CN102361912A - 高分子量聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法 - Google Patents

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Abstract

一种具有高纯度和高分子量的聚氧化亚烷基衍生物，其通过减少主要组分中包含的每个分子具有不同羟基数量的杂质来生产。一种纯化方法，在所述方法中，从分子量为8,800至100,000的特定聚氧化亚烷基衍生物中分离出羟基数量不同的杂质，该方法包括步骤(A)、(B)、(C)和(D)。步骤(A)：使用以重量计至少为聚氧化亚烷基衍生物的5倍量的质子惰性有机溶剂溶解其中的聚氧化亚烷基衍生物并形成溶液的步骤；步骤(B)：向溶液加入以重量计为聚氧化亚烷基衍生物的0.5至5倍量的包含铝和硅至少一种的氧化物的吸附剂，由此产生浆液的步骤；步骤(C)：将浆液在25℃或更高温度下搅拌的步骤；步骤(D)：从浆液回收聚氧化亚烷基衍生物的步骤。

Description

高分子量聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法
技术领域
本发明涉及具有高分子量的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法。
背景技术
近年来，聚氧化亚烷基衍生物在极为广泛的领域中用作材料，为多肽、酶、抗体、核酸化合物包括基因和寡核酸、核酸药物以及其他生理活性物质提供了在血液中的长效循环性质、靶向靶位点的功能等。这是因为聚氧化亚烷基衍生物与活生物体的其他组分由于空间排斥效应而显示出弱的相互作用。已知用聚氧化亚烷基衍生物修饰的生理活性物质或通过用聚氧化亚烷基衍生物修饰脂质体等而获得的药物载体，与未修饰的对应物相比在内部血液中显示出更长期的长效循环性质。已报道，聚氧化亚烷基衍生物的分子量越高，效能越高。此外，通过将活性基团或抗体与这种聚氧化亚烷基衍生物的末端相组合，也能提供定向功能。在药物递送系统领域中，聚氧化亚烷基衍生物已变成极为有用和必不可少的材料。因此，从使用聚氧化亚烷基衍生物生产的药物的性能和安全性角度来说，对于具有高纯度和低杂质含量的聚氧化亚烷基衍生物存在着需求。到目前为止，已经开发出具有各种构架的聚氧化亚烷基衍生物，并且取决于生产方法，作为副产物产生了各种不同杂质。其实例显示如下。
(情况A：单末端阻断的直链聚氧化亚烷基衍生物中的二醇杂质)
其实例首先包括被称为二醇的杂质，其是两个末端的每一个末端都终止于羟基的聚氧化亚烷基衍生物，并包含在最广泛使用的聚氧化亚烷基衍生物、即具有一个羟基的直链聚氧化亚烷基衍生物中。
在将要生产具有一个羟基的聚氧化亚烷基衍生物时，通常可以通过使用相应的醇作为引发剂并进一步使用碱催化剂对亚烷基氧化物进行加成-聚合，来获得衍生物。在该过程中，当亚烷基氧化物与掺杂在引发剂醇中或残留在反应罐中的水、或与通过引发剂的分解而形成的在两个末端具有羟基的杂质经历加成聚合时，亚烷基氧化物与每个末端加成聚合，产生了作为副产物的分子量为主要组分分子量的两倍的二醇。因为在具有高分子量的聚氧化亚烷基衍生物的生产中有大量亚烷基氧化物加成聚合，因此对于反应容器来说，引发剂的量变少。结果，系统中水的摩尔数相对于引发剂变得太大，因此高分子量聚氧化亚烷基中的二醇含量增加。此外，聚氧化亚烷基衍生物的分子量越高，其熔体黏度越高。因此存在着在亚烷基氧化物的加成聚合过程中添加溶剂以降低黏度，或者补充催化剂以便提高反应速率的情况。还存在着由于亚烷基氧化物与那些成分中包含的微量水的加成聚合而产生的二醇，并且取决于生产方法，这样的二醇具有各种不同分子量。甚至还存在着产生了具有与主要组分近似相等或更低的分子量的二醇的情况。
如上所述，由于即使当水以极微量存在时也产生二醇，因此难以完全抑制这种副产物的产生。具体来说，在生产在药物载体领域中公认有效的高分子量聚氧化亚烷基衍生物的过程中，抑制更加困难。当用于药物修饰时，这样的杂质二醇是药物二聚化的原因。二醇与目标产物相同都是聚醚化合物，并且分离和纯化困难。因此，对于用来减少聚氧化亚烷基衍生物中所包含的二醇的纯化技术，存在着强烈需求。
(情况B和E：聚合后形成的支链类型的聚氧化亚烷基衍生物中的杂质)
生产聚氧化亚烷基链数量为2或更大的整数的支链聚氧化亚烷基衍生物的一种方法，是将反应性聚氧化亚烷基衍生物与用作构架并具有活性氢基团的化合物进行化学结合的方法。
从这种方法产生的作为副产物的杂质包括反应性聚氧化亚烷基衍生物、通过反应性聚氧化亚烷基衍生物的水解并由此使反应性部分回复成羟基而形成的聚氧化亚烷基衍生物、未反应的起始原料以及由于仅在起始原料中导入一个聚氧化亚烷基链而形成的反应中间体。其实例还包括最初包含在反应性聚氧化亚烷基衍生物中的二醇。通过这种方法合成支链聚氧化亚烷基衍生物，导致产生了具有各种官能团和分子量的杂质，并且纯化特别困难。这样的支链聚氧化亚烷基衍生物通过很少的键合位点修饰生理活性物质，并能使修饰过的物质表现出与用直链衍生物修饰的物质相同的保留在血液中的性质。因为键合位点数量少，支链聚氧化亚烷基衍生物在防止生理活性物质本身的活性降低方面极为有效。因此，对于用于除去直链聚氧化亚烷基衍生物的纯化技术存在着需求。
(情况D：多支链聚氧化亚烷基衍生物中的二醇杂质)
对于具有三个或以上带有羟基末端的聚氧化亚烷基链，并且通过使用多元醇例如甘油或双甘油作为引发剂对亚烷基氧化物进行加成聚合而获得的聚氧化亚烷基衍生物来说，杂质的实例包括源自于引发剂中包含的水的二醇，这与具有一个羟基的直链聚氧化亚烷基衍生物的情况中相同。其实例还包括源自于溶剂中包含的水的二醇，因为某些固体或具有高黏度的引发剂在用于反应之前被溶解在有机溶剂中。与前述的情况中相同，还存在着由于在反应过程中添加溶剂或补充催化剂而产生的作为副产物的二醇。因为作为主要组分的多元醇具有较大的羟基数量并具有较大的每摩尔添加的亚烷基氧化物的摩尔数，因此那些副产物二醇具有与主要组分相等或更低的分子量。这样的多功能聚氧化亚烷基衍生物可作为外科手术等的止血剂用于医药领域中，并可用作胶凝剂例如密封剂的原材料。在源自于二醇的杂质进入到多功能聚氧化亚烷基衍生物中的情况下，这意味着分子量或交联位点不同的杂质进入，并且不能获得所需的凝胶强度。与情况A中相同，在合成阶段中移除水是极为困难的，因此对于用来减少聚氧化亚烷基衍生物中包含的二醇的纯化技术，存在着强烈需求。
(情况C：由官能团转化而产生的具有未反应的羟基的杂质)
通过上述方法合成的聚氧化亚烷基衍生物，随后通过将末端羟基转化成各种官能团来进行化学修饰。通常情况下，聚氧化亚烷基衍生物的分子量越高，黏度越高，并且分子中反应性部分的浓度越低。这样的聚氧化亚烷基衍生物损害了转化，因此羟基有少量残留。此外，如情况D中那样，在聚氧化亚烷基衍生物的分子中具有大量羟基的情况下，在化学修饰过程中产生未反应羟基数量不同的杂质，这些杂质的种类数量是2或更大的整数。从纯度提高和收率提高的角度来说，减少具有未反应羟基的聚氧化亚烷基衍生物变得重要。
当未反应羟基因此而残留时，聚氧化亚烷基衍生物具有降低的纯度，并且给出的药物也具有降低的纯度。因此，对用于纯化聚氧化亚烷基衍生物的技术存在着需求。
