栽，运输成本增加，且玻璃瓶所占体积较大，放入培养室培养，增加了存放费用。而聚丙烯薄膜袋重量轻，不仅降低了运输成本，而且减轻了工人的劳动强度，移栽时也方便。同时，传统玻璃容器成本高，一个350ml的玻璃容器需0.8～1.0元左右，而且容易破损，需要不断进行补充，而薄膜袋成本低，仅约0.035元/个。除此之外，省去培养基灭菌步骤，降低了生产成本，满足了薯类脱毒试管苗移栽前的最后一次继代培养且培养基需现用现配等要求。薄膜袋也可以减少培养室中的存放费用。运用本发明所述的方法生产成本降低1/2、劳动强度降低1/3、生产效率提高1/4。
3、基质+液体培养的模式，实现了分层繁殖原原种，不仅能有效的控制地上部徒长、确保了植株匍匐茎的生长发育，更有效的促进了顶端块茎的形成膨大，简单易操作，一年可多季栽培，单位面积结薯数量和产量得到了较大的提高，大幅度地降低成本，提高了繁殖效率。
4、本发明在大棚条件下，采用无糖培养基质进行马铃薯试管苗扩繁，大幅度提高微型种薯的繁育效率、降低繁育成本，是一种解决我国马铃薯种薯产业优质高效快速发展的重要技术，实现了马铃薯脱毒微型种薯工厂化规模生产，为建立以微型种薯为核心的马铃薯脱毒种薯微型化繁育推广体系奠定了基础。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的上述发明内容作进一步的详细描述。
但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。
实施例1  
本实施例为马铃薯试管苗的实验室生产：
（1）制作聚丙烯薄膜袋：将聚丙烯薄膜裁减成35cm×10cm的长方形，从15cm处折叠两个2.5cm宽后，用塑料封口机将两边粘合在一起，做成高15cm，宽10cm的开口袋子。
（2）培养基的配制与分装：
培养基按照如下方法配制：
①准确称取KH 2 PO 4  170mg、NH 4 NO 3  1650mg、KNO 3  1900mg、CaCl 2 ·2H 2 O 440mg和MgSO 4 ·7H 2 O 370mg，分别置于200ml的烧杯中，加纯净水100ml分别溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液混合在2000ml的烧杯中，注意混合时要慢，不断搅拌，待用；
②准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 22.3 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 8.6 mg、 H 3 BO 3   6.2 mg、  KI 0.83 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.25 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.025 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.025 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 27.8 mg、Na 2 —EDTA 37.3 mg、烟酸 0.5 mg、维生素B 6  0.5mg、维生素B 1  0.1mg、甘氨酸2.0 mg以及肌醇100 mg，置于200ml的烧杯中，加纯净水溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
③准确称取琼脂6g、蔗糖30g、抗生素3mg、杀菌剂1mg以及多效唑5mg，倒入①步骤中的2000ml的烧杯中搅拌，同时加热，沸腾后加纯净水至烧杯刻度1000mL处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节培养基的PH值到6.5。
将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，冷却凝固后用塑料封口机进行封口待用。
（3）无菌操作：用75%酒精擦拭超净工作台，开超净工作台和室内紫外灯，杀菌20～30min；用75%酒精消毒双手、试验用具以及塑料袋封口机，打开接种消毒器，温度达290℃～300℃时把切割刀和镊子等操作工具放入消毒约5分钟，取出，放在工具架上冷却；
当脱毒马铃薯试管苗的基础苗繁殖到一定数量后，将要转接的马铃薯试管苗瓶用75%酒精喷雾消毒后放入超净工作台内，1号组培技术工人在超净工作台内将基础苗从培养袋中取出，置无菌滤纸上，用剪刀剪成1cm左右长度同时带1～2片叶的试管苗； 2号技术工人剪开已灌装培养基且培养基已凝固的薄膜袋封口处，用消毒过并冷却的镊子将1号组培技术工人切割的试管苗夹入薄膜袋内；3号组培技术工人将2号组培技术工人放入的试管苗的茎段插入培养基中0.3～0.5cm左右；4号组培技术工人将3号组培技术工人做好的装有繁殖的试管苗的薄膜袋用塑料袋封口机将其薄膜袋封口，写上培养的试管苗编号，放置于培养室中的培养架上,培养15～20天。
（4）将待要移栽的试管苗薄膜袋置于温室或网室中进行炼苗5～7天后，用剪刀剪开薄膜袋封口，取出试管苗用清水洗净根部培养基，保湿待用。
实施例2  
本实施例为试管苗大棚内无糖培养快速繁殖：
（1）将试管苗浸泡在植物生长调节剂溶液中20分钟，取出，植物生长调节剂溶液为1升水中同时含有NAA 25mg、IBA 25mg以及IAA 40mg。此时的试管苗是带腋芽的1～2节茎段的扦插苗，准备具有栽培基质的50孔穴盘，将所述扦插苗扦插到穴盘的穴盘孔中，扦插完后浇水至水从穴盘底孔中流出；栽培基质配方为沙:蛭石:珍珠岩=2:2:1。
