CN102361643B - 用于治疗蛋白尿、肾小球硬化症和肾衰竭的5-β，14-β-雄甾烷衍生物 - Google Patents

用于治疗蛋白尿、肾小球硬化症和肾衰竭的5-β，14-β-雄甾烷衍生物 Download PDF

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Abstract

式(I)化合物，其中符号具有说明书中所报告的含义；用于制备预防和/或治疗蛋白尿，肾小球硬化症或肾衰竭的药物。

Description

用于治疗蛋白尿、肾小球硬化症和肾衰竭的5-β，14-β-雄甾烷衍生物
发明领域
本发明涉及17-β-(3-呋喃基)和(4-哒嗪基)-5-β，14-β-雄甾烷衍生物，其用作制备预防和治疗蛋白尿，肾小球硬化症和肾衰竭的药物的试剂。
发明背景
术语蛋白尿源于蛋白质和尿，其意指尿中存在过量的血清蛋白。蛋白尿可以是肾脏(肾)损害的病征，由于血清蛋白可容易地自尿再吸收，则过量蛋白质的存在指出吸收不足或过滤损伤。
蛋白尿可以是下述病征的特征：肾病综合征(也即内源性肾衰竭)；肾的毒性损伤；胶原血管病(例如，全身性红斑狼疮)；肾小球病，比如膜质肾小球性肾炎，局灶性节段性肾小球性肾炎；大强度运动；应激；糖尿病；药物(例如，NSAIDs，尼古丁，青霉胺，金和其它重金属，ACE抑制剂，抗生素，阿片类特别是二醋吗啡)；感染(例如，HIV，梅毒，肝炎，后-链球菌感染)；氨基酸尿症；高血压性肾硬化；间质性肾炎和肾小球硬化症。
肾小球硬化症是通用术语，其描述肾微血管(也即肾小球)结瘢，肾小球是肾中自血液过滤尿的功能单元。患有肾小球硬化症的许多患者的病情逐渐恶化直至肾完全衰竭。该病征称为肾病的最终阶段或ESRD。患有ESRD的患者必须进行透析(血液透析或腹膜透析)以清洁他们的血液或者通过移植获得新的肾。
肾小球是高度专门的结构，其控制蛋白的血浆超滤。确保上述控制的特定细胞单元是足细胞，其功能障碍牵涉蛋白在尿中的大量损失(蛋白尿)。熟知的是足细胞功能受特定的蛋白调节性肌动蛋白细胞骨架的严格控制。已知的是，编码上述足细胞蛋白的基因的突变与肾小球膜屏障的改变有关，并因而与大量蛋白尿和肾损害有关。在这些足细胞蛋白中，去氧肾上腺素是裂孔膜的基础组分，其通过激活由酪氨酸激酶Fyn介导的信号转导途径来调节细胞骨架动力学，所述激酶属于Src激酶类(TrendsMolMed.2007；13：396-403)。
内收蛋白是细胞骨架蛋白质，其牵涉在所有细胞中调节肌动蛋白-血影蛋白动力学。已证实内收蛋白基因的多态现象与高血压和肾衰竭进展有关。
实验数据指出α和β内收蛋白被表达进入肾小球，而其多态现象牵涉在动物模型中某些足细胞蛋白经改变的表达，蛋白尿和肾损害进展，这与其血压无关。(JHypertension2003，21(Suppl.4)，abs4C.4)。
具体来说，血压正常的突变型β内收蛋白敲除小鼠，与对照小鼠相比，显示增加的足细胞蛋白比如去氧肾上腺素、突足蛋白(synaptopodin)、α-辅肌动蛋白，Fyn和ZO-1的表达以及尿蛋白质的减少(图1)，这指出β内收蛋白独立于血压控制在调节肾小球渗透性中的潜在作用。
在血压正常的同类系NB大鼠中，其中来自亲代高血压MHS品系的突变型β内收蛋白基因(Q529R)已被渐掺入血压正常的MNS背景(BBRC2004；324：562-568)，已发现在经培养足细胞中测得的某些足细胞蛋白(去氧肾上腺素，α-辅肌动蛋白，裂孔膜蛋白(podocyn)和ZO-1)的表达减少(参见图2)并且关联于大量蛋白尿和肾损害，上述现象是在与血压正常的携带野生型β内收蛋白变种以及来自MHS品系的α突变变种的同类系NA品系比较的情况下，由成年大鼠的免疫荧光数据(参见图3)所指出的。因此，这些发现提示突变型β内收蛋白对肾脏功能的病理学作用，其独立于血压并且受α突变型变种调节。
在动物模型中获得的实验数据与人类疾病的相关性受到新近临床发现的支持，其显示，在携带与α内收蛋白突变变种(Trp)相互作用的β内收蛋白突变(CT+TT)的情况下，患有IgA肾病的患者更快地进展至肾衰竭最终阶段(参见图4)。
内源的毒毛花苷G(EO)已被广泛地视作能够通过各种机理并主要通过调节肾脏Na处理来控制血压的新激素。已发现EO的高循环水平与高血压有关。
17-(3-呋喃基)和(4-哒嗪基)-5-β，14-β-雄甾烷衍生物是已知化合物。
EP0583578B1描述本申请中要求保护的β-雄甾烷衍生物，制备它们的方法和它们用于治疗心血管障碍比如心力衰竭和高血压的用途。
