CN102507942B - 一种水中微囊藻毒素的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水中微囊藻毒素的检测方法。所述方法包括如下步骤：(1)制备连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁颗粒；(2)制备连接有微囊藻毒素分子的拉曼探针，所述拉曼探针是通过银纳米颗粒对小分子的拉曼增强制得的；(3)在所确定的最佳反应条件下绘制微囊藻毒素的标准检测曲线；(4)通过测样品拉曼光谱特定峰的峰强对比标准曲线确定待测样品的浓度。所述检测过程结合了激光拉曼增强和竞争免疫，同时在检测过程中应用了磁分离，与传统的检测方法相比，大大缩短了检测时间。本发明所提供的检测方法还可用于水中其他种类藻毒素分子以及小分子的检测，为水中污染物提供了一条快速、方便的检测途径。
Description
技术领域
本发明涉及一种水中微囊藻毒素的检测方法，属于微囊藻毒素检测技术领域。
背景技术
环境污染造成的水体富营养化所引起的有害蓝藻水华的频繁发生，已成为国内外普遍关注的环境问题。微囊藻毒素(MCs)为有害的蓝藻水华释放的一类具有强烈促癌作用的肝毒素，已发现60多种异构体。微囊藻毒素性质稳定，煮沸后不失活，不挥发，抗PH变化，溶于水、甲醇和丙酮。微囊藻毒素对生物体损害主要表现为肝脏毒性和神经毒性，对肾、肾上腺、肺及胃等也有不同程度的损伤。蓝藻水华及其毒素已列为微生物和有机污染物的检测项目，并已有国家推荐水中微囊藻毒素的安全浓度为1.0μg/L。我国的“生活饮用水卫生规范”和“城市供水水质标准”中都规定MC-LR的最高含量为1.0μg/L。
对于微囊藻毒素的检测方法主要有传统的小鼠腹腔注射生物分析法、酶联免疫法、蛋白磷酸酶抑制等生化分析方法，但这些方法都存在操作复杂，费时且不能鉴定MC的种类等缺点，而常用的高效液相色谱法(HPLC)，样品耗样量大且污染环境。毛细管电泳、质谱联用技术(CE-MS)虽然所需样品少、分离效率高，还可以通过分子量信息确认MCs的种类，但是这种方法需要昂贵的设备，专业的技能，高的成本而且费时。因此迫切需要发明一种快速，灵敏的微囊藻毒素的检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种水中微囊藻毒素的检测方法，该方法可快速，灵敏的检测水中的藻毒素。
本发明提供的一种水中微囊藻毒素的检测方法，包括如下步骤：
(1)将微囊藻毒素的单克隆抗体连接到磁性纳米颗粒上并分散于水或磷酸盐缓冲溶液，得到连接有所述微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒(MAb-MPs)溶液；
(2)将拉曼探针分子吸附于银纳米颗粒上并用二氧化硅进行包覆得到包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒，然后将所述微囊藻毒素连接到所述包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒上并分散于水或磷酸盐缓冲溶液得到连接有所述微囊藻毒素的拉曼探针分子(MC-SERS Tags)溶液；
(3)将至少3种不同浓度所述微囊藻毒素的标准水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液A；将所述孵育液A与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物A；测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱，得到拉曼光谱的峰强与所述微囊藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线；
(4)将含有微囊藻毒素的待测水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液B，所述待测水溶液与步骤(3)中所述标准水溶液的体积相同；将所述孵育液B与所述连接有藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物B，所述反应时间与步骤(3)中所述反应时间相同；测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱，然后根据所述拉曼光谱的峰强与所述微囊藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线即得待测水溶液中微囊藻毒素的浓度。
上述的检测方法中，所述拉曼探针分子的结构式如式(a)所示，其中，R选自H、NH2、烷基、烷氧基、COOH和OH等，所述烷基具体可为碳原子数为1～5的烷基，所述烷氧基具体可为碳原子数为1～5的烷氧基，
上述的检测方法中，所述磁性纳米颗粒可为氧化铁，具体可为Fe3O4或α-Fe2O3)，金属合金，如Fe与Co和/或Ni合金，铁氧体，具体可为CoFe2O4或BaFe12O19，氧化铬CrO2和氮化铁Fe4N等磁性纳米颗粒，均可通过现有的方法进行制备；然后将微囊藻毒素的单克隆抗体通过共价键修饰到所述磁性纳米颗粒上，例如，可以先用羧基修饰所述磁性纳米颗粒，然后利用羧基与氨基之间的反应将所述微囊藻毒素的单克隆抗体与所述磁性纳米颗粒进行结合；所述磁性纳米颗粒度的粒径可为100nm～10μm。