如上所述，在聚氧化亚烷基衍生物的合成中作为副产物产生了各种杂质，并且对于纯化衍生物的方法已经提出了各种方案。具体来说，对于通过从其中移除二醇来纯化具有一个羟基的聚氧化亚烷基衍生物来说，已经提出了下列方法。
(单末端OH衍生物的纯化方法的实例：在亚烷基氧化物加成过程中控制水含量)
一种方法是在亚烷基氧化物的加成聚合中使用的生产方法。如专利文献1(JP-A-11-335460)和专利文献2(US 2006/0074200)中所示，在使用醇化合物作为起始原料的氧化乙烯加成反应中，系统中的水含量被控制在ppm级别，由此使产生作为具有较高分子量的杂质二醇的原因的水分子的含量降到最低，抑制了二醇的产生。然而，由于在具有高分子量的聚氧化亚烷基衍生物的生产中大量亚烷基氧化物加成聚合，因此对于反应容器来说，引发剂的量变小。结果，系统中水的摩尔数相对于引发剂变得太大，因此高分子量聚氧化亚烷基的二醇含量增加。因此作为副产物的二醇的产生不可避免。
(单末端OH衍生物的纯化方法的实例：层析纯化)
在作为用于移除产生的二醇的技术而提出的方法中，存在着基于分子量执行纯化和分离的方法，正如在非专利文献1中报道的通过透析纯化甲氧基聚乙二醇的实验(Leonard等，Macromol.Chem.，189，1809-1817(1988))。然而，分子量等于或接近于主要组分的分子量的二醇，难以通过透析纯化来分离。
在非专利文献2中所报道的通过使用硅胶的柱层析纯化甲氧基聚乙二醇的实验中(Lapienis等，J.Bioactive Compatible Polymers，16，206-220(2001))，在实验室水平上对约几十克分子量为5,000或以下的甲氧基聚乙二醇进行纯化，从中移除二醇。然而，使用的硅胶和溶剂两者的量与待纯化的甲氧基聚乙二醇的量相比都过大，并且难以在工业规模上生产。此外，具有增加的分子量的化合物每个分子具有降低的极性，因此难以分离。此外，洗脱率随着分子量而变化，影响了可分离性。因此，对于通过柱层析分离目标化合物来说，需要根据杂质的种类和含量选择填充材料和洗脱剂。还需要优化展开条件。如上所述，通过柱层析的纯化要求使用大量吸附剂和溶剂，并且操作极为复杂。不可能根据目标聚氧化亚烷基衍生物和其中包含的杂质的分子量通过这种方法进行纯化。
此外，专利文献3(美国专利No.5,298,410)和专利文献4(JP-T-2008-514693；本文中使用的术语“JP-T”是指PCT专利申请的已发表的日文翻译)公开了一种方法，其中使用二甲基三苯甲游基、乙酸酯基或邻苯二甲酸酯基对甲氧基聚乙二醇的羟基进行修饰以增加极性的差异，并通过柱层析分离修饰的化合物。然而，这种生产方法要求对末端羟基进行暂时化学修饰，对该化合物进行柱纯化，然后去保护，随后将修饰的基团变回羟基。因此存在着步骤过分复杂以及由于化学修饰而产生新的化学物质杂质的问题。此外，据认为，特别是具有较高分子量的聚乙二醇衍生物的末端极性差异较小，这使分离变得困难。
(单末端OH衍生物的纯化方法的实例：使用离子交换树脂的分批处理)
同时，专利文献5(WO 2006/028745)显示了一个实例，其中将没有化学修饰的甲氧基聚乙二醇作用在由聚羧酸形成的离子交换树脂上，由此吸附并除去二醇。其中对效果有一个陈述，即该技术是也对分子量为30,000的高分子量化合物有效的纯化方法。然而，这种吸附的原理是利用聚乙二醇分子中的醚氧原子与树脂中的羧酸之间的相互作用并且也基于分子量差异的分离方法。因此，纯化方法不适用于二醇的分子量等于或接近于甲氧基聚乙二醇的分子量的情况。
从上面的解释可以看出，从一端具有羟基的高分子量聚氧化亚烷基衍生物中移除高分子量二醇是困难的，并且移除分子量不高于主要组分的分子量的二醇在技术上是困难的。
现有技术文献
专利文献
[专利文献1]JP-A-11-335460
[专利文献2]US 2006/0074200
[专利文献3]美国专利No.5,298,410
[专利文献4]JP-T-2008-514693
[专利文献5]WO 2006/028745
非专利文献
[非专利文献1]Leonard等，Macromol.Chem.，189，1809-1817(1988)
[非专利文献2]Lapienis等，J.Bioactive Compatible Polymers，16，206-220(2001)
发明概述
本发明要解决的问题
本发明的目的是提供一种通过减少主要组分中包含的每个分子具有不同羟基数量的杂质，来生产具有高纯度和高分子量的聚氧化亚烷基衍生物的方法。
解决问题的手段
为了克服这些问题，本发明人进行了勤奋的研究。结果他们成功获得了一种纯化方法，其中当在质子惰性有机溶剂中使用由含有铝和硅至少一种的氧化物构成的无机吸附剂对高分子量聚氧化亚烷基衍生物进行吸附操作时，可以将衍生物按照分子中包含的羟基数量的差异进行分离而不论其分子量如何，并可以获得具有高纯度和高分子量的聚氧化亚烷基衍生物。根据本发明，可以通过仅仅使用下述方式而不执行柱层析，极为容易地纯化聚氧化亚烷基衍生物，在所述方式中，使吸附剂例如过滤助剂进入从一开始就与其中含有溶解的衍生物的溶液相混合的状态，然后对其进行过滤。
发明的优点
根据本发明，能够基于羟基数量的差异纯化至高纯度，而不论目标化合物的分子量、杂质的分子量和结构以及其中包含的官能团如何。此外，本发明提供了操作简便性，因此即使在放大到工业生产时方法也获得令人满意的可重复性。可以认为，纯化方法高度适合于工业生产。通过本发明的纯化方法获得的高分子量聚氧化亚烷基衍生物具有高纯度和降低的杂质含量。通过本发明的纯化方法进行生产，容易获得高纯度产品。用本发明的高分子量聚氧化亚烷基衍生物修饰的生物相关物质具有低杂质含量，具有出色的安全性和稳定性，并且是有用的。
附图说明
图1是一组图，其显示了没有经历处理的样品、经历了实施例6的处理的样品A和经历了比较例2的处理的样品B的分析结果。
具体实施方式
具体来说，本发明是通过包含下列操作的吸附处理步骤，纯化由下列通式[1]所表示的分子量为8,800至100,000的聚氧化亚烷基衍生物的方法。
Figure BPA00001440171200081
Z是具有2至8个活性氢原子的化合物的残基。化合物的实例包括多元醇例如乙二醇、丙二醇、三亚甲基二醇、异丙二醇、丁二醇、四亚甲基二醇、三甲醇丙烷、甘油、双甘油、三甘油、四甘油、五甘油、六甘油、季戊四醇、二季戊四醇和木糖醇，具有氨基、羧基或硫醇基的氨基酸和肽例如赖氨酸和谷氨酸，或化合物例如有机胺和有机羧酸。在本文中，术语残基在羟基和羧基的情况下是指通过移除羟基而形成的残基，并且在氨基、仲胺基和硫醇基的情况下是指通过移除氢原子而形成的残基。
Y1和Y2是连接Z与聚氧化亚烷基链的连接基团。尽管对Y1和Y2没有具体限制，只要它们是共价键即可，但其优选实例包括醚键、硫醚键、酯键、氨基甲酸酯键、酰胺键、碳酸酯键、仲胺基和包含任何这些基团的亚烷基。亚烷基组成部分的优选实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚戊基、亚异戊基和亚己基，并且这些基团可以是支链的。更优选的是亚甲基、亚乙基和亚丙基。具体的连接基团随着Z的活性氢基团而变。Y1和Y2的更优选实例显示如下。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的羟基结合时，Y1和Y2的更优选实例是-O-、-OCONH(CH2)2或3O-、-O(CH2)2或3NHCO(CH2)1-5O-和-O(CH2)2或 3NHCOO-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的氨基结合时，Y1和Y2的更优选实例是-CO(CH2)1-5O-、-COO-和-CO-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的羧基结合时，Y1和Y2的更优选实例是-O-和-NH(CH2)2或3O-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的硫醇基结合时，Y1和Y2的更优选实例是-S-。