EP0590271B1描述17-芳基和17-杂环基-5-α，14-β-雄甾烷，雄甾烯和雄甾二烯衍生物，制备它们的方法和它们用于治疗心血管障碍比如心力衰竭和高血压的用途。
EP0590272B1描述17-芳基和17-杂环基-5-β，14-β-雄甾烷衍生物和它们用于治疗心血管障碍比如心力衰竭和高血压的用途。
WO2008148812描述17-β-(3-呋喃基)和(4-哒嗪基)-5-β，14-β-雄甾烷衍生物和它们用于治疗在血管形成术或内切削术(endoartherectomy)之后再狭窄和器官纤维化导致的疾病的用途。
上述公开中没有任何一个公开5β，14β-雄甾烷衍生物用于预防和/或治疗蛋白尿，肾小球硬化症和肾衰竭的用途。
目前发现根据本发明的17-β-(3-呋喃基)和(4-哒嗪基)-5-β，14-β-雄甾烷衍生物是预防和治疗蛋白尿，肾小球硬化和肾衰竭的有用试剂。
发明详述
因此，本发明目的是式(I)化合物，
其中：
符号代表单键或双键；
在位置3的是双键的情况下，Y是氧或胍基亚氨基；
在位置3的是单键并且能够具有α或β构型的情况下，Y是羟基，OR4或SR4；
R是未经取代的或取代的3-呋喃基或4-哒-嗪基；
R1是氢；甲基；乙基或正丙基，其被OH或NR5R6取代；
R2是氢或与R3一起是环氧乙烷环的键；
R3是氢或与R2一起是环氧乙烷环的键；
R4是氢；甲基；C2-C6烷基或C3-C6烯基或C2-C6酰基，这些烷基、烯基和酰基是未经取代的或者被季铵基团或一个或多个OR7，NR8R9，甲酰基，脒基，胍基亚氨基或NR8R9和羟基取代；
R5，R6独立地是氢；甲基；C2-C6烷基，其是未经取代的或者被一个NR10R11，或NR10R11和羟基取代，或者R5和R6与氮原子一起形成未经取代的或取代的饱和或不饱和的五元或六元单环杂环，该杂环任选地含有选自氧或硫或氮的又一个杂原子；
R7是氢，甲基或C2-C4烷基，该烷基是未经取代的或被一个或多个NR10R11或NR10R11和羟基取代；
R8，R9独立地是氢；甲基；C2-C6烷基或C3-C6烯基，这些烷基和烯基是未经取代的或者被一个或多个NR10R11，或NR10R11和羟基取代，或者R8和R9与氮原子一起形成未经取代的或取代的饱和或不饱和的五元或六元单环杂环，该杂环任选地含有选自氧或硫或氮的又一个杂原子，或者R8是氢而R9是脒基；或者NR8R9代表炔丙基氨基；
R10，R11独立地是氢，C1-C6烷基，或者R10和R11，与氮原子一起形成饱和或不饱和的五元或六元单环杂环；
本发明中还包括(I)的药学上可接受的盐，其保留相应碱的生物学活性并且衍生自已知的药学上可接受的酸比如盐酸，硫酸，磷酸，苹果酸，酒石酸，马来酸，柠檬酸，甲磺酸或苯甲酸；
烷基和烯基可以是支化的或直链基团；
C1-C6烷基优选是C1-C4烷基，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基；
C2-C6烷基优选是C2-C4烷基，例如乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基；
C3-C6烯基优选是C3-C4烯基，例如2-丙烯基，2-丁烯基；
C2-C6酰基优选是C2-C4酰基，例如乙酰基，丙酰基，丁酰；
季铵基团优选是三甲基铵基团或N-甲基吡咯烷鎓基团或N-甲基哌啶鎓基团；
OR7基团优选是羟基，2-氨基乙氧基，3-氨基丙氧基，2-二甲基氨基乙氧基，2-二乙基氨基乙氧基，3-二甲基氨基丙氧基，3-氨基-2-羟基丙氧基，2，3-二氨基丙氧基，2-(1-吡咯烷基)乙氧基，3-(1-吡咯烷基)丙氧基；
NR5R6基团优选是氨基，甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，吡咯烷基，吗啉代，哌嗪基，1-咪唑基，2-氨基乙基氨基，3-氨基丙基氨基；
NR8R9基团优选是氨基，甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，异丙基氨基，烯丙基氨基，炔丙基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，吡咯烷基，吗啉代，哌嗪基，1-咪唑基，1-胍基，2-氨基乙基氨基，3-氨基丙基氨基，2-(1-吡咯烷基)乙基氨基，3-(1-吡咯烷基)丙基氨基，3-氨基-2-羟基丙基氨基，3-(1-吡咯烷基)2-羟基丙基氨基，2，3-二氨基丙基氨基，(2-(1-吡咯烷基)乙基)甲基氨基；
