CN102401816A - 烟草中生物碱的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测技术领域的烟草中生物碱的检测方法，包括如下步骤：步骤一，取烟草样品，加入碱溶液，超声处理，之后加入含有喹啉的有机溶剂，震荡萃取，将有机层浓缩，得进样溶液；步骤二，利用气相色谱-质谱联用仪检测进样溶液，对烟草中生物碱进行定性和定量测定。本发明的检测方法步骤简单，操作方便；同时重现性较好，灵敏度较高；本发明的检测方法回收率较高，同时能确保烟叶生物碱各个组分提取完全，可有效应用于烟草生物碱的分析检测。
Description
技术领域
本发明属于检测技术领域，具体是一种烟草中生物碱的检测方法。
背景技术
生物碱是烟叶中的主要含氮杂环化合物，种类较多，其中最主要的是尼古丁，它是烟草中特有的一种生物碱。绝大部分烟草生物碱是2-吡啶基衍生物，主要以有机酸和无机酸盐的形式存在，其含量的高低会影响到香烟的口感和品质。由于生物碱的含量极低，运用常规方法无法准确检测。现在常用的分析方法主要有气相色谱法，高效液相色谱法，毛细管电泳法以及超临界液体法等。但这些方法存在操作过程复杂，重现性较差，回收率低，测得的生物碱种类较少的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中检测烟草中生物碱时存在的操作过程复杂，重现性较差，回收率低，测得的生物碱种类较少的技术问题。
本发明的烟草中生物碱的检测方法包括如下步骤：
步骤一，取烟草样品，加入碱溶液，超声处理，之后加入含有喹啉的有机溶剂，震荡萃取，将有机层浓缩，得进样溶液；
步骤二，利用气相色谱-质谱联用仪检测进样溶液，对烟草中生物碱进行定性和定量测定。
优选地，步骤一中，所述碱溶液为NaOH的水溶液或氨水。
优选地，所述碱溶液为2mol/L的NaOH的水溶液。
优选地，步骤一中，所述有机溶剂为二氯甲烷、甲醇或二者的混合。
优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷。
优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷与甲醇按体积比为3∶1混合而得。
优选地，步骤一中，所述浓缩为用水浴蒸干浓缩。
优选地，步骤二中，所述检测的条件为，MS条件为：电子轰击，电子能量70eV，离子源温度230℃，连接管温度280℃，溶剂延迟3min，采用全扫描方式；升温程序：初温90℃，以15℃/min升至140℃，保持20min，再以15℃/min升至260℃，保持5min；GC条件：进样口温度250℃，氢火焰离子检测器温度280℃，载气为高纯氮，流速2.0ml/min，不分流进样，升温程序同MS条件中的升温程序。
本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明的检测方法步骤简单，操作方便；
(2)本发明的检测方法重现性较好，利用本发明的方法可较好地检测出生物碱含量差异明显的烟叶样品中的烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱和新烟草碱，RSD平均值＜9.6％，检测烟草生物碱灵敏度较高；
(3)本发明的检测方法回收率较高，同时能确保烟叶生物碱各个组分提取完全，可有效应用于烟草生物碱的分析检测。
附图说明
图1为实施例中生物碱混合标准液总离子流色谱图；
图2为实施例中样品生物碱总离子流色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例中的烟叶样品为云南省大理弥渡样品；
气相色谱-质谱联用仪为美国Aglent公司产品，型号为6850-5975C；旋转蒸发仪购于郑州长城科工贸有限公司；超声仪购于昆山市超声仪器有限公司；烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱等标样均购于美国SIGMA公司。
实施例
1、进样溶液的制备
准确称取0.5g样品置于100ml带塞三角瓶中，然后加入2mol/L的NaOH的水溶液，浸泡后超声，之后加10μl的5mg/ml喹啉作为内标，4000rpm离心10min取上清液，用CH2CI2萃取3次，合并有机层，之后加少量无水硫酸钠，冷藏过夜，用旋转蒸发仪于45℃水浴中将萃取液浓缩至1ml，得到进样溶液；
2、线性回归方程及检测限的确定
准确量取烟碱24.75μl溶于1ml二氯甲烷中，配成25mg/ml的烟碱标准液；
准确称取降烟碱25mg溶于1ml二氯甲烷中，再量取80μl溶于1ml二氯甲烷中，配成2mg/ml的降烟碱标准储备液；
分别准确称取麦斯明、假木贼碱各25mg溶于1ml二氯甲烷中，再各量取40μl溶于1ml二氯甲烷，配成1mg/ml的麦斯明和假木贼碱标准储备液；
分别准确移取上述烟碱、降烟碱、麦斯明和假木贼碱的标准储备液80、500、40、200μl，再定容至1ml，配成混标母液；