聚合物1和聚合物2是具有2至4个碳原子的直链或支链聚氧化亚烷基链。聚氧化亚烷基链的实例包括聚氧化乙烯、聚氧化-1-乙基乙烯、聚氧化-1，2-二甲基乙烯、聚氧化丙烯、聚氧化三亚甲基乙基它们的嵌段共聚物或随机共聚物。对于药物应用来说，因为药物需要溶解在血液中，因此用作其修饰剂的聚氧化亚烷基衍生物需要具有高水溶性。从该观点来说，优选的聚氧化亚烷基链是聚氧化乙烯和聚氧化丙烯。更优选的是聚氧化乙烯。支链聚氧化亚烷基链是包括通过连接物相连的两条或多条支链的聚氧化亚烷基链。可以存在多个分支位点。其实例是包括从多元醇、例如下式(i)中显示的分支位点伸出的两条或多条支链的的聚氧化亚烷基链。
(在式中，n1是1至2,300，优选为20至1,000，更优选为100至1,000；n2是1至1,200，优选为20至1,000，更优选为100至1,000)。
R是具有1至7个碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基。烃基和缩醛基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、异戊基、环戊基、己基、2-己基、3-己基、环己基、苯基、苯甲基、二乙基缩醛基、二甲基缩醛基、二异丙基缩醛基和1，3-二氧戊环。优选的烃基是甲基、叔丁基和苯甲基，优选的缩醛基是二乙基缩醛基。
X是氨基、受保护的氨基、受保护的羧基、醛基、受保护的醛基、羟基、受保护的羟基、硫醇基、受保护的硫醇基、磺酰基、乙烯基、烯丙基、氰基和含有任何这些基团的亚烷基，或氢原子。亚烷基的实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚戊基、亚异戊基和亚己基。优选的是亚甲基、亚乙基和亚丙基。更优选的是亚乙基。对于X来说，当n——其将在后面描述——是n＝1并且存在聚合物2时，X是位于聚氧化亚烷基链末端处的官能团。当n＝0并且不存在聚合物2时，即当X与连接基团Y直接相连时，X是与Z结合的官能团或与Z结合并含有官能团的亚烷基。当X是氢原子时，该X表示不参与Z与聚氧化亚烷基链的键合的活性氢基团。
符号m和n是1或0并满足1≤m+n；
a和b是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a≤8的整数；并且
当a和b是2或更大的整数时，分子中的Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
下面详细解释每个步骤。
步骤(A)：使用以重量计至少为通式[1]所表示的聚氧化亚烷基衍生物的5倍量的质子惰性有机溶剂溶解聚氧化亚烷基衍生物的步骤
理想情况下，溶剂是质子惰性的、具有低极性并且聚氧化亚烷基衍生物在其中高度可溶的溶剂。质子惰性有机溶剂的实例包括甲苯、二甲苯、苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙腈和四氢呋喃。优选的质子惰性有机溶剂是甲苯和乙酸乙酯。更优选的是甲苯。质子性溶剂是不合需要的，因为溶剂损害聚氧化亚烷基衍生物与吸附剂之间的相互作用。
理想情况下，溶剂的量以重量计为通式[1]所表示的聚氧化亚烷基衍生物的量的至少5倍。在其中以重量计小于5倍的情况下，溶液的黏度增加，导致纯化效率受损并且收率受损。因此，从生产角度来说，将溶剂的量调整到以重量计至少5倍是有利的。即使当溶剂的量增加到以重量计30倍或以上时，纯化效率仍令人满意。然而，这样大的溶剂量需要在随后的过滤操作中处理增加的体积，导致工时增加和收率降低。从成本角度来说，过大的溶剂量是不利的。出于这些原因，溶剂量优选为以重量计5至30倍，更优选为10至20倍。
溶剂用于将聚氧化亚烷基衍生物溶解在其中。对于在处理容器中装料的次序来说，可以首先导入聚氧化亚烷基衍生物或质子惰性有机溶剂。取决于其分子量，一些聚氧化亚烷基衍生物需要加热。其方法没有具体限制。一般来说，可以通过加热至30℃或更高温度来溶解聚氧化亚烷基衍生物。
步骤(B)：加入以重量计为聚氧化亚烷基衍生物的0.5至5倍量的由含有铝和硅至少一种的氧化物构成的无机吸附剂，从而产生浆液的步骤
由含有铝和硅至少一种的氧化物构成的无机吸附剂，是其中含有铝原子或硅原子或两者的氧化物。其实例包括氧化铝、二氧化硅、由氧化铝和二氧化硅构成的复合氧化物、由氧化铝和另一种金属构成的复合氧化物以及由二氧化硅和另一种金属构成的复合氧化物。“另一种金属”的实例包括钠、镁和钙的氧化物
这样的吸附剂可以单独或组合使用。
因为本发明是按照分子中的羟基数量进行分离的方法，因此与羟基相互作用的吸附剂是有利的。优选的无机吸附剂是氧化铝(Al2O3)、二氧化硅(SiO2)和包含铝和硅的复合氧化物。更优选的是(Al2O3)、(SiO2)、(Al2O3·H2O)和(Al2O3·9SiO2·H2O)。特别优选的是(Al2O3)、(SiO2)和(Al2O3·H2O)。最优选的是(Al2O3·H2O)。
其具体实例包括活性铝土(Al2O3)、硅胶(SiO2)和Kyowa ChemicalIndustry Co.，Ltd.公司所制造的Kyoward系列中的Kyoward 200B(Al2O3·H2O)、Kyoward 700(Al2O3·9SiO2·H2O)、Kyoward 2000(Mg0.7Al0.3O1.15)和Kyoward 300(2.5MgO·Al2O3·XH2O)(x是9≤x≤11)。
理想情况下，吸附剂的量以重量计在通式[1]所表示的聚氧化亚烷基衍生物的量得0.5至5倍的范围内。在其量小于0.5倍的情况下，不能获得足够的纯化效果。在其量以重量计大于5倍的情况下，待处理的量大，导致收率的降低和工时的增加。出于这些原因，在情况A、B和C中吸附剂的量优选为以重量计1至3倍，更优选为以重量计2倍，并且在情况D和E中吸附剂的量优选为以重量计2至5倍，更优选为以重量计3倍。
步骤(C)：将浆液在25℃或更高温度下搅拌的步骤
该步骤(C)是向步骤(B)的溶液加入吸附剂以制备吸附剂浆液，并将该浆液进行吸附处理的步骤。处理温度优选为25至80℃。在温度低于25℃的温度下，溶液具有高黏度，导致纯化效率受损。此外，取决于聚氧化亚烷基衍生物的结构或分子量，发生不合需要的晶体沉淀。因此，处理温度理想地为25℃或更高温度。优选的温度范围是40至100℃，更优选的范围是40至60℃。在该范围内的温度下，将浆液在惰性气体气氛中或使用惰性气体鼓泡搅拌30分钟或更久，以执行吸附处理。通过这种操作，在分子中具有大量羟基的聚氧化亚烷基衍生物被吸附到吸附剂上。
步骤(D)：从浆液回收聚氧化亚烷基衍生物的步骤
