CN102423699B - 一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种手性固定相的制备方法。一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：1)、将多糖涂覆在硅胶表面，得到多糖-硅胶复合物；2)、用异氰酸酯或者酰氯对多糖-硅胶复合物上的多糖进行衍生化，得到衍生化的多糖-硅胶复合物；3)、用硅烷对衍生化的多糖-硅胶复合物表面的硅羟基进行封端，得到涂覆型多糖类手性固定相。该方法可克服某些多糖衍生物难溶于常见的有机溶剂而无法涂覆的问题，所制得的固定相具有很好的手性分离能力。
Description
技术领域
本发明涉及一种手性固定相的制备方法。
背景技术
有许多药物是手性化合物，这些化合物的对映体往往有不同的生理及药理活性。对于一对对映体来说，其中的一个对映体对治疗疾病有效，而另一个对映体对治疗疾病可能无效，甚至有毒副作用，所以分离及检测手性药物的对映体对制药工业来说至关重要。目前比较成熟的用来分析检测对映体含量的方法是高效液相色谱法，这一技术需要使用手性固定相，已经有上百种手性固定相商业化。至今，仍有一些学者在研究新的手性固定相，或手性固定相的制备方法。
天然多糖，如纤维素、直链淀粉、葡聚糖及甲壳胺等，它们本身是手性高分子，价廉易得，且含有大量的羟基，容易被取代和官能团化，常用来制备手性固定相，特别是纤维素和淀粉类手性固定相早已商业化。天然多糖用酰氯或异氰酸酯修饰，得到多糖衍生物，将这些衍生物溶解在有机溶剂中，再涂覆在3-氨基丙基硅胶上，即得涂覆型多糖手性固定相(Y.Okamoto，M.Kawashima，K.Hatada，Chromatographic resolution XI.Controlled chiral recognitionof cellulose triphenylcarbamate derivatives supported on silica gel.Journal of Chromatography，363(1986)173.)。这是制备天然多糖手性固定相的一般方法。但是一些多糖衍生物不能溶解于一般的有机溶剂，如纤维素三(3，5-二甲基苯基甲酸酯)等(Y.Okamoto，R.Aburatani，K.Hatada，Chromatographic chiral resolution XIV.Cellulose tribenzoate derivatives as chiral stationary phasesfor high-performance liquid chromatography，Journal of chromatography，389(1987)95.)，用上述方法就不能将这些多糖衍生物涂覆在载体表面，也就无法制备成手性固定相。
发明内容
本发明的目的在于提供一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，该方法所制得的固定相具有很好的稳定性。
本发明解决其技术问题的技术方案为：一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：
1)、将多糖涂覆在硅胶表面，得到多糖-硅胶复合物；
2)、用异氰酸酯或者酰氯对多糖-硅胶复合物上的多糖进行衍生化，得到衍生化的多糖-硅胶复合物；
3)、用硅烷对衍生化的多糖-硅胶复合物表面的硅羟基进行封端，得到涂覆型多糖类手性固定相。
具体的步骤如下：
1)将多糖涂覆在硅胶表面(多糖-硅胶复合物的制备)，采用下列两种方法中的一种将多糖涂覆在硅胶表面：
①按多糖的加入量为多糖和硅胶总质量的1％-30％，选取多糖和硅胶；将多糖配制成多糖溶液，其中多糖溶液的浓度为任意浓度(最佳为1.0wt％)；将多糖溶液与用于色谱填料的硅胶均匀混合，加热蒸除多糖溶液中的溶剂，得到多糖-硅胶复合物(即涂覆有多糖的硅胶)；
②按多糖的加入量为多糖和硅胶总质量的1％-30％，选取多糖和硅胶；将多糖配制成多糖溶液，其中多糖溶液的浓度为任意浓度(最佳为1.0wt％)；将多糖溶液与用于色谱填料的硅胶均匀混合，得到混合溶液；再向混合溶液中加入沉淀剂，使多糖沉积在硅胶表面，得到多糖-硅胶复合物，其中沉淀剂为酸或者碱溶液时，则沉淀剂的用量是使多糖溶液中和至中性即可；若沉淀剂为有机溶剂时，则沉淀剂用量使多糖从混合溶液中沉淀完全即可；
所述的多糖为淀粉、纤维素、甲壳胺或葡聚糖；