（2）将完成的穴盘放入水槽内进行液体培养，水槽内具有营养液Ⅰ，保持营养液深度为0.3cm左右，在穴盘表面覆盖地膜培养，若晴天太阳大时遮阴；
营养液Ⅰ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取KH 2 PO 4  34mg、NH 4 NO 3  330mg、KNO 3  380mg、 MgSO 4 ·7H 2 O 74mg、CaCl 2 ·2H 2 O 88mg，分别置于200ml的烧杯中，加水100 ml溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液混合在2000ml的烧杯中，注意混合时要慢，不断搅拌，待用；
②准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、 H 3 BO 3  1.24 mg、KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
③准确称取NAA 10mg、IBA 10mg于烧杯中，加少量酒精溶解后加水200ml，再缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，并加水至烧杯刻度1000ml处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（3）待扦插苗长根并长出新叶，苗高度达到2～3cm时，掀开薄膜，往穴盘里添加栽培基质至与穴孔口齐平。
（4）若水槽内营养液Ⅰ被蒸发和被根系吸收完毕时，重新配制营养液Ⅰ倒入水槽，保持营养液深度为0.3cm左右，此过程持续3周。
（5）待苗长成8～10片叶左右时，将离顶部4～6片叶茎段剪下，再将茎段剪成带腋芽的1～2节短茎段进行扦插繁殖；当留下的苗有分枝又长成8～10片叶左右时，将离顶部6～8片叶茎段剪下，再将茎段剪成带腋芽的1～2节短茎段形成扦插苗，重复步骤（二）3次继续扦插繁殖，扩大种苗数量。
（6）当扦插苗移栽生长到第4周时进入步骤（三）。
实施例3  
本实施例为基质+液体培养生产原原种：
（1）扦插苗生长在第4周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅱ，深度保持为1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续2周；
其中，营养液Ⅱ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、H 3 BO 3  1.24 mg 、  KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P 2 O 5 :K 2 O=19:19:19复合肥1g于烧杯中，加水400 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000ml处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（2）扦插苗生长在第6周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅲ，深度保持1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续2周；
其中，营养液Ⅲ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、 H 3 BO 3  1.24 mg 、 KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P 2 O 5 :K 2 O=13:34:22复合肥2g于烧杯中，加水600 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000mL处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（3）扦插苗生长在第8周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅳ，深度保持1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续至原原种收获期；
其中，营养液Ⅳ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO 4 ·4H 2 O 4.46 mg、 ZnSO 4 ·7H 2 O 1.72 mg、 H 3 BO 3  1.24 mg 、 KI 0.17 mg、Na 2 MoO 4 ·2H 2 O 0.05 mg、CoCl 2 ·6H 2 O 0.005 mg、CuSO 4 ·5H 2 O 0.005 mg、FeSO 4 ·7H 2 O 5.56 mg、Na 2 —EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P 2 O 5 :K 2 O=14:14:30复合肥3g于烧杯中，加水600 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000mL处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