根据本发明的具体化合物的优选实例是：
17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇；
3-β-(2-羟基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-氨基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-氨基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-甲基氨基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(1-咪唑基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(2-咪唑啉-2-基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(2-脒基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-胍基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-胍基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-氨基-2-羟基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2，3-二氨基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
17-β-(3-呋喃基)-17-α-甲氧基-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；
17-β-(3-呋喃基)-17-α-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；
17-β-(3-呋喃基)-17-α-(3-氨基丙氧基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-17-α-甲氧基-5-β-雄甾烷-14-β-醇；
3-β，17-α-二(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β-醇；
3-β，17-α-二(3-氨基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β-醇；
14-β，17-α-二羟基-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-酮；
3-胍基亚氨基-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇；
3-β-(2-羟基乙氧基)-17-β-(4-哒嗪基)5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-氨基丙氧基)-17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
17-β-(4-哒嗪基)-17-α-(3-氨基丙氧基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(4-哒嗪基)-17-α-甲氧基-5-β-雄甾烷-14-β-醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(4-哒嗪基)-17-α-(3-氨基-丙氧基)-5-β-雄甾烷-14-β-醇；
14-β，17-α-二羟基-17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-3-酮；
3-胍基亚氨基-17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
14-β，15-β-环氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，17-α-二醇；