该步骤(D)是从经历过步骤(C)的吸附处理的溶液中除去吸附剂和溶剂，由此分离所需聚氧化亚烷基衍生物的步骤。对于除去吸附剂的方法没有具体限制。然而，一般来说，吸附剂通过真空过滤或压力过滤来移除。在这种操作中，过滤器应该事先加热到与处理温度相同的温度，以便防止过滤期间在温度下降后发生晶体沉淀。过滤后，当所需衍生物具有比杂质聚氧化亚烷基更少的羟基数量时，所需聚氧化亚烷基衍生物包含在滤液中，而当所需衍生物具有更大羟基数量时，其包含在滤饼中。从滤液分离所需聚氧化亚烷基和从滤饼分离它们在方法上不同。在从滤液分离的情况下，溶剂移除与杂质移除相比没有具体限制。然而，优选的方法是通过真空蒸馏或通过重新沉淀来移除。在从滤饼分离的情况下，可以使用的方法包括向滤饼加入有机溶剂，再次使用方法移除吸附剂和通过方法移除溶剂。
下面对每种情况下进行解释。
在步骤(D)中，当所需聚氧化亚烷基衍生物与杂质聚氧化亚烷基衍生物相比具有较少羟基数量时，所需化合物存在于滤液中，杂质保留在吸附剂上，这是因为所需化合物与杂质相比显示出与吸附剂的较弱的相互作用。因此，在该步骤(D)中，所需化合物通过真空蒸馏或重新沉淀从过滤产生的滤液中分离。
适合于这种方法的代表性聚氧化亚烷基衍生物显示如下。
(从情况A中的具有一个羟基的直链聚氧化亚烷基衍生物移除水衍生的杂质二醇的情况)
在通式[1]中，
a和b分别为a＝1和b＝1；并且m和n分别为m＝1和n＝0。
Z是通过从具有两个羟基的化合物移除羟基而形成的残基。化合物的实例包括乙二醇。
连接Z与聚氧化亚烷基链的连接基团Y1和Y2是醚键。
聚合物1是具有2至4个碳原子的直链聚氧丙烯链。优选的聚氧化亚烷基链是聚氧化乙烯和聚氧化丙烯。更优选是聚氧化乙烯。
R是具有1至7个碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基。R优选为甲基、叔丁基、苯甲基或二乙基缩醛基，更优选为甲基或二乙基缩醛基，更优选为甲基。
X是氢原子。
(从情况B中的支链聚氧化亚烷基衍生物中移除作为具有羟基的直链或支链聚氧化亚烷基衍生物的杂质聚氧化亚烷基衍生物的情况)
在通式[1]中，
a和b分别是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；并且m和n分别为m＝1或0和n＝1。
Z是多元醇或氨基酸或肽的残基。优选的多元醇是甘油和季戊四醇。更优选为甘油。优选的氨基酸是赖氨酸和谷氨酸。
Y1和Y2是连接Z与聚氧化亚烷基链的连接基团。尽管对Y1和Y2没有具体限制，只要它们是共价键即可，但其优选实例包括醚键、硫醚键、酯键、氨基甲酸酯键、酰胺键、碳酸酯键、仲胺基和含有任何这些基团的亚烷基。亚烷基的优选实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚戊基、亚异戊基和亚己基。更优选的是亚甲基、亚乙基和亚丙基。具体的连接基团随着Z的活性氢基团而变。Y1和Y2的优选实例显示如下。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的羟基结合时，Y1和Y2的优选实例是-O-、-OCONH(CH2)2或3O-、-O(CH2)2或3NHCO(CH2)1-5O-和-O(CH2)2或3NHCOO-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的氨基结合时，Y1和Y2的优选实例是-CO(CH2)1-5O-、-COO-和-CO-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的羧基结合时，Y1和Y2的优选实例是-O-和-NH(CH2)2或3O-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的硫醇基结合时，Y1和Y2的优选实例是-S-。
聚合物1和聚合物2是具有2至4个碳原子的直链或支链聚氧化亚烷基链。优选的聚氧化亚烷基链是聚氧化乙烯和聚氧化丙烯。更优选为聚氧化乙烯。
R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基。R优选为甲基、叔丁基、苯甲基或二乙基缩醛基，更优选为甲基。
X是受保护的氨基、受保护的羧基、受保护的醛基、受保护的羟基、受保护的硫醇基、氰基和含有任何这些基团的亚烷基。亚烷基优选为亚甲基、亚乙基或亚丙基，更优选为亚乙基。
X的优选实例显示为下面的式(ii)、(iii)、(iv)和(v)。
Figure BPA00001440171200151
Figure BPA00001440171200152
(v)-CH2-CH2-CN
此外，当当a和b是2或更大的整数时，分子中的上述Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
情况B中的具体形式的实例显示在表1中。
[表1]
Figure BPA00001440171200161
(在情况C中，从聚氧化亚烷基衍生物中移除杂质聚氧化亚烷基衍生物的情况，所述杂质具有在将末端羟基转变成烃基例如作为氨基的前体的甲氧基、缩醛基或氰基、或转变成氨基保护基团后未反应的羟基)
在通式[1]中，
a和b分别是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；并且m和n各自为1或0，并且1≤m+n。
Z是通过从多元醇移除羟基而形成的残基。优选的多元醇是乙二醇、丙二醇、三甲醇丙烷、四亚甲基二醇、甘油、双甘油、三甘油、四甘油、五甘油、六甘油、季戊四醇、二季戊四醇和木糖醇。
连接Z与聚氧化亚烷基链的连接基团Y1和Y2是醚键。
聚合物1和聚合物2是具有2至4个碳原子的直链或支链聚氧化亚烷基链。优选的聚氧化亚烷基链是聚氧化乙烯和聚氧化丙烯。更优选的是聚氧化乙烯。
R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基。R优选为甲基、叔丁基、苯甲基或二乙基缩醛基，更优选为甲基。
X是受保护的氨基、受保护的羧基、受保护的醛基、受保护的羟基、受保护的硫醇基、氰基和含有任何这些基团的亚烷基。亚烷基优选为亚甲基、亚乙基或亚丙基，更优选为亚乙基。
X的优选实例显示为下面的式(iii)、(iv)和(v)。
(v)-CH2-CH2-CN
此外，当a和b是2或更大的整数时，分子中的上述Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
情况C中的具体形式的实例显示在表2和3中。
[表2]
在直链聚氧化亚烷基衍生物的情况下
[表3]
在支链聚氧化亚烷基衍生物的情况下
Figure BPA00001440171200181
在步骤(D)中，当所需聚氧化亚烷基衍生物具有比杂质聚氧化亚烷基衍生物更大的羟基数量时，由于其更大的羟基数量，所需衍生物与杂质相比显示出与吸附剂更强的相互作用。因此，在步骤(C)中，杂质存在于滤液中，所需化合物保留在吸附剂上。因此，在该步骤(D)后需要进一步执行下列步骤(E)。
步骤(E)：对浆液溶液进行过滤并从滤饼中回收式(1)化合物的步骤
