CN102415414A - 短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用 - Google Patents

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本发明公开了一种短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用，该短小芽孢杆菌保藏名称为：Bacillus pumilus 223，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2010年4月8，保藏号：CCTCC NO：M2010075。将Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075制备而得的拮抗细菌发酵液与硅藻土混合，得可湿性粉剂I；将Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075制备而得的抗菌活性物质粗提液与硅藻土混合，得可湿性粉剂II；上述2种可湿性粉剂均能用于治疗或预防兰花茎腐病。

Description

短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用
技术领域
本发明涉及一种微生物在防治植物病害中的应用，具体为短小芽孢杆菌及其提取物在防治兰花茎腐病中的应用。
背景技术
兰花以其高贵典雅，幽香，独特摄魂的花型，花色，香味，数千年来一直深受人们的喜爱与珍藏。目前，各地已将兰花作为高利润的精细农业项目大力开发，经过几年的发展，特别是前几年的兰花热，不少农民靠兰花发家致了富。但另一方面，随着盆栽兰花规模化种植和野生兰花的驯化与推广，其病害的发生越来越严重，新的病害也不时出现，兰花茎腐病是其中最严重的病害。
兰花茎腐病发病期与兰花的快速生长期是一致的，通常情况下，发病从兰花根部开始，然后向上发展，叶基部变黑褐色，球茎和叶基部腐烂，整苗完全死亡。从2006年开始申发明人通过系统研究明确了兰花茎腐病为一种由尖孢镰刀菌引起的病害。
兰花茎腐病造成兰花死亡可达10％以上，有的甚至可达30％以上。有人估计浙江省每年因此病害而造成的损失都在几千万元以上，云南大理州调查2005年4～8月份，仅因茎腐病造成兰花损失在1亿元以上。虽然现在有许多预防和治疗的药物及方法，但总体上说效果都很不理想，兰花茎腐病被兰友们称为兰花的不治之症，是兰花养植的大敌。兰花茎腐病已严重威胁着兰花生长，特别是规模化的种植。有效预防兰花茎腐病的发生和发展已是目前迫切需解决的问题。
经检索，陈卫良等曾利用短小芽孢杆菌来防治水稻纹枯病(见中国专利，公开号：CN101942403A，申请号201010201531.9)，但尚未发现利用短小芽孢杆菌防治兰花茎腐病的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用，该短小芽孢杆菌保藏名称为：Bacillus pumilus 223，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2010年4月8，保藏号：CCTCC NO：M2010075。
作为本发明的短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用的改进：将Bacillus pumilus223 CCTCC NO：M2010075制备而得的拮抗细菌发酵液与硅藻土按照1∶0.9～1.1的体积比混合，得可湿性粉剂I；可湿性粉剂I能用于治疗或预防兰花茎腐病。
作为本发明的短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用的另一种改进：将Bacilluspumilus 223CCTCC NO：M2010075制备而得的抗菌活性物质粗提液与硅藻土按照1∶0.9～1.1的体积比混合，得可湿性粉剂II；可湿性粉剂II能用于治疗或预防兰花茎腐病。
作为本发明的短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用的进一步改进：
当用于治疗兰花茎腐病时，将可湿性粉剂I或可湿性粉剂II与水按照1∶150～250的重量比混合，利用所得的悬浮液对发病兰花进行浸苗处理；
当用于预防兰花茎腐病时，将可湿性粉剂I或可湿性粉剂II与水按照1∶150～250的重量比混合，利用所得的悬浮液对兰花进行灌根处理。
本发明发现了短小芽孢杆菌Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075的新用途，即用于防治兰花茎腐病。虽然在CN101942403A中告知了短小芽孢杆菌Bacillus pumilus 223CCTCC NO：M2010075能用于防治水稻纹枯病，但是水稻纹枯病与兰花茎腐病却是2个完全不同的病因；具体如下：
水稻纹枯病是由丝核菌属真菌所引起的病害，而兰花茎腐病是由镰刀菌属引起的病害。这二种病原菌的有性阶段分别属于担子菌和子囊菌，在分类上差异巨大。目前用于水稻纹枯病防治的药剂主要有井冈霉素、爱苗、满穗等，这些农药无一有用于兰花茎腐病防治的报道。
至今已有较多的防治水稻纹枯病的细菌菌株的报道，这些菌株包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis，专利公开号CN1468524和CN101857848A)、蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus，专利公开号CN101671641)、多粘类芽孢杆菌(专利公开号CN101218924)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus，专利公开号CN101962623A)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus，专利公开号CN101984044A)、伯克氏菌(专利公开号CN101985606A)、致黄假单孢菌(Pseudomonas aureofaciens专利公开号CN1519309)等，但这些专利中均未提及用于兰花茎腐病的防治，也没有涉及用于兰花病害的防治。