上述的检测方法中，所述银纳米颗粒的粒径可为1nm～200nm；所述二氧化硅层的厚度可为1nm～30nm，所述二氧化硅层可以保护银纳米颗粒不被氧化，同时使所述拉曼探针分子牢固地吸附在所述银纳米颗粒上而不容易掉下来。
上述的检测方法中，所述微囊藻毒素的标准水溶液的质量体积浓度可为0～50μg/L。
上述的检测方法中，步骤(3)中在测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱之前，还可包括用所述磷酸盐缓冲溶液洗涤所述磁性免疫复合物A的步骤；可用磁铁将所述磁性免疫复合物A分离出来。
上述的检测方法中，步骤(4)中在测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱之前，还可包括用所述磷酸盐缓冲溶液洗涤所述磁性免疫复合物B的步骤；可用磁铁将所述磁性免疫复合物B分离出来。
上述的检测方法中，所述磷酸盐缓冲溶液(PBS，0.01M)的组成为：：NaCl 8.00g，KCl 0.20g，KH2PO4 0.20g，Na2HPO4·H2O 1.56g和蒸馏水1000ml。
本发明提供的检测方法可适用于水中不同种类微囊藻毒素的快速，准确、灵敏的检测，还可用于水中其它小分子污染物的快速检测。
附图说明
图1为本发明制备的各种颗粒的透射电镜图，其中图1(a)为银纳米颗粒，图1(b)为MC-SERS Tags，图1(c)为四氧化三铁磁颗粒，图1(d)为MAb-MPs。
图2为本发明确定最佳反应条件的反应配比及反应时间的曲线，其中图2(a)为不同MC-SERS Tags溶液加入量时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强随着MC-SERS Tags溶液加入量的变化曲线；图2(b)为不同反应时间时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强随着反应时间的变化曲线。
图3为用本发明实施例1所提供的检测方法得到的检测藻毒素MC-LR的标准曲线。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明下述实施例所用的(连接有藻毒素单克隆抗体MAbs的磁性纳米颗粒)MAb-MPs溶液以及(连接有藻毒素分子MCs的拉曼探针)MC-SERS Tags溶液是按照以下方法制备的：
(1)MAb-MPs溶液的制备
首先制备磁性纳米颗粒(本实施例中选择四氧化三铁纳米颗粒)，用水热法制备，具体步骤如下：将0.45g～0.75g氯化铁，0.10g～0.20g柠檬酸三钠溶解于20ml～40ml乙二醇中，然后加入1.0g～2.0g的醋酸钠，搅拌30min，将得到的混合液倒入容积为50ml的反应釜中，在200℃下反应10h；将得到的黑色产物分别用水和乙醇洗三次，最后溶于水中，即得到直径为180nm～250nm的四氧化三铁纳米颗粒的水溶液，其中，四氧化三铁纳米颗粒的透射电镜图如图1(c)所示；
用EDC-NHS偶联剂将微囊藻毒素单克隆抗体(MAbs)，分别为MC-LR、MC-YR和MC-RR的单克隆抗体，连接到所制备的磁性纳米颗粒上，具体步骤如下：将20μL的摩尔浓度为3.0mM NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)和20μL的摩尔浓度为3.0mM EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)加入至2.0mL的质量体积浓度为0.5mg/mL的磁性纳米颗粒的水溶液中反应1h，然后离心分离并用PBS洗3次，将12.0μl质量体积浓度为1.0mg/mL的MAbs加入上述所得溶液中反应过夜；然后加入20μL的摩尔浓度为3.0mM乙醇胺水溶液中反应2h，最后用PBS缓冲溶液洗2次并用PBS配置成2ml的MAb-MPs溶液，其中，连接有MC-LR的单克隆抗体的MAb-MPs颗粒的透射电镜图如图1(d)所示。
(2)MC-SERS Tags溶液的制备
首先制备银纳米颗粒，具体步骤如下：将90mg硝酸银溶解于500mL水中加热到沸腾；然后，迅速加入10ml质量分数为1％的柠檬酸三纳水溶液，混合液持续沸腾反应5～30分钟后停止反应将温度降到室温即得到粒径为10～100nm的银纳米颗粒，溶于水中即得到银纳米颗粒水溶液；控制不同的反应时间可以得到颗粒大小为1nm～200nm的银纳米颗粒，其透射电镜图如图1(a)所示；
取50mL上述所制备的银纳米颗粒水溶液，离心分离并用乙醇洗2遍，最后分散于1ml的乙醇中；将200μL的摩尔浓度为1mM的拉曼探针分子对氨基苯硫酚(还可选择对羟基苯硫酚、苯硫酚和对甲基苯硫酚)水溶液和800μL的摩尔浓度为1mM的3-氨丙基三甲氧基硅烷(APTS，有利于随后进一步包覆SiO2层)乙醇溶液加入上述所得银纳米颗粒的乙醇溶液中，室温下搅拌反应30min，将所得纳米颗粒离心分离并用乙醇洗3次最后溶于1ml的乙醇中。