所述的硅胶为表面含有羟基的色谱用球形或者无定形硅胶；
多糖的涂覆量为1％-30％，即多糖在多糖-硅胶复合物中的质量分数为1％-30％；
2)对多糖-硅胶复合物上的多糖进行衍生化(多糖-硅胶复合物上的多糖的修饰)，用下列两种方法中的一种：
①多糖-硅胶复合物上的多糖用酰氯修饰，其方法是：按多糖-硅胶复合物∶酰氯∶不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂∶催化剂的配比＝1g∶0.8g-3g∶15ml-30ml∶0.03g-0.1g，将步骤1)制备的多糖-硅胶复合物置于不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂中，加入酰氯和催化剂4-二甲氨基吡啶，在15-90℃下搅拌反应5-24小时；冷却，过滤收集固体，用极性有机溶剂洗涤固体，干燥，得到粉末状产物；
所述酰氯为苯甲酰氯及其衍生物，这些衍生物为3，5-二甲基苯甲酰氯、2，6-二甲基苯甲酰氯、2-甲基苯甲酰氯、3-甲基苯甲酰氯、4-甲基苯甲酰氯、3，5-二氯苯甲酰氯、2-氯苯甲酰氯、3-氯苯甲酰氯或4-氯苯甲酰氯；
所述不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂为吡啶(或者三乙胺，或者为吡啶和三乙胺按任意配比的混合物)或甲苯或苯。所述不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂视不同多糖的衍生物而定，如纤维素-三(3，5-二甲基苯基甲酸酯)在吡啶、甲苯和苯中均难溶解，则这三种溶剂均可作为用3，5-二甲基苯甲酰氯对纤维素-硅胶复合物进行衍生化反应的溶剂；而纤维素-三(苯基甲酸酯)能溶于吡啶，难溶于甲苯或苯，故用苯甲酰氯对纤维素-硅胶复合物进行衍生化时，不能使用吡啶作为反应的溶剂，但可用甲苯或苯作为溶剂；大多数的多糖衍生物难溶于甲苯或苯，所以甲苯或苯有普适性，因甲苯对人的健康影响小于苯，所以使用甲苯为最优；
所述极性有机溶剂为乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇或正丙醇；
②多糖-硅胶复合物上的多糖用异氰酸酯修饰，其方法是：按多糖-硅胶复合物∶异氰酸酯∶催化剂＝1g∶0.8g-3g∶0.03g-0.1g，将步骤1)制备的多糖-硅胶复合物置于不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂中(多糖-硅胶复合物与该有机溶剂的配比关系为1g∶15ml-30ml)，加入异氰酸酯和催化剂，在15-90℃下搅拌反应5-24小时；冷却，过滤收集固体，用中等极性或中等以上极性的有机溶剂洗涤固体，干燥，得到粉末状产物；
所述异氰酸酯为苯基异氰酸酯及其衍生物，这些衍生物为3，5-二甲基苯基异氰酸酯、2，6-二甲基苯基异氰酸酯、2-甲基苯基异氰酸酯、3-甲基苯基异氰酸酯、4-甲基苯基异氰酸酯、3，5-二氯苯基异氰酸酯、2-氯苯基异氰酸酯、3-氯苯基异氰酸酯、4-氯苯基异氰酸酯中的一种；
所述催化剂为吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶、二月桂酸二丁基锡中的一种；
所述不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂视不同多糖的衍生物而定，如纤维素三(3，5-二甲基苯基甲酸酯)在吡啶、甲苯和苯中均难溶解，则这三种溶剂均可作为用3，5-二甲基苯甲酰氯对纤维素-硅胶复合物进行衍生化反应的溶剂；而纤维素三(苯基甲酸酯)能溶于吡啶，难溶于甲苯或苯，故用苯甲酰氯对纤维素-硅胶复合物进行衍生化时，不能使用吡啶作为反应的溶剂，但可用甲苯或苯作为溶剂；大多数的多糖衍生物难溶于甲苯或苯，所以甲苯或苯有普适性，因甲苯对人的健康影响小于苯，所以使用甲苯为最优；
所述中等极性或中等以上极性的有机溶剂为乙醚或异丙基醚、甲基叔丁基醚或乙酸乙酯；
3)用硅烷对衍生化的多糖-硅胶复合物表面的硅羟基进行封端：
按步骤2)中得到的粉末状产物∶不能溶解粉末上多糖衍生物的有机溶剂∶三乙胺∶硅烷的配比＝1g∶8mL-12mL∶0.3-0.7mL∶0.1mL-15mL，将步骤2)中得到的粉末状产物与不能溶解粉末上多糖衍生物的有机溶剂相混合，得到混合物；再向此混合物中加入三乙胺、硅烷；在15-100℃下搅拌2-24小时；冷却，过滤，滤饼用不能溶解粉末上多糖衍生物的有机溶剂洗涤，干燥后得到粉末状固体，即制得涂覆型多糖类手性固定相。
