CN102487821A

CN102487821A - 一种耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法

Info

Publication number: CN102487821A
Application number: CN2011103766536A
Authority: CN
Inventors: 訾惠君; 张志军; 周永斌; 刘连强; 魏雪生; 李凤美; 陈晓明; 王玫
Original assignee: Tianjin Forestry and Fruit Tree Institute
Current assignee: Tianjin Forestry and Fruit Tree Institute
Priority date: 2011-11-24
Filing date: 2011-11-24
Publication date: 2012-06-13

Abstract

一种耐盐食用菌的紫外线诱变育种和驯化的方法，将食用菌出发菌株经活化、菌丝体紫外诱变、利用含盐选择性培养基对耐盐菌株初筛、驯化和复筛而获得耐盐菌株。该方法适用于平菇、香菇、木耳等食用菌品种的耐盐菌株育种和驯化。优点是：采用菌丝体紫外诱变和驯化方法获得高耐盐性突变菌株，开拓了耐盐平菇诱变育种新途径。操作程序简便，所用仪器设备少，成本低，是一种易于推广的食用菌育种方法。诱变周期短、正向突变率提高，收效显著。获得的菌株、耐盐能力达到2％，遗传性状稳定、农艺性状优良，应用于盐碱地生产，使得平菇子实体品质改善，干鲜比和耐储性提高50％以上，不仅有效提高了平菇的质量，而且生产成本降低，经济效益显著提升。

Description

一种耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法

技术领域

本发明属于耐盐食用菌的紫外线诱变育种和驯化，特别涉及的是一种将食用菌菌丝体经紫外线辐射诱变后，再利用含盐选择性培养基筛选、驯化，获得耐盐菌株的方法。

背景技术

中国盐碱地面积广大，土壤及地下水中含盐量高，极大地影响了农业生产。因此，培育抗盐耐盐作物品种，提高其耐盐能力，是改良利用盐碱地经济而有效的方法。

食用菌味道鲜美、营养丰富，有“素中之荤”的美誉，而且它还具有很高的药用价值，完全符合世卫组织倡导的“天然、营养、健康”的食品原则。随着民众生活水平的提高，食用菌的消费需求日益增加。若在盐碱地上直接利用咸水资源生产，既可充分利用荒弃盐碱地解决农地资源紧缺问题，又能降低生产成本，增加市场供给，经济效益显著。

食用菌属于微生物中的大型真菌，具有繁殖快、适应强、变异快等特点。传统的食用菌耐盐菌株选育的方法，是通过人工选择或杂交等手段来培育新品种，工作量大，筛选周期长，获得正突变异株的几率小。应用诱变育种结合驯化的方法选育抗盐耐盐食用菌，能大幅提高育种效率，获得大量优质高产的耐盐新菌株。

发明内容：

本发明的目的是提供一种紫外诱变结合驯化食用菌菌丝体，获得耐盐菌株的方法。它是简单、高效的食用菌育种方法，诱变周期短、操作程序简便，正向突变率高，收效显著。

本发明的技术方案是：一种耐盐食用菌的紫外线诱变育种和驯化的方法，其特征是：出发菌株活化、菌丝体紫外诱变、利用含盐选择性培养基对耐盐菌株初筛、驯化和复筛从而获得耐盐菌株。

出发菌株的活化是将供诱变食用菌菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上，25℃恒温培养10d～15d活化菌丝，后取0.5cm²左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养5d～7d后，从活化的平板培养皿用打孔器打孔取材，接种同样大小的菌块(0.2cm²～0.4cm²)于新鲜的含0.5％～4％NaCl-PDA选择性平板培养基中央，25℃培养72h～120h。

菌丝体紫外诱变是，在辐照处理前先打开超净工作台电源20min～30min，紫外灯光线稳定后再进行照射。诱变时将生长有出发菌株菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30厘米处，打开培养皿盖，照射时间为3′～8′。照射后用黑布迅速包裹，置于25℃恒温箱中避光培养72h。

耐盐菌株初筛是，72h后观测在含0.5％～4％NaCl-PDA的选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，选择菌落浓密、洁白、菌丝生长快速的菌株。

耐盐性驯化是将选出的菌株接种于新鲜的含0.5％～4％NaCl-PDA选择性平板培养基中央，25℃培养72h～120h，后使用含0.5％～4％NaCl-PDA选择性培养基试管，连续转管传代5次以上。每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量。

耐盐菌株的复筛是，比较在0.5％～4％NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌株，以菌块菌丝体萌发早，菌丝浓白、粗壮、分布均匀，日长速大于0.4cm～1cm，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝为筛选指标，获得食用菌耐盐突变菌株。

该方法适用于平菇、香菇、木耳等食用菌品种的耐盐菌株育种和驯化。

本发明的优点是：

1、采用菌丝体紫外诱变和驯化方法获得高耐盐性突变菌株，开拓了耐盐食用菌诱变育种新途径。操作程序简便，所用仪器设备少，成本低，是一种易于推广的食用菌育种方法。

2、诱变周期短、正向突变率提高，收效显著。获得的菌株耐盐能力达到1％～2％，且遗传性状稳定、农艺性状优良。在盐碱地生产应用，食用菌子实体品质明显改善，干鲜比和耐储性提高40％～50％以上，不仅有效提高了食用菌的质量，而且生产成本降低，经济效益显著提升。