该步骤(E)是在步骤(C)后回收滤饼并向其添加有机溶剂以执行再次过滤的步骤。作为有机溶剂，使用极性溶剂是有利的。优选的是质子性溶剂例如甲醇或乙醇。更优选的是乙醇。尽管对溶剂的量没有具体限制，但其量理想情况下以重量计为聚氧化亚烷基衍生物的量的至少5倍。处理温度优选为40℃或更高温度。对于通过过滤移除吸附剂没有具体限制。然而，一般来说，吸附剂通过真空过滤或压力过滤来移除。在该操作中，理想情况下滤液应该事先加热到与处理温度相同的温度，以便防止在过滤期间在温度下降后发生晶体沉淀。此外，理想情况下，应该使用已被事先加热到与处理温度相同的温度的甲醇或乙醇来洗涤从过滤产生的滤饼，以便获得提高的收率。对于从滤液移除溶剂没有具体限制。然而，优选通过真空蒸馏或通过重新沉淀来移除溶剂。
适合于这种方法的聚氧化亚烷基衍生物显示如下。
(在情况D中从具有3个或以上羟基的支链聚氧化亚烷基衍生物移除水衍生的二醇的情况)
在通式[1]中，
a和b分别是满足a＝0或1、2≤b≤8和3≤a+b≤8的整数；并且m和n分别为m＝0和n＝1。
Z是通过从多元醇移除羟基而形成的残基。优选的多元醇是三甲醇丙烷、甘油、双甘油、三甘油、四甘油、五甘油、六甘油、季戊四醇、二季戊四醇和木糖醇。更优选为甘油、双甘油和季戊四醇。
连接Z与聚氧化亚烷基链的连接基团Y1和Y2是醚键。
聚合物1和聚合物2是具有2至4个碳原子的直链或支链聚氧化亚烷基链。优选的聚氧化亚烷基链是聚氧化乙烯和聚氧化丙烯。更优选的是聚氧化乙烯。
R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基。R优选为甲基、叔丁基、苯甲基或二乙基缩醛基，更优选为苯甲基。
X是含有羟基的亚烷基。亚烷基优选是亚乙基和亚丙基，更优选为亚乙基。
(在情况E中从支链聚氧化亚烷基衍生物中移除一个末端仍然作为羟基未反应的直链聚氧化亚烷基衍生物的情况)
在通式[1]中，
a和b分别是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；m和n各自为1或0，并且1≤m+n。
Z是化合物例如多元醇或氨基酸或肽。优选的多元醇和氨基酸是乙二醇、甘油、赖氨酸和谷氨酸。
Y1和Y2是连接Z与聚氧化亚烷基链的连接基团。其优选实例包括醚键、硫醚键、酯键、氨基甲酸酯键、酰胺键、碳酸酯键、仲胺基和含有任何这些基团的亚烷基。亚烷基的优选实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚戊基、亚异戊基和亚己基。更优选的是亚甲基、亚乙基和亚丙基。具体的连接基团随着Z的活性氢基团而变。Y1和Y2的优选实例显示如下。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的羟基结合时，Y1和Y2的优选实例是-O-、-OCONH(CH2)2或3O-、-O(CH2)2或3NHCO(CH2)1-5O-和-O(CH2)2或3NHCOO-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的氨基结合时，Y1和Y2的优选实例是-CO(CH2)1-5O-、-COO-和-CO-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的羧基结合时，Y1和Y2的优选实例是-O-和-NH(CH2)2或3O-。
当聚氧化亚烷基衍生物与Z的硫醇基结合时，Y1和Y2的优选实例是-S-。
聚合物1和聚合物2是具有2至4个碳原子的直链或支链聚氧化亚烷基链。优选的聚氧化亚烷基链是聚氧化乙烯和聚氧化丙烯。更优选为聚氧化乙烯。
R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基。R优选为甲基、叔丁基、苯甲基或二乙基缩醛基，更优选为甲基。
X是氨基、受保护的氨基、受保护的羧基、醛基、受保护的醛基、羟基、受保护的羟基、硫醇基、受保护的硫醇基、氰基和含有任何这些基团的亚烷基，或者是氢原子。亚烷基和优选实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚戊基、亚异戊基和亚己基。优选情况下，X是含有羟基的亚烷基或者是氢原子。
此外，当a和b是2或更大的整数时，分子中的上述Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
情况E中的具体形式的实例显示在表4中。
[表4]
情况A至E中的聚氧化亚烷基衍生物具有8,800至100,000的分子量。然而，聚氧化亚烷基的所需分子量倾向于增加，这是因为用于最近的临床应用的聚氧化亚烷基衍生物需要在血液中具有增加的长效循环性质并防止生理活性物质活性降低。因此，聚氧化亚烷基衍生物的分子量优选为10,000至100,000，更优选为20,000至100,000，更优选为30,000至100,000。
步骤(A)至(D)或步骤(A)至(E)的操作可以重复。特别是当含有大量杂质时，重复操作能够提高纯度。
实施例
下面将参考实施例对本发明进行更详细的解释。
对于获得的聚氧化亚烷基衍生物的纯度来说，通过凝胶渗透色谱法(GPC)检查聚合物的分子量分布。检测方法如下所述。
作为GPC系统，使用了SHODEX GPC SYSTEM-11。展开溶剂为四氢呋喃；流速为1mL/min；柱子为SHODEX KF-801、KF-803、KF-804(8mmI..D×30cm)；柱温为40℃；检测器为RIX8；样品量为1mg/g；注射量为100μL。
以下列方式处理GPC数据。通过从相对于主峰的每个拐点画一条与基线垂直的分开峰的线，将洗脱曲线上高分子量杂质和低分子量杂质的峰分开，并从峰的面积值计算每个峰的面积百分率。
(实施例1-1)
在5-L四颈烧瓶中导入100g甲氧基聚乙二醇(在后文中称为mPEG)(分子量为30,000；二醇含量为2.81％)和1,500g(1,700mL)甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG在55℃下溶解。向其加入200克Kyoward 200B(Kyowa ChemicalIndustry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入1,000g己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品(50g)。
作为GPC分析的结果，发现样品具有0.3％的二醇含量。
在实施例1-2至1-24中，按照实施例1的操作进行实验，只是对下列条件进行了改变：甲氧基聚乙二醇的分子量，溶剂种类，溶剂量，吸附剂种类和吸附剂量。其结果显示在下面的表5至11中。
(实施例1-1至1-7：其中改变了溶剂种类的实施例)
在5-L四颈烧瓶中导入100g mPEG(分子量为30,000；二醇含量为2.81％)和1,700mL下表中显示的任一溶剂。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG在40℃左右溶解。向其加入200克Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)，并将混合物在40℃至55℃并且不高于溶剂的沸点的温度下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入1,000g己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥以回收样品。对于氯仿、丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷来说，通过使用蒸发器浓缩滤液，随后将浓缩物重新溶解在1,000g乙酸乙酯中，然后向其加入1,000g己烷以引起结晶，通过过滤取出沉淀的晶体并对晶体进行真空干燥，来回收样品。