步骤3)所述不能溶解粉末上多糖衍生物的有机溶剂为甲苯、苯或四氢呋喃，以甲苯为最优；
所述硅烷为三甲基氯硅烷，也可以为三甲氧基硅烷衍生物或三乙氧基硅烷衍生物中的一种，如3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-氨丙基三甲氧基硅烷、甲基三甲氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、3-氯丙基三乙氧基硅烷、3-氯丙基三甲氧基硅烷等中的一种。
本发明具有以下优点：
1、在本发明中，先将多糖涂覆于裸露的硅胶表面，利用硅胶表面的硅羟基与多糖上的羟基之间形成氢键作用，将多糖吸附在硅胶上，得到多糖-硅胶复合物，然后用酰氯或异氰酸酯对多糖-硅胶复合物进行异相修饰，最后用硅烷对衍生化的多糖-硅胶复合物表面的硅羟基进行封端，得到相应的手性固定相，克服了某些多糖衍生物(如纤维素-三(3，5-二甲基苯基甲酸酯)难溶于常见的有机溶剂而无法涂覆的问题。
2、该方法所制得的固定相具有很好的稳定性。
3、采用不同的硅烷对硅胶表面的羟基进行封端，有利于手性选择体对不同种类手性样品的识别。
附图说明
图1是实施例1中的红外光谱图；
图1中：a涂覆纤维素的硅胶[IR(KBr，cm-1)：3358(-OH)，1098(Si-O)]；b纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相[IR(KBr，cm-1)：3448(N-H)，1734(-CO2-)，1099(Si-O)]。
图2是实施例1中的纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相固体核磁图谱；
图2中：13C NMR(25℃)δ：200-195，192-185，168-164(-CO2-)，141-122(Ar.C)，107-98(C-1)，83-56(C-2，C-3，C-4，C-5，C-6，Si-O-CH2CH3)，47-38(SiCH2CH2CH2NH2)，28-13(Ar-CH3，SiOCH2CH3，SiCH2CH2CH2NH2)，12-8(SiCH2CH2CH2NH2)。
图3是实施例1中的手性化合物1在纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相上分离的色谱图；
图3中：分离条件：a异丙醇/正己烷(30/70，体积比)；b：异丙醇/正己烷(50/50，体积比)；c：异丙醇/正己烷(70/30，体积比)；紫外检测波长：220纳米。
图4是实施例1中用硅烷衍生物封端的多糖手性固定相的结构式图。
具体实施方式
下面结合附图及实例对比本发明进一步描述：
实施例1：
一种涂覆型多糖类手性固定相(或称为：纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相)的制备方法，具体的步骤如下：
1)纤维素溶液的制备，
先将干燥的纤维素(0.70g)置于三口烧瓶中，加入二甲基乙酰胺(25mL)，氮气保护，在160℃下搅拌活化1h，冷却，过滤，并用丙酮洗涤数次，再将纤维素于60℃下常压干燥。取干燥的LiCl(6.50g)(使用前200℃下干燥4h)和二甲基乙酰胺(65mL)置于三口烧瓶，加热到100℃，待LiCl完全溶于二甲基乙酰胺后，加入干燥好的纤维素，降温至80℃，搅拌溶解3h，冷却至室温。然后再将冷却的溶液升温至80℃，搅拌2h，冷却至室温。将冷却后的溶液离心，得到质量分数为1.0wt％的澄清的纤维素溶液。
2)纤维素的涂覆(纤维素-硅胶复合物的制备)：
取制得的纤维素溶液(51.30g)与干燥好的空白硅胶(10.30g)混合均匀，用旋转蒸发仪于70℃下减压蒸馏。蒸干后，将混合物转移至烧杯中，加蒸馏水搅拌0.5h，抽滤，此洗涤过程重复数次，直到用硝酸银水溶液检测不到氯离子为止，干燥后得到纤维素-硅胶复合物[白色粉状产品(10.78g)]，涂覆量为5.0％。
3)纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物的制备(纤维素-硅胶复合物的衍生化)：