具体实施方式1：

诱变流程：

出发菌株活化→菌丝体紫外诱变→耐盐菌株初筛→耐盐性驯化→耐盐菌株复筛→获得耐盐菌株

出发菌株的活化是将供诱变平菇菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上，25℃恒温培养14d活化菌丝，后取0.5cm²左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养5d。然后，从活化的平板培养基上用打孔器打孔取材，接种0.4cm²大小的菌块于新鲜含1％NaCl-PDA的选择性培养基平板中央，25℃培养72h。

紫外诱变处理前先打开超净工作台电源20min，紫外灯光线稳定后再进行照射。诱变时将生长有出发菌株菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30cm处，打开培养皿盖，紫外线辐照菌丝体时间为4′。照射后迅速用黑布包裹培养皿，置于25℃恒温箱中避光培养72h。

耐盐菌株初筛是，黑暗培养72h后，观测在1％NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，选出菌落浓密、洁白、菌丝生长快速的菌株。

耐盐性驯化是，将选出的菌株接种于新鲜含1％NaCl-PDA选择性培养基平板中央，25℃培养72h，后用NaCl-PDA选择性培养基连续转管传代6次。每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量，浓度由1％渐增至2％。

耐盐菌株的复筛是，以菌块萌发早，菌丝浓白、粗壮、分布均匀，日长速大于0.6cm，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝作为筛选指标，获得耐盐平菇突变菌株，后转接于含1％NaCl-PDA选择性培养基试管斜面，4℃低温保藏。

上述诱变过程可作为本发明的一个实施例。

实施前述诱变流程后所获得的耐盐平菇菌株具有以下指标：

1、有效缩短育种周期20％以上，正向突变率提高。

2、平菇菌株耐盐能力达2％，能够应用于盐碱地规模化栽培。

3、菌丝生长速度提高10％～20％，日长速大于0.6cm。

4、子实体品质改善，蛋白质含量增加10％，含水量减少40％，耐储性提高50％以上。

感官指标：菌丝浓白、粗壮、分布均匀，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝。

具体实施方式2：

出发菌株的活化是，将供诱变黄背木耳菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上，25℃恒温培养14d活化菌丝，后取0.5cm²左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养7d。然后，从活化的平板培养皿用打孔器打孔取材，接种0.4cm²大小的菌块于新鲜含0.5％NaCl-PDA的选择性培养基平板中央，25℃培养72h。

紫外诱变处理前先打开超净工作台电源20min，紫外灯光线稳定后再进行照射。诱变时将生长有菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30cm处，打开培养皿盖，紫外线辐照菌丝体时间为3′30″。照射后迅速用黑布包裹培养皿，置于25℃恒温箱中避光培养72h。

耐盐菌株初筛是，黑暗培养72h后，观测在0.5％NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，选出菌丝洁白、生长快速的菌株。

耐盐性驯化是将选出的菌株接种于新鲜含0.5％NaCl-PDA选择性培养基平板中央，25℃培养72h，后用NaCl-PDA选择性培养基连续转管传代5次。每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量，浓度由0.5％渐增至1％。

耐盐菌株的复筛是，以菌块菌丝体萌发早，菌丝洁白、粗壮、分布均匀，日长速大于0.4cm，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝为指标，获得黄背木耳耐盐突变菌株，转接于含1％NaCl-PDA选择性培养基试管，4℃低温保藏。

上述诱变过程可作为本发明的一个实施例。

实施前述诱变流程后所获得的耐盐平菇菌株具有以下指标：

1、有效缩短育种周期20％以上，正向突变率提高。

2、黄背木耳菌株耐盐能力达1％，能够应用于盐碱地规模化栽培。

3、菌丝生长速度提高10％以上，日长速大于0.4cm。

感官指标：菌丝洁白、浓密、生长粗壮整齐，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝。

Claims

1.一种耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法，其特征在于：将食用菌出发菌株活化后，置于紫外灯下辐照诱变菌丝体；以诱变后菌丝体长势为指标，在0.5％～4％NaCl-PDA选择性培养基中进行耐盐菌株初筛；选出的菌株于新鲜含0.5％～4％NaCl-PDA选择性平板培养基中反复传代驯化，每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量；以菌丝长势和显微镜检指标为依据复筛，获得耐盐菌株。

2.根据权利要求1所述的耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法，其特征是：将供诱变食用菌菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上，25℃恒温培养10d～15d活化菌丝，后取0.5cm²左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养5d～7d；然后从活化的平板培养皿用打孔器打孔取材，接种同样大小的菌块(0.2cm²～0.4cm²)于新鲜含0.5％～4％NaCl的PDA选择性平板培养基中央，25℃培养72h～120h；在紫外线辐照前打开超净工作台电源20min～30min，紫外灯光线稳定后再进行照射；诱变时将生长有菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30厘米处，打开培养皿盖，照射时间为3′～8′；照射后用黑布迅速包裹，置于25℃恒温箱中避光培养72h。

3.根据权利要求1所述的耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法，其特征是：耐盐菌株初筛是，观测在含0.5％～4％NaCl-PDA的选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，筛选菌落浓密、洁白、菌丝生长快速的菌株；驯化是将选出的菌株接种于新鲜含0.5％～4％NaCl-PDA选择性平板培养基中央，25℃培养72h～120h，后连续转管传代5次以上，每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量；复筛是在0.5％～4％NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌株，以菌块菌丝体萌发早，菌丝浓白、粗壮、分布均匀，日长速大于0.4cm～1cm，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝为筛选指标，获得食用菌耐盐突变菌株。

4.该耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法适用于平菇、香菇、白灵菇、杏鲍菇、金针菇、木耳、滑菇、双孢菇等食用菌品种的耐盐菌株育种和驯化。