3-β-(2-羟基乙氧基)-14-β，15-β-环氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-17-α-醇；
3-β-(3-氨基丙氧基)-14-β，15-β-环氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-17-α-醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-14-β，15-β-环氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-17-α-醇；
3-β-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-14-β，15-β-环氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-17-α-醇；
3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-17-α-甲氧基-14-β，15-β-环氧-5-β-雄甾烷；
17-α-羟基-17-β-(3-呋喃基)-14-β，15-β-环氧-5-β-雄甾烷-3-酮；
3-胍基亚氨基-17-β-(3-呋喃基)-14-β，15-β-环氧-5-β-雄甾烷-17-α-醇；
14-β，15-β-环氧-17-β-(4-哒嗪基)-5-β-雄甾烷-3-β，17-α-二醇；
和上述3-β衍生物的3α衍生物以及其中Y＝S的相应3α和3-β硫代衍生物；
用作抗蛋白尿的(antiproteuremic)剂。
根据本发明的具体化合物的最优选实例是17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇，下文称为″罗培呋辛(rostafuroxin)″或″PST2238″。
本发明式(I)化合物的又一目的是用作抗肾小球硬化的(antiglomerosclerotic)剂。
本发明式(I)化合物的又一目的是用作抗肾衰竭剂。
本发明的又一目的是式(I)化合物用于制备预防或治疗蛋白尿，肾小球硬化症和肾衰竭的药物的用途。
本发明的又一目的是治疗罹患蛋白尿，肾小球硬化症或肾衰竭的哺乳动物的方法，包括给药治疗上有效量的式(I)化合物。术语″治疗上有效量″如本文所用是指治疗、改善靶标疾病或病症，或者展示可检测的治疗效果所需要的治疗剂的量。
对于任意化合物，治疗上有效的剂量能够在细胞培养试验中或者动物模型通常是小鼠、兔子、狗或猪中进行初步估计。
动物模型还可以用来确定适当的浓度范围和给药途径。然后，这种信息能够用来确定有用剂量和人类中的给药途径。
对于人类受试者的精确有效量将取决于疾病状况的严重性，受试者的一般健康，受试者的年龄、体重和性别，膳食，给药的时间和频率，药物组合，反应敏感性，和对治疗的耐受/反应。上述量能够通过常规实验来确定并且在临床医师的判断之内。一般地，每天的有效剂量是0.05mg至20mg，优选0.5mg至15mg，最优选5mg至10mg。
根据医师判断，计量给药治疗可以是单次给药方案或多次给药方案。
组合物可以给予单独地患者或者可以与其它试剂、药物或激素组合地给予。
药物还可以含有用于给药治疗剂的药学上可接受的载体。上述载体包括抗体和其它多肽，基因和其它治疗剂比如脂质体，条件是该载体本身不诱导产生对接受组合物的个体有害的抗体，并且可以不引起过度毒性地进行给予。
适宜的载体可以是大的、代谢缓慢的大分子比如蛋白，多糖，聚乳酸，聚乙醇酸，聚合型氨基酸，氨基酸共聚物和无活性的病毒颗粒。
关于药学上可接受的载体的详尽论述可参见Remington′sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.，N.J.1991)。
治疗组合物中的药学上可接受的载体可以额外地含有液体比如水，盐水，甘油和乙醇。额外地，辅剂物质比如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等可以存在于上述组合物中。所述载体使得药物组合物可以配制为片剂，丸剂，锭剂，胶囊，液体，凝胶，糖浆剂，浆料，悬浮液等，用于患者进食。
一经配制，则本发明组合物能够直接给予至受试者。待治疗的受试者能够是动物；尤其是，可以治疗人类受试者。