将纤维素-硅胶复合物(涂覆有纤维素的硅胶)9.70g置于三口烧瓶，加入吡啶(150mL)，25℃下搅拌30min。升温至60℃，加入4-二甲氨基吡啶(0.40g)和三乙胺(5mL)，再缓慢滴加3，5-二甲基苯甲酰氯(10.10g)。滴加完毕，搅拌24h后，升温至80℃，搅拌17h，冷却。将反应液滴加到500mL无水乙醚中洗涤，抽滤，滤饼用无水乙醚洗涤数次，直到用硝酸银水溶液检测不到氯离子为止。干燥，得到灰白色的粉末状产物(纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物10.81g)。
4)纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物上硅羟基的封端：
将纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物(6.86g)，甲苯(75mL)、三乙胺(3mL，)和3-氨丙基三乙氧基硅烷(11mL)相混合，85℃下搅拌15h，冷却。抽滤，滤饼用四氢呋喃洗涤数次，干燥后得到灰白色粉末状的固体(涂覆型多糖类手性固定相7.00g)，即制得手性固定相。采用红外光谱法和固体核磁技术对该手性固定相进行表征，其红外图谱见图1，核磁共振数据见图2。将这种手性固定相填充于色谱柱中，用高效液相色谱法对化合物1的外消旋体进行拆分，其色谱图见图3。
图1中的1733cm-1附近出现酯基的吸收峰，说明硅胶表面的纤维素已经发生衍生化反应。图2中化学位移在43ppm和10ppm处的峰对应-CH2NH2和SiCH2-，氨基来自于3-氨丙基三乙氧基硅烷，表明成功实施了封端反应。图3说明了化合物1(化合物1是2-[(4-硝基苯基)羟基甲基]-对甲苯磺酰氮丙啶)能在纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相上成功地实现了对映体分离。实施例1说明了本发明克服了某些多糖衍生物[如纤维素-三(3，5-二甲基苯基甲酸酯)]难溶于常见的有机溶剂而无法涂覆的问题。
用硅烷衍生物封端的多糖手性固定相的结构式如图4所示。
用该固定相填充的色谱柱在高效液相仪上运行，经过1280多次手性样品运行后再测量色谱柱的柱效，柱效基本无变化，由此说明所制得的固定相具有很好的稳定性。
实施例2：淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备，
1)淀粉溶液的制备，
将直链淀粉(4.02g)加入到冷蒸馏水(396mL)中，然后再加热沸腾，搅拌溶解，冷却后得到1wt％澄清的淀粉溶液。
2)淀粉的涂覆(淀粉-硅胶复合物的制备)，
取制得的淀粉溶液(380.47g)分成7等份，第一份与干燥的空白硅胶(13.49g)混合均匀，用旋转蒸发仪于70℃下减压蒸馏。蒸干后，再用余下的淀粉溶液重复上述涂覆操作6次，每次用相同量的淀粉溶液，干燥后得到白色粉状产品(淀粉-硅胶复合物17.21g)，涂覆量为28.2％。
3)淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物的制备(淀粉-硅胶复合物的衍生化)
将(淀粉-硅胶复合物(涂覆有淀粉的硅胶)10.24g置于三口烧瓶，加入甲苯(150mL)，25℃下搅拌30min。升温至60℃，加入三乙胺(0.41g)，再缓慢滴加3，5-二甲基苯基异氰酸酯(23.60g)。滴加完毕，搅拌24h后，升温至80℃，搅拌17h，冷却。将反应液滴加到500mL无水乙醚中洗涤，抽滤，滤饼用无水乙醚洗涤3次。干燥，得到灰白色粉末状[即涂覆有淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶20.58g]。
4)淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物上硅羟基的封端，
按照实施例1第四步的方法，不同之处在于，将涂覆有淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶(6.15g)代替纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物[即涂覆有纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)的硅胶]，用甲基三甲氧基硅烷(10mL)代替3-氨丙基三乙氧基硅烷。反应完毕，洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.22g)，即制得涂覆型多糖类手性固定相。