（4）在收获前一周放干水槽内的营养液，待植株自然黄化、萎蔫后，收获原原种，收获的原原种分级贮藏。
每个穴孔可结薯1～3粒，重量1g～5g不等。
综上所述，本发明采用了聚丙烯薄膜袋代替传统玻璃容器，透光透气性好、成本低、重量轻、有效重量大、搬运更简单；基质+液体培养的模式，实现了分层繁殖原原种，不仅能有效的控制地上部徒长、确保了植株匍匐茎的生长发育，更有效的促进了顶端块茎的形成膨大，简单易操作，一年可多季栽培，单位面积结薯数量和产量得到了较大的提高，大幅度地降低成本，提高了繁殖效率，实现了马铃薯脱毒微型种薯工厂化规模生产。

Claims (8)

1.一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于包括以下步骤：
（一）马铃薯试管苗的实验室生产：
（1）制作聚丙烯薄膜袋：将聚丙烯薄膜裁减成35cm×10cm的长方形，从15cm处折叠两个2.5cm宽后，用塑料封口机将两边粘合在一起，做成高15cm，宽10cm的开口袋子；
（2）培养基的配制与分装：将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，冷却凝固后用塑料封口机进行封口待用；
（3）无菌操作：用75%酒精擦拭超净工作台，开超净工作台和室内紫外灯，杀菌20～30min；用75%酒精消毒双手、试验用具以及塑料袋封口机，打开接种消毒器，温度达290℃～300℃时把切割刀和镊子等操作工具放入消毒约5分钟，取出，放在工具架上冷却；
当脱毒马铃薯试管苗的基础苗繁殖到一定数量后，将要转接的马铃薯试管苗瓶用75%酒精喷雾消毒后放入超净工作台内，1号组培技术工人在超净工作台内将基础苗从培养袋中取出，置于无菌滤纸上，用剪刀剪成1cm左右长度同时带1～2片叶的试管苗； 2号技术工人剪开已灌装培养基且培养基已凝固的薄膜袋封口处，用消毒过并冷却的镊子将1号组培技术工人切割的试管苗夹入薄膜袋内；3号组培技术工人将2号组培技术工人放入的试管苗的茎段插入培养基中0.3～0.5cm左右；4号组培技术工人将3号组培技术工人做好的装有繁殖的试管苗的薄膜袋用塑料袋封口机将其薄膜袋封口，写上培养的试管苗编号，放置于培养室中的培养架上，培养15～20天；
（4）将待要移栽的试管苗薄膜袋置于温室或网室中进行炼苗5～7天后，用剪刀剪开薄膜袋封口，取出试管苗用清水洗净根部培养基，保湿待用；
（二）试管苗大棚内无糖培养快速繁殖：  
（1）将试管苗浸泡在植物生长调节剂溶液中20分钟，取出，此时的试管苗是带腋芽的1～2节茎段的扦插苗，准备具有栽培基质的穴盘，将所述扦插苗扦插到穴盘的穴盘孔中，扦插完后浇水至水从穴盘底孔中流出；
（2）将完成的穴盘放入水槽内进行液体培养，水槽内具有营养液Ⅰ，保持营养液深度为0.3cm左右，在穴盘表面覆盖地膜培养，若晴天太阳大时遮阴；
（3）待扦插苗长根并长出新叶，苗高度达到2～3cm时，掀开薄膜，往穴盘里添加栽培基质至与穴孔口齐平；
（4）若水槽内营养液Ⅰ被蒸发和被根系吸收完毕时，重新配制营养液Ⅰ倒入水槽，保持营养液深度为0.3cm左右，此过程持续3周；
（5）待苗长成8～10片叶左右时，将离顶部4～6片叶茎段剪下，再将茎段剪成带腋芽的1～2节短茎段进行扦插繁殖；当留下的苗有分枝又长成8～10片叶左右时，将离顶部6～8片叶茎段剪下，再将茎段剪成带腋芽的1～2节短茎段形成扦插苗，重复步骤（二）2～3次继续扦插繁殖，扩大种苗数量；
（6）当扦插苗移栽生长到第4周时进入步骤（三）；
 （三）基质+液体培养生产原原种：
（1）扦插苗生长在第4周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅱ，深度保持为1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续2周；
（2）扦插苗生长在第6周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅲ，深度保持1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续2周；
（3）扦插苗生长在第8周时，更换水槽内的营养液为营养液Ⅳ，深度保持1～2cm，同时在穴盘下垫上直径大约1cm的塑料硬管，使穴盘底部不接触水槽底部，此过程持续至原原种收获期；
（4）在收获前一周放干水槽内的营养液，待植株自然黄化、萎蔫后，收获原原种，收获的原原种分级贮藏。
2. 根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（一）（2）步骤中所述的培养基按照如下方法配制：
①准确称取KH2PO4 170mg、NH4NO3 1650mg、KNO3 1900mg、CaCl2·2H2O 440mg和MgSO4·7H2O 370mg，分别置于200ml的烧杯中，加纯净水100ml分别溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液混合在2000ml的烧杯中，注意混合时要慢，不断搅拌，待用；
②准确称取MnSO4·4H2O 22.3 mg、 ZnSO4·7H2O 8.6 mg、 H3BO3  6.2 mg、  KI 0.83 mg、Na2MoO4·2H2O 0.25 mg、CoCl2·6H2O 0.025 mg、CuSO4·5H2O 0.025 mg、FeSO4·7H2O 27.8 mg、Na2—EDTA 37.3 mg、烟酸 0.5 mg、维生素B6 0.5mg、维生素B1 0.1mg、 甘氨酸2.0 mg以及肌醇100 mg，置于200ml的烧杯中，加纯净水溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