本发明药物可以通过任意种类的途径进行给予，所述途径包括但不限于口服，静脉内，肌内，动脉内，髓内，鞘内，室内，透皮或经皮施用，皮下，腹膜内，鼻内，肠的，局部，舌下，直肠途径或者在外科手术之后局部地给予至患病组织。本发明化合物还可以施用(包覆)至支架上甚至掺入控释型基质。
附图说明
图1展示，与野生型(WT)对照相比，敲除β内收蛋白小鼠(KO)中的尿蛋白质分泌水平(mg/6h)。所用雄性小鼠的年龄是11个月，自饲养于代谢笼中的各小鼠收集尿6小时，并测量其尿蛋白质分泌。数据是15只WT和19只KO小鼠的平均值±标准误差。通过Studentt检验进行统计学分析。该图显示，与WT对照相比，在β内收蛋白KO小鼠中6小时-尿蛋白质分泌显著降低(30％)。
图2展示在得自从同类系NB和NA品系新生(＜10天龄)的大鼠的经培养足细胞中表达的足细胞蛋白(去氧肾上腺素，α-辅肌动蛋白，ZO-1，裂孔膜蛋白(podocin)，α-内收蛋白和肌动蛋白)的量。通过Western印迹用适当抗体(参见柱状图顶部的代表性痕迹)对足细胞提取物进行足细胞蛋白定量。对各品系数次(4至24次)实验所报告的数据是平均值±标准误差。通过Studentt检验进行统计学分析。该图显示，与携带野生型变种的NA对照相比，在来自NB血压正常的携带突变型β-内收蛋白的大鼠的足细胞中，去氧肾上腺素、α-辅肌动蛋白、ZO-1、裂孔膜蛋白和α-内收蛋白的量显著降低，而管家蛋白质肌动蛋白的量则相似。
图3展示，与携带野生型变种的NA对照相比，在来自NB血压正常的携带突变型β-内收蛋白的大鼠的肾小球中，通过免疫荧光可检测的某些足细胞蛋白(去氧肾上腺素，突足蛋白，α-辅肌动蛋白，ZO-1，Fyn和波形蛋白)的表达。该图显示，与NA大鼠相比，在NB中这些蛋白的表达猛烈降低，而波形蛋白，也即集中于足细胞细胞体中的微丝，在所述两种品系中正常地表达。
图4显示，在根据α-内收蛋白(ADD1，Gly460Tyr)和β-内收蛋白(ADD2，C399T)基因型划分为4组的受IgA肾病影响的患者中，按肾小球过滤速率(GFR)随时间(ml.分-1.年-1)衰减进行评价的肾衰竭进展。发现两种基因间对衰减速率的相互作用是显著的。
图5展示，在得自从同类系NB品系新生(＜10天龄)大鼠的并与或不与罗培呋辛10-9M一起温育5天的经培养足细胞中，表达的足细胞蛋白(去氧肾上腺素，ZO-1，裂孔膜蛋白，α-内收蛋白，突足蛋白和肌动蛋白)的量。通过Western印迹用适当抗体对足细胞提取物进行足细胞蛋白定量。数据报告为数个实验的平均值±标准误差。通过Studentt检验进行统计学分析。该图显示，在10-9M罗培呋辛存在下培养的足细胞中，去氧肾上腺素，ZO-1，裂孔膜蛋白，α-内收蛋白和突足蛋白的量有所增加，但不包括肌动蛋白。
图6展示，与输注盐水的对照大鼠或者用罗培呋辛100μg/kg/天经口处理8周的OS大鼠比较，长期输注毒毛花苷G并用媒介物处理的大鼠(OS)的收缩压(SBP)，尿蛋白质分泌和来自肾皮质的去氧肾上腺素量。对各组，数据报告为8只大鼠的平均值±标准误差。通过Studentt试验进行统计学分析。该图显示，罗培呋辛显著降低SBP和尿蛋白质分泌，同时其增加OS大鼠中的去氧肾上腺素表达，从而对抗毒毛花苷G肾效果。
下述非限制性实施例进一步说明本发明。
实施例1
为了试验本发明化合物防止足细胞蛋白损失的活性，使用携带β内收蛋白突变的同类系NB大鼠(TripodiG.等人EffectofAdd1genetransferonbloodpressureinreciprocalcongenicstrainsofMilanrats.BBRC2004；324：562-568)。所述NB大鼠是非高血压大鼠并且可以得自PrassisResearchInstitute，Sigma-tau，意大利。
将7至10天龄的NB大鼠用于足细胞分离和培养。在不加(NB对照，n＝4)和加10-9M的罗培呋辛(NBn＝5)的情况下，将来自NB大鼠的足细胞温育5天。在5天温育结束时，通过Western印迹定量足细胞蛋白。对各足细胞标记物，重复Western印迹定量2至3次。表1A和1B显示各条件下所分析的最终足细胞样品数，其是重复测试的平均值(NB对照，n＝4；NB+罗培呋辛，n＝5)。按人为指定单位将密度分析定量为光密度。
足细胞分离和经培养足细胞中的蛋白质定量