实验方法和数据同实施例1，本实施例说明了本发明克服了某些多糖衍生物[如纤维素-三(3，5-二甲基苯基甲酸酯)]难溶于常见的有机溶剂而无法涂覆的问题。
用该固定相填充的色谱柱在高效液相仪上运行，经过1000多次手性样品运行后再测量色谱柱的柱效，柱效基本无变化，由此说明所制得的固定相具有很好的稳定性。
实施例3：
甲壳胺-三(4-甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
1)甲壳胺溶液的制备，
称取2.52g甲壳胺加入到浓度为1wt％的盐酸(198mL)中，搅拌溶解，得到1wt％澄清甲壳胺溶液。
2)甲壳胺的涂覆(甲壳胺-硅胶复合物的制备)，
取制得的甲壳胺溶液(180.41g)与干燥的空白硅胶(10.42g)混合均匀，在搅拌情况下，滴加沉淀剂氢氧化钠溶液(1wt％)至溶液成中性，过滤并用蒸馏水洗涤3次，直到用硝酸银水溶液检测不到氯离子为止。干燥后得到白色粉状产品(甲壳胺-硅胶复合物12.04g)，涂覆量为14.8％。
3)甲壳胺-三(4-甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物的制备(甲壳胺-硅胶复合物的衍生化)
操作步骤同实施例2第三步，用甲壳胺-硅胶复合物(即涂覆有甲壳胺的硅胶)8.47g代替涂覆有淀粉的硅胶，用4-甲基苯基异氰酸酯(12.32g)代替3，5-二甲基苯基异氰酸酯。反应完毕后洗涤干燥，得到灰白色粉末状【即涂覆有甲壳胺-三(4-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶(12.12g)】。
4)甲壳胺-三(4-甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物上硅羟基的封端
将涂覆有甲壳胺-三(4-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶(6.46g)，甲苯(75mL)、三乙胺(3mL)和3-氯丙基三乙氧基硅烷(11mL)相混合。85℃下搅拌15h，冷却；抽滤，滤饼用四氢呋喃洗涤数次，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.61g)，即制得手性固定相。
用该固定相填充的色谱柱在高效液相仪上运行，经过1000多次手性样品运行后再测量色谱柱的柱效，柱效基本无变化，由此说明所制得的固定相具有很好的稳定性。
实施例4：
葡聚糖-三(2，6-二甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
1)葡聚糖溶液的制备，
将葡聚糖(2.01g)加入到蒸馏水(198mL)中，搅拌溶解，得到1wt％澄清葡聚糖溶液。
2)葡聚糖的涂覆(葡聚糖-硅胶复合物的制备)，
取制得的葡聚糖溶液(180.47g)分成三等份，第-份与干燥的空白硅胶(10.15g)混合均匀，用旋转蒸发仪于70℃下减压旋蒸，调节转速，控制溶剂蒸发的速度。旋干后再分次加入第二份和第三份淀粉溶液，按照上述操作蒸发干。将干燥后得到白色粉状产品(葡聚糖-硅胶复合物11.78g)，涂覆量为15.1％。
3)葡聚糖-三(2，6-二甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物的制备(葡聚糖-硅胶复合物的衍生化)
按照实施例1第三步的方法，不同之处在于，将用葡聚糖-硅胶复合物(即涂覆有葡聚糖的硅胶6.42g)代替涂覆有纤维素的硅胶，用2，6-二甲基苯基异氰酸酯(10.56g)代替3，5-二甲基苯甲酸酯。反应完毕后洗涤干燥，得到灰白色粉末状【即涂覆有葡聚糖-三(2，6-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶(9.77g)】。
4)葡聚糖-三(2，6-二甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物上硅羟基的封端
按照实施例1第三步的方法，不同之处在于，将涂覆有葡聚糖-三(2，6-二甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶(6.47g)代替涂覆有纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)的硅胶，将甲基三甲氧基硅烷(11mL)代替3-氨丙基三乙氧基硅烷。反应完毕，洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.55g)，即制得手性固定相。