将上述所得纳米颗粒包覆一层SiO2，具体步骤如下：将1mL的质量百分含量为0.54wt％的SiO2的硅酸钠水溶液加入上述所得银纳米颗粒乙醇溶液中；90℃下剧烈搅拌反应1h；将1mL的体积分数为5vol％的APTS乙醇溶液和10μL的质量分数为28％的氨水加入到上述所得银纳米颗粒溶液中，室温下搅拌反应12h得到包覆SiO2层(厚度为1～2nm)的银纳米颗粒；将所得到的包覆SiO2层的银纳米颗粒用乙醇洗3次后分散于200μL的氮氮-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入琥珀酰胺反应以引入羧基，然后加入10μg的MC-LR，并在室温下搅拌反应2h；然后加入10μL的摩尔浓度为1mM的乙醇胺反应2h；最后用PBS离心洗涤3次后分散于1mL的PBS溶液中即得到MC-SERS tags溶液，其中MC-SERS tags颗粒的透射电镜图如图1(b)所示。
本发明下述实施例所用的藻毒素检测的最佳反应条件(MC-SERS Tags溶液与MAb-MPs溶液的最佳配比以及最佳反应时间)是按照以下方法确定的：
(1)MC-SERS Tags溶液与MAb-MPs溶液的最佳配比的确定
将不同量的MC-SERS Tags溶液(5～40μL)加入至20μL MAb-MPs溶液中晃动使其混合均匀，待反应完全后(1h)，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号；图2(a)为所得到的不同MC-SERS Tags溶液加入量时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强随着MC-SERS Tags溶液加入量的变化曲线，由此曲线可确定MC-SERS Tags溶液与MAb-MPs溶液的最佳体积配比为27.5∶20。
(2)最佳反应时间的确定
将27.5μL的MC-SERS Tags溶液加入到20μL的MAb-MPs溶液中晃动反应不同的时间(5～30min)，待特定反应时间后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号；图2(b)为所得到的不同反应时间时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强随着反应时间的变化曲线，由此曲线可知当反应时间大于20min时即达到平衡。
实施例1、水中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
将10μL不同浓度的MC-LR标准溶液(浓度依次为0μg/L、0.02μg/L、0.04μg/L、0.06μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、1.5μg/L、2μg/L、2.5μg/L、3μg/L、3.5μg/L和4μg/L)依次与27.5μL的MC-SERS Tags(连接有MC-LR分子)溶液混合得到孵育液；将此孵育液加入至20μL MAb-MPs(连接有MC-LR单克隆抗体)溶液中晃动反应25min以后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号，(激光拉曼检测入射光波长为532nm，功率为2mW，光谱检测时间为10s)；用不同MC-LR浓度时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强对MC-LR标准溶液浓度作图得到标准曲线，所得到的标准曲线如图3所示。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
将10μL含有MC-LR的待测样品溶液与27.5μL的MC-SERS Tags(连接有MC-LR分子)溶液混合得到孵育液，将此孵育液加入至20μL MAb-MPs(连接有MC-LR单克隆抗体)溶液中晃动反应25min以后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号，(激光拉曼检测入射光波长为532nm，功率为2mW，光谱检测时间为10s)；根据所得拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强对照标准曲线即可确定样品中藻毒素MC-LR的浓度；测量结果的准确率为99％。
实施例2、水中微囊藻毒素MC-YR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
将10μL不同浓度的MC-YR标准溶液(浓度依次为0μg/L、0.02μg/L、0.04μg/L、0.06μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、1.5μg/L、2μg/L、2.5μg/L、3μg/L、3.5μg/L和4μg/L)依次与27.5μL的MC-SERS Tags(连接有MC-YR分子)溶液混合得到孵育液；将此孵育液加入至20μL MAb-MPs(连接有MC-YR单克隆抗体)溶液中晃动反应25min以后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号，(激光拉曼检测入射光波长为532nm，功率为2mW，光谱检测时间为10s)；用不同MC-YR浓度时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强对MC-LR标准溶液浓度作图得到标准曲线。
(2)样品中微囊藻毒素MC-YR的检测
