CN102499911A

CN102499911A - 一种茶皂苷纳米囊及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102499911A
Application number: CN2011103279889A
Authority: CN
Inventors: 叶勇; 罗月婷
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2011-10-25
Filing date: 2011-10-25
Publication date: 2012-06-20
Anticipated expiration: 2031-10-25
Also published as: CN102499911B

Abstract

本发明公开了一种茶皂苷纳米囊及其制备方法和应用，即将茶皂素用水溶解后用正丁醇萃取，加入1～5％的氢氧化钠，80～100℃回流2～5小时，减压回收正丁醇，用溶剂溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷；将囊材用溶剂制成1～10％囊材溶液，加入0.5～5％乳化剂、1～10％茶皂苷，搅拌乳化0.5～2小时，将乳液缓慢加入到pH 2～6含乳化剂0.1～1％的水溶液中，搅拌1～3小时，过微孔滤膜，静置分层，沉淀物干燥，即制得茶皂苷纳米囊。该纳米囊可制成杀菌、抗炎和增强免疫功能制剂。该纳米囊提高了茶皂苷的稳定性，显著提高其杀菌、抗炎和增强免疫功能效果。

Description

一种茶皂苷纳米囊及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种茶皂苷纳米囊的制备方法及其作为杀菌、抗炎和免疫增强药物的应用。

背景技术

茶皂苷是茶籽或油茶籽中一种主要的五环三萜化合物。它具有抗菌、抗炎和增强免疫功能等多种生物活性。我国是油茶高产的国家，油茶籽中皂苷的含量占12％，目前提取后作为表面活性剂使用，但在医药中未得到有效利用。

国内生产的茶皂素多以油茶籽为原料，将油茶籽脱脂后经甲醇水或乙醇水提取、干燥所得经过技术改进，茶皂素可直接从茶籽饼浸提液中用苯乙烯型共聚树脂或大孔树脂吸附分离(中国专利CN1148598、中国专利申请200810011095.1、中国专利申请200810220573.X)，或用大孔树脂与茶皂素的低浓度有机溶剂提取液共回流提取(中国专利申请200710168737.4)，或采用超声波法提取茶皂素(中国专利CN1706863)、或采用超滤膜法提取茶皂素(中国专利申请200910082997.9)。但以上方法所获得的均为茶皂素产品，其茶皂苷的含量只有50～70％。还没有将茶皂苷制成一种微囊制剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种可有效地分离纯化茶皂苷，制成的茶皂苷纳米囊及制备方法和应用。该纳米囊可用于人或鱼禽兽作为杀菌、抗炎和免疫增强药物或添加剂。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种茶皂苷纳米囊的制备方法，包括下述步骤：

(1)茶皂素用水溶解，配制成质量浓度5～20％的溶液，加入正丁醇提取1～3次，加入茶皂素质量1～5％的氢氧化钠，80～100℃回流2～5小时；

(2)减压回收正丁醇，用甲醇、乙醇或丙酮溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷；

(3)将囊材用乙醇、丙酮或二氯甲烷制成质量浓度1～10％的囊材溶液，加入囊材溶液质量0.5～5％的乳化剂、1～10％的茶皂苷，搅拌乳化0.5～2小时；

(4)将步骤(3)制得的乳液缓慢加入到5～20倍体积pH 2～6含乳化剂0.1～1％体积浓度的水溶液中，搅拌1～3小时，过微孔滤膜，静置分层；

(5)将沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊。

步骤(1)中所述茶皂素是是自茶叶、茶籽或油茶籽中提取的或自脱脂茶籽中提取的茶皂素水剂或固体干燥物。

步骤(3)所述囊材为聚甲基丙烯酸甲酯、聚烷基异氰酸酯、丙烯酸树脂、苯乙烯、甲基纤维素、乙基纤维素的一种或几种。

步骤(3)和(4)所述乳化剂为单甘酯、吐温20、司盘60、蔗糖脂肪酸酯、泊洛沙姆中的一种或几种。

所述茶皂苷纳米囊用于制备杀菌、抗炎及增强免疫功能的药物制剂，适用于人或鱼禽兽等。所述药物制剂为含有茶皂苷纳米囊的单方或复方制剂，该药物制剂可以是外用、口服或注射用药剂型的任何一种。

茶皂纳米囊的片剂的制备方法：称取茶皂苷纳米囊100质量份，加入药用淀粉、糖粉和糊精按质量比7∶2∶1组成的混合物300质量份，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得松散颗粒，过20目筛，晾干，加20质量份的硬脂酸镁，压片，即得茶皂纳米囊的片剂。

茶皂苷纳米囊的胶囊剂的制备方法：称取茶皂苷纳米囊100质量份，加入药用微晶纤维素200质量份，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得松散颗粒，过20目筛，晾干，干燥后填充胶囊，即得茶皂苷纳米囊的胶囊剂。

茶皂苷微米囊的注射剂的制备方法：称取茶皂苷纳米囊100质量份，加入200质量份的甘露醇，用灭菌水溶解后，过0.3μm微孔滤膜，罐装入安培瓶中，-50℃冷冻干燥24小时，即得茶皂苷微米囊的冻干粉针注射剂。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明以茶皂素为原料，经过碱解和溶液萃取，除去了胶质、蛋白等等结合物，得到的茶皂苷纯度高、活性好。