[表5]
Figure BPA00001440171200231
上面给出的结果显示，在非极性质子惰性溶剂中，具有较低极性的溶剂例如甲苯和乙酸乙酯更加有效。
(比较例1-1和1-2：其中改变了溶剂种类的实施例)
使用质子性溶剂乙醇和质子惰性但具有高极性的溶剂DMF作为溶剂，按照实施例1-1至1-7的方法进行操作。其结果显示在下面的表6中。
[表6]
  比较例   1-1   1-2
  溶剂种类   乙醇   DMF
  二醇含量(％)   2.54   2.69
  收率(％)   21   29
上面给出的结果显示，质子性溶剂和高极性溶剂没有纯化效能。
(实施例1-8至1-13：其中改变了溶剂量的实施例)
在5-L四颈烧瓶中导入100g mPEG(分子量为30,000；二醇含量为2.81％)和甲苯(其量显示在表中)。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG在55℃下溶解。向其加入200克Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入1,000g己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品。
[表7]
Figure BPA00001440171200241
上面给出的结果显示，溶剂量小导致纯化效率低和收率低，并且尽管通过增加溶剂量改进了纯化效率和收率，但溶剂量超过20倍基本上不导致纯化效果的变化。
(实施例1-14至1-18：其中改变了吸附剂种类的实施例)
在5-L四颈烧瓶中导入100g mPEG(分子量为30,000；二醇含量为2.81％)和1,500g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG在55℃下溶解。向其加入200克下表中显示的任一吸附剂，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入1,000g己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品。
[表8]
  实施例   1-14   1-1   1-15   1-16   1-17   1-18
  吸附剂种类   活性氧化铝   KW200B   硅胶   KW700   KW300   KW2000
  二醇含量(％)   0.6   0.3   0.4   0.77   1.1   1.3
  收率(％)   70   50   25   53   60   60
*KW：Kyoward
上面给出的结果显示，由含有铝和硅的至少一种的氧化物构成的无机吸附剂是有效的。
(比较例1-3至1-6：其中改变了吸附剂种类的实施例)
使用不含铝或硅的氧化物的金属盐或金属氧化物作为吸附剂，按照实施例1-8至1-13的方法进行操作。其结果显示在下面的表9中。
[表9]
  比较例   1-3   1-4   1-5   1-6
  吸附剂种类   MgSO4   CaO   MgO   Al(OH)3
  二醇含量(％)   2.51   2.52   2.26   2.67
  收率(％)   84   71   85   73
上面给出的结果显示，不含铝或硅的氧化物的其他种类的金属氧化物或盐没有纯化效果。
(实施例1-19至1-22：其中改变了吸附剂量的实施例)
在5-L四颈烧瓶中导入100g mPEG(分子量为30,000；二醇含量为2.81％)和1,500g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG在55℃下溶解。向其加入Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)(其量显示在表中)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入1,000g己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品。
[表10]
Figure BPA00001440171200261
上面给出的结果显示出下列情况。即使使用0.5倍量的吸附剂也能观察到足够的纯化效果；并且吸附剂量越大，纯化效率越高。然而，随着吸附剂量增加，收率将变低。
(实施例1-23和1-24：其中改变了甲氧基聚乙二醇的分子量的实施例)
在5-L四颈烧瓶中导入100g mPEG(显示在表中)和1,500g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG在55℃下溶解。向其加入200克Kyoward 200B(Kyowa ChemicalIndustry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入1,000g己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品。
[表11]
  实施例   1-23   1-1   1-24
  mPEG   20,000   30,000   40,000
  处理前的二醇含量(％)   0.7   2.81   3.5
  处理后   N.D   0.3   0.5
  收率(％)   56   50   50
上面给出的结果显示，即使当甲氧基聚乙二醇的分子量改变时，也能获得足够的纯化效果。
(实施例2)
在200-L玻璃反应罐中导入5kg mPEG(分子量为30,000；高分子量杂质含量为2.81％)和10kg KW-200B，然后加入75kg甲苯。将内含物加热到55℃，然后搅拌1小时。将该混合物通过包含有对应于5A滤纸的过滤器进行压力过滤。将该操作重复5次。将获得的滤液加热到60℃，在减压下蒸馏掉约100kg甲苯。然后加入75kg己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到12kg样品。
作为GPC分析的结果，发现样品具有0.3％的高分子量杂质含量。
(实施例3-1)
在3-L四颈烧瓶中导入100g由下式(a)所显示的α-(3，3-二乙氧基丙基)-，ω-羟基-聚氧化乙烯(分子量为20,000；二醇含量为2.88％)和1,600g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器、水测量管和氮气鼓泡管与其相连。使用加热罩将内含物加热到110℃，并允许包含的水与甲苯形成共沸物。由此进行回流脱水。在蒸馏掉100g甲苯后，将内含物冷却到50℃。向其加入200克Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品(50g)。