用该固定相填充的色谱柱在高效液相仪上运行，经过1000多次手性样品运行后再测量色谱柱的柱效，柱效基本无变化，由此说明所制得的固定相具有很好的稳定性。
实施例5：纤维素-三(2，6-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
按照实施例1第一步和第二步的方法，不同之处在于，纤维素的涂覆的方法为：取制得的纤维素溶液(52.41g)与干燥好的空白硅胶(10.32g)混合均匀，将混合物滴加到60mL蒸馏水中，过滤并用蒸馏水洗涤沉淀物数次，直到用硝酸银水溶液检测不到氯离子为止。干燥后得到白色粉状产品(10.14g)，涂覆量为4.8％。
4)纤维素-三(3，5-二甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物的制备(纤维素-硅胶复合物的衍生化)，
与实施例1不同之处在于，用2，6-二甲基苯甲酰氯(7.56g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应，用甲基三乙氧基硅烷(10mL)代替3-氨丙基三乙氧基硅烷进行硅羟基封端。封端后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.80g)，即制得手性固定相。
用该固定相填充的色谱柱在高效液相仪上运行，经过1000多次手性样品运行后再测量色谱柱的柱效，柱效基本无变化，由此说明所制得的固定相具有很好的稳定性。
实施例6：纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用4-甲基苯甲酰氯(5.94g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.35g)，即制得手性固定相。
用该固定相填充的色谱柱在高效液相仪上运行，经过1000多次手性样品运行后再测量色谱柱的柱效，柱效基本无变化，由此说明所制得的固定相具有很好的稳定性。
实施例7：纤维素-三(2-甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用2-甲基苯基异氰酸酯(6.04g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.40g)，即制得手性固定相。
实施例8：纤维素-三(3-甲基苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用3-甲基苯基异氰酸酯(5.84g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.28g)，即制得手性固定相。
实施例9：纤维素-三(苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用苯基异氰酸酯(5.27g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.05g)，即制得手性固定相。
实施例10：纤维素-三(3，5-二氯苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用3，5-二氯苯基异氰酸酯(18.87g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.45g)，即制得手性固定相。
实施例11：纤维素-三(2-氯苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用2-氯苯基异氰酸酯(4.57g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.42g)，即制得手性固定相。
实施例12：纤维素-三(3-氯苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，3-氯苯基异氰酸酯(4.50g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.45g)，即制得手性固定相。