(2)本发明制备的茶皂苷纳米囊，粒度在200～1000nm之间，稳定性增强，并可快速被人或动物机体吸收，缓慢释放，起到长期作用效果。

(3)本发明制备工艺简单，反应条件易于控制，便于工业化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

茶皂素100g用水1900g溶解，加入等体积正丁醇提取1次，加入2g氢氧化钠，80℃回流5小时。减压回收正丁醇，用甲醇溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷65g；将聚甲基丙烯酸甲酯10g用乙醇90g配成囊材溶液，加入0.5g单甘酯、10g茶皂苷，搅拌乳化0.5小时，得到100ml的乳液。将上述乳液缓慢加入到5倍体积(500ml)pH 2含0.1％(0.5ml)吐温20的水溶液中，搅拌1小时，过微孔滤膜，静置分层；沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊20g。

实施例2

茶皂素100g用水900g溶解，加入等体积正丁醇提取2次，加入3g氢氧化钠，90℃回流3小时。减压回收正丁醇，用乙醇溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷75g；将聚烷基异氰酸酯5g用丙酮95g配成囊材溶液，加入5g蔗糖脂肪酸酯、3g茶皂苷，搅拌乳化1小时，得到100ml的乳液。将乳液缓慢加入到10倍体积(1000ml)pH 3含0.5％(5ml)泊洛沙姆的水溶液中，搅拌2小时，过微孔滤膜，静置分层；沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊8g。

实施例3

茶皂素60g用水340g溶解，加入等体积正丁醇提取3次，加入2g氢氧化钠，100℃回流4小时。减压回收正丁醇，用丙酮溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷38g；将丙烯酸树脂3g用丙酮97g配成囊材溶液，加入1g单甘酯、2g茶皂苷，搅拌乳化1.5小时，得到100ml的乳液。将乳液缓慢加入到15倍体积(1500ml)pH 5含1％(15ml)泊洛沙姆的水溶液中，搅拌3小时，过微孔滤膜，静置分层；沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊5g。

实施例4

茶皂素100g用水400g溶解，加入等体积正丁醇提取3次，加入2.5g氢氧化钠，100℃回流5小时。减压回收正丁醇，用乙醇溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷73g；将苯乙烯8g用二氯甲烷92g配成囊材溶液，加入3g司盘60、8g茶皂苷，搅拌乳化2小时，得到100ml的乳液。将乳液缓慢加入到 20倍体积(2000ml)pH 6含1％(20ml)的吐温20水溶液中，搅拌3小时，过微孔滤膜，静置分层；沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊15g。

实施例5

茶皂素60g用水440g溶解，加入等体积正丁醇提取3次，加入1g氢氧化钠，90℃回流2小时。减压回收正丁醇，用甲醇溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷45g；将甲基纤维素1g用丙酮99g配成囊材溶液，加入1g单甘酯、2g茶皂苷，搅拌乳化1小时，得到100ml的乳液。将乳液缓慢加入到10倍体积(1000ml)pH 5含0.3％(3ml)的蔗糖脂肪酸酯水溶液中，搅拌1小时，过微孔滤膜，静置分层；沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊3g。

实施例6

茶皂素90g用水410g溶解，加入等体积正丁醇提取3次，加入2.5g氢氧化钠，80℃回流4小时。减压回收正丁醇，用乙醇溶解沉淀，并结晶和干燥，得到茶皂苷70g；将乙基纤维素2g用丙酮98g配成囊材溶液，加入1g司盘60、5g茶皂苷，搅拌乳化2小时，得到100ml的乳液。将乳液缓慢加入到15倍体积(1500ml)pH 4含0.5％(7.5ml)的蔗糖脂肪酸酯水溶液中，搅拌2小时，过微孔滤膜，静置分层；沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊6.5g。

实施例7

称取实施例1～6制得的茶皂苷纳米囊100g，加入药用淀粉、糖粉和糊精按质量比7∶2∶1组成的混合物300g，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得颗粒松散，便于压片状态，过20目筛，晾干。加20g硬脂酸镁，压片，即得茶皂纳米囊的片剂。

实施例8

称取实施例1～6制得的茶皂苷纳米囊100g，加入药用微晶纤维素200g，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得颗粒松散过20目筛，晾干。干燥后填充胶囊。即得茶皂苷纳米囊的胶囊剂。

实施例9

称取实施例1～6制得的茶皂苷纳米囊100g，加入200g甘露醇，用灭菌水溶解后，过0.3μm微孔滤膜，罐装入安培瓶中，-50℃冷冻干燥24小时，即得茶皂苷微米囊的冻干粉针注射剂。

实施例10

实施例1-6制得的茶皂苷纳米囊的粒径和包封率实验

方法：采用2000年中国药典第二部附录IXE粒度和粒度分布测定方法第三法光散射法测定纳米囊粒径；采用丙酮溶解囊材，过滤，称量挥发丙酮后的物质重量，包封率＝(纳米囊重量-丙酮挥发后物质重量)/纳米囊重量。