作为GPC分析的结果，发现样品具有0.15％的二醇含量。
Figure BPA00001440171200271
实施例(3-2)
在5-L四颈烧瓶中导入252g α-(3，3-二乙氧基丙基)-，ω-羟基-聚氧化乙烯(分子量为10,000；二醇含量为3.13％)和3,753g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器、水测量管和氮气鼓泡管与其相连。使用加热罩将内含物加热到110℃，并允许包含的水与甲苯形成共沸物。由此进行回流脱水。在蒸馏掉100g甲苯后，将内含物冷却到50℃。向其加入500克Kyoward200B(Kyowa Chemical Industry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品(116g)。
作为GPC分析的结果，样品中的二醇未检测到。
(实施例4-1)
在10-L玻璃反应容器中导入121g由下式(b)所显示的α-(叔丁基)-，ω-羟基-聚氧化乙烯(分子量为40,000；二醇含量为6.54％)和6,000g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将聚合物在55℃下溶解。向其加入244g Kyoward 200B(Kyowa ChemicalIndustry)。将得到的混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品(65g)。
作为GPC分析的结果，发现样品具有1.05％的二醇含量。
(实施例4-2)
在10-L玻璃反应容器中导入202g α-(叔丁基)-，ω-羟基-聚氧化乙烯(分子量为10,000；二醇含量为2.99％)和6,004g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将聚合物在55℃下溶解。向其加入244g Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)。将得到的混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。将回收的滤液浓缩至1,200g，随后向其中加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品(105.2g)。
作为GPC分析的结果，发现样品的二醇含量未检测到。
(实施例5)
为了证实情况B中的纯化，通过向下式(c)所显示的具有与甘油架构键合的两个聚氧化乙烯链的支链聚氧化乙烯衍生物(分子量为40,000)添加分子量为20,000的甲氧基聚乙二醇制备了样品(样品中分子量为20,000的mPEG的含量为11.9％)，并对其进行纯化。在100-mL四颈烧瓶中导入2.25g制备的样品和40g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将样品在55℃下溶解。向其加入5克Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并干燥，回收到样品(1.22g)。作为GPC分析的结果，发现该样品中分子量为20,000的甲氧基聚乙二醇杂质的含量为9.1％。进一步对操作进行重复。作为结果，GPC分析显示样品中分子量为20,000的甲氧基聚乙二醇杂质的含量能够降低到5.1％。
Figure BPA00001440171200291
(实施例6和比较例2)
为了证实本发明移除不论何种分子量的二醇的能力，制备了含有3至4％的分子量为主要组分的两倍的二醇和3至4％的分子量为主要组分的分子量的一半的二醇的mPEG样品，并按照本发明进行处理。出于比较的目的，将该样品通过专利文献5(WO 2006/028745)中描述的方法进行处理。其详细情况显示如下。
在300-mL四颈烧瓶中导入10g mPEG样品(分子量为40,000；分子量为80,000的二醇的含量为2.98％；分子量为20,000的二醇的含量为3.91％)和150g甲苯。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG样品在55℃下溶解。向其加入20克Kyoward 200B(Kyowa Chemical Industry)，并将混合物在55℃下搅拌1小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品A(5g)。
在2-L四颈烧瓶中导入10g mPEG样品(分子量为40,000；分子量为80,000的二醇的含量为2.98％；分子量为20,000的二醇的含量为3.91％)和1,000g去离子水。将Three-One Motor搅拌器、冷凝器和氮气鼓泡管与其相连，并使用加热罩将mPEG样品在60℃下溶解。向其加入30克DOWEX(DOW Chemical Co.)(聚丙烯酸树脂)，并将混合物在60℃下搅拌3小时。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向其加入1千克氯仿以进行萃取，并将该操作重复两次。将氯仿层浓缩，随后向其加入200g乙酸乙酯以重新溶解浓缩物。向其加入10克硫酸镁对溶液进行脱水。准备带有5A滤纸的Nutsche漏斗，并对混合物进行抽滤。回收滤液。向回收的滤液加入己烷以引起结晶。通过过滤取出沉淀的晶体并真空干燥，回收到样品B(5g)。
其结果显示在表12和图1中。
[表12]
  处理前   样品A   样品B
  二醇(分子量为80,000)(％)   2.98   0.35   0.40
  mPEG(分子量为40,000)(％)   93.11   98.24   94.48
  二醇(分子量为20,000)(％)   3.91   1.41   5.12
正如上面给出的结果所显示的，发现在专利文献5(WO 2006/028745)中描述的方法对于移除低分子量二醇来说基本上无效，尽管它能够移除高分子量二醇。这种现有技术的方法不适用于含有低分子量二醇杂质的情况。此外还发现，与此相反，本发明能够同时移除二醇，不论其分子量如何。
尽管已经详细地并参考其具体实施方案对本发明进行了描述，但对于本技术领域的专业人员来说，显然可以在其中进行各种改变和修改，而不背离其精神和范围。
本申请是基于2009年3月31日提交的日本专利申请(申请号2009-085124)，其全部内容在此引为参考。此外，所有本文中引用的参考文献在此作为整体引用。

Claims (16)

1.一种聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中从下面通式[1]所表示的分子量为8,800至100,000的聚氧化亚烷基衍生物中分离出杂质，所述杂质与聚氧化亚烷基衍生物的差别在于羟基数量，所述方法包含下列步骤(A)、(B)、(C)和(D)：
步骤(A)：使用以重量计至少为聚氧化亚烷基衍生物的5倍量的质子惰性有机溶剂溶解聚氧化亚烷基衍生物，以形成聚氧化亚烷基衍生物溶液的步骤；
步骤(B)：向溶液加入以重量计为聚氧化亚烷基衍生物的0.5至5倍量的包含铝和硅至少一种的氧化物的无机吸附剂，以产生浆液的步骤；