实施例13：纤维素-三(4-氯苯基氨基甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，4-氯苯基异氰酸酯(4.82g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.38g)，即制得手性固定相。
实施例14：纤维素-三(2-甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，2-甲基苯甲酰氯(8.26g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.25g)，即制得手性固定相。
实施例15：纤维素-三(3-甲基苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用3-甲基苯甲酰氯(8.14g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.28g)，即制得手性固定相。
实施例16：纤维素-三(苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用苯甲酰氯(6.32g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.44g)，即制得手性固定相。
实施例17：纤维素-三(3，5-二氯苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用3，5-二氯苯甲酰氯(6.59g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.36g)，即制得手性固定相。
实施例18：纤维素-三(2-氯苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用2-氯苯甲酰氯(6.02g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.14g)，即制得手性固定相。
实施例19：纤维素-三(3-氯苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用3-氯苯甲酰氯(6.14g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.44g)，即制得手性固定相。
实施例20：纤维素-三(4-氯苯甲酸酯)-硅胶复合物手性固定相的制备
与实施例1不同之处在于，用4-氯苯甲酰氯(6.58g)代替3，5-二甲基苯甲酰氯进行反应。封端方法与实施例1第4步相同。反应完毕后洗涤、抽滤，干燥后得到灰白色粉末状固体(6.34g)，即制得手性固定相。
本发明的各原料的上下限取值以及区间值都能实现本发明，以及所列举的酰氯、异氰酸酯类试剂各具体原料都能实现本发明，以及所列举的硅烷试剂各具体原料都能实现本发明，以及所列举的催化试剂各具体原料都能实现本发明，以及各工艺参数(温度、反应时间)的上下限取值以及区间取值都能实现本发明。
Claims (8)
1.一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：
1）、 将多糖涂覆在硅胶表面，得到多糖－硅胶复合物；
2）、 用异氰酸酯或者酰氯对多糖－硅胶复合物上的多糖进行衍生化，得到衍生化的多糖－硅胶复合物；
3）、 用硅烷对衍生化的多糖－硅胶复合物表面的硅羟基进行封端，得到涂覆型多糖类手性固定相；
所述的多糖为淀粉、纤维素、甲壳胺或葡聚糖；
所述的硅胶为表面含有羟基的色谱用球形或者无定形硅胶；
所述酰氯为苯甲酰氯及其衍生物；所述苯甲酰氯衍生物为3,5-二甲基苯甲酰氯、2,6-二甲基苯甲酰氯、2-甲基苯甲酰氯、3-甲基苯甲酰氯、4-甲基苯甲酰氯、3,5-二氯苯甲酰氯、2-氯苯甲酰氯、3-氯苯甲酰氯或4-氯苯甲酰氯；
所述异氰酸酯为苯基异氰酸酯及其衍生物；所述苯基异氰酸酯衍生物为3,5-二甲基苯基异氰酸酯、2,6-二甲基苯基异氰酸酯、2-甲基苯基异氰酸酯、3-甲基苯基异氰酸酯、4-甲基苯基异氰酸酯、3,5-二氯苯基异氰酸酯、2-氯苯基异氰酸酯、3-氯苯基异氰酸酯、4-氯苯基异氰酸酯中的一种；