在兰花病害防治方面，中国林业科学研究院和河北农业大学曾联合针对兰花炭疽病病原菌胶孢炭疽菌(Colletoichum gloeosporioides)进行了拮抗芽孢杆菌的体外筛选[河北农业大学学报，2008，31(3)：64-68]，发现花域芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)对兰花炭疽病病原菌胶孢炭疽菌在平板上有较强的抑制作用，但没有进行对兰花炭疽病病的防治试验。同时，兰花炭疽病完全不同于兰花茎腐病，前者由炭疽菌属真菌引起的叶部病害，后者为镰刀菌属真菌引起的基部病害。常用于兰花炭疽病病防治的化学药剂，如代森锰锌、多菌灵、甲基托布津等经试验对兰花茎腐病没有很好的防治效果。
本发明所用的拮抗细菌发酵液和抗菌活性物质粗提液在申请号为201010201531.9的发明专利《短小芽孢杆菌及其培养方法和用途》中均明确告知了相应的制备方法。
综上所述，本发明发现短小芽孢杆菌及其及提取物对兰花茎腐病有良好的防治效果。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是兰花茎腐病的发病症状图；
图2是短小芽孢杆菌对兰花茎腐病的防治效果图；
左图中的“2号”为防治后的植株，右图中的“1号”为未防治的对照。
具体实施方式
实施例1、可湿性粉剂I的制备：
按照申请号为201010201531.9的发明专利《短小芽孢杆菌及其培养方法和用途》制备而得的拮抗细菌发酵液经检测菌体浓度达到107cfu/mL以上，将该拮抗细菌发酵液与干燥的硅藻土按1∶1(V/V)混合，制成可湿性粉剂I。
实施例2、可湿性粉剂II的制备：
按照申请号为201010201531.9的发明专利《短小芽孢杆菌及其培养方法和用途》制备而得的抗菌活性物质粗提液与干燥硅藻土按1∶1(V/V)混合，制成可湿性粉剂II。
实施例3、芽孢杆菌223菌株可湿性粉剂(即可湿性粉剂I和可湿性粉剂II)治疗兰花茎腐病的作用：
将可湿性粉剂I和可湿性粉剂II分别用200重量倍的清水进行稀释，分别得可湿性粉剂I悬浮液和可湿性粉剂II悬浮液。
取已发病且发病程度基本相同的90丛兰花，对每丛兰花均作如下处理：
剔除球茎和叶基部已明显变褐、腐烂的兰苗；
将上述处理后的30丛的兰花(丛)浸泡于可湿性粉剂I悬浮液中(以全苗被浸没为准)，放置30分钟后，移苗于新的培养钵中培养。
将上述处理后的30丛的兰花(丛)浸泡于可湿性粉剂II悬浮液中(以全苗被浸没为准)，放置30分钟后，移苗于新的培养钵中培养。
将上述处理后的30丛的兰花(丛)浸泡于清水中(以全苗被浸没为准)，放置30分钟后，移苗于新的培养钵中培养。
上述3者的培养条件相同(在一个隔离的兰棚内按照常规方式进行培养)，一个月后观察发病情况。结果发现，经可湿性粉剂I悬浮液浸泡的苗有83％存活，经可湿性粉剂II悬浮液浸泡的苗有81％存活，而未经处理的仅14％未见发病。
实施例4、芽孢杆菌223菌株可湿性粉剂(即可湿性粉剂I和可湿性粉剂II)预防兰花茎腐病的作用：
将可湿性粉剂I和可湿性粉剂II分别用200重量倍的清水进行稀释，分别得可湿性粉剂I悬浮液和可湿性粉剂II悬浮液。
取健康状态相同的300丛兰花。
对其中的100丛兰花(丛)用可湿性粉剂I悬浮液按50ml/丛灌根一次，每隔10天用可湿性粉剂I悬浮液按50ml/丛灌根一次。
对其中的100丛兰花(丛)用可湿性粉剂II悬浮液按50ml/丛灌根一次，每隔10天用可湿性粉剂II悬浮液按50ml/丛灌根一次。
另100丛用清水按50ml/丛灌根一次，每隔10天后用清水按50ml/丛灌根一次，作为对照。
上述3者的其余培养条件均相同。
一个月后观察发病情况。结果发现，经可湿性粉剂I悬浮液灌根的苗(丛)发病率为2％，经可湿性粉剂II悬浮液灌根的苗(丛)发病率为1％，而作为对照的发病率达16％。
对比例1、用发明人保存的枯草芽孢杆菌A30菌株(枯草芽孢杆菌A30菌株产生的拮抗肽的分离纯化与理化性质研究，中国水稻科学，2002，64(2)：361-365)制备而得的拮抗细菌发酵液，其菌体浓度同实施例1中的菌体浓度；所得的可湿性粉剂称为可湿性粉剂A。
以该可湿性粉剂A替代实施例3中的可湿性粉剂I，其余同实施例3。结果发现，经可湿性粉剂A悬浮液浸泡的兰苗仅53％存活。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (4)

1.短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用，该短小芽孢杆菌保藏名称为：Bacilluspumilus 223，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2010年4月8，保藏号：CCTCC NO：M2010075。
2.根据权利要求1所述的短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用，其特征是：将所述Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075制备而得的拮抗细菌发酵液与硅藻土按照1∶0.9～1.1的体积比混合，得可湿性粉剂I；所述可湿性粉剂I能用于治疗或预防兰花茎腐病。
3.根据权利要求1所述的短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用，其特征是：将所述Bacillus pumilus 223 CCTCC NO：M2010075制备而得的抗菌活性物质粗提液与硅藻土按照1∶0.9～1.1的体积比混合，得可湿性粉剂II；所述可湿性粉剂II能用于治疗或预防兰花茎腐病。
4.根据权利要求2或3所述的短小芽孢杆菌在防治兰花茎腐病中的应用，其特征是：
当用于治疗兰花茎腐病时，将可湿性粉剂I或可湿性粉剂II与水按照1∶150～250的重量比混合，利用所得的悬浮液对发病兰花进行浸苗处理；
当用于预防兰花茎腐病时，将可湿性粉剂I或可湿性粉剂II与水按照1∶150～250的重量比混合，利用所得的悬浮液对兰花进行灌根处理。
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