通过过筛将肾小球分离自NB肾，并进一步手工纯化。然后，在37℃于5％CO2气氛下，将肾小球接种于培养瓶(Corning，Sigma-Aldrich，米兰，意大利)中，预包覆有IV型胶原(Sigma-Aldrich)。在第4至5天，足细胞开始生长，在第8天，将肾小球用胰蛋白酶-EDTA脱除。将光显微技术检查为＞90％纯的第二代足细胞接种在培养瓶和腔室玻片上。通过Western印迹技术进行足细胞蛋白质定量(10μg蛋白质/道)，使用针对去氧肾上腺素、裂孔膜蛋白、ZO-1、内收蛋白、突足蛋白和肌动蛋白的特定抗体。
获得的结果报告于下表1A，1B和图5中
表1A
表1B
获得的结果指出，本发明化合物能够对抗β内收蛋白突变诱导的足细胞蛋白质损失，从而在血压正常的实验模型中有利于肾小球过滤屏障的正确功能并且减少蛋白尿。
实施例2
为了试验本发明化合物防止蛋白尿和肾小球蛋白损失的活性，使用长期性输注毒毛花苷G(OS大鼠)或盐水(对照大鼠)的大鼠。
用媒介物(甲基纤维素0.5％)或罗培呋辛(100μg/kg)，对两组2月龄OS大鼠(各自n＝8)进行经口管饲处理8周。将输注盐水的一组大鼠用作对照。在该时间段之后，在上述三组中测量收缩压和尿蛋白质分泌。然后，将三组动物处死，通过Western印迹自肾皮质微粒体进行去氧肾上腺素定量。
毒毛花苷G输注
将体重100-110g的三周龄雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan，IN)用渗透微泵进行皮下植入，释放15μg/kg/天的毒毛花苷G(OS大鼠，n＝16)，持续14周，或者释放无菌盐水(CS大鼠，n＝8)(FerrariP.等人J.Pharmacol.Exp.Ther.1998；285：83-94)。在毒毛花苷G输注的第6周，将OS大鼠随机分为两组(n＝8各)：第一组(OS处理的)以100μg/kg/天经口接受悬浮于0.5％w/v甲基纤维素的罗培呋辛，而第二组(对照)仅接受媒介物。在清醒大鼠中，通过尾套式体积描记术(BP记录仪，U.Basile，意大利)每周测量收缩压(SBP)和心率(HR)。
测量尿参数的生物化学试验
在处理第12周的清醒OS和对照大鼠中测量尿参数。将大鼠圈养于单独的代谢笼中，并适应1天。于9a.m.开始24小时的尿收集，在尿收集期间大鼠可随意进食水和食物。在离心(4500rpm，20分钟；Varifuge3.2RS，HaereusInstruments，AHSI，米兰，意大利)之后，分析大鼠尿的尿体积(ml)(在Mettler精密天平上称量尿储存器进行定量)；尿的pH(pHM83，放射计，Copenhagen)和总尿蛋白质分泌(mg/24h)(用标准总蛋白质试剂盒(SentinelDiagnostics，米兰，意大利)进行测量)。然后，处死上述三组动物，自各大鼠制备肾皮质微粒体，并通过Western印迹定量去氧肾上腺素，即裂孔隔膜的关键蛋白质。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品，印迹，在4℃温育过夜与特异性一抗(SantaCruz的抗去氧肾上腺素；Sigma-Aldrich的抗肌动蛋白)，随后与荧光二抗(AlexaFluor)温育1小时，然后通过Odyssey红外成像检测系统(LI-CORBiosciences)进行分析和定量。去氧肾上腺素定量表示为光密度，单位人为指定。
获得的结果报告于下表2A；2B；2C；和图6中。
表2A
表2B
表2C
获得的结果指出，本发明化合物能够对抗毒毛花苷G对血压、尿蛋白质分泌和肾小球蛋白质损失的病理学效果，从而降低血压、重建肾小球去氧肾上腺素表达并减少蛋白尿。

Claims (7)

1.17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β,14-β,17-α-三醇用于制备药物的用途，所述药物用于预防和/或治疗蛋白尿、肾小球硬化症和肾衰竭。
2.根据权利要求1的用途，其中所述化合物以0.05mg至20mg每天的剂量给予。
3.根据权利要求2的用途，其中所述化合物以0.5mg至15mg的剂量给予。
4.根据权利要求3的用途，其中所述化合物以5mg至10mg的剂量给予。
5.根据权利要求2-4中任一项的用途，其中所述化合物以单次给药方案给予。
6.根据权利要求2-4中任一项的用途，其中所述化合物以多次给药方案给予。
7.根据权利要求1的用途，其中所述药物用于口服，静脉内，肌内，动脉内，髓内，鞘内，室内，透皮，经皮，皮下，腹膜内，鼻内，肠道，局部，舌下或直肠给药。
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