所述硅烷为三甲基氯硅烷、三甲氧基硅烷衍生物或三乙氧基硅烷衍生物中的一种；所述的三甲氧基硅烷衍生物为3－氨丙基三甲氧基硅烷、甲基三甲氧基硅烷或3－氯丙基三甲氧基硅烷；三乙氧基硅烷衍生物为 3－氨丙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷或3－氯丙基三乙氧基硅烷。
2.根据权利要求1所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：步骤1）所述的将多糖涂覆在硅胶表面，采用下列两种方法中的一种将多糖涂覆在硅胶表面：
①按多糖的加入量为多糖和硅胶总质量的1%－30%，选取多糖和硅胶；将多糖配制成多糖溶液；将多糖溶液与用于色谱填料的硅胶均匀混合，加热蒸除多糖溶液中的溶剂，得到多糖－硅胶复合物；
②按多糖的加入量为多糖和硅胶总质量的1%－30%，选取多糖和硅胶；将多糖配制成多糖溶液；将多糖溶液与用于色谱填料的硅胶均匀混合，得到混合溶液；再向混合溶液中加入沉淀剂，使多糖沉积在硅胶表面，得到多糖－硅胶复合物，其中沉淀剂为酸或者碱溶液时，则沉淀剂的用量是使多糖溶液中和至中性即可；若沉淀剂为有机溶剂时，则沉淀剂用量使多糖从混合溶液中沉淀完全。
3.根据权利要求1所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：步骤2）所述的对多糖－硅胶复合物上的多糖进行衍生化，用下列两种方法中的一种：
①多糖－硅胶复合物上的多糖用酰氯修饰，其方法是：按多糖－硅胶复合物：酰氯：不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂：催化剂的配比＝1g：0.8g－3g：15mL－30mL：0.03g－0.1g，将步骤1)制备的多糖－硅胶复合物置于不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂中，加入酰氯和催化剂4-二甲氨基吡啶，在15-90℃下搅拌反应5-24小时；冷却，过滤收集固体，用极性有机溶剂洗涤固体，干燥，得到粉末状产物；
②多糖－硅胶复合物上的多糖用异氰酸酯修饰，其方法是：按多糖－硅胶复合物：异氰酸酯：催化剂＝1g：0.8g－3g：0.03g－0.1g，所述催化剂为吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶、二月桂酸二丁基锡中的一种；将步骤1)制备的多糖－硅胶复合物置于不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂中，加入异氰酸酯和催化剂，在15-90℃下搅拌反应5-24小时；冷却，过滤收集固体，用中等极性或中等以上极性的有机溶剂洗涤固体，干燥，得到粉末状产物。
4.根据权利要求3所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：所述不能溶解修饰反应中所生成的多糖衍生物的有机溶剂为吡啶或三乙胺或甲苯或苯，或者为吡啶和三乙胺按任意配比的混合物。
5.根据权利要求3所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：所述极性有机溶剂为乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇或正丙醇。
6.根据权利要求3所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：所述中等极性或中等以上极性的有机溶剂为乙醚或异丙基醚、甲基叔丁基醚或乙酸乙酯。
7.根据权利要求3所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：用硅烷对衍生化的多糖－硅胶复合物表面的硅羟基进行封端：
按①或②中得到的粉末状产物：不能溶解粉末状产物上多糖衍生物的有机溶剂：三乙胺：硅烷的配比＝1g: 8mL－12mL : 0.3－0.7mL: 0.1mL－15mL，粉末状产物与不能溶解粉末状产物上多糖衍生物的有机溶剂相混合，得到混合物；再向此混合物中加入三乙胺、硅烷；在15－100℃下搅拌2-24小时；冷却，过滤，滤饼用不能溶解粉末状产物上多糖衍生物的有机溶剂洗涤，干燥后得到粉末状固体，即制得涂覆型多糖类手性固定相。
8.根据权利要求7所述的一种涂覆型多糖类手性固定相的制备方法，其特征在于：所述不能溶解粉末状产物上多糖衍生物的有机溶剂为甲苯或苯。
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