结果：茶皂苷纳米囊粒径范围在200～1000nm之间，包封率在82～87％。结果见表一。这表明该采用实施例1～6法制得的茶皂苷纳米囊粒径分布较均匀，具有较高的包封率。

表一茶皂苷纳米囊粒径分布和包封率

实施例11

实施例1-6制备的茶皂苷纳米囊的抗炎性和淋巴细胞增殖能力实验

方法：取雄性小鼠90只，随机分为9组，每组10只。第1组给生理盐水，灌胃，为阴性对照组；第2组给阿司匹林200mg/kg，灌胃，为阳性对照组；第3～8组分别实施例1～6制备的茶皂苷纳米囊200mg/kg，灌胃，第9组为茶皂苷原药组。每天1次，10天后，于末次给药1h后，在每只动物右耳前后两面涂二甲苯0.02ml致炎。各组致炎1h后，将动物颈椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳，用7mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重。计算公式：

肿胀度＝右耳片重量-左耳片的重量

另无菌取脾，分离单个脾细胞，用RPMI 1640培养液调整细胞浓度为3×10⁶个/mL。按MTT法用酶标仪，以57Onm波长测定光密度(OD值)。用加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值表示淋巴细胞的增殖能力。比较给药组和对照组的差异情况。

结果：致炎1h后，各组小鼠右耳均可见明显红肿。茶皂苷纳米囊组对二甲苯致小鼠耳肿胀较阴性组均有明显的抑制作用，淋巴增殖能力也显著增强，效果优于茶皂苷原药组。说明本发明的茶皂苷纳米囊有更好的抗炎和提高免疫力作用。结果见表二。

表1茶皂苷纳米囊对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制率和淋巴细胞增殖能力

实施例12

实施例1-6制备的茶皂苷纳米囊的体内抗菌实验

方法：将培养18h的金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus Rosenbach)、绿脓杆菌(p.aeruginosa)培养液稀释至细菌浓度分别为10⁸、10⁷、10⁶、10⁵cfu/mL，取0.5mL稀释液注入小鼠腹腔内，观察小鼠的感染情况。发现金黄色葡萄球菌在10⁵cfu/mL，绿脓杆菌在10⁷cfu/mL时，小鼠第1天有30％的死亡，第4天有90％的小鼠死亡。因此将金黄色葡萄球菌稀释10^-4倍，绿脓杆菌稀释10^-2倍为感染浓度。

将小鼠100只随机分为空白对照组、实施例1～6制得的茶皂苷纳米囊组、茶皂苷原药组、阿莫西林阳性对照组，每组10只。空白对照组用等量生理盐水灌胃，茶皂苷纳米囊、茶皂苷原药和阿莫西林组按0.4g/kg剂量连续灌胃给药3天，在第4天时，腹腔给菌0.5mL/只，观察7天内各组动物的死亡情况。

结果：茶皂苷纳米囊给药组金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌感染小鼠死亡率与空白对照组比，显著减少，也明显低于茶皂苷组，但与阳性对照组差别不显著。说明茶皂苷纳米囊较茶皂苷原药对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌感染小鼠有更好的抗菌和抗病作用。结果见表二。

表二茶皂苷纳米囊对致病菌感染小鼠的作用实验

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种茶皂苷纳米囊的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

(5)将沉淀物干燥，制得茶皂苷纳米囊。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述茶皂素是是自茶叶、茶籽或油茶籽中提取的或自脱脂茶籽中提取的茶皂素水剂或固体干燥物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述囊材为聚甲基丙烯酸甲酯、聚烷基异氰酸酯、丙烯酸树脂、苯乙烯、甲基纤维素、乙基纤维素的一种或几种。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，步骤(3)和(4)所述乳化剂为单甘酯、吐温20、司盘60、蔗糖脂肪酸酯、泊洛沙姆中的一种或几种。

5.权利要求1～4任一项所述方法制得的茶皂苷纳米囊。

6.权利要求5所述茶皂苷纳米囊的应用，其特征在于，所述茶皂苷纳米囊用于制备杀菌、抗炎及增强免疫功能的药物制剂。

7.根据权利要求6所述茶皂苷纳米囊的应用，其特征在于，称取茶皂苷纳米囊100质量份，加入药用淀粉、糖粉和糊精按质量比7∶2∶1组成的混合物300质量份，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得松散颗粒，过20目筛，晾干，加20质量份的硬脂酸镁，压片，即得茶皂纳米囊的片剂。

8.根据权利要求6所述茶皂苷纳米囊的应用，其特征在于，称取茶皂苷纳米囊100质量份，加入药用微晶纤维素200质量份，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得松散颗粒，过20目筛，晾干，干燥后填充胶囊，即得茶皂苷纳米囊的胶囊剂。

9.根据权利要求6所述茶皂苷纳米囊的应用，其特征在于，称取茶皂苷纳米囊100质量份，加入200质量份的甘露醇，用灭菌水溶解后，过0.3μm微孔滤膜，罐装入安培瓶中，-50℃冷冻干燥24小时，即得茶皂苷微米囊的冻干粉针注射剂。