将10μL含有MC-YR的待测样品溶液与27.5μL的MC-SERS Tags(连接有MC-YR分子)溶液混合得到孵育液，将此孵育液加入至20μL MAb-MPs(连接有MC-YR单克隆抗体)溶液中晃动反应25min以后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号，(激光拉曼检测入射光波长为532nm，功率为2mW，光谱检测时间为10s)；根据所得拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强对照标准曲线即可确定样品中藻毒素MC-YR的浓度；测量结果的准确率为98％。
实施例3、水中微囊藻毒素MC-RR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
将10μL不同浓度的MC-RR标准溶液(浓度依次为0μg/L、0.02μg/L、0.04μg/L、0.06μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、1.5μg/L、2μg/L、2.5μg/L、3μg/L、3.5μg/L和4μg/L)依次与27.5μL的MC-SERS Tags(连接有MC-RR分子)溶液混合得到孵育液；将此孵育液加入至20μL MAb-MPs(连接有MC-RR单克隆抗体)溶液中晃动反应25min以后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号，(激光拉曼检测入射光波长为532nm，功率为2mW，光谱检测时间为10s)；用不同MC-RR浓度时拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强对MC-RR标准溶液浓度作图得到标准曲线。
(2)样品中微囊藻毒素MC-RR的检测
将10μL含有MC-RR的待测样品溶液与27.5μL的MC-SERS Tags(连接有MC-RR分子)溶液混合得到孵育液，将此孵育液加入至20μL MAb-MPs(连接有MC-RR单克隆抗体)溶液中晃动反应25min以后，用磁铁将溶液中的磁性免疫复合物分离，弃掉剩余溶液，将所得到的免疫复合物用PBS洗两遍，然后用激光拉曼光谱仪检测其拉曼信号，(激光拉曼检测入射光波长为532nm，功率为2mW，光谱检测时间为10s)；根据所得拉曼光谱1076cm-1处峰的峰强对照标准曲线即可确定样品中藻毒素MC-RR的浓度；测量结果的准确率为98％。
实施例4、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：反应时间为20min。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：反应时间为20min；测量结果的准确率为99％。
实施例5、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：反应时间为30min。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：反应时间为30min；测量结果的准确率为95％。
实施例6、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：所用MC-LR标准溶液的量为20μL。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：所用MC-LR待测样品溶液的量为20μL；测量结果的准确率为96％。
实施例7、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：所用MC-SERS Tags溶液以及MAb-MPs溶液的量分变为55μL和40μL。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测过程
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：所用MC-SERS Tags溶液以及MAb-MPs溶液的量分变为55μL和40μL；测量结果的准确率为97％。
实施例8、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光功率为5mW。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光功率为5mW；测量结果的准确率为99％。
实施例9、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光功率为10mW。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光功率为10mW；测量结果的准确率为99％。
实施例10、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光波长为632nm。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光波长为632nm；测量结果的准确率为99％。