取混标母液300、200、100、80、60、40、20、10μl，各加人10μl的5mg/ml的喹啉作为内标，再定容至1ml，制备成系列标准溶液；
按色谱条件测定，以分析物峰面积和内标峰面积的比(Y)对相应的质量浓度(X)(μl/ml)进行线性回归；将逐级稀释的标准溶液分别进样1μl，以3倍基线噪声作为检出限。
经GC-MS分析鉴定，各生物碱的保留时间及匹配度见表1，线性回归方程、相关系数及检出限也如表1所示；生物碱混合标准液总离子流色谱图如图1所示，图1中，峰1代表的是喹啉，峰2是烟碱，峰3为降烟碱，峰4为麦斯明，峰5为假木贼碱，峰6为新烟草碱；样品生物碱总离子流色谱图如图2所示，图2中各数字代表峰的含义同图1。结果标明：各生物碱呈现较好峰型，无重叠无拖尾，匹配度均达到定性要求，且当烟碱、降烟碱、麦斯明和假木贼碱的质量浓度分别为20～600，30～300、3.2～12.0、16～60mg/L时，呈现良好的线性关系。
表1
3、回收率及重现性测定
将烟碱、降烟碱、麦斯明和假木贼碱的标样分别配制成高、中、低3个浓度添加到样品中，样品生物碱含量及添加标样量见表2，每个添加浓度重复5次，计算各生物碱的平均回收率和相对标准偏差，以分别考察方法的准确度和精密度。回收率和重现性测定结果见表2，各生物碱质量浓度在5.1～14650g/ml时，加标回收率为88.5％～105.4％，RSD为2.4％～9.2％，说明测定方法重复性较好，准确度和精密度均符合分析要求。
表2
4、定性和定量测定
采用GC-EI/MS全扫描方式(Scan)对烟草生物碱进行定性，内标法相对定量，由于新烟草碱没有无标准样品，故利用保留时间与之相近的假木贼碱响应因子定量。检测的条件为，MS(质谱)条件为：电子轰击，电子能量70eV，离子源温度230℃，连接管温度280℃，溶剂延迟3min，采用全扫描方式；升温程序：初温90℃，以15℃/min升至140℃，保持20min，再以15℃/min升至260℃，保持5min；GC(气相色谱)条件：进样口温度250℃，氢火焰离子检测器温度280℃，载气为高纯氮，流速2.0ml/min，不分流进样，升温程序同MS条件中的升温程序。
由表3可知，5份样品的烟碱占总生物碱含量平均为95.4％，微量生物碱的含量从大到小，依次为新烟草碱、降烟碱、假木贼碱、麦斯明，其检测的含量范围和各组分含量所占比例与已有报道基本一致。另外，同一样品的3次测定结果在不同组分的峰面积的RSD平均值小于9.6％，说明本实施例的检测方法能有效地应用于生物碱含量差异明显的烟叶样品检测。
表3
综上所述，本发明的检测方法步骤简单，操作方便；同时重现性较好，灵敏度较高；本发明的检测方法回收率较高，同时能确保烟叶生物碱各个组分提取完全，可有效应用于烟草生物碱的分析检测。
Claims (8)
1.一种烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，取烟草样品，加入碱溶液，超声处理，之后加入含有喹啉的有机溶剂，震荡萃取，将有机层浓缩，得进样溶液；
步骤二，利用气相色谱-质谱联用仪检测进样溶液，对烟草中生物碱进行定性和定量测定。
2.如权利要求1所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述碱溶液为NaOH的水溶液或氨水。
3.如权利要求2所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，所述碱溶液为2mol/L的NaOH的水溶液。
4.如权利要求1所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述有机溶剂为二氯甲烷、甲醇或二者的混合。
5.如权利要求4所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷。
6.如权利要求4所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷与甲醇按体积比为3∶1混合而得。
7.如权利要求1所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，步骤一中，所述浓缩为用水浴蒸干浓缩。
8.如权利要求1所述的烟草中生物碱的检测方法，其特征在于，步骤二中，所述检测的条件为，MS条件为：电子轰击，电子能量70eV，离子源温度230℃，连接管温度280℃，溶剂延迟3min，采用全扫描方式；升温程序：初温90℃，以15℃/min升至140℃，保持20min，再以15℃/min升至260℃，保持5min；GC条件：进样口温度250℃，氢火焰离子检测器温度280℃，载气为高纯氮，流速2.0ml/min，不分流进样，升温程序同MS条件中的升温程序。
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| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120404 |