③准确称取琼脂6g、蔗糖30g、抗生素3mg、杀菌剂1mg以及多效唑5mg，倒入①步骤中的2000ml的烧杯中搅拌，同时加热，沸腾后加纯净水至烧杯刻度1000ml处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节培养基的PH值到6.5。
3.根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（二）（1）步骤中所述的植物生长调节剂溶液为1升水中同时含有NAA 25mg、IBA 25mg以及IAA 40mg。
4.根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（二）（1）步骤中所述的穴盘为孔数在72穴以下的穴盘或其他栽培平盘；栽培基质配方为沙:蛭石:珍珠岩=2:2:1。
5. 根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（二）（2）步骤中所述的营养液Ⅰ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取KH2PO4 34mg、NH4NO3 330mg、KNO3 380mg、 MgSO4·7H2O 74mg、CaCl2·2H2O 88mg，分别置于200ml的烧杯中，加水100 ml溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液混合在2000ml的烧杯中，注意混合时要慢，不断搅拌，待用；
②准确称取MnSO4·4H2O 4.46 mg、 ZnSO4·7H2O 1.72 mg、 H3BO3 1.24 mg、KI 0.17 mg、Na2MoO4·2H2O 0.05 mg、CoCl2·6H2O 0.005 mg、CuSO4·5H2O 0.005 mg、FeSO4·7H2O 5.56 mg、Na2—EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
③准确称取NAA 10mg、IBA 10mg于烧杯中，加少量酒精溶解后加水200ml，再缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，并加水至烧杯刻度1000ml处，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
6. 根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（三）（1）步骤中所述的营养液Ⅱ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO4·4H2O 4.46 mg、 ZnSO4·7H2O 1.72 mg、H3BO3 1.24 mg 、  KI 0.17 mg、Na2MoO4·2H2O 0.05 mg、CoCl2·6H2O 0.005 mg、CuSO4·5H2O 0.005 mg、FeSO4·7H2O 5.56 mg、Na2—EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P2O5:K2O=19:19:19复合肥1g于烧杯中，加水400 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000ml处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
7. 根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（三）（2）步骤中所述的营养液Ⅲ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO4·4H2O 4.46 mg、 ZnSO4·7H2O 1.72 mg、 H3BO3 1.24 mg 、 KI 0.17 mg、Na2MoO4·2H2O 0.05 mg、CoCl2·6H2O 0.005 mg、CuSO4·5H2O 0.005 mg、FeSO4·7H2O 5.56 mg、Na2—EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
②准确称取N:P2O5:K2O=13:34:22复合肥2g于烧杯中，加水600 ml溶解后，缓慢倒入①中的2000ml的烧杯中，加水至烧杯刻度1000ml处，搅拌混匀后，再逐滴滴入氢氧化钾溶液调节PH值到6.5。
8. 根据权利要求1所述的一种生产马铃薯原原种的方法，其特征在于：（三）（3）步骤中所述的营养液Ⅳ每一升的配方及配制方法如下：
①准确称取MnSO4·4H2O 4.46 mg、 ZnSO4·7H2O 1.72 mg、 H3BO3 1.24 mg 、 KI 0.17 mg、Na2MoO4·2H2O 0.05 mg、CoCl2·6H2O 0.005 mg、CuSO4·5H2O 0.005 mg、FeSO4·7H2O 5.56 mg、Na2—EDTA 7.46 mg于200ml的烧杯中，加水溶解后，缓慢倒入中的2000ml的烧杯中，搅拌混匀后，待用；
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