实施例11、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光波长为785nm。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测入射光波长为785nm；测量结果的准确率为99％。
实施例12、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测时间为5s。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测时间为5s；测量结果的准确率为99％。
实施例13、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测时间为20s。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：激光拉曼检测时间为20s；测量结果的准确率为97％。
实施例14、样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
(1)检测标准曲线的绘制
同实施例1的步骤(1)中的步骤，不同之处为：绘制标准曲线所用激光拉曼峰位为1585cm-1。
(2)样品中微囊藻毒素MC-LR的检测
同实施例1的步骤(2)中的步骤，不同之处为：确定待测样品浓度所用激光拉曼峰位为1585cm-1；测量结果的准确率为99％。
Claims (6)
1.一种水中微囊藻毒素的检测方法，包括如下步骤：
（1）将微囊藻毒素的单克隆抗体连接到磁性纳米颗粒上并分散于水或磷酸盐缓冲溶液中，得到连接有所述微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液；
（2）将拉曼探针分子吸附于银纳米颗粒上并用二氧化硅进行包覆得到包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒，然后将所述微囊藻毒素连接到所述包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒上并分散于水或所述磷酸盐缓冲溶液中得到连接有所述微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液；
（3）将至少3种不同浓度的所述微囊藻毒素的标准水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液A；将所述孵育液A与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物A；测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱，得到拉曼光谱的峰强与所述藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线；
（4）将含有微囊藻毒素的待测水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液B，所述待测水溶液与步骤（3）中所述标准水溶液的体积相同；将所述孵育液B与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物B，所述反应时间与步骤（3）中所述反应时间相同；测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱，然后根据所述拉曼光谱的峰强与所述微囊藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线即得待测水溶液中微囊藻毒素的浓度；
所述拉曼探针分子的结构式如式（a）所示，其中，R选自H、NH2、烷基、烷氧基、COOH或OH，
所述磁性纳米颗粒为氧化铁、金属合金、铁氧体、氧化铬或氮化铁；所述磁性纳米颗粒的粒径为100nm～10μm。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述银纳米颗粒的粒径为1nm～200nm；所述二氧化硅层的厚度为1nm～30nm。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述微囊藻毒素的标准 水溶液的质量体积浓度为0～50μg/L。
4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：步骤（3）中在测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱之前，还包括用所述磷酸盐缓冲溶液洗涤所述磁性免疫复合物A的步骤。
5.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：步骤（4）中在测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱之前，还包括用所述磷酸盐缓冲溶液洗涤所述磁性免疫复合物B的步骤。
6.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲溶液的组成如下：NaCl8.00g，KCl0.20g，KH2PO40.20g，Na2HPO4·H2O1.56g和蒸馏水1000ml。
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