步骤(C)：将浆液在25℃或更高温度下搅拌的步骤；以及
步骤(D)：从浆液回收聚氧化亚烷基衍生物的步骤：
其中
Z是具有2至8个活性氢原子的化合物的残基；
Y1和Y2表示醚键、硫醚键、酯键、氨基甲酸酯键、酰胺键、碳酸酯键、仲胺基或包含任何这些基团的亚烷基；
聚合物1和聚合物2表示具有2至4个碳原子的直链或支链聚氧化亚烷基链；
R表示具有1至7个碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基；
X表示氨基、受保护的氨基、受保护的羧基、醛基、受保护的醛基、羟基、受保护的羟基、硫醇基、受保护的硫醇基、磺酰基、乙烯基、烯丙基、氰基或含有任何这些基团的亚烷基，或氢原子；
m和n使得m＝1或0，n＝1或0，并且1≤m+n；
a和b是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；并且
当a和b是2或更大的整数时，分子中的Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
2.如权利要求1所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在步骤(D)中，将浆液过滤然后从滤液中回收聚氧化亚烷基衍生物。
3.如权利要求2所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在通式[1]中，Z是通过从乙二醇移除羟基而形成的残基；Y1和Y2是醚键；聚合物1是直链聚氧化乙烯链；R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基；X是氢原子；m和n分别是m＝1和n＝0；并且a和b分别是a＝1和b＝1。
4.如权利要求3所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在通式[1]中，R是甲基。
5.如权利要求2所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在通式[1]中，Z是多元醇或氨基酸或肽的残基；Y1和Y2是醚键、硫醚键、酯键、氨基甲酸酯键、酰胺键、碳酸酯键、仲胺基或含有任何这些基团的亚烷基；聚合物1和聚合物2是直链或支链聚氧化乙烯链；R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基；X是受保护的氨基、受保护的羧基、受保护的醛基、受保护的羟基、受保护的硫醇基、氰基或含有任何这些基团的亚烷基；m和n分别是m＝1或0并且n＝1；a和b分别是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；并且当a和b是2或更大的整数时，则分子中的Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
6.如权利要求2所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在通式[1]中，Z是通过从多元醇移除羟基而形成的残基；Y1和Y2是醚键；聚合物1和聚合物2是直链聚氧化乙烯链；R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基；X是受保护的氨基、受保护的羧基、受保护的醛基、受保护的羟基、受保护的硫醇基、氰基或含有任何这些基团的亚烷基；m和n各自是1或0，并且1≤m+n；a和b分别是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；并且当a和b是2或更大的整数时，则分子中的Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X以及m可以相同或不同。
7.如权利要求1所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在步骤(D)中，将浆液溶液过滤然后从滤饼中回收聚氧化亚烷基衍生物。
8.如权利要求7所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在通式[1]所表示的聚氧化亚烷基衍生物中，Z是通过从多元醇移除羟基而形成的残基；Y1和Y2是醚键；聚合物2是直链聚氧化乙烯链；R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基；X是氢原子；m和n分别是m＝0和n＝1；a和b分别是满足a＝0或1、2≤b≤8和3≤a+b≤8的整数；并且当b是2或更大的整数时，则分子中的聚合物2和X可以相同或不同。
9.如权利要求7所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中在通式[1]中，Z是多元醇、氨基酸或肽的残基；Y1和Y2是醚键、酰胺键、酯键、碳酸酯键、仲胺基或含有任何这些基团的亚烷基；聚合物1和聚合物2是直链或支链聚氧化乙烯链；R是具有1至7碳原子的烃基或具有3至9个碳原子的缩醛基；X是氨基、受保护的氨基、受保护的羧基、醛基、受保护的醛基、羟基、受保护的羟基、硫醇基、受保护的硫醇基、氰基或含有任何这些基团的亚烷基，或氢原子；m和n分别使得m＝1或0、n＝1或0并且1≤m+n；a和b分别是满足0≤a≤8、0≤b≤8和2≤a+b≤8的整数；并且当a和b是2或更大的整数时，则分子中的Y1和Y2、聚合物1和聚合物2、R、X、m和n可以相同或不同。
10.如权利要求1至9任一项所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中由通式[1]所表示的聚氧化亚烷基衍生物具有10,000或更高的分子量。
11.如权利要求10所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中由通式[1]所表示的聚氧化亚烷基衍生物具有30,000或更高的分子量。
12.如权利要求1至11任一项所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中无机吸附剂包含氧化铝和氧化硅中的至少一种作为组分。
13.如权利要求1至12任一项所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中吸附剂的量以重量计为聚氧化亚烷基衍生物的量的1至3倍。
14.如权利要求1至13任一项所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中质子惰性溶剂是选自甲苯、二甲苯、苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙腈和四氢呋喃的一个或多个成员。
15.如权利要求14所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中质子惰性溶剂是甲苯。
16.如权利要求1至15任一项所述的聚氧化亚烷基衍生物的纯化方法，其中质子惰性溶剂的量以重量计为聚氧化亚烷基衍生物的量的